第12章非发酵菌
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非发酵菌感染对策
外排泵高表达：MexAB-OprM,MexCDOprJ,MexXY-OprM,MexEF-OprN
通透性下降:OprD2缺失
生物被膜形成
非发酵菌感染对策
金属酶分类
按功能分成三个亚群: 3a，3b和3c
按氨基酸序列分成三组亚型：B1、B2和B3
获得性金属酶属于B1亚型
包括IMP VIM SPM GIM-1 SIM-1 AIM 位于可转移的基因元件上，造成区域性传播。
连续8年度分离的最常见的革兰阴性菌（株数）
450
400 菌
350
株 数
300
250
200
150
100
50
0
1994 1995 1996 1998 1999 2000 2001 2002
总菌株 554 1048 1348 1542 1291 1678 1949 2062
非发酵菌感染对策
铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 克雷伯菌属 不动杆菌属 肠杆菌属 嗜麦芽窄食单胞菌 变形杆菌属 沙雷菌属 其它假单胞菌属 枸橼酸杆菌属
4% 0%
42%
54%
肠杆菌科 非发酵菌 嗜血杆菌 卡他莫拉菌
非发酵菌感染对策
1316株非发酵菌分布
金氏杆菌 1.4
产碱杆菌 2
伯克霍尔
3.6
嗜麦芽
13
不动
34
铜绿
0
10
20
30
40
非发酵菌感染对策
%
45 50
耐碳青霉烯类非发酵菌逐年上升
非发酵菌感染对策
2007年12家医院9644株非发酵菌耐药率（%）
抗菌药物
耐药
敏感
头孢哌酮/舒巴坦
15.6
非发酵菌的鉴定
非发酵菌的鉴定定义：非发酵菌（nonfermenters）指一群需氧或兼性厌氧、不发酵糖类，能在普通培养基上生长的革兰阴性杆菌。
主要存在外界环境中，种类繁多，多为条件致病菌或医院内感染菌。
关于临床标本中NFB的意义，在混合培养物中见到时，必须考虑到患者的情况和标本来源。
一般来说，以纯培养方式分离自正常无菌部位的NFB，一定要鉴定到种并进行抗生素敏感性试验。
目前CLSI中，K-B法除了假单胞菌属、不动杆菌属、嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌有抗生素敏感性实验的判断标准外，其他非发酵菌没有K-B法的标准。
一、鉴定原则：1．血、无菌部位（脑脊液、胸水等），特殊病人，少见菌可用API-20NE或VIKET TWO-GN 卡鉴定。
2．其它部位如呼吸道标本、临床常见的非发酵，根据菌落形态、生化反应、抗生素耐药谱等综合分析手工法鉴定即可。
二、非发酵性菌基本分类：假单胞菌属Pseudomonas spp.（20多个临床上重要菌种中，铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌等最常见。
）不动杆菌属Acinetoacter spp.（最常分离的种鲍曼不动杆菌、鲁氏不动杆菌、溶血不动杆菌等）窄食单胞菌Stenotrophomonas spp.（嗜麦芽窄食单胞菌、非洲嗜麦芽窄食单胞菌）伯克霍尔德菌Burkholderia spp.（洋葱伯克霍尔德菌、唐菖蒲伯克霍尔德菌、类鼻疽伯克霍尔德菌等）鞘氨醇单胞菌属Sphingomonas spp.（少动鞘氨醇杆菌）无色杆菌属Achromobacter spp.（木糖氧化无色杆菌）希瓦氏菌属Shewanella spp. （腐败希瓦氏菌海藻希瓦氏菌）产硷菌属Alcaligenes spp.黄杆菌属Flavoacterium spp.莫拉菌属Moraxella spp.罗尔斯通菌属 Ralstonia spp.食酸菌属Acidovorax spp.丛毛单胞菌属Comamonas spp.甲基杆菌属Methylobacterium spp.等还有一些未定名的菌群三、辨认非发酵菌的基本要点1. 分离培养基上的菌落有以下情况初步考虑非发酵菌的存在a.培养基上生长较差或中国蓝上不生长的阴性菌。
非发酵菌 PPT课件
3生化反应：OX弱阳性或阴性，H2O2阳性， 能水解明胶，不发酵糖。 4抗原结构：有O抗原和H抗原，O抗原有特 异性。 5.抵抗力：抵抗力强，在水中可存活数月。 对化学消毒剂敏感。
致病性
可引起肺炎型（重症类型）、流感样型 （轻症类型）和肺外感染三种类型； 肺炎型死亡率高 感染后对该菌有一定的抵抗力。
