性病实验室检查

方法
首先用无菌生理盐水拭子洗尿道口，然后用手由后 向前挤出其脓性分泌物，再用棉拭子插入尿道口 取材，将分泌物均匀薄层涂布于载玻片上。女性 取宫颈或尿道分泌物涂片。凉干作革兰氏染色。
(革兰氏染色法：标本涂片，干燥，火焰固定，依次行结晶紫液初染， 碘液媒染，酒精脱色，，复红复染，水洗后凉干，油镜检查)
结果：
显微镜下革兰氏染色淋球菌和多形核白细胞均染为红 色，但淋球菌色较浓。急性男性患者尿道分泌物中见大 量白细胞及细胞内Ｇ－双球菌，即镜检阳性。
意义
1.直接涂片染色检查简便、快速、低廉、且具有一定的敏感 性和特异性。对急性男性尿道炎患者敏感性可 > 90％； 镜检阳性可诊断淋球菌感染，但阴性不能除外诊断，需作 培养检查。
二、支原体实验诊断
分离培养：
原理
生殖道支原体主要有三种，即解脲支原体(Uu)、人型支原体(Mh)、生 殖支原体(Mg)，其中Uu与Mh较常见。支原体肉汤培养基中含有酚红 指示剂，并含有尿素、精氨酸或葡萄糖。Uu有尿素酶，分解尿素产 生氨，使pH值上升，培养基的颜色由黄变为粉红色。Mh分解精氨 酸产生氨，也使培养基变为粉红色。而Mg分解葡萄糖，产生乳酸， 使SP-4肉汤培养基由粉红变为黄色，可初步判定有支原体生长，再 将液体培养物转种到固体培养基，在合适的条件下，形成具特征性 油煎蛋样集落。但Mg较Mh、Uu培养不易生长。
淋球菌的鉴定特征
菌落形态 革兰染色 氧化酶试验 过氧化物酶试验 快速糖发酵试验 β-内酰胺酶
淋球菌样 革兰阴性双球菌 阳性 阳性 G+ L- M- S阳性﹙PPNG﹚或阴性
氧化酶实验
意义
1. 培养及鉴定结果阳性可确诊淋球菌感染。分离培养、 鉴定淋球菌是诊断淋病的“金标准”，也是目前ＷＨ Ｏ推荐的诊断淋病的方法。
等均可影响淋球菌生长，繁殖。
最适生长条件：
35 ℃ ～36℃，含5%～10% CO2，湿 润（70%湿度）的环境。
使用CO2培养箱最佳,若无可用虹缸培养。
结果：
淋球菌在平皿培养基上培 养24－48小时后，形成直 径0.5-1mm左右的圆形,半 透明或灰白色,表面光滑， 湿润，凸起，边缘整齐的 菌落，用接种环触之有粘 性。菌落形态特征也为细 菌鉴定的标准之一。涂片 作革兰染色发现有肾形成 对的革兰阴性双球菌。
3、培养基发生颜色变化后取0.2ml转种到固体培养基， 在固体培养基上，Uu培养3—5天，Mh培养4—5 天，Dienes染色，低倍显微镜下观察。
结果
1、液体培养基培养：Uu、Mh液体培养基颜 色由黄色变红，透明无混浊，则可初步判 断Uu或Mh生长 ；若颜色无改变，则为阴 性。
2、固体培养基培养：固体培养基培养后， 经Dienes染色，低倍显微镜下观察，见 具特征性油煎蛋样集落，可初步确诊，必 要时行PCR鉴定。
培养基、Ｎｅw Yｏｒk Ｃｉｔｙ（Ｎ．Ｙ．Ｃ）培养基、Ｍ ａｒｔｉｎ－Ｌｅｗｉｓ（Ｗ－Ｌ）培养基。国内的有桂敏培 养基,巧克力琼脂培养基。均应为选择性培养基,在培 养基中加入抗生素(如多粘菌素,万古霉素、制霉菌素 等)抑制杂菌生长,同时加入促淋球菌生长的增菌剂(如 氨基酸、维生素、嘌呤等)。
