体外诊断试剂校准品溯源质控品定值及不确定度研究

§池 § 过滤 § 分装 § 冷冻 -70°C
个体样本 不适用
室温下凝结 3-4 小时
使用剩余临床样本制备参考物质
剩余临床样本
冷冻的个体样本
解冻，混合， 溶解，过滤
去除分子
分装并保存 冻干或冷冻
添加分析物 添加防腐剂 混合，过滤
修改的C37指南：使用混合血样制备参考物质
C37 方案
去除分子
添加分析物 添加防腐剂 混合，过滤
当没有参考测量程序时 溯源中止
溯源性
参考物质 (基质)
生产商的产品 校准品
病人样本
病人结果
校准 赋值 校准 赋值
生产商内部程序 医学实验室程序
必须赋一个值
溯源性
参考物质 (基质)
生产商的产品 校准品
病人样本
病人结果
校准 赋值 校准 赋值
生产商内部程序 医学实验室程序
当没有参考测量程序时的赋值
ð 任意设定的单位, e.g. U/L ð 使用一个指定的对比程序 ð 使用所有程序的截尾均值
2017年11月1日 113个品种
参考品研制
Ø 生化项目：尿素尿酸总蛋白、K、Na、Cl等离子 Ø 传染性疾病产品评价参考品（HBV、HCV、HIV、HPV等） Ø 遗传性疾病产品评价参考品（地贫、耳聋基因突变等） Ø 血型检测相关的产品评价参考品（免疫学、分子生物学技术产品） Ø 高通量测序技术相关产品评价参考品 ü 测序仪评价用基因组DNA参考品 ü 外周血胎儿染色体非整倍体参考品 ü 胚胎植入前染色体非整倍体参考品 ü 肿瘤基因突变参考品研制 Ø 流式细胞技术相关产品评价参考品 ü 人淋巴细胞参考品 Ø 激素检测相关的标准品 Ø -----
4139195
4154897 186233691 196385090 125335778 127167265 64389210 64276122 27084262 26766620
8825888 8838797 2965447 2862345
浓度值
38.52 40.50 16.15 16.88 7.74 7.49 3.68 3.66 1.92 1.94 1.05
参考物质 reference material， RM l 具有一种或多种足够均匀和很好地确定了的特性，用以
校准测量装置、评价测量方法或给材料赋值的一种材料 或物质。
校准品calibrator 校准物质 calibration material l 其值在一个校准函数中用作独立变量的参考物质。应具
有定值和已知的测量不确定度，其目的应是校准某一测 量系统，从而建立此系统测量结果的计量学溯源性。
UA项目的量值溯源图
物质 SRM 913a
校准 赋值
SI单位
程序 ID/GC/MS法
实施
不确定度
多家 参考实验室
计
量
学
校准品
溯
（-70℃保存）
源
多项生化校准品
选定方法 (AACC 1982)
参考实验室
厂家常规测量 程序
参考实验室
常规样本
用户常规测量 程序
结果
用户
锂、钠、钾、镁、钙、氯复合电解质 冰冻人血清国家标准品联合赋值
3.75
1.875
0.9375
30
15
C-P缓冲稀
7.5
释液，
200ng/ml
3.75
1.875
0.9375
对照（-20℃）
信号值
210052170 215013733 146649535 144519274 81517027 81153709 34679524 34782683 12303947 12834305
生产商内部程序 医学实验室程序
dPCR技术的溯源
报告内容
标准物质基本概述 溯源 赋值、不确定度研究
互通性、一致化研究
题目5
常规标准物质制备路线
均匀性评价 稳定性评价
参考物质样本来源
模拟微球 分泌物 基因组DNA
片段化DNA
细胞
样本
病毒株
血浆
血清 细菌标准株 组织
CLSI C37可互换的冷冻人血清池
4211756
4310620 198200689 202061484 143631775 145411185 78030032 76742254 33281636 33128166 11829746 11587350
3931971 3763507
浓度值
39.82 43.42 16.57 16.15 7.66 7.63 3.76 3.76 1.95 2.00 1.06
稀释基质 配制基质
去激素人血清，200ng/ml
缓冲稀释液，200ng/ml
30 15 7.5 3.75 1.875 0.9375 30 15 7.5 3.75 1.875 0.9375
标示
1
26.02 13.03 6.55 3.43 1.80 0.95 26.28 12.91 6.56 3.42 1.79 0.94
• 5.2有原级参考物质和参考测量程序(被测量由参 考测量程序定义)并计量学溯源到SI的情况，如
HbA1C
• 5.3有国际约定参考测量程序（非一级）和 国际约定校准物，未计量学溯源到SI
ISO 17511(2015草案)与ISO 17511(2003)
• 5.3 没有原级校准物,但有参考测量程序(它定 义被测量)并计量学溯源到SI的情况
标准物质的制备生产
制备—冻干赋型剂
1#、5#、7#和9#瓶子里为F公司FSH抗原，稀释液中甘露醇浓度分别为1%、2%、5%和10% 2#、6#、8#和10#瓶子里为M公司FSH抗原，稀释液中甘露醇浓度分别为1%、2%、5%和10%
单克隆抗体类国家标准品赋形剂配方
成分
配方1（原配方）
配方2
配方3
单位 A
B
C D
锂 离子色谱法
/ / /
钠 离子色谱法
/
离子色谱法 原子吸收法
钾 离子色谱法
/
离子色谱法 原子吸收法
镁
钙
氯
离子色谱法 离子色谱法 离子色谱法
同位素稀释电 感耦合等离子 离子色谱法
体质谱法
离子色谱法 离子色谱法
/
原子吸收法 原子吸收法
/
ISO 17511(2015草案)与ISO 17511(2003)
分装并保存 冻干或冷冻
以血清为基质的参考物质
收集经抗凝的血液 离心
冷冻血浆
血清蛋白基质 过滤，分装
添加小分子
添加Biblioteka Baidu物分子 （人源或非人源）
添加防腐剂
解冻血浆
通过添加钙离子和凝 血酶转换成血清
以液体，冰冻状 或冻干状态储存
离心，透析，浓缩
恢复血清蛋白基质
Miller, et.al. Clin Chem 2011;57:1670-80.
