无菌检查法验证方案
除菌过滤后消毒剂无菌验证方案
消毒剂除菌过滤后检验方法验证方案目录1.0 概述 (3)1.1 目的 (3)1.2 范围 (3)1.3 职责 (3)2.0 可接受标准 (4)3.0 确认前条件 (4)1.1 人员确认 (4)1.2 文件确认 (5)4.0 文件记录要求 (5)5.0 程序 (5)5.1 仪器的确认 (5)5.2 菌株、培养基及试剂 (5)5.3 验证步骤 (7)5.4 验证总结 (9)6.0 再确认 (9)7.0 偏差 (9)8.0 变更 (10)9.0 术语 (10)10.0 参考文件 (10)11.0 修订历史 (10)12.0 附录列表 (10)1.0概述1.1目的2010版GMP附录无菌第九章第四十四条A/B级洁净区应当使用无菌的或经无菌处理的消毒剂和清洁剂。
本公司在A/B级洁净区使用的消毒剂有75%乙醇、过氧乙酸消毒液PAA，清洁剂为注射用水。
按2010版GMP第七章第一百四十条规定对该除菌方式进行验证。
1.2范围本确认方案时应用于江苏复旦复华药业有限公司消毒剂除菌过滤后检验方法验证工作。
1.3职责1.3.1QC检验员职责QC检验员，同时作为验证实施部门，职责如下：1.3.1.1起草验证草案，完成验证报告；1.3.1.2负责对相关人员进行培训，确保验证工作按方案进行；1.3.1.3负责本方案的实施，验证数据的收集及数据分析；1.3.1.4协调进行验证中可能出现的偏差的调查、完成变更的书面记录、完成验证报告；1.3.1.5负责向QC部门经理及时报告验证中出现的问题。
1.3.2QC部门经理职责1.3.2.1QC经理审核本验证方案与验证报告；1.3.2.2负责指导验证中发生的偏差的调查及审核验证期间发生的偏差；1.3.2.3负责安排具有资格的操作人员开展验证工作；1.3.2.4负责验证过程中的监督与指导等其它工作。
1.3.3QA职责1.3.3.1负责确认工作实施的监督；1.3.3.2协调进行验证中可能出现的偏差的调查、完成变更的书面记录；1.3.3.3为制定和实施本验证方案提供相关程序等必要文件、技术支持；1.3.3.4负责验证用仪表、量具等相关器具的校验，并保证在有效期内；1.3.3.5QA文档管理员负责给出确认文件的文件编号，以及相关文件的发放、回收及归档；1.3.3.6QA经理负责本验证方案与验证报告的审核。
无菌服清洁与灭菌效果验证方案措施
无菌检验 方法学验证方案辽宁爱母医疗科技有限公司 2010 年 9 月文件名称 文件编号 起草部门无菌检验方法学验证方案起草人起草日期总页数 备注审核部门审核人生产技术部主管起草部门主管审批部门审批人总工办负责人质量部主管审核意见审核日期审批意见审批日期1、验证对象、范围及时间 2、目的 3、实施验证的人员分工及职责 4、可接受标准 5、验证操作方法 6、验证结论 7、结果分析与评价 8、漏项与偏差表 9、再验证周期 10、最终批准 11、附录目录1、验证对象及范围本实验是关于产品无菌检查试验的验证。
参照《中国药典2005年版》二部附录无菌检查方法进行试验。
结果采用直接接种法对人工污染的六种菌株进行试验，产品对枯草芽孢杆菌、生孢梭菌有不同程度的抑菌作用。
采用薄膜过滤法用0.9%氯化钠100mL进行样品稀释，然后用500mL的pH7.0氯化钠缓冲液分几次冲洗，可消除其抑菌成分。
验证结果应显示对产品无菌试验方法。
2、目的 本方案的目的在于为分析评价无菌检验方法，以确认采用适宜的检验方法。
3、实施验证的人员分工及职责表 1 无菌检验方法学验证小组职责分工验证职责负责部门负责人起草验证方案起草验证报告无菌检验方法学验证实施检验审核验证方案和验证报告批准验证方案和验证报告4、接受标准已对生化检验人员进行专业培训。
5、验证操作方法5、1 概述本产品为三类医疗器械无菌产品。
无菌检查法是对该产品质量控制的重要检查项目，《2005年版药典》要求建立产品的无菌检查法时要进行方法学的验证，来确认所采用的方法适用。
按照《中国药典2005年版》要求，以金葡球菌，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌，黑曲霉菌作为实验菌种，对甲磺酸罗哌卡因注射液无菌检查方法进行了验证实验。
5、2 验证主要文件文件名称编号实际情况《无菌工作服管理规程》AM·SMP·De23-05-I《初始污染菌检验》5、3 无菌服洗衣消毒灭菌程序纯化水浸泡加洗涤剂适量15 分钟洗涤脱水2 分钟纯化水漂洗消毒0.1 新洁尔灭浸泡 15 分钟纯化水漂洗5 分钟3 分钟脱水晾干放入无菌袋灭菌121℃，30min放入传递窗缓冲区指定地点5、4 取样 将浸有灭菌生理盐水的棉拭子在无菌服的门衣襟、袖上来回涂抹 10 次（往返为一次）采样面积为 5cm×5cm，将棉拭子放入 10ml 灭菌生理盐水的试 管中。
无菌检验方法验证
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无菌检验阳性结果调查
实验室调查：一个合适的调查程序和记录是必要的
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无菌检验阳性结果调查
若产品不合格，必须通过该批生产过程回顾找出污染 原因和污染源 –人 – 物料 – 环境 – 设备 – 方法和工艺
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方法二：用实验确定是否具有抑菌性的方法 在规定量的供试液中加入实验用微生物10~100个，
如微生物生长良好，即说明供试品对该种微生物无抑 菌活性。如已用药典规定的各试验菌试验，结果均能 生长良好，说明供试品无抑菌性，可用常规方法检验 之。将这些试验记录在案——就是证明该供试品无抑 菌性的验证试验部分；如加入的微生物不生长或生长 缓慢，说明供试品有抑菌性，将这些试验记录在案— —就是证明该供试品有抑菌性的验证试验部分；如加 入的微生物中有某一种菌最不能生长或生长最缓慢， 这一种菌就是该样品的敏感菌。
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验证试验和对验证结果技术评价的判断为：如平行3 次的试验中，各管微生物均生长良好，说明供试品 已消除了抑菌活性。可以确定按该方法进行该品种 的无菌检查；如有供试品管的微生物生长微弱、缓 慢或不生长，说明供试品仍有抑菌活性，应考虑进 一步增加冲洗量或中和剂的用量以消除抑菌活性， 并重新验证，直至验证证明已充分消除或有效降低 抑菌活性。