葡萄糖产酸
+
+ + 端鞭毛 +
尿素
－ 无色杆菌属 + 土壤杆菌属
假单胞菌属
第 一节 假单胞菌属 (Pseudomonas)
一、 概述 1. 分类 2. 临床意义 3. 微生物特性 4.微生物检验 (1)检验程序 (2)鉴定 (3)药物敏感性试验(Antibacterial Susceptibility Test)
葡萄糖氧化
木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶
+
－ ＋ ＋
+
＋ ＋ ＋
+/－
+/－ － ＋
－
－ ＋ ＋
－
－ ＋ －/＋
－
－ ＋ －
鸟氨酸脱羧酶
苯丙氨酸脱氨酶 丙二酸盐利用
＋
＋ ＋
＋
＋ ＋
－
－ ＋
－
－ －
－
－ －/＋
－
－ －
枸椽酸盐利用
明胶液化 生长温度: 37℃ Nhomakorabea＋
－ ＋
＋
－ ＋
＋
＋ ＋
＋/－
－ ＋
＋
－ －
生长温度范围广，最适生长温度为35℃
产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光
素、脓褐素
对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药
非发酵菌
非发酵菌
定义
非发酵菌是一大类不能以发酵形式利 用葡萄糖的需氧、无芽孢革兰阴性杆 菌的统称。
主要非发酵菌种类
非发酵菌
铜绿假单胞菌 鲍假单胞菌
伯克霍尔德菌属
洋葱伯克霍尔德菌
窄食单胞菌属
嗜麦芽窄食单胞菌
黄杆菌属
脑膜败血黄杆 菌
产碱杆 菌属
不动杆菌属
鲍曼不动杆菌
感染部位或疾 病 医院获得性肺 炎 败血症
宜选药物 氨苄西林／舒巴坦，头 孢哌酮/舒巴坦 氨苄西林/舒巴坦
可选药物 碳青霉烯类，氟喹诺酮 类 氨基糖苷类，头孢哌酮/ 舒巴坦，碳青霉烯类， 氟喹诺酮类
备注 重症患者可联合 氨基糖苷类 菌株之间对药物 敏感性差异大， 需根据药敏试验 结果选药
• 嗜麦芽窄食单胞菌：首选甲氧苄胺嘧啶/磺胺甲恶 唑（复方新诺明），次选替卡西林-克拉维酸或氨 曲南+替卡西林-克拉维酸。 • 嗜麦芽窄食单胞菌对亚胺培南等碳氢酶烯类天然 耐药。尚无公认的推荐抗菌治疗方案。可根据体 外药敏结果选用复方磺胺甲恶唑（复方新诺明）， 替卡西林-克拉维酸、环丙沙星或左氧氟沙星等。
窄食单胞菌属
嗜麦芽窄食单胞菌
• 嗜麦芽窄食单胞菌为条件致病菌，广泛分 布于自然界的水、土壤和植物中是医院环 境中的常见微生物，在非发酵菌感染中排 第3位。
形态及特征
• 嗜麦芽窄食单胞菌为有动力的需氧革兰阴 性杆菌，具有从及鞭毛，不发酵糖。在多 数培养基上均能生长，在血平皿上呈淡黄 色、淡灰色或淡绿色，有氨味。 • 本菌产生锌离子依赖的金属β内酰胺酶而对 碳氢酶烯类抗生素和β内酰胺酶抑制剂天然 耐药。
兵中流行，造成严重
的公共卫生问题
多重耐药菌与泛耐药菌株
• 多重耐药菌(MDR)是指有多重耐药性的病原 菌。其定义为一种微生物对三类（比如氨 基糖苷类、红霉素、β－内酰胺类）或三类 以上抗菌药物同时耐药。 • 泛耐药菌株(PDR)指除多粘菌素类外，对几 乎所有测试抗菌素耐药。比如对氨基糖苷、 青霉素、头孢菌素、碳氢酶烯系类、四环 素类、氟奎诺酮及磺胺类等耐药。
定义
非发酵菌是一大类不能以发酵形式利 用葡萄糖的需氧、无芽孢革兰阴性杆 菌的统称。
主要非发酵菌种类
非发酵菌
铜绿假单胞菌 鲍假单胞菌
伯克霍尔德菌属
洋葱伯克霍尔德菌
窄食单胞菌属
嗜麦芽窄食单胞菌
黄杆菌属
脑膜败血黄杆 菌
产碱杆 菌属
不动杆菌属
鲍曼不动杆菌
感染部位或疾 病 医院获得性肺 炎 败血症
宜选药物 氨苄西林／舒巴坦，头 孢哌酮/舒巴坦 氨苄西林/舒巴坦
可选药物 碳青霉烯类，氟喹诺酮 类 氨基糖苷类，头孢哌酮/ 舒巴坦，碳青霉烯类， 氟喹诺酮类
备注 重症患者可联合 氨基糖苷类 菌株之间对药物 敏感性差异大， 需根据药敏试验 结果选药
• 嗜麦芽窄食单胞菌：首选甲氧苄胺嘧啶/磺胺甲恶 唑（复方新诺明），次选替卡西林-克拉维酸或氨 曲南+替卡西林-克拉维酸。 • 嗜麦芽窄食单胞菌对亚胺培南等碳氢酶烯类天然 耐药。尚无公认的推荐抗菌治疗方案。可根据体 外药敏结果选用复方磺胺甲恶唑（复方新诺明）， 替卡西林-克拉维酸、环丙沙星或左氧氟沙星等。
窄食单胞菌属
嗜麦芽窄食单胞菌
• 嗜麦芽窄食单胞菌为条件致病菌，广泛分 布于自然界的水、土壤和植物中是医院环 境中的常见微生物，在非发酵菌感染中排 第3位。
