酶联免疫吸附实验
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
洗涤：每孔加满洗涤液后，静置3-5分钟后甩去 扣干；重复3次 加样及量：待测血清及阳性和阴性对照 各3孔 ／ 组 除终止液0.05ml／孔外，均为0.1ml／孔
（三）原理与方法
间接法
双抗夹心法
抗原竞争法
间接法 包被物 Ag 酶标物 Ab2(抗抗体) 待测物 Ab1(一抗)
双抗体夹心法
抗原竞争法
Ab
Ab
Ab
Ag
ห้องสมุดไป่ตู้
多价大分子抗原 抗原、半抗原、抗体
1、间接法
2、双抗体夹心法
3、竞争法
微实 量验 加材 样料 器 、
板
——
三、双抗体夹心法测定HBsAg
（一）实验流程
抗体包被（4℃过夜）
洗涤3次（已做）
加待测血清及对照液（37℃孵育30′） 洗涤2次
加酶标抗体（37℃孵育30′）
洗涤2次
加底物显色（37℃孵育10min）, 终止酶反应，肉眼 观察或于酶标仪中测OD值
（二） 实验材料及方法
包被抗体：羊抗人HBsAg的抗体 酶标抗体： HRP-羊抗人HBsAg的抗体 底物 ： OPD（邻苯二胺） 终止液： 2M H2SO4
【实验内容】
实验八 ELISA
(双抗体夹心法测定HBsAg)
一、免疫标记技术
（一） 免疫标记技术：即用酶、同位素、荧
光素、发光物质等标记技术代替传统的肉眼可见反 应，其特异性、敏感性均增加，且可以定性、定量 甚至定位；缺点是某些技术需特殊精密检测仪。
（二）免疫酶标技术：用酶标记的已知抗原
（或抗体）来检测未知的抗体（或抗原）的一种免 疫学标记技术。它同时利用了酶的高效催化效能及 Ag-Ab反应的高度特异性；据底物被酶分解后的显 色及深浅可反映待测样品中Ag、Ab的有无与含量； 故可以定性、定量或定位（免疫组化）。
二、 ELISA（酶联免疫吸附试验）
（一） 定义：是固相吸附技术与免疫酶技术的
结合，具有特异性高、敏感性强、稳定性好、操作 简便等优点，是当前应用最广的一类酶免疫测定法。 其中固相免疫技术即将抗原或抗体用物理方法连接 在固相上形成免疫吸附剂。
（二） 常用的实验材料
固相吸附剂：聚苯乙烯、NC膜 酶：HRP（辣根过氧化物酶）、AKP（碱性磷酸 酶） 底物：OPD（邻苯二胺）、 DAB（二胺基联苯 胺）、TMB（四甲基联苯胺）
（三）原理与方法
间接法
双抗夹心法
抗原竞争法
间接法 包被物 Ag 酶标物 Ab2(抗抗体) 待测物 Ab1(一抗)
双抗体夹心法
抗原竞争法
Ab
Ab
Ab
Ag
ห้องสมุดไป่ตู้
多价大分子抗原 抗原、半抗原、抗体
1、间接法
2、双抗体夹心法
3、竞争法
微实 量验 加材 样料 器 、
板
——
三、双抗体夹心法测定HBsAg
（一）实验流程
抗体包被（4℃过夜）
洗涤3次（已做）
加待测血清及对照液（37℃孵育30′） 洗涤2次
加酶标抗体（37℃孵育30′）
洗涤2次
加底物显色（37℃孵育10min）, 终止酶反应，肉眼 观察或于酶标仪中测OD值
（二） 实验材料及方法
包被抗体：羊抗人HBsAg的抗体 酶标抗体： HRP-羊抗人HBsAg的抗体 底物 ： OPD（邻苯二胺） 终止液： 2M H2SO4
【实验内容】
实验八 ELISA
(双抗体夹心法测定HBsAg)
一、免疫标记技术
（一） 免疫标记技术：即用酶、同位素、荧
光素、发光物质等标记技术代替传统的肉眼可见反 应，其特异性、敏感性均增加，且可以定性、定量 甚至定位；缺点是某些技术需特殊精密检测仪。
（二）免疫酶标技术：用酶标记的已知抗原
（或抗体）来检测未知的抗体（或抗原）的一种免 疫学标记技术。它同时利用了酶的高效催化效能及 Ag-Ab反应的高度特异性；据底物被酶分解后的显 色及深浅可反映待测样品中Ag、Ab的有无与含量； 故可以定性、定量或定位（免疫组化）。
二、 ELISA（酶联免疫吸附试验）
（一） 定义：是固相吸附技术与免疫酶技术的
结合，具有特异性高、敏感性强、稳定性好、操作 简便等优点，是当前应用最广的一类酶免疫测定法。 其中固相免疫技术即将抗原或抗体用物理方法连接 在固相上形成免疫吸附剂。
（二） 常用的实验材料
固相吸附剂：聚苯乙烯、NC膜 酶：HRP（辣根过氧化物酶）、AKP（碱性磷酸 酶） 底物：OPD（邻苯二胺）、 DAB（二胺基联苯 胺）、TMB（四甲基联苯胺）