条件 无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行， 其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污 染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物 的检出。
无菌检验方法验证
无菌检验方法验证无菌检查方法是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的试验方法！至于无菌检查具体有哪些验证方法呢？下面就随店铺一起来了解下吧！无菌检验方法验证无菌检查方法验证一般分为前验证和再验证两种。
前验证，也称预验证，指在无菌分析方法正式使用前，按照预定验证方案进行的验证。
如果没有充分的理由，任何检查方法必须进行前验证。
再验证，指某一检查方法经过验证并在使用一段时间后进行的，旨在证实已验证状态没有发生飘移而进行的重新验证及对检查方法进行修订、改变时进行的验证。
通常一个无菌产品的检查流程为：首先基于产品的剂型、溶解度等性质，按照药典的要求确定是否需要进行前处理;然后根据产品的特性是否有抑菌性，确定是否需要增加去除产品抑菌性的方法;最后验证整个检查方法中用到的一切及试验过程中的每一个环节包括样品的预处理方式、检查过程、培养条件等均不影响样品中微生物的生长。
前处理方法直接影响后续步骤的效果和重现性，应是验证的重点。
供试品中抑菌活性的去除是当前验证工作的重点，尤其强调应充分验证供试品本身对微生物生长的影响。
(一)具体的验证方法如下：1. 菌种的选择无菌检查方法验证中通常选择以下6种试验中常用的控制菌的标准菌株，它们分别代表不同类型的菌种：枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]代表药品中常见的污染菌——芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]代表革兰阳性菌、生孢梭菌 [CMCC(B)64 941]代表厌氧菌、大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]代表革兰阴性菌、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]代表酵母菌、黑曲霉菌 [CMCC(F)98 003]代表霉菌。
2. 菌液的制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30~35 ℃培养18~24h;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，23~28℃培养24~48h，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。
直接接种无菌检查法验证方案及报告
贵州金玖生物有限责任公司验证方案及报告验证方案名称：直接接种无菌检查方法验证验证方案编号：验证完成日期：有效期：验证方案申请人: 日期: 年月日验证方案审核人: 日期: 年月日验证方案审批人: 日期: 年月日1 概述无菌检查法是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的检查法，是作为批准无菌产品放行的检验或监督部门对无菌产品质量监督中的一个重要项目。
它是根据用于实验的培养基中是否有微生物生长来判定样品的无菌性，液体培养基变浑浊一般表明样品受微生物的污染。
基于微生物污染的不均匀性，使无菌检查法结果的可信度受许多因素制约，如抑菌因素、检查法、检验量、检查用的培养基质量、操作环境、无菌技术等。
检验方法的验证是现代质量保证体系中关系到质控技术、方法、手段的科学性、准确性的重要组成部分，是保证检验结果的公正、科学、准确的基础。
2 验证目的对本公司所采用的直接接种无菌检查法进行分析验证，以证明所采用的方法适合于本公司产品的无菌检查。
3 实验原理直接接种法是通过加入一定的抑菌中和剂，以方便而快捷地中和抑菌剂，消除抑菌作用，从而消除抑菌作用对无菌检查的影响。
本实验通过设计对照试验对直接接种法所加入的抑菌剂的中和效果进行验证，从而得出直接接种法无菌检验的有效性。
4 验证范围实用于本公司所采用的直接接种法进行的无菌检验过程验证。
56 职责7 验证内容建立样品组、对照组及菌种活性检查组，接种菌株到指定培养基，培养24~72小时，比较观察菌落的生长状况，得出结论。
8 验证指示物本实验所用菌种为购于贵州食品药品监督管理局标准菌株:大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌及生孢梭菌。
9 实验过程（1）培养基的配制用于大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的营养琼脂培养基用于白色念球菌的改良马丁培养基用于生孢梭菌的流体硫乙醇酸盐培养基（2）供试品的制备术泰舒TM生物多糖冲洗胶液供试品：直接取成品10ml，加pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试品。
无菌验证方案
4.4.10无菌参照中国药典2010年版二部附录ⅪH 无菌检查法操作并进行方法学验证。
4.4.10.1 验证用培养基硫乙醇酸盐流体培养基，批号；改良马丁琼脂培养基，批号；营养琼脂培养基，批号；营养肉汤培养基，批号；改良马丁培养基，批号；玫瑰红钠琼脂培养基，批号；4.4.10.2 验证用菌种金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]，批号；铜绿假单胞菌[CMCC（B）10 104]，批号；枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]，批号；生孢梭菌[CMCC（B）64 941]，批号；白色念珠菌[CMCC（F）98 001]，批号以上菌种均由中国药品生物制品检定所提供。
4.4.10.3 培养基的适用性检查（1）无菌性检查随机取用于实验批次的营养肉汤培养基（30~35℃培养），营养琼脂培养基（30~35℃培养），改良马丁培养基（23~28℃培养）、硫乙醇酸盐流体培养基（30~35℃培养）各5支/瓶，置规定温度的培养箱中培养14天，结果应均无菌生长。
（2）培养基灵敏度检查1）菌液制备取经30~35℃培养18~24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌与枯草芽孢杆菌营养肉汤液体培养物1ml加入9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，用0.9%无菌氯化钠溶液以10倍稀释的方式稀释至10-5～10-7，使每ml菌悬液约含50～100cfu菌落数，备用。