形态及特征
• 嗜麦芽窄食单胞菌为有动力的需氧革兰阴 性杆菌，具有从及鞭毛，不发酵糖。在多 数培养基上均能生长，在血平皿上呈淡黄 色、淡灰色或淡绿色，有氨味。 • 本菌产生锌离子依赖的金属β内酰胺酶而对 碳氢酶烯类抗生素和β内酰胺酶抑制剂天然 耐药。
兵中流行，造成严重
的公共卫生问题
多重耐药菌与泛耐药菌株
• 多重耐药菌(MDR)是指有多重耐药性的病原 菌。其定义为一种微生物对三类（比如氨 基糖苷类、红霉素、β－内酰胺类）或三类 以上抗菌药物同时耐药。 • 泛耐药菌株(PDR)指除多粘菌素类外，对几 乎所有测试抗菌素耐药。比如对氨基糖苷、 青霉素、头孢菌素、碳氢酶烯系类、四环 素类、氟奎诺酮及磺胺类等耐药。
非发酵菌群的分类鉴定课件(1).ppt
生化反应 I
脑膜炎败血 黄杆菌
+
芳香黄杆菌 —
DNA 酶
+
+
七叶苷水解
+
—
短小黄杆菌
+ + —
黄杆菌 Ⅱb 群
+ — +/—
黄杆菌属
I
+
—
脑膜炎败血黄杆菌
短小黄杆菌 黄杆菌Ⅱb 群
DNA 酶
+
—
芳香黄杆菌
脑膜炎败血黄杆菌 短小黄杆菌 七叶苷水解
+
黄杆菌Ⅱb 群 —
脑膜炎败血黄杆菌
短小黄杆菌
（四）、鲍特氏菌属
黄杆菌属目前共分为8个种和4个未命名的 生物群。它们分别是：
脑膜炎败血黄杆菌、芳香黄杆菌、短小黄 杆菌、水田黄杆菌、嗜醇黄杆菌、嗜糖黄 杆菌、嗜温黄杆菌、薮内黄杆菌及黄杆菌 Ⅱb、Ⅱe、Ⅱh、Ⅱi群。其中脑膜炎败血 黄杆菌、芳香黄杆菌、短小黄杆菌和黄杆 菌Ⅱb群可引起人类疾病。
四种黄杆菌的主要鉴别点
主要特性：
1、 产碱杆菌属为一群革兰氏阴性专性需氧菌， 具有周身鞭毛，多数无荚膜。
2、 营养要求不高，在普通培养基上生长良好； 在液体培养基上可形成菌膜；在含蛋白胨的肉 汤中产碱，使培养基pH上升到8.6以上，故名 产碱杆菌。
3、 除木糖氧化产碱杆菌木糖氧化亚种可氧化 分解木糖外，不分解任何糖类；氧化酶、触酶 均 阳 性 ； 在 O/F 培 养 基 中 产 生 碱 性 反 应 ； IMViC试验为：—、—、—、+。
2、该菌属为专性需氧菌，百日咳鲍特氏菌初次 分离时营养要求较高，需要有谷氨酸、L—脯氨 酸、半胱氨酸及菸酸等营养物质，但不需要X和 V因子。在生长过程中形成过多的脂肪酸、重金 属盐和H2O2等物质能抑制其生长，因此在培养 基中需加入血液、活性炭和离子交换树脂等物 质来吸附多余的有害物质，故该菌只能在鲍— 金二氏培养基上生长，在普通琼脂、麦康凯琼
非发酵菌感染对策ppt课件
耐药
敏感
阿米卡星
18.7
73.9
庆大霉素
39.2
56.2
哌拉西林
40.1
59.9
哌拉西林/他唑巴坦
32.8
67.2
替卡西林/克拉维酸
50
50
头孢哌酮
40.3
45.4
头孢他啶
29.3
65.2
头孢吡肟
26
63.2
头孢哌酮/舒巴坦
22.8
54.8
氨曲南
31.2
48.4
亚胺培南
35.8
61.4
美罗培南
28.5
耐药
69.3 87.5 69.4 46.5 69.2 21.4 72.4 17.33 35.9
敏感
29.3 12.5 30.5 53.5 30.7 78.6 27.6 72 64.10
·
17
·
18
·
19
铜绿假单胞菌耐药机制
产生B-内酰胺酶：ESBLs AmpC 碳青霉烯酶 （金属酶）
外排泵高表达：MexAB-OprM,MexCDOprJ,MexXY-OprM,MexEF-OprN
连续8年度分离的最常见的革兰阴性菌（株数）
450
400 菌
350
株 数
300
250
200
150
100
50
0
1994 1995 1996 1998 1999 2000 2001 2002
总菌株 554 1048 1348 1542 1291 1678 1949 2062
·
铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 克雷伯菌属 不动杆菌属 肠杆菌属 嗜麦芽窄食单胞菌 变形杆菌属 沙雷菌属 其它假单胞菌属 枸橼酸杆菌属
非发酵菌PPT课件
在生物抗病毒、抗炎等活性的代谢产物， 用于新药研发。
疫苗生产
非发酵菌产生的某些代谢产物具有免疫原性，可以作为疫苗用于 预防疾病。
基因工程
非发酵菌可以作为基因工程的宿主细胞，用于外源基因的表达和 产物的生产。
05
非发酵菌的遗传改良与基 因工程
基因克隆与表达