Procedures
Medical Laboratory Procedure
Patient’s Result
ISO 17511(2015草案)与ISO 17511(2003)
• 5.1有原级参考测量程序和原级校准 物情况:完整计量学溯源到SI
• 5.2 有一级参考测量程序和一级 校准物，计量学溯源到SI的情况
通过公认的程序赋值是恰当的
Ø 实际浓度是未知的 Ø 通过追溯校准值至参考物质的值可以实现协调
一致 Ø 可使用临床指南
通过公认程序赋值的局限性
所有测量程序应可追溯到同一参考物质
§ 若有多家参考物质供应商，非等效性赋值的风险将被 分配给参考物质
§ 因此，存在导致临床样本结果不一致的风险
ISO 17511(2015草案)与ISO 17511(2003)
• 5.6.被测量只溯源到制造者内部确定/具有的校准物; 无原级校准物或参考程序;未计量溯源到SI的情况
• 5.6有制造商选定的测量程序，但既无国际约定参考测量 程序，也无国际约定校准物，未计量学溯源到SI的情况
必须赋一个值
溯源性
参考物质 (基质)
生产商的产品 校准品
病人样本
病人结果
校准 赋值 校准 赋值
4058837
4172266 204522957 202799485 135266958 137662012 73522700 74909554 31483801 31028908 10853983 10822649
3712196 3469789
浓度值
50.46 43.84 16.75 16.67 7.45 7.48 3.83 3.82 1.98 1.95 1.04
每L含量
蔗糖 海藻糖
乳糖
50g
100g
50g
/
/
50g
/
/
/
激素类国家标准品赋形剂配方
成分
配方9（原配方） 配方2（10） 配方3（11） 每L含量
人血清白蛋白
乳糖 甲酸铵
1g
10g 0.63g
5g
10g 0.63g
1g
20g 0.63g
配方4
50g /
50g
配方4（12） 1g 50g
0.63g
C-P冻干赋形剂的选择
ISO 17511(2015草案)
ISO
17511(2015草案)
Primary Reference Material
Assign value
(pure substance)
TRACEABILITY
Panel of Patient Samples
Pure Substance Calibrator
Assign value
Procedures for identity and mass balance
Reference Measurement
Procedure (e.g. Gravimetry)
Reference Measurement
Procedure (e.g. IDMS)
Manufacturer’s Internal
1.08 32.88 34.92 15.98 16.33 7.33 7.21 3.65 3.64 1.91 1.89 1.02 1.00
37℃ 10d
信号值
223013135 215549939 147549280 147169633 79319023 79635341 35589861 35507995 12571388 12293575
• 5.4 有国际约定参考测量程序（非一级）但无 国际约定校准物，未计量学溯源到SI的情况
酶类, 凝血因子
溯源性
病人 样本盘
二级参考物质 (基质)
生产商的产品 校准品
病人样本 病人结果
赋值 校准 赋值 校准
赋值
参考测量程序
生产商的内部程 序
医学实验室程序
ISO 17511(2015草案)与ISO 17511(2003)
体外诊断试剂标准品溯源、质控品 赋值及不确定度研究
黄杰 非传染病诊断试剂室 中国食品药品检定研究院
PPT大量采用了ISO17511（2015草案）和Miller教授培训PPT，也是学习体会
报告内容
标准物质基本概述 溯源 赋值、不确定度研究
互通性、一致化研究
题目5
中检院已发布标准物质
2016年11月7日 61个品种
• 5.4 有符合ISO15194国际约定校准物,它定义被 测量;无国际约定参考测量程序和原级校准品, 未计量学溯源到SI的情况
• 5.5 有国际约定校准物（非一级），但无国际 约定参考测量程序，未计量学溯源到SI的情况
ISO 17511(2015草案)
• 5.5 有国际一致化方案支持的国际约定校准物;无国际约定参考物质和参考测量 程序，未计量溯源到SI的情况
Secondary Reference Material (matrix)
Manufacturer’s Product Calibrator
Patient’s Sample
Assign value Calibrate
Assign value Calibrate
Assign value Calibrate
1.06 36.32 35.33 14.48 14.89 6.92 7.04 3.51 3.48 1.82 1.81 0.99 0.95
室温4h
信号值
208084646 211043379 144477679 148180812 82335569 79681128 33674633 33402338 11960708 12124549
各厂家稀释
2
29.94 14.94 7.53 3.84 2.01 1.12 23.61 11.97 6.06 3.12 1.65 0.89
3
25.74 14.48 7.28 3.34 1.65 0.84 23.85 12.91 6.36 3.14 1.63 0.8
储存条件 配制基质
标示 30
15
去激素人血清， 7.5 200ng/ml
NIBSC国际协作标定
促黄体生成素
免疫试剂最多、检测方法最全面，被采纳数据最多
泌乳素
2013
2014
2015
2017
C-肽
游离前列腺特异性抗原 总前列腺特异性抗原
报告内容
标准物质基本概述 溯源 赋值、不确定度研究
互通性、一致化研究
题目5
术语和定义
计量学溯源性 metrological traceability 测量结果或标准的值通过连续的比较链与一定的参考标 准相联系的属性，参考标准通常是国家或国际标准， 比较链中的每一步比较都有给定的不确定度。