取经30~35℃培养18~24小时的生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养物1ml ，加入9ml 0.9%氯化钠溶液中，用0.9%无菌氯化钠溶液以10倍稀释的方式稀释至10-6备用。
取经20~28℃培养24~28小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml，加入9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，用0.9%无菌氯化钠溶液以10倍稀释的方式稀释至10-6，使每ml菌悬液约含50～100cfu菌落数，备用。
2）各菌悬液活菌计数结果活菌计数结果记录于表10-38。
表10-38 活菌计数（cfu/ml）10－5稀释10－6稀释10－7稀释均数试验次数 1 2 3 1 2 3 1 2 3金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌铜绿假单胞菌白色念珠菌3）培养基接种取无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基9支，每支12ml，分别接种上述活菌计数结果约为50～100cfu/ml的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，每支接种菌悬液1ml，另一支不接种作为空白对照，在30~35℃培养3天。
无菌检查方法验证方案
无菌检查方法验证验证项目编号R-YZ-501-01年月验证机构云南德华生物药业有限公司质控部化验室负责部门：质控部验证小组成员：验证方案批准对验证方案批准表示同意其测试内容、测试方法和本方案内的各种表格格式、内容。
目录1.概述2.验证目的3.验证范围4.验证人员及职责5.文件准备和培训6.验证条件及验证时间安排7.验证依据8.验证过程9.评价标准10.验证过程评价11.验证结论12.建议无菌检查方法验证1.概述无菌检查是用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其它品种是否无菌的一种方法。
无菌检查工作量大、操作不规范、人员的知识匮乏、检查方法应用不当等都会导致试验失败，因此在对一个产品进行无菌检查之前应先对无菌检查方法进行验证。
2.验证目的2.1确认所用的无菌检查方法适用于“医用即溶止血纱布”的无菌检查。
2.2确保检查结果的准确性、可靠性、准确性和重新性以及检查方法的完整性。
2.3通过对不同批次产品无菌检查的比较，对医用即溶止血纱布产品的生产全过程进行质量监控。
3.验证范围医用即溶止血纱布产品的无菌检查。
4.验证人员及职责验证委员会负责验证项目的确定；质控部负责该验证方案的起草及组织实施；验证小组负责验证方案的审批；质控部参与验证的实施及监督。
验证小组成员：5.文件准备和培训5.1检查验证所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。
5.2培训参加验证人员需进行本文件及下述内容的培训：微生物知识、无菌检查及微生物检验操作培训。
6.验证条件及验证时间安排6.1验证条件6.1.1检验公用系统验证及仪器安装完成；仪表量器经过校验合格，且在有效期内。
6.1.2供试品3批①②③6.1.3培养基及试剂：氯化钠：临用前配成0.9%浓度的溶液硫乙醇酸盐流体培养基批号：生产厂家：改良马丁培养基批号：生产厂家：营养肉汤培养基批号：生产厂家：改良马丁琼脂培养基批号：生产厂家：6.1.4验证用菌株：（来源：云南省药品检验所）金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】生孢梭菌【CMCC（B）64941】大肠埃希菌【CMCC（B）44102】白色念珠菌【CMCC（F）98001】6.1.5无菌检验仪器及相关设备压力蒸汽灭菌器型号：生产厂家：生化培养箱型号：生产厂家：霉菌培养箱型号：生产厂家：超净工作台型号：生产厂家：6.2验证时间验证小组提出完整的验证计划，经批准后实施，整个验证活动按下面时间安排完成。
商业无菌检验能力验证技术方案
食品微生物学检验
商业无菌检验能力验证技术方案
根据《新项目论证技术要求》，为保证此次能力验证数据准确，结果可靠，特制定如下技术方案：
一、检验依据
《食品微生物学检验商业无菌检验GB4789.26-2013》
二、检品
灭菌乳：取两个品牌的同品种产品
调制乳：灭菌工艺生产的产品
三、人员比对
灭菌乳A：a、b分别试验进行数据比对（双人双平行）；
灭菌乳B：c、a分别试验进行数据比对（双人双平行）；
调制乳：c、b分别试验进行数据比对（双人双平行）。
三、准备工作
仔细核对并灭菌本试验使用试剂、耗材以及玻璃容器等。
四、质量控制
1、按照国家标准规定准确称重并按照不同温度进行保藏或培养。
2、仪器设备性能和检测环境的确认
（1）依据《消毒与灭菌效果的评价方法与标准GB15981-1995》定期对高压蒸汽灭菌锅的灭菌效果进行检测评价并记录；
（2）依据《无菌室消毒灭菌操作规程》定期对对无菌室、生物安全柜、超净台、无菌衣进行清洁消毒灭菌；
（3）依据《实验室质量控制规范食品微生物检测GB/T27405-2008》定期对对无菌室、生物安全柜及超净台进行沉降菌检测并记录。
3、对照
每次实验均应进行低温对照确保实验数据的可靠性。
五、注意事项
1、实验人员要严格按照《无菌检查系统操作规程》进出无菌室；
2、严格按照《食品微生物学检验总则GB4789.1-2016》进行采样
和实验；
3、PH测定所用到的酸度计每次应进行校准；
4、本实验不包含商业无菌异常原因分析；。
无菌、微生物限度检查及方法验证
01
02
03
直接接种法
将样品接种在培养基上， 观察是否有微生物生长。
薄膜过滤法
将样品通过薄膜过滤，收 集滤膜上的微生物，再进 行培养。
离心沉淀法
将样品离心，收集沉淀物 中的微生物，再进行培养 。
无菌检查的注意事项
确保环境洁净
无菌检查需要在洁净的环境中进行，以避免 外界微生物的污染。
避免样品中防腐剂的影响
方法验证
方法验证的定义与目的
定义
方法验证是对检测方法的可靠性、准确性和可重复性的评估过程，以确保该方 法能够满足预期的检测要求。
目的
方法验证的目的是确保所采用的无菌、微生物限度检查方法具有足够的灵敏度 、特异性、重现性和可操作性，以保证检测结果的准确性和可靠性。