生物能源
非发酵菌可以用于生产生物燃料，如乙醇、丁醇等，具有高效、 环保的优点。
生物材料
非发酵菌可以用于生产生物可降解塑料、生物纤维等，替代传统的 石化产品。
生物农药
非发酵菌可以用于生产生物农药，具有安全、环保、高效的优点。
非发酵菌在环境治理和生物医学中的新挑战
环境治理
非发酵菌在环境污染治理方面具有重要作用，可以用于降解有机污染物、重金属离子等。
营养需求
特殊营养需求
培养基配制
非发酵菌通常需要特殊的营养物质， 如维生素、氨基酸等，以满足其生长 和代谢需求。
为了满足非发酵菌的营养需求，需要 精心配制培养基，确保提供适当的营 养成分。
不同种类营养需求差异
不同种类的非发酵菌对营养的需求存 在差异，有些需要更多的有机氮源， 而有些则需要更多的无机盐。
生物医学
非发酵菌在生物医学领域具有广阔的应用前景，如用于治疗感染性疾病、癌症等，但同时也面临着安全性、有效 性等方面的挑战。
THANKS
感谢观看
代谢途径
糖酵解途径
非发酵菌主要通过糖酵解途径进行能量代谢，将葡萄糖转化为丙 酮酸并产生能量。
丙酮酸的去向
丙酮酸可以进一步转化为其他有机化合物，如脂肪酸、氨基酸等。
不同种类代谢途径差异
不同种类的非发酵菌具有不同的代谢途径，有些能够利用其他有机 化合物作为碳源。
非发酵菌
＿
＿ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＿ ＋ ＋ ＋
赖氨酸脱羧酶 ＿ 精氨酸水解酶 ＋ 硝酸盐还原 ＋/＿ 明胶液化 ＿/＋
42℃生长
＋
＿
＿
＋/＿
＋/＿
＿
＋
第三节
不动杆菌
不动杆菌（Acinetobacter）为一群氧化酶 阴性，不发酵糖类、无动力的革兰阴性菌。
含6个种：醋酸钙不动杆菌
洛菲不动杆菌
溶血不动杆菌
鲍曼不动杆菌
生化反应：
抵抗力：较强，临床分离株对
多种抗生素耐药
（二）致病性：
可产生多种致病物质：内毒素、外毒 素、菌毛、荚膜、胞外酶和溶血物质 除自然界外，也存在于人体皮肤上及 与外界相通的腔道中。 多为继发感染，如烧伤后的创面感染， 也可引起肺炎、脑膜炎、尿道感染，严重 时可引起败血症，死亡率甚高。
（三）微生物学检验
挑选可疑菌落
最后鉴定 生化反应
初步鉴定 KIA：底层、斜面不变 硝酸盐还原、氧化酶、 动力
不动杆菌属主要菌种生化反应特征
醋酸钙不 动杆菌 鲍曼不 动杆菌 溶血不 动杆菌 琼氏不 动杆菌 约翰逊 不动杆菌 洛菲不 动杆菌
葡萄糖氧化
木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶
＋
＿ ＋ ＋
＋
＋ ＋ ＋
+/_
+/_ ＿ ＋
麦康凯上可形成5种不同形态的菌落：
①典型型：灰绿色，大小不一，扁平湿润， 边缘不齐，表面可见金属光泽。 ②大肠菌群型：圆形凸起，灰白色半透明。
③粗糙型：菌落中央凸起，边缘扁平，表 面粗糙。
④侏儒型：细小无光泽，半透明菌落 ⑤粘液型：光滑凸起呈粘液状
氧化酶＋，O/F 上能氧化分解葡萄糖、木糖产酸、精 氨酸双水解酶＋，枸橼酸盐＋，硝酸 盐＋。
俞云松-非发酵菌相关感染现状及治疗(2011-3-12)
株数 7992 4959 4912 4796 1684 1656 907 894 389 345 336 311 304 236
％ 25.78 16.00 15.84 15.47 5.43 5.34 2.93 2.88 1.25 1.11 1.08 1.00 0.98 0.76
细菌 金杆菌属 摩根菌属 产碱杆菌 气单胞菌属 沙门菌属 罗尔斯顿菌属 志贺菌属 普罗威登菌属 博特菌属 多源菌属 丛毛单胞菌 奈瑟菌属 黄杆菌属 其他
耐药率（％）
2009年11家医院1690株铜绿假单胞菌耐药率（%）
100
90
80
70
60
50
40.1
40 30 20 11.6
16.6
18.4
19.9
22.1
22.9
24.3
24.5
27.1
30.1
30.3
30.6
10
0
阿米卡星 头孢吡肟 头孢哌酮/舒巴坦 头孢他啶 环丙沙星 庆大霉素 美罗培南 哌拉西林/他唑巴坦
Systematic review
Infection
Nosocomial bacteremia
VAP
VAP and bacteremia
Longer ICU stay
Yes
Yes
Yes
Longer ventilator dependence Yes
Yes
-
Higher Mortality
