第三章第三节再生植株ppt课件

根段。
茎尖、茎段 剪或切除枝条上的叶片、叶柄及刺、卷 须等附属物；软质枝条用软毛刷蘸肥皂 水刷洗、硬质枝条用刀刮除枝条表面的 蜡质、油质、茸毛等；枝条剪成带2-3个 茎节的茎段精，品课长件 约4-5cm。
接种材料修整方法
外植体类型
修整方法
叶片
叶片带油脂、蜡质、茸毛，可用毛笔 蘸肥皂水刷洗；较大叶片可剪成若干 带叶脉的叶块，大小以能放入冲洗用
次生代谢产物生产
愈伤组织
种质保存
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成分检测、提取等
• 再生植株途径 • 常规快速繁殖基本环节
• 脱毒苗组织培养 • 育种培养 • 细胞融合
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第一部分 常规快速繁殖基本环节
外植体处理-----愈伤组织（脱分化）----丛生芽、胚 状体、原球茎（再分化）----增值壮苗---根----移栽
形成的茎梢节长， 直立向上呈小灌木 丛状
无愈伤组织产生 继
茎段培养 继代扩繁
代
试管苗
生根培养 获得较多嫩茎梢
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2、丛生芽发生型
外 脱分化
植
体
①
初
②
芽生芽
少量或无愈伤 组织
分化
代 继 代 试管苗
芽、芽丛
切割芽丛 继代培养 生根培养 精品课件 大量芽丛
3、器官发生型
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• 器官发生型有3种基本方式（顺序）： • 先分化芽再分化根：待芽伸长后在其幼茎基部长根， 形成完整的小植株，这种方式在木本植物组织培养中 较为普遍，因此芽和根的诱导要分两步完成 • 先分化根再分化芽：先分化根再在根上产生不定芽而 形成完整植株。一般来说，培养物若先形成根，则会 抑制芽的形成 • 愈伤组织的不同部位分别形成芽和根：然后二者的维 管组织互相连接，成为具有统一的轴状结构的小植株
• 一个细胞向分生状态回复过程所能进行的程度，取决 于它在原来所处的自然部位上已经达到的细胞和生理 状态。
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1、愈伤组织特点
外植体产生的排列 疏松而无规则且没 有发生分化的薄壁
细胞。
• 植物细胞脱分化而不断增殖形成的愈伤组织， 主要由薄壁细胞构成的非器官化组织或不定组 织
• 愈伤组织的颜色、质地不同 • 愈伤组织具有结构的不均一性和生理和遗传上
另一方面：形态发生期
不定芽方式
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胚状体方式---胚型 愈伤组织
4、愈伤组织增殖
• 将诱导形成的愈伤组织转接到新鲜的培养基上时，愈 伤组织就会进一步增殖生长，生长一段时间以后，又 必须重新将愈伤组织切割成一定大小的愈伤组织块， 转接到新鲜的培养基上继续增殖。
• 转接必须及时，因为愈伤组织的生长基本符合s形生 长曲线。
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4、胚状体型
①来源：体细胞 ②特点：直接成苗 ③发生：愈伤组织 表面；悬浮培养的 细胞或外植体表面
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• 体细胞胚(somatic embryo)或胚状体(embryoid)：指的 是在植物组织培养中起源于一个非合子细胞、经过胚胎 发生和胚胎发育过程形成的具有双极性的胚状结构。
• 定义表明: • 它不同于合子胚，因为它不是两性细胞融合的产物; • 它不同于孤雌胚或孤雄胚，因为它不是无融合生殖的 产物; • 它不同于组织培养中通过器官发生途径形成的茎芽和 根，因为它的形成经历与合子胚相似的发育过程，而 且成熟的胚状体是一个双极性结构。
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• 形成期 • 形成期是外植体细胞经过诱导期和分裂期后 形成了无序结构的愈伤组织的时期。进入形 成期后，细胞的平均大小相对稳定，不再减 少，细胞分裂由原来局限在组织外缘的平周 分裂转为组织内部较深层局部细胞的分裂。
分化期----愈伤组织增殖或形态发生： 一方面：愈伤组织增殖---增殖型愈伤组织
的不稳定性
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2、愈伤组织形成的条件
• 离体 • 培养条件（尤其是激素的种类和浓度，常用的
生长素是2，4－D，IAA和NAA，常用的细胞分 裂素是KT和6－BA） • 外植体类型（木本植物中的幼态或成年态） • 外植体原来在植株上所处的位置（它反映了内 源激素的水平）
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3、愈伤组织形成的过程
• 诱导期 • 诱导期是外植体细胞进行分裂准备的时期。在 这一时期外植体细胞大小没有多大变化，但细胞 内合成代谢活跃，RNA含量迅速增加，细胞核体 积明显增大。
• 分裂期 • 细胞分裂的速度大大超过了细胞伸展的速率，细 胞体积迅速变小，逐渐回复到分生状态。外植体 细胞由原来的静止状态经过诱导期的分裂准备之 后进入分裂高峰期，回复为分生状态，这整个过 程即为脱分化。脱分化细胞不断进行分裂，从而 形成了愈伤组织。
容器即可。
花器
一般不用修整，直接冲洗消毒。
果实、种子、 一般不用修整，直接冲洗消毒。种子、 胚、胚乳 胚或胚乳培养时，对于种皮较硬的种
子，可去除种皮或预先用低浓度的盐 酸浸泡或机械磨损。
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接种材料修整与冲洗
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二、愈伤组织形成---脱分化
• 植物细胞只要具有一个完整的膜系统和一个有生命力 的核，即使是已经高度成熟和分化，也还保持着回复 到分生状态的能力。
不定根
整 植 株
不定根 不定芽
体细胞 经历类似合子胚的各个时期 胚状体
兰科植物的 诱导 茎尖或侧芽
反复继代
原球茎
分化
反复继代 植株再精生品途课件径
再生类型
无菌短枝型 丛生芽增殖型 器官发生型 胚状体发生型 原球茎发生型
1、无菌短枝型（微型扦插） 顶芽
微型扦插
初 侧芽
代
带芽的 茎切段
CTK刺激 接种培养
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三、再生途径与类型---愈伤组织再分化
1）、无菌短枝型（微型扦插）
2）、丛生芽发生型（器官型）
3）、器官发生型 4）、胚状体型
5）、原球茎型
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外植体来源
经历途径
外植 体
切割
顶芽 茎段
幼枝
短枝
生根
侧芽
茎尖、茎段
分割
或初代培养 的芽
诱导
丛生芽
生根
完
叶片、叶柄、 诱导
花瓣等
愈伤组织
不定芽
第三节 再生植株途径
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再生植 目 株途径 的
脱分化 再分化
脱毒苗 快繁
育种材 料快繁
良种、突 变体、种 质、濒危 材料快繁
体细胞杂 交材料快 繁
脱毒处理
花药、胚、胚胎、
胚乳等
外植体
各种器官组织
融合原生质体
愈伤组织 人工种子
来自百度文库
倍性检测 脱毒苗检测
检测
移栽
生根
细胞生产
丛生芽 胚状体 原球茎
壮苗
悬浮培 目 养途径 的
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脱分化
外植体
再分化
接种
愈伤组织（脱分化培养基）
丛生芽（再分化培养基）
壮苗（壮苗培养基）
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再生根（生根培养基）
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一、外植体处理
接种材料修整方法
外植体类型
修整方法
根及地下部 剪除老根、烂根；切除损伤及污染严重
器官
部位；用软毛刷刷洗，去除泥土、虫卵
等附属物；幼根剪或切成1至几厘米长的