方法验证的流程
准备验证计划
制定详细的验证计划，包括验 证实验的设计、实验步骤、数 据收集和分析等内容。
进出口检验
进出口药品需要进行严格的微生物限度检查，以确保药品符合进口 国或地区的质量标准，保障公众健康。
方法验证在药品质量控制中的应用
验证无菌、微生物限度检查方法的可靠性
通过方法验证可以确保无菌、微生物限度检查方法的准确性和可靠性，提高药品质量控制 水平。
评估检测方法的性能指标
方法验证过程中需要对检测方法的性能指标进行评估，如灵敏度、特异性、重现性等，以 确保检测结果的准确性和可靠性。
如果样品中含有防腐剂，可能会抑制微生物 的生长，因此需要进行相应的处理。
正确选择培养基
根据待测样品的特性，选择适合的培养基， 以确保微生物能够正常生长。
定期进行方法验证
无菌检查方法需要定期进行验证，以确保其 可靠性。
0义与目的
无菌线验证方案范文
无菌线验证方案范文一、目的和范围二、设备和试剂1.灭菌器：包括高温灭菌器、过滤器和紫外线灭菌器等。
2.培养基：需使用无菌培养基。
3.培养箱：需验证其温度和湿度的准确性。
4.空气采样器：用于采集环境中的微生物。
三、验证步骤1.准备工作（1）准备验证材料：无菌培养基、无菌培养箱、无菌培养皿、灭菌针具等。
（2）准备验证记录表：包括验证日期、验证人员、验证材料、验证结果等。
2.空气质量检测（1）打开空气采样器，将其固定在适当的位置，采集约30分钟。
（2）将采集的样品用无菌材料封装，送至专业实验室进行微生物检测。
（3）根据检测结果判断环境空气中微生物污染的情况。
3.培养箱验证（1）检查培养箱的温度和湿度显示是否准确。
（2）将无菌培养基分装到无菌培养皿中。
（3）将培养皿放入培养箱中，设定适当的温度和湿度。
（4）培养一定时间后，观察培养皿中是否有微生物生长。
4.灭菌验证（1）使用高温灭菌器、过滤器和紫外线灭菌器等进行灭菌操作。
（2）将无菌培养基和培养皿等材料放入灭菌器中，执行相应的灭菌程序。
（3）灭菌结束后，将培养基和培养皿进行培养，观察是否有微生物生长。
5.操作员无菌操作验证（1）验证实验员是否按照无菌操作规程进行操作。
（2）观察实验员的操作流程、手部清洁程度和戴手套的方法。
（3）观察实验员操作过程中是否产生颗粒和飞溅等污染物。
四、验证结果和记录1.根据各项验证结果，分别判定环境空气、培养箱和灭菌操作是否符合无菌要求。
2.对操作员无菌操作进行评价，给予合格或不合格的评定。
3.将验证结果和评价记录在验证记录表中，并签名确认。
五、验证频率根据实验室或生产环境的要求，无菌线验证可以进行定期验证和临时验证。
定期验证：按照一定的频率进行验证，如每月或每季度进行一次。
临时验证：针对特殊情况或新装置的投入使用，进行一次性验证。
六、验证结果分析和改进根据验证结果，对无菌操作是否符合要求进行分析和评价，发现问题并进行改进。
同时，需要对验证方案进行评估和调整，以确保验证的准确性和可操作性。
无菌、微生物限度检查及方法验证
此法为实验室工作用菌种的最常用的保藏方法，仅能用于工作用菌种的短期保藏。
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琼脂斜面低温保藏法保藏法（厂家常用）
保藏芽胞液对
产芽胞的微生物宜制成芽胞菌悬液后再保藏， 无菌操作，取1ml孢子液接入茄形瓶或培养皿内，轻轻转动使菌液均匀分布于培养基表面。 将培养皿在适当的温度下培养。一般需要7天或更长时间 在层流台下，取3~5ml氯化钠磷酸盐缓冲液（pH7.0）加入培养皿内 用无菌玻璃L棒轻轻刮下菌苔，注意不要划破培养基。 用无菌注射器或无菌吸管吸取菌悬液，收集于试管中。 将收集的芽胞液放在80~90℃水浴中加热15分钟，冷却。 做好标记，放至2~8℃冰箱中保藏。原始芽胞液可保存1年。 每次使用前用平皿法重新标定其浓度。
微生物实验室的质量管理
设施—洁净室、净化工作台、生物安全柜。 设备—高压蒸汽灭菌器、电热恒温干烤箱、培养箱、冰箱。 实验仪器—全封闭薄膜过滤装置、电动匀浆仪、电热恒温水浴箱、离心机、显微镜，及刻度吸管、试管、三角烧瓶、培养皿等。 建立主要设施、设备、仪器的明细记录，内容包括名称、型号、生产厂家、购买日期。 质量保证档案：购买发票、安装验收或开箱验收记录、调试记录、计量检定或运行校验合格证、指定专人负责、制订标准操作规程（SOP）、建立使用登记册，维修、保养记录、改造或更新记录、直至报废记录。
记录温湿度是否在规定的范围内，每次实验时，对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数并记录；如发现问题应找原因，及时报修和报告并将报修原因和结果记录归档。如遇停电，应立即停止实验，重新进入无菌室前，至少开启机房运转1小时以上。
实验室使用管理
微生物实验室的质量管理
平时实验室内应尽可能减少人员的走动或活动，通向洁净室的门要关闭或安装自动闭门器使其保持关闭状态。
枯草芽孢杆菌 [CMCC（B）63501] 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 生孢梭菌 [CMCC（B）64941] 铜绿假单胞菌 [CMCC（B）10104] 大肠埃希菌 [CMCC（B）44102] 乙型副伤寒沙门菌 [CMCC（B）50094] 白色念珠菌 [CMCC（B）98001] 黑曲霉 [CMCC（B）9 003]
注射液无菌检查的方法学验证方案
注射液无菌检查的方法学验证方案注射液的无菌性是医疗领域中最为重要的质量指标之一。
为了确保注射液的无菌性，需要进行方法学验证方案。
本文将介绍一种常见的注射液无菌检查方法学验证方案，确保验证结果准确可靠。
一、验证目的本验证方案旨在验证注射液无菌性检查的方法学准确性和可靠性。
通过验证，可以确保注射液无菌性检查的结果符合预期，并为其他类似检查提供参考。
二、验证对象本验证方案适用于各类注射液无菌性检查方法，包括但不限于常规培养法、膜过滤法、试管法等。
三、验证步骤1. 制定验证计划：明确验证的目标、方法和时间安排等。
2. 准备样品和试剂：收集需要验证的样品和所需试剂，并确认其质量符合要求。
3. 合理布局实验室：确保实验室环境符合无菌实验要求，避免干扰因素的存在。
4. 实验操作：a) 样品准备：按照标准操作程序，制备样品，确保操作无菌。
b) 检测方法操作：按照所选的检测方法，依次进行实验，确保操作无误。
c) 平行实验：为了验证结果的可重复性，进行平行实验，确保结果一致。
5. 结果分析：根据实验结果进行数据统计和分析，得出结论。