No
Yes
Yes
2007
7
2008
2009 6
2010
5
4
3
7.9 2.9
肺杆 2005 2006 2007 2008 2009 2010
非发酵菌ppt课件
2019
-
24
临床意义
分布广泛，为条件致病菌，可引起抵抗力低 下患者呼吸道、泌尿道、伤口等部位的感染， 严重者可出现菌血症和心内膜炎。 假单胞菌的感染中居第二位，非发酵菌所致 的感染中居第三位。
2019
-
25
微生物特性
G-杆菌，具有端鞭毛1-8根，有动力，无芽孢 无荚膜。
2019
-
26
微生物检验
2019
-
42
黄杆菌属
3.存在于水、土壤和蔬菜中，还可从口腔、上呼 吸道、皮肤中检出，是条件致病菌，也是引起医
院感染的常见菌。可引起术后感染、菌血症、在
新生儿及婴幼儿的化脓性脑膜炎中分离出脑膜败 血性黄杆菌比例较高。
2019
-
43
黄杆菌属
4. Ｇ - 杆菌，需氧代谢，血琼脂培养基生长 良好，典型菌落为淡黄色，氧化酶、触酶、磷酸
可采用K-B法药敏试验 鲍曼不动杆菌对全部氨基青霉素、一代二代 头孢菌素和一代奎诺酮类抗生素天然耐药。
2019
-
38
鲍曼不动杆菌初步鉴定要点
OF试验：O/ MAC 上生长良好，菌落呈轻微粉红色 氧化酶（-） 快速分解葡萄糖和乳糖 无动力 对青霉素耐药
2019 39
产碱杆菌属
2019 30
不动杆菌属
2019 31
分 类
定义：为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、不 能运动的G-杆菌。 属奈瑟菌科 17个杂交群 临床分离最多的为鲍曼不动杆菌，排在非发 酵菌的第二位，仅次于铜绿假单胞菌。
2019 32
临床意义
分布广泛 条件致病菌 医院感染的常见病原菌
12第十二章 非发酵菌检验
• 在非发酵菌感染中，假单胞菌属细菌所占比例高达70%-80%，其中又以铜绿假单胞 菌感染最为常见
• 铜绿假单胞菌含有多种毒力因子，包括黏附素、内毒素、外毒素、多糖荚膜样物 质、绿脓菌素（pyocyanin）及侵袭性酶类等，在细菌的侵入、扩散和感染中发挥 重要作用。临床上，铜绿假单胞菌可引起伤口和创面感染、呼吸道感染、泌尿道 感染、败血症等。重度感染可发生在局部组织损伤或抵抗力下降人群，如烧伤， 长期卧床者，呼吸机使用者，应用广谱抗生素、激素、抗肿瘤药物及免疫抑制剂 等药物的患者，以及早产儿，囊性纤维化患者，艾滋病和老年患者等。对于烧伤 患者的伤口感染，应特别注意防范脓毒症的发生，以降低感染后的死亡率
抗生素
微生物 鲍曼/醋酸钙不动杆菌群 洋葱伯克霍尔德菌 铜绿假单胞菌 嗜麦芽窄食单胞菌
氨 苄 西 林
阿 莫 西 林
哌 拉 西 林
替 卡 西 林
氨 苄 西 林 / 舒 巴 坦
阿 莫 西 林 / 克 拉 维 酸
哌 拉 西 林 / 他 唑 巴 坦
头 孢 噻 肟
头 孢 曲 松
头 孢 吡 肟
氨 曲 南
亚 胺 培 南
• 典型的铜绿假单胞菌具有特殊气味（生姜味）和菌落特征（金属或珍珠般光泽、 粗糙、产色、有时极其黏稠），临床可结合革兰染色和氧化酶实验进行初步鉴定 。铜绿假单胞菌与属内其他临床常见菌种的鉴别特征见表12-4
临床微生物学检验技术
表12-4 临床常见假单胞菌的鉴别 试 验
铜绿
荧光
恶臭
斯氏
门多萨
假产碱
产碱
临床微生物学检验技术
表12-1 常见非发酵菌的初步分群鉴定
细菌分类
菌落色素
氧化酶
假单胞菌属
不定
• 铜绿假单胞菌含有多种毒力因子，包括黏附素、内毒素、外毒素、多糖荚膜样物 质、绿脓菌素（pyocyanin）及侵袭性酶类等，在细菌的侵入、扩散和感染中发挥 重要作用。临床上，铜绿假单胞菌可引起伤口和创面感染、呼吸道感染、泌尿道 感染、败血症等。重度感染可发生在局部组织损伤或抵抗力下降人群，如烧伤， 长期卧床者，呼吸机使用者，应用广谱抗生素、激素、抗肿瘤药物及免疫抑制剂 等药物的患者，以及早产儿，囊性纤维化患者，艾滋病和老年患者等。对于烧伤 患者的伤口感染，应特别注意防范脓毒症的发生，以降低感染后的死亡率
抗生素
微生物 鲍曼/醋酸钙不动杆菌群 洋葱伯克霍尔德菌 铜绿假单胞菌 嗜麦芽窄食单胞菌
氨 苄 西 林
阿 莫 西 林
哌 拉 西 林
替 卡 西 林
氨 苄 西 林 / 舒 巴 坦
阿 莫 西 林 / 克 拉 维 酸
哌 拉 西 林 / 他 唑 巴 坦
头 孢 噻 肟
头 孢 曲 松
头 孢 吡 肟
氨 曲 南
亚 胺 培 南
