实验二 蛙和蟾蜍神经肌肉标本制备

实验二蛙和蟾蜍神经肌肉标本制备

一、实验目的

熟悉并掌握蛙和蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。属于急性实验中的离体实验。

原理：两栖类动物的离体组织器官可在室温下，于一定时间内保持其机能，故常用作生理学实验的材料。蛙或蟾蜍坐骨神经腓肌肠标本，常用来研究兴奋性、兴奋过程、刺激的规律以及肌肉的收缩特点等。制备坐骨神经腓肌肠标本是生理实验的一项基本操作技术。

可兴奋细胞包括：神经细胞、肌肉细胞

兴奋的传递：神经细胞之间突触传递；神经细胞与肌肉细胞之间采用接头传递。

二、实验仪器及材料

牛蛙（Rana catesbeiana），手术剪1把，虹膜剪刀1把，大、小镊子各1把，刺蛙针1根，玻璃分针2根，小玻璃板和蛙板各1块，培养皿1个，烧杯1个，滴管1支，棉线、纱布、任氏液、锌铜弓。

三、实验方法与步骤

1、破坏脑和脊髓取一只牛蛙，洗净蛙体，用左手握蛙，并用食指按压其头部前端，拇指按压背部，使头前俯；右手持刺蛙针由头前端沿中线向尾方划触，触及凹陷处即枕骨大孔处。将刺蛙针转向头方，向前探入颅腔，然后向各方搅动刺蛙针，以捣毁脑组织。脑组织捣毁后，将刺蛙针退出；再由枕骨大孔刺入，并转向尾方，与脊柱平行刺入脊管，以破坏脊髓。脑和脊髓完全破坏后，动物四肢肌肉的紧张性完全消失。拔出刺蛙针后，用一小干棉球堵住针孔止血。2.剪除躯干上部、皮肤及内脏用左手捏住蟾蜍的脊柱，右手持粗剪刀在前肢腋窝处连同皮肤、腹肌、脊柱一并剪断，然后左手握住蟾蜍的后肢，紧靠脊柱两侧将腹壁及内脏剪去(注意避开坐骨神经)，并剪去肛门周围的皮肤，留下脊柱和后肢。

3.剥皮一只手捏住脊柱的断端（注意不要捏住脊柱两侧的神经），另一只手捏住其皮肤的边缘,向下剥去全部后肢的皮肤（图2）。将标本放在干净的任氏液中。将手及使用过的探针、剪刀全部冲洗干净。

4.分离两腿用鑷子取出标本，左手捏住脊柱断端,使标本背面朝上，右手用粗剪刀剪去突出的骶骨（也可不进行此步）。然后将脊柱腹侧向上，左手的两个手指捏住脊柱断端的横突，另一手指将两后肢担起，形成一个平面。此时用粗剪刀沿正中线将脊柱盆骨分为两半(注意，勿伤坐

骨神经)。将一半后肢标本置于盛有任氏液中备用，另一半放在蛙板上进行下列操作。

5、分离坐骨神经取一标本放于玻璃板上，用玻璃分针沿脊柱向下分离坐骨神经，再在下肢股部背侧股二头肌和半膜肌之间，找出坐骨神经的大腿部分，小心分离，使之完全暴露。以粗剪刀剪下一小段与神经相连的脊柱（约1～2个脊椎骨），用镊子轻轻提起该块脊柱，逐一剪去分支，分离神经至膝关节处。在分离过程中，操作必须精细，避免金属器械碰夹神经，以免损伤。分离出的神经须常用任氏液湿润，避免干燥。

6、分离腓肠肌用玻璃分针或镊子将腓肠肌跟腱分离，并穿线结扎。在结扎处下端用粗剪刀剪断跟腱，左手执线提起腓肠肌，用手术剪刀剪去与周围联系的组织，只保留腓肠肌的起始端与骨的联系。

7、游离坐骨神经腓肠肌标本将该后肢股部所有肌肉从膝关节起沿股骨剥离并剪去，用粗剪刀剪去股骨的上1/3；再在膝关节下将小腿剪去，留下的即为坐骨神经腓肠肌标本。

8、检查标本机能并稳定其兴奋性用浸有任氏液的锌铜弓轻轻接触坐骨神经以刺激之，如腓肠肌有收缩反应，表明标本制作良好。将标本放入任氏液中15分钟，以稳定其兴奋性。提起标本时，切勿牵拉神经。

3 蛙后肢肌

图4 分离坐骨神经（A）和坐骨神经腓肠肌标本（B）

注意事项：

1、在剥制标本时，不能用金属器械触碰神经干。

2、分离神经时，一定要把周围的其他组织剥离干净。

3、标本制备过程中，要随时用任氏液湿润神经和肌肉，防止干燥；不能使动物的皮肤分泌物和血液等玷污神经和肌肉，也不能用水冲洗，以免影响组织的机能。

四、作业与思考题

1、用各种刺激检验标本兴奋性时，为什么要从中枢端开始？

2、解释神经—骨骼肌接头处兴奋的传递过程，并用简图示之。

3、绘出坐骨神经腓肠肌标本的简图，并标示。