6. 结果确认：将验证结果与预期目标进行比较，确认验证是否合格。
7. 编写验证报告：将整个验证过程、操作方法和结果总结编写成验证报告。
四、验证要求1. 严格遵守无菌技术操作规范。
2. 注射液样品的选择应具有代表性和典型性。
3. 实验室环境应符合无菌要求，避免外界干扰。
4. 检测方法的选择应根据实际情况和需求进行。
5. 实验操作过程要规范、准确，确保每个步骤符合方法要求。
6. 结果分析要科学、客观，数据统计要准确无误。
7. 结果确认应根据验证目标和标准进行判断。
8. 验证报告要详细、完整，包括验证目的、方法、结果和结论等。
五、验证结果分析根据实验结果的分析，可以判断注射液无菌性检查方法是否准确可靠。
如果验证结果符合要求并且与预期目标一致，则说明所选的检查方法具有可靠性和精准性。
如果验证结果与预期目标不一致，则需要进一步分析原因，寻找解决方案。
4无菌检验方法验证
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无菌检验方法验证
1.ONE
开展验证的思路和程序
首先了解供试品是否具有抑菌性，抑什么菌
2.TWO
考虑和选择出适当的方法已消除或减低供试品的抑菌性
3.three 4.four
用实验证明你所用的方法已消除抑菌性——能使人工加 入的各种菌生长良好。
将所作实验记录在案——即为确认该供试品在该检验量
条件 无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行， 其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污 染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物 的检出。
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无菌检验方法验证
方法验证试验 当建立产品的无菌检查方法时，应进行
六、验证结论。
七、【检查】项下【无菌】或【微生物限度】具体方法确定。
八、实验员签名、验证报告批准人签名。
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无菌检验阳性结果调查
无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果 不符合无菌检查法要求
回顾无菌测试过程，发现有可能引起微生物污染的 因素
阴性对照有菌生长
稀释：—— 验证降低供试品相对抑菌浓度的有效稀释 倍数。
离心：—— 验证所用转速、时间和微生物的分YO布UR情SIT况E H。ERE
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3、确定供试品是否有抑菌性、抑什么菌 方法一： 可通过查阅临床药物实验手册、文献资料 （特别是杂志“Drug”，每一种新药上市，都有专 门的综述）、申报资料中的药效学资料，关注其对不 同细菌的MIC情况、参考已经验证过的品种、抗菌 药物可根据抗菌谱确定其敏感菌、中成药如果抗菌谱 不清楚，至少需选择一株细菌和一株真菌来试验等方 法。也可直接通过验证实验确定之。
无菌检验方法适用性试验方案
无菌检验方法适用性试验方案无菌检验是一种用于确认样品是否含有微生物的技术方法，广泛应用于药品、医疗器械、食品等行业中。
为了确保无菌检验方法的可靠性和准确性，需要进行适用性试验。
本文将详细介绍无菌检验方法的适用性试验方案。
一、背景介绍二、试验目的1.验证培养基的适用性：验证所选培养基是否能够有效地促进微生物的生长，并区分不同的微生物种类。
2.验证培养条件的适用性：验证所选培养条件（如温度、湿度、压力等）对于无菌检验结果的影响。
3.验证无菌器材的适用性：验证所选无菌器材是否能够有效地防止微生物的污染。
三、试验内容1.培养基适用性试验（1）准备不同类型的培养基，如营养琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、选择性琼脂等。
（2）分别接种已知数量的目标微生物（如大肠杆菌、枯草杆菌、白色念珠菌等）。
（3）分别在不同培养基上培养，并进行菌落计数。
（4）比较同一微生物在不同培养基上的菌落计数结果，评估培养基的适用性。
2.培养条件适用性试验（1）选取不同的温度、湿度、压力等培养条件。
（2）分别接种已知数量的目标微生物。
（3）在不同培养条件下培养，并进行菌落计数。
（4）比较同一微生物在不同培养条件下的菌落计数结果，评估培养条件的适用性。
3.无菌器材适用性试验（1）准备不同类型的无菌器材，如培养皿、试管、注射器等。
（2）分别接种已知数量的目标微生物。
（3）使用无菌器材进行培养，并进行菌落计数。
（4）比较不同无菌器材上的菌落计数结果，评估无菌器材的适用性。
四、数据处理和结果分析根据试验结果进行数据统计和分析，并评估不同培养基、培养条件和无菌器材的适用性。
可以使用统计方法，如t检验、方差分析等，对数据进行处理和分析，以验证试验结果的可靠性。
五、质量控制1.试验过程中要严格遵循无菌操作规程，防止试验过程中的交叉污染。
2.试验中使用的培养基、培养条件和无菌器材应符合相关标准和规范，确保试验结果的可靠性。
六、结论根据试验结果，对所选的无菌检验方法进行适用性评估，判断其是否符合要求。
医疗器械无菌检验方法验证方案
**********有限公司无菌检验方法验证方案验证方案申请人: 日期: 年月日验证方案审核人: 日期: 年月日验证方案审批人: 日期: 年月日1. 概述：无菌检查法是为了检查药典要求无菌的医疗器械产品是否无菌而建立的检查法，是作为批准无菌产品放行的检验或监督部门对无菌产品质量监督中的一个重要项目。
它是根据用于实验的培养基中是否有微生物生长来判定样品的无菌性，液体培养基变浑浊一般表明样品受微生物的污染。
基于微生物污染的不均匀性，使无菌检查法结果的可信度受许多因素制约，如抑菌因素、检查法、检验量、检查用的培养基质量、操作环境、无菌技术等。
检验方法的验证是现代质量保证体系中关系到质控技术、方法、手段的科学性、准确性的重要组成部分，是保证检验结果的公正、科学、准确的基础。
2. 验证目的：验证所采用的方法和条件是否适合于供试品的无菌检查。
即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性以被充分消除到可以忽略不计。
3. 验证范围：适用于医用纱布无菌检查法的验证。
4.验证人员及职责5. 文件准备和培训检查验证所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。