• 典型的铜绿假单胞菌具有特殊气味（生姜味）和菌落特征（金属或珍珠般光泽、 粗糙、产色、有时极其黏稠），临床可结合革兰染色和氧化酶实验进行初步鉴定 。铜绿假单胞菌与属内其他临床常见菌种的鉴别特征见表12-4
临床微生物学检验技术
表12-4 临床常见假单胞菌的鉴别 试 验
铜绿
荧光
恶臭
斯氏
门多萨
假产碱
产碱
临床微生物学检验技术
表12-1 常见非发酵菌的初步分群鉴定
细菌分类
菌落色素
氧化酶
假单胞菌属
不定
非发酵菌
•不动杆菌属(Acinetobacter) •黄单胞菌属(Xanthomonas)
• 莫拉菌属(Moraxella)
等
4 2019年8月22日星期四
临床常见非发酵菌
• 假单胞菌属： 铜绿假单胞菌(P. aeruginosa) 洋葱伯克霍尔德菌(B. cepacia)
嗜麦芽窄食单胞菌（S. maltophilia）
非发酵菌耐药趋势与合理用药
北京大学第一医院，北京大学临床药理研究所 高磊
2019年8月22日星期四
内容简介
• 非发酵菌的概念 • 2008年Mohnarin非发酵菌耐药趋势 • 非发酵菌的临床治疗
2 2019年8月22日星期四
非发酵菌简介
•不发酵糖(Nonfermenters)革兰阴性杆菌:
简称非发酵菌指一大群不发酵葡萄糖或仅
合理治疗方案
25 2019年8月22日星期四
临床常见非发酵菌用药选择
铜绿假单胞菌：
• 哌拉西林或头孢他啶 • 碳青霉烯类：亚胺培南、美洛培南、帕尼培南 • 加酶抑制剂药物：头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦
、哌拉西林/舒巴坦、替卡西林/克拉维酸 • 喹诺酮类（环丙沙星，左氧沙星，检测敏感性） • 抗假单胞菌氨基糖苷类抗生素：阿米卡星、妥布霉素、
7027
15.5
23.3
61.1
头孢吡肟
6766
58.6
6.5
34.8
亚胺培南
6817
38.1
1.7
60.1
美洛培南
6006
41.7
1.6
56.6
妥布霉素
1028
64.4
1.3
34.3
阿米卡星
7114
每日一菌之非发酵菌及检验
每日一菌之非发酵菌及检验一、概述非发酵菌主要是指一群①不发酵或不分解糖类的②革兰阴性③无芽胞④需氧杆菌。
目前，非发酵菌包括13个属。
主要有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。
这些细菌大多为条件致病菌。
对于非发酵菌的鉴定，必须首先进行种属间的鉴别，然后进行种间的鉴定。
一般实验室只需用几项试验，如氧化酶、O-F试验、动力及鞭毛、菌落色素、硝酸盐还原试验以及在麦康凯琼脂上的生长情况等即可对90%～95%分离的菌株作出初步鉴定。
1.培养温度：多数非发酵菌适宜生存于自然界，培养温度以30℃为宜。
有的更适宜生长于室温（18℃～22℃）。
故常规标本应先培养于35℃～37℃，再培养于30℃或室温。
2.动力与鞭毛：在非发酵菌的鉴定中，细菌是否具有鞭毛及鞭毛的特点有重要的诊断意义。
由于非发酵菌大部分为专性需氧菌，在半固体培养基上观察动力不明显，因细菌在琼脂表面生长，底层穿刺生长不良或不生长，故观察非发酵菌的动力以30℃或室温12～24h培养物悬滴法为准。
有时需借助鞭毛染色予以鉴定。
3.氧化酶试验：该试验是鉴定非发酵菌的重要试验，非发酵菌中除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。
4.氧化-发酵（O-F）试验：本试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。
非发酵菌对葡萄糖的代谢特点是氧化型产生微量酸。
在氧化-发酵（O-F）试验中，应为开管产酸，闭管不变。
5.在麦康凯琼脂上生长情况：如假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。
非发酵菌几种主要菌属的基本特征见表5-25-1。
表5-25-1 非发醇菌主要菌属的基本特征二、假单胞菌属假单胞菌属为一大组革兰阴性杆菌，大量存在于水、土壤和空气中。
在人类感染的非发酵菌中，假单胞菌属约占70%～80%，主要为铜绿假单胞菌（约55%～65%）。
其次为嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。
微生物学检验非发酵菌及检验
涂片 染色镜检