3、培养条件： 淋球菌培养条件高，温度、湿度、ＰＨ值
（1）.尿道标本：急性尿道炎有脓性分泌物，可用棉拭
子伸入尿道2－4cm，停留数秒钟取分泌物进行检查。无尿道 分泌物或分泌物少时，取前列腺液检查。
（2）.宫颈标本：取宫颈分泌物培养时不能消毒，先用无菌棉
拭子擦去宫颈表面分泌物，再用另一根棉试子插入宫颈口1－2 ｃｍ，轻轻转动，停留20－30秒钟，让拭子充分沾取较多的分 泌物
2.对于女性病人宫颈分泌物中杂菌较多，不易分辨，易造成 假阳性，ＷＨＯ不推荐用镜检而用培养法作为女性淋病的 诊断依据。
3.慢性病人或用药后的病人因症状不典型，不易查到细胞及G －双球菌，故以培养法进行诊断；
4.其它部位标本如咽部、眼结膜、直肠肛门等部位标本一般 不采用直接镜检而采用培养法确诊。
（二）、培养检查
一、淋球菌实验诊断
（一）、涂片染色检查：
原理
淋病是由淋球菌感染引起的泌尿生殖道化脓性 炎症的一种常见性病。淋球菌为革兰氏染色阴 性双球菌，位于脓细胞内，呈肾形成双成对排 列。淋病患者的尿道或宫颈脓性分泌物中有大 量脓细胞，可通过分泌物涂片革兰氏染色直接 镜检查找到典型的细胞内革兰氏阴性双球菌， 可作出初步诊断。
（3）.肛门直肠标本：将棉拭子插入肛门1－2ｃｍ，轻轻
转动，停留20钞钟取出。如果棉拭子碰到粪便应换一根拭子重 取。必要时可用直肠镜取材。
（4）.其它部位标本：眼结膜炎者取结膜分泌物，淋菌性咽
炎用无菌棉拭子取喉、咽部脓性分泌物，播散性淋球菌感染的病 人取静脉血5ｍl进行细菌培养。
2、培养基：国外常用的有Ｔhａｙｅｒ－Ｍａｒｔｉｎ（Ｔ－Ｍ）
原理 如果标本中有淋球菌，则细菌在适当的培
养基（血琼脂培养基及巧克力琼脂培养基） 上和适宜的培养条件下能生长繁殖，根据 其菌落形态、大小、边缘、颜色及生化反 应可以作出细菌的鉴定。
方法 1、标本采集：淋球菌Biblioteka Baidu常娇嫩，对环境抵抗力低，ＰＨ值
温度、营养物质等均可影响淋球菌的检查结果，如采集不
。 当，就会出现阴性结果
2.除男性急性淋病外，男性慢性淋病、女性淋病及其它部 位标本如咽部、眼结膜、直肠、肛门淋球菌感染应采 用培养法确诊。
3.培养的敏感性81~100%。 4.培养的优点有： — 特异性极高（100%）； — 可发现无症状淋球菌感染患者； — 可用于进一步作药敏试验； — 可用于治疗后的判愈试验。
方法
1、标本采集：男性用无菌棉拭子插入尿道2—
4cm，轻轻转动取出分泌物，或取前列腺液；女 性先用无菌的脱脂棉擦去阴道内粘液，用无菌棉 拭子插入宫颈内1—2cm处旋转取材；或无菌试 管收集清晨首次中段尿离心沉渣。标本采集后立 即接种培养，不能立即培养的要放入运送培养基 或保存液中。
2、将标本分别洗人Uu、Mh、Mg（SP-4）液体培养基， 置 3 7 ℃ 温 箱 培 养 ， 每 日 观 察 。 Uu 培 养 1 — 2 天 ， Mh培养2—3天，Mg培养约35—140天颜色才会 变化。