6. 验证条件6.1. 仪表量器经过校验合格，且在有效期内。
6.2. 供试品：随机抽取*******医药有司生产的3个批次医用无菌医用纱布6.3. 培养基及试剂：6.3.1. 试剂试液：0.9%氯化钠、氯化钠—蛋白胨缓冲液，配制记录见附件16.3.2. 培养基硫乙醇酸盐流体培养基生产厂家：批号：改良马丁培养基生产厂家：批号：营养琼脂培养基生产厂家：批号：改良马丁琼脂培养基生产厂家：批号：蛋白胨生产厂家：批号：培养基配制记录见附件2。
6.4. 验证用菌株：金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】生孢梭菌【CMCC（B）64941】白色念珠菌【CMCC（F）98001】黑曲霉【CMCC（F）98003】标准菌株购自：浙江省食品药品检验研究中心各验证用菌种传代记录见附件3。
医疗器具无菌检查方法验证方案
医疗器具无菌检查方法验证方案1概述无菌检查法系用于检查药典要求的医疗器械产品是否无菌的一种方法，其应在1000级下的局部100级的单向流空气区域内进行的，其全过程应严格无菌操作，防止污染，以免供试品的检出误判定。
2验证目的通过验证，确认所采用的试验方法适用于本产品的无菌检查，以确认我公司的无菌检验的有效性，确保产品满足相关标准要求。
3 验证范围3.1 在每个月的同一生产批（灭菌批）中选取序列号排在最后的产品（为特制试验用，工艺与常规产品相同）（具体抽样量见表1）。
为了扩大样本量，每个月至少进行一次验证，连续不低于六个月，且根据产品特性，每月按规格大小分档选取样品。
表1 批出厂产品最少检验数量4 验证人员及职责管理者代表：XX，负责验证项目的确定及审批；质控部：XX，负责验证方案的起草及组织实施；质控部：XX，负责验证的操作执行。
质控部：XXX、XXX，负责检验的操作和复核。
5 文件准备和培训5.1 检查验证所需的各类文件及记录资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。
5.2 组织参加验证人员需进行本方案的学习。
6 验证条件及验证时间安排6.1 验证条件6.1.1 质控部检测的公用系统良好；仪表量器经过校验合格，且在有效期内。
6.1.2 供试品至少6批6.1.3 培养基及试剂：①0.9%的氯化钠溶液②硫乙醇酸盐流体培养基③改良马丁培养基④改良马丁琼脂培养基⑤营养琼脂培养基⑥PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液⑦营养肉汤培养基6.1.4 验证用菌株：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26003]枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63501]生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B) 64941]白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98001]。
无菌检查方法验证方案
无菌检查方法验证方案无菌检查是用来验证产品的无菌性的方法。
无菌性是指产品中不存在可繁殖的微生物。
无菌检查的目的是确保产品的安全性和质量，避免由于微生物污染而引起的感染或降低产品的有效性。
1.检测方法的选择：根据产品的特性和要求，选择合适的无菌检测方法。
常用的无菌检测方法包括微生物限度试验、膜过滤法、直接刨片法和填充法等。
2.样品准备：根据产品的特性和要求，合理选择样品的采集方法和数量。
样品的采集应在无菌条件下进行，以避免外部微生物的污染。
样品的存储和运输也需要符合无菌条件。
3.控制样品：准备一批已知无菌的样品作为正对照，以验证无菌检测方法的准确性和灵敏度。
正对照的准备应在无菌条件下进行，并进行相关记录。
4.负对照：准备一批已知含有可繁殖的微生物的样品作为负对照，以验证无菌检测方法的特异性和无菌性。
5.实验操作：根据选定的无菌检测方法，进行实验操作。
实验操作应在无菌条件下进行，包括无菌操作台、无菌培养基和无菌器具的使用。
所有操作人员都应接受相关的培训和认证。
6.试验结果的解释和判定：根据实验结果，判断样品是否无菌，并根据相应的标准和规范进行判定。
试验结果的解释和判定应由经过培训和认证的人员进行。
7.系统的记录和存档：对于每一次无菌检测，应记录实验过程、实验结果和相关的数据。
实验记录应具备可追溯性，便于审核和查找。
所有记录和相关数据应进行适当的存档，以备将来参考。
8.系统的验证：根据无菌检测方法验证方案的内容和要求，对整个无菌检测系统进行验证，包括设备、物料和人员。
验证应由专业的第三方机构进行，确保验证结果的客观性和可靠性。
验证结果和报告应进行适当的存档，以供将来参考。
以上就是一个完整的无菌检查方法验证方案。
通过合理的无菌检查方法验证方案的制定和实施，可以确保无菌检测的准确性和可靠性，保证产品的质量和安全性。
无菌检查方法验证方案
产品无菌检查方法验证方案无菌检查方法验证1.概述无菌检查是用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其它品种是否无菌的一种方法。
无菌检查工作量大、操作不规范、人员的知识匮乏、检查方法应用不当等都会导致试验失败，因此在对一个产品进行无菌检查之前应先对无菌检查方法进行验证。
2.验证目的2.1确认所用的无菌检查方法适用于“本公司所有无菌产品”的无菌检查。
2.2确保检查结果的准确性、可靠性、准确性和重现性以及检查方法的完整性。
2.3通过对不同批次产品无菌检查的比较，对医用即无菌产品的生产全过程进行质量监控。
3.验证范围“本公司所有无菌产品”的无菌检查。
4.验证人员及职责验证委员会负责验证项目的确定；质控部负责该验证方案的起草及组织实施；验证小组负责验证方案的审批；质控部参与验证的实施及监督。
验证小组成员：5.文件准备和培训5.1检查验证所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。
5.2培训参加验证人员需进行本文件及下述内容的培训：微生物知识、无菌检查及微生物检验操作培训。
6.验证条件及验证时间安排6.1验证条件6.1.1检验公用系统验证及仪器安装完成；仪表量器经过校验合格，且在有效期内。