标本
分离培养 （血平板、麦康凯）
可疑菌落
血标本 增菌
涂片 动力观察 革兰染色 鞭毛染色
氧化酶
O/F 硝酸盐还原
KIA斜面底层不变色 其他生化反应
测验1
关于铜绿假单胞菌，错误的是 A 革兰阴性杆菌 B 氧化酶－、触酶－ C 硝酸盐还原－ D 产生水溶性蓝绿色素 E 菌落有金属光泽
测验2
黄杆菌科
革兰阴性杆菌，无鞭毛 专性需氧、营养要求不高，普通平板上 生长，形成黄色色素 麦康凯平板上不生长 氧化酶＋ O/F：O
莫拉菌属
革兰阴性球杆菌 ，不易脱色，成双排列 （与奈瑟菌相似），无鞭毛，部分菌株 有荚膜 专性需氧，营养要求高，普通平板上不 生长 氧化酶＋ O/F：－
非发酵菌－－检验程序
流感嗜血杆菌与金 黄色葡萄球菌在血 平板上共同孵育时， 由于后者能合成较 多的V因子，在金黄 色葡萄球菌菌落周 围生长的流感嗜血 杆菌的菌落较大， 离金黄色葡萄球菌 菌落越远的越小。
卫星现象
根据荚膜抗原分ABCDEF六型，B型 毒力最强
可产生自溶酶
致病物质：荚膜、菌毛、内毒素、 IgA蛋 白酶
所致疾病
军团菌
是引起军团菌病的病原体 首发于1976年的美国一次军人聚会，故 称作军团病 1982年,在我国南京首次证实了军团菌病。
形态染色
革兰阴性，但不易被着色 杆菌，形态有多形性 Gimenen染色，菌体呈红色，背景为绿 色 不形成芽孢，无荚膜 ， 有端生或侧生鞭毛
培养特性
营养要求高 专性需氧 需～5％CO2 生长缓慢 常用培养基及菌落特征 BCYE培养基：灰白色、圆形光滑湿润菌落 F-G培养基：针尖大小、黄色荧光
铜绿假单胞菌－－分型检查
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鲍曼不动杆菌，对全部氨基青霉素、一代二代头孢 菌素和一代喹诺酮类抗生素天然耐药
生物学特性
• 形态结构： G-杆菌、形态近似球形或球杆状， 单个存在或成双排列，酷似奈瑟菌， 有时呈短链状排列 G染色不易脱色，易误认为G+菌 多有荚膜，无鞭毛
培养特性：
• 专性需氧菌、营养要求不高 • 最适温度35℃，鲍曼不动杆菌42℃能生长 • BAP——圆形凸起、灰白色、光滑、边缘整
异性，其抗体对不同血清型细菌感染 有保护作用
抵抗力：
• 较其他无芽胞细菌强，对干燥及紫外线的抵 抗力较强。在潮湿的环境中能长期生存
• 对多种抗生素不敏感
耐药机制：细胞外膜对药物的通透性低 产生破坏抗生素的酶类 外膜存在独特的药物主动外排系统 细菌生物被膜形成
微生物学检验
标本采集： • 根据病情采集相应标本，如血液、CSF、
• 几乎可感染人体的任何组 织和部位
• 表现为局部和全身化脓性 炎症。多见于烧伤和创伤 后感染
• 婴儿：流行性腹泻
生物学特性
• 形态结构： G-杆菌，细长且长短不一
有鞭毛——运动活泼 临床分离株常有菌毛
培养特性
• 专性需氧菌，4℃不生长、42℃生长， 可与荧光假单胞菌等区别
产生多种色素： • 绿脓素—为蓝绿色，可溶于水和氯仿，
于正常人体皮肤、呼吸道及肠道，构成人 体正常菌群，为条件致病菌 • 医院感染的主要病原菌之一
临床意义——致病物质：
• 黏附素（菌毛、非菌毛样黏附素） • 荚膜样物质 • 内毒素 • 外毒素A.B.C.S • 绿脓素 • 弹性蛋白酶 • 磷脂酶C
所致疾病：
• 多见于皮肤粘膜损伤与机 体免疫力下降病人
复习要点
• 不发酵G-杆菌的共同特点 • 铜绿假单胞菌、不动杆菌的鉴定及
鉴别要点
33
染色法
O/F试验
• 不发酵菌对葡萄糖的代谢特点是氧化型， 产生微量酸
• 发酵菌发酵糖产生大量酸 • 常用的糖发酵试验培养基中蛋白胨和糖类
的含量比例为2：1 • O/F试验中蛋白胨和糖的比例为0.2：1
O—F培养基：0.2%蛋白胨 、1%糖 指示剂溴麝香草酚蓝
氧化型：开管产酸
闭管不变
发酵型：开管产酸
第四节 不动杆菌属 (Acinetobacter)
• 为一群不发酵糖类、氧化酶和硝酸 盐还原试验（-）、无动力的G-杆菌
临床标本中常能分离菌种有：
醋酸钙不动杆菌、鲍曼不动杆菌、洛菲 不动杆菌、琼氏不动杆菌、约翰逊不动 杆菌、溶血不动杆菌
临床意义
• 广泛存在于自然界 • 是人类皮肤、呼吸道、泌尿道的正常菌群 • 条件致病菌 • 引起各种感染和医院感染 • 大多数菌株对多种抗生素天然耐药
KIA - - - -
MIU - - -
微生物学检验
• 标本采集： 根据病情采集适当标本
• 涂片镜检： CSF沉淀物及除血液外其他标本均
可直接涂片染色镜检，可见G-球菌或 球杆菌、常呈双排列，有的存在于 吞噬细胞内，易误诊为奈瑟菌
分离培养：
• 血液、CSF→增菌→分离培养（BAP） • 其他标本接种BAP和MAC
闭管产酸
产碱型：开管不变
闭管不变
发酵型
氧化型
产碱型
第二节 假单胞菌属
• G-、直或微弯的杆菌，无芽胞、有鞭毛， 专性需氧菌，氧化酶(+)
• 分布广泛，种类繁多，已超过200种 • 铜绿假单胞菌 • 荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假
单胞菌等
铜绿假单胞菌
• 假单胞菌属的代表菌种，俗称绿脓杆菌 • 广泛分布于自然界水、土壤、空气。存在
齐的菌落，直径2~3mm，部分菌株呈黏液状， 无溶血环（溶血不动杆菌β溶血） • 洛菲不动杆菌菌落小，直径为1~1.5mm • MAC——无色/粉红色菌落（产生色素） • SS——部分菌株生长
鲍曼不动杆菌在MAC上粉红色菌落
生化反应：
氧化酶（-）、触酶（+） 葡萄糖O/F——氧化型或产碱型 吲哚、H2S、甲基红、V—P、硝酸盐 还原均（-）
无荧光 • 荧光素—为绿色荧光素，溶于水而不
溶于ห้องสมุดไป่ตู้仿
• 普通琼脂平板：
圆形、大小不一、边 缘不整齐、扁平、湿润 的菌落，呈亮绿色
• BAP：
大而扁平、湿润、有 金属光泽、蓝绿色菌落， 有透明溶血环，有生姜 味
•SS、 MAC：
微小、半透明菌落，
48h菌落中心常呈棕绿
色
MAC
•肉汤： 18～24 h液面可形成菌 膜，细菌在深层发育不 良、呈微混浊或透明状， 菌液上层为蓝绿色
生化反应：
• 氧化酶（+） • 葡萄糖O/F试验——氧化型 • 不分解乳糖、蔗糖、麦芽糖 • 枸橼酸盐、精氨酸双水解酶试验（+） • 还原硝酸盐且产生N2 • 吲哚、赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶试验（-）
• KIA - - - - MIU + - +/-
抗原构造与分型：
• O 抗原、H抗原 • O抗原包括两种成分： 脂多糖——型特异性，用于分型 外膜蛋白——具有强免疫原性，属特
鉴定：
• 形态染色、动力（-） • 氧化酶（-）硝酸盐还原（-） • 不发酵葡萄糖 • KIA - - - - MIU - - • 生化反应进一步鉴定
鉴别试验：
• 氧化酶（-）、动力（-）——可与 假单胞菌属鉴别
• 硝酸盐还原（-）、不发酵葡萄糖— —可与肠杆菌科鉴别
• 氧化酶（-）——可与奈瑟菌鉴别
第十二章 非发酵菌检验
概述:
• 是指一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形 式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、能 在普通培养基生长的G-杆菌
• 存在于外界环境中 • 条件致病菌 • 医院内感染常见病原菌之一
假单胞菌属、不动杆菌属、窄食单胞菌属、 产碱杆菌属、莫拉菌属等
• 氧化酶试验 (+/-) • 葡萄糖O/F（氧化/发酵）试验 • 动力试验：需氧菌用悬滴法或鞭毛
胸腹水、尿液、脓液以及分泌物等 • 医院环境中各种标本 • 消毒灭菌效果监测的抽检物
标本直接检查：
• 直接涂片镜检 • 脓液、分泌物可直接涂片 • CSF、胸、腹水可直接涂片或离心后
取沉淀物涂片
• 抗原检测： 血清学分型、噬菌体分型——有24种 • 核酸检测： 质粒指纹图分析 脉冲电场凝胶电泳分析 基因芯片技术、PCR等
分离培养：
• 血液、体液——增菌 • 脓液、分泌物、尿液——BAP、MAC • 无正常菌群存在的标本——BAP • 有正常菌群存在的标本或外环境标
本——MAC、SS
鉴定：
• 菌落特征、色素（约10%菌株不产生 色素）、生姜气味
• 氧化酶（+）、葡萄糖O/F-氧化型 • 动力（+）、4℃不生长42℃生长 • 精氨酸双水解酶（+） • 还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生N2
生物学特性
• 形态结构： G-杆菌、形态近似球形或球杆状， 单个存在或成双排列，酷似奈瑟菌， 有时呈短链状排列 G染色不易脱色，易误认为G+菌 多有荚膜，无鞭毛
培养特性：
• 专性需氧菌、营养要求不高 • 最适温度35℃，鲍曼不动杆菌42℃能生长 • