蛋白酶的分类及酶切位点

蛋白酶的分类及酶切位点

氨基酸0.ppt

氨基酸的名称与符号

alanine 丙氨酸Ala A

arginine 精氨酸Arg R

asparagine 天冬酰氨Asn Asx N

aspartic acid 天冬氨酸Asp Asx D

cysteine 半胱氨酸Cys C

glutamine 谷氨酰胺Gln Glx Q

glutamic acid 谷氨酸Glu Glx E

glycine 甘氨酸Gly G

histidine 组氨酸His H

isoleucine 异亮氨酸Ile I

leucine 亮氨酸Leu L

lysine 赖氨酸Lys K

methionine 甲硫氨酸Met M

phenylalanine 苯丙氨酸Phe F

proline 脯氨酸Pro P

serine 丝氨酸Ser S

threonine 苏氨酸Thr T

tryptophan 色氨酸Trp W

tyrosine 酪氨酸Tyr Y

valine 缬氨酸Val V

血清终止胰酶消化的原理

血清终止的原理其实是竞争抑制。就是用过量的牛血清中含有的蛋白来和胰酶结合。不给胰

酶消化细胞蛋白的机会。

细胞传代时，血清为什么能终止胰酶消化？

胰蛋白酶的酶切位点是肽链的Lys和Arg两个残疾的羧基端肽键，血清的加入可使酶饱和，严格上说不是竞争性抑制，因为血清蛋白不是抑制剂，还是底物！

什么样的细胞不能用胰酶-EDTA消化

植物细胞不能用胰酶-EDTA消化，要用纤维素酶消化。

应该是肿瘤细胞吧。正常的细胞，貌似都需要用胰酶或者胶原酶消化。

EDTA-胰酶，只不过是在胰酶里加入了EDTA而已。

EDTA是乙二胺四乙酸，一种金属螯合剂。一般和胰蛋白酶配合使用。原因在于，钙，镁等金属离子会降低胰酶活力，故在使用胰酶消化液时要配合加入EDTA。它可以螯合这些离子，消除对胰酶的抑制。

干细胞饲养层制作中，胰酶—EDTA消化成纤维细胞（MEF）时，EDTA的作用是什么？

应该是胰酶分散细胞，EDTA鳌合金属离子使金属酶失活

《军医进修学院学报》1992年02期

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正常人血浆蛋白酶解产物对胃癌细胞肺转移抑制作用的研究

焦顺昌赵东海黄昌霞王洪海

【摘要】：本文采用胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶联合消化方法得到正常人血浆(NHP)有限蛋白酶解产物(NHP-EP)。体外研究发现,NHP的细胞粘附性可达90％;而NHP-EP的细胞粘附

抑制性亦可达90％以上,具有可逆性、竞争性、非细胞毒性等特点。动物实验发现,NHP-EP 可抑制小鼠胃癌细胞实验性肺转移的形式,抑制率达83.3％;并可延长带瘤小鼠的中位生存期,实验组生存期35天,而对照组为19天。我们认为,NHP-EP对胃癌血行转移防治可能有较大实用价值。

【作者单位】：

【关键词】：正常人血浆蛋白酶解产物胃肿瘤肺肿瘤癌症肿瘤转移细胞粘连

【正文快照】：

肿瘤转移的各个环节均有赖于癌细胞活跃的游走、与基质的粘附和去粘附等生物学功能田。体内有多种介导细胞—基质粘附的蛋白质,常见的有纤维连接素(fi bronectin,FN)、层粘素(laminin,LN)、胶原、Vitro-neetin等,它们与肿瘤转移有关(2,’〕。其中FN与细胞结合位点的氨基酸序

《癌症》1993年02期

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纤维连接素酶解产物的生物学特性及其对胃癌细胞血行转移抑制作用的初步研究

焦顺昌赵东海黄昌霞王洪海

【摘要】：本文采用胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶联合降解方法得到正常人血浆纤维连接素有限蛋白酶解产物(FN—EP)。体外研究发现,纤维连接素的细胞粘附率可达60％以上;而FN—E P的细胞粘附抑制率可达90％,具有可逆性、竞争性、非细胞毒性等特征。动物实验初步显示,FN—EP可抑制小鼠胃癌细胞实验性肺转移的形成,抑制率达78.6％。本研究提示,FN—E P在恶性肿瘤血行转移防治中具有应用价值。

【作者单位】：解放军总医院解放军总医院解放军总医院解放军总医院

【关键词】：血浆纤维连接素酶解产物细胞粘附肿瘤转移

【正文快照】：

纤维连接素(Fibroneetin,FN)通过介导癌细月包一胞外基质粘附,在肿瘤转移中发挥重要作用〔’,”〕。FN与细胞结合位点的氨基酸序列为RGD(即精氨酸一甘氨酸一天门冬氨酸)。Hum分hr ies〔3,‘〕等用人工合成的含RGD序列的GRGDS多肚成功地抑制了黑色素瘤细胞实验性小鼠肺转移,抑

台研究发现Pif1解旋酶蛋白质杀死癌细胞有转机

2013年09月13日15:32 来源：中国新闻网参与互动(0)中新网9月13日电据台湾东森电视台网站报道，修复受损癌细胞的谜题逐渐解开。台湾大学生化所发现细胞内一种“Pif1解旋酶”蛋白质，能在癌细胞基因受损时，促进DNA 间的重组，进而修复细胞。医师指出，无论是正常细胞或是癌细胞都拥有Pif1，未来有机会借由抑制癌细胞中的Pif1，开发抗癌新药物。

台大生化所助理教授冀宏源带领的研究团队3年前开始与美国贝勒医学院、耶鲁大学等知名学校合作，成功从酵母菌中找到细胞里的Pif1解旋酶。冀宏源表示，DNA受损的形态中，最严重的就是双股DNA断裂，团队利用酵母菌、蛋白质纯化技术，发现Pif1可解开双股DNA结构，帮助它的重组，完成细胞修复。

这项发现成为治疗癌症的重大突破，也登上国际知名期刊《自然》(Nature)。2年前海外实验更证实，若在乳癌细胞株上注射Pif1抑制剂，降低癌细胞存活率的效果高达10倍。台大校长杨泮池表示，下一阶段研究重点是透过临床试验，尽快找到对Pif1活性敏感的癌症种类。

标签：癌细胞酵母菌冀宏源解旋酶细胞