6.1.2供试品3批①②③培养基及试剂：氯化钠：临用前配成0.9%浓度的溶液硫乙醇酸盐流体培养基批号：生产厂家：TSB 批号：生产厂家：6.1.3验证用菌株：微生物培养基质控品（来源：杭州微球科技有限公司）金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】菌种传代次数铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】生孢梭菌【CMCC（B）64941】白色念珠菌【CMCC（F）98001】6.1.4无菌检验仪器及相关设备压力蒸汽灭菌器型号：编号：生化培养箱型号：编号：霉菌培养箱型号：编号：超净工作台型号：编号：6.2验证时间验证小组提出完整的验证计划，经批准后实施，整个验证活动按下面时间安排完成。
无菌验证方案
1.对无菌操作人员进行定期培训，提高其操作技能和意识。
2.加强生产过程监控，确保无菌操作持续合规。
3.对验证过程中发现的问题，及时整改并跟踪验证效果。
九、方案审批
本方案经相关部门审核、批准后实施。十、附件1. Nhomakorabea菌验证计划
2.无菌试验操作规程
3.模拟试验操作规程
（注：本方案仅作为无菌验证的指导性文件，具体实施过程中需结合实际情况进行调整。）
十、附件
1.无菌验证计划
2.无菌试验操作规程
3.模拟试验操作规程
（注：本方案仅作为无菌验证的指导性文件，具体实施过程中需结合实际情况进行调整。）
第2篇
无菌验证方案
一、前言
为确保产品质量，满足无菌产品生产要求，依据《药品生产质量管理规范》（GMP）及相关法规，特制定本无菌验证方案。本方案旨在对无菌生产过程进行严格监控，确保产品在整个生产过程中达到无菌标准。
无菌验证方案
第1篇
无菌验证方案
一、项目背景
为确保产品在生产过程中达到无菌要求，保障产品质量和消费者安全，根据《药品生产质量管理规范》（GMP）及相关法律法规，特制定本无菌验证方案。
二、目标
1.确保生产过程符合无菌要求。
2.确保验证过程合规、有效。
3.提高产品质量，降低生产风险。
三、验证范围
1.验证产品：本次验证针对所有无菌产品。
2.现场检查：对无菌生产现场进行实地检查，评估无菌操作环节的风险。
3.无菌试验：对关键工艺环节进行无菌试验，以验证产品无菌性。
4.模拟试验：模拟无菌操作过程，验证操作规程的可行性。
五、验证流程
1.准备阶段：
a.成立无菌验证小组，明确各成员职责。
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浙江红雨医药用品有限公司无菌检验方法验证方案及报告验证方案申请人: 日期: 年月日验证方案审核人: 日期: 年月日验证方案审批人: 日期: 年月日1 概述无菌检查法是为了检查药典要求无菌的医疗器械产品是否无菌而建立的检查法，是作为批准无菌产品放行的检验或监督部门对无菌产品质量监督中的一个重要项目。
它是根据用于实验的培养基中是否有微生物生长来判定样品的无菌性，液体培养基变浑浊一般表明样品受微生物的污染。
基于微生物污染的不均匀性，使无菌检查法结果的可信度受许多因素制约，如抑菌因素、检查法、检验量、检查用的培养基质量、操作环境、无菌技术等。
检验方法的验证是现代质量保证体系中关系到质控技术、方法、手段的科学性、准确性的重要组成部分，是保证检验结果的公正、科学、准确的基础。
2 验证目的对本公司所采用的直接接种无菌检查法进行分析验证，以证明所采用的方法适合于本公司产品的无菌检查。
3 实验原理直接接种法是通过加入一定的抑菌中和剂，以方便而快捷地中和抑菌剂，消除抑菌作用，从而消除抑菌作用对无菌检查的影响。
本实验通过设计对照试验对直接接种法所加入的抑菌剂的中和效果进行验证，从而得出直接接种法无菌检验的有效性。
4 验证范围实用于本公司所采用的直接接种法进行的无菌检验过程验证。
5 执行程序文件编码文件名称存放部门HY-QC-012 无菌检验操作规程品管部6 职责姓名职务职责刘传杰经理负责验证方案的批准实施、验证报告的批准周德标QC 验证方案、验证报告的起草并负责验证过程中现场的监控及取样张思东QC 负责按制订无菌检验规程实施检验和验证实验7 验证内容建立样品组、对照组及菌种活性检查组，接种菌株到指定培养基，培养24~72小时，比较观察菌落的生长状况，得出结论。
8 验证指示物本实验所用菌种为购于浙江省食品药品检验研究所标准菌株:金黄色葡萄球菌、白色念球菌、大肠埃希菌及生孢梭菌。
9 实验过程（1）培养基的配制用于大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的营养琼脂培养基用于白色念球菌的改良马丁培养基用于生孢梭菌的流体硫乙醇酸盐培养基（2）供试品的制备创可贴供试品：将包装好的创可贴打开，用剪刀将创可贴剪碎，放入100ml pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液中浸泡1小时，取水层作为供试品。
无菌敷贴供试品：将包装好的无菌敷贴打开，用剪刀将无菌敷贴剪碎，放入100mlpH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液中浸泡1小时，取水层作为供试品。
（3）供试菌液的制备大肠埃希菌菌液：取经35℃培养19小时的大肠埃希菌培养物1ml，加9ml生理盐水，10倍稀释至约10-5~10-8之间,混匀备用。
金黄色葡萄球菌菌液：取经35℃培养19h小时的金黄色葡萄球菌培养物1ml，加9ml 生理盐水，10倍稀释至约0-5~10-8之间,混匀备用。
白色念球菌菌液：取经25.5℃培养72小时的白色念珠菌真菌斜面培养物，加入生理盐水4ml洗下孢子，吸出转移至空试管作为原液，取1ml加9ml生理盐水，10倍稀释至10-6，取1.2ml加生理盐水9ml，混匀备用。
生孢梭菌菌液：取经35℃培养18h的生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养基培养物1ml，加9ml生理盐水，10倍稀释至10-6，混匀备用。
（3）实验设计实验样品组：按照本公司常规微生物检验方法进行，加入抑菌中和剂，最后接入已知量的菌株（≤100cfu），培养观察。
阳性对照组：以0.1%的蛋白胨代替供试品，加入抑菌中和剂，最后接入同样量的菌株，培养观察。
阴性对照组：取与实验样品组等量的供试品，加入与中和剂等量的生理盐水，最后接入已知量的菌株（≤100cfu），培养观察菌种活性检查组：直接将菌种接种到培养基上，培养观察。
10 标准与判断1. 如果实验样品组与阳性对照组的微生物计数相似，表明所用中和剂（中和剂类别及用量）具有足够的中和效力；2. 如果阳性对照组与菌种活性检查组的微生物生长数量相似，表明所用的中和剂不影响微生物的生长。
3. 阴性对照组微生物生长量应低于实验组，才能证明供试剂有抑菌性，否则该实验无意义。
4. 样品组的平均菌检计数结果不得低于对照组的70%，否则直接否定无菌检验方法。
11 检验与记录无菌检查验证实验数据表（菌落数/皿）NO: 供试品：实验时间：试验组名检验菌种实验样品组阳性对照组阴性对照组活性检查组大肠埃希菌1 2 3 4 5 平均金黄色葡萄球菌1 2 3 4 5 平均白色念球菌1 2 3 4 5 平均生孢梭菌1 2 3 4 5 平均结论：实验人：日期：年月日复核人：日期：年月日12 编写验证报告（1）根据验证方案设计实验；（2）统计实验数据编写验证报告。
13 再验证周期及日常监测（1）无菌检查按所生产的每批次进行日常监测；（2）当无菌检查日常监测出现不符合标准时，必须进行再验证；（3）当无菌检查方法发生改变和生产工艺发生改变时，必须重新验证；（4）本验证方案有效期为1年。
14 验证结果与评价实验人对验证实验结果做好相关记录并进行科学性评价；15 验证方案的批准验证小组审阅所有结果及评价分析意见，同意验证结果，签字并按此结论实施。
直接接种无菌检查法验证报告一实验目的对本公司所采用的直接接种无菌检查法进行分析验证，以证明所采用的方法适合于本公司产品的无菌检查。
二实验原理直接接种法是通过加入一定的抑菌中和剂，以方便而快捷地中和抑菌剂，消除抑菌作用，从而消除抑菌作用对无菌检查的影响。
本实验通过设计对照试验对直接接种法所加入的抑菌剂的中和效果进行验证，从而得出直接接种法无菌检验的有效性。
三实验步骤1、.培养基的配制大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌用的营养琼脂培养基：准确称取营养琼脂培养基16.5g，加入500ml纯化水，缓慢加热使其完全溶解。
白色念球菌用的改良马丁培养基：准确称取改良马丁培养基14.5g，加入500ml纯化水，在加入6g琼脂粉，加热使其溶解。
生孢梭菌用的流体硫乙醇酸盐培养基：准确称取流体硫乙醇酸盐培养基14.5g，加入500ml纯化水，在加入6g琼脂粉，加热使其溶解。
将上述配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅中115℃，30min。
2、供试品的制备创可贴供试品：将包装好的创可贴打开，用剪刀将创可贴剪碎，放入100ml pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液中浸泡1小时，取水层作为供试品。
无菌敷贴供试品：将包装好的无菌敷贴打开，用剪刀将无菌敷贴剪碎，放入100ml pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液中浸泡1小时，取水层作为供试品。
3、供试菌液的制备：大肠埃希菌菌液：取经35℃培养19小时的大肠埃希菌培养物1ml，加9ml生理盐水，10倍稀释至约10-5~10-8之间,混匀备用。
金黄色葡萄球菌菌液：取经35℃培养19h小时的金黄色葡萄球菌培养物1ml，加9ml 生理盐水，10倍稀释至约10-5~10-8之间,混匀备用。
白色念球菌菌液：取经25.5℃培养72小时的白色念珠菌真菌斜面培养物，加入生理盐水4ml洗下孢子，吸出转移至空试管作为原液，取1ml加9ml生理盐水，10倍稀释至10-6，混匀备用。
生孢梭菌菌液：取经35℃培养18h的生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养基培养物1ml，加9ml生理盐水，10倍稀释至10-6，混匀备用。
4 、分别取上述两种供试品100ml，加入抑菌中和剂，接入≤100cfu菌株（大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌及生孢梭菌分别进行实验），再接种到每种菌株所需的上述培养基中，作为实验样品组。
5 、用0.1%的蛋白胨溶液代替供试品进行同上步骤操作，作为实验阳性对照组。
6、取与实验样品组等量的供试品，加入与中和剂等量的生理盐水，再同第4步操作，作为阴性对照组。
7、取100ml 0.1%蛋白胨溶液，不加中和剂直接接种等量菌株，再接种到培养基上，作为菌种活性检查组。
8 、将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌及生孢梭菌培养温度为35℃，白色念球菌培养温度为25.5℃，培养数天后，观察并记录菌落数。
四实验结果记录无菌检查验证实验数据表（菌落数/皿）NO:1 供试品：创可贴实验时间：试验组名检验菌种实验样品组阳性对照组阴性对照组活性检查组大肠埃希菌1 2 3 4 5 平均金黄色葡萄球菌1 2 3 4 5 平均白色念球菌1 2 3 4 5 平均生孢梭菌1 2 3 4 5 平均结论：实验人：日期：年月日复核人：日期：年月日NO:2 供试品：创可贴实验时间：试验组名菌种实验样品组阳性对照组阴性对照组活性检查组大肠埃希菌1 2 3 4 5 平均金黄色葡萄球菌1 2 3 4 5 平均白色念球菌1 2 3 4 5 平均生孢梭菌1 2 3 4 5 平均结论：实验人：日期：年月日复核人：日期：年月日NO:3 供试品：创可贴实验时间：试验组名菌种实验样品组阳性对照组阴性对照组活性检查组大肠埃希菌1 2 3 4 5 平均金黄色葡萄球菌1 2 3 4 5 平均白色念球菌1 2 3 4 5 平均生孢梭菌1 2 3 4 5 平均结论：实验人：日期：年月日复核人：日期：年月日NO:4 供试品：无菌敷贴实验时间：试验组名菌种实验样品组阳性对照组阴性对照组活性检查组大肠埃希菌1 2 3 4 5 平均金黄色葡萄球菌1 2 3 4 5 平均白色念球菌1 2 3 4 5 平均生孢梭菌1 2 3 4 5 平均结论：实验人：日期：年月日复核人：日期：年月日NO:5 供试品：无菌敷贴实验时间：试验组名菌种实验样品组阳性对照组阴性对照组活性检查组大肠埃希菌1 2 3 4 5 平均金黄色葡萄球菌1 2 3 4 5 平均白色念球菌1 2 3 4 5 平均生孢梭菌1 2 3 4 5 平均结论：实验人：日期：年月日复核人：日期：年月日NO:6 供试品：无菌敷贴实验时间：试验组名菌种实验样品组阳性对照组阴性对照组活性检查组大肠埃希菌1 2 3 4 5 平均金黄色葡萄球菌1 2 3 4 5 平均白色念球菌1 2 3 4 5 平均生孢梭菌1 2 3 4 5 平均结论：实验人：日期：年月日复核人：日期：年月日12 验证结果与评价实验人：日期：年月日13 验证报告批准检验人：日期：年月日审核人：日期：年月日批准人：日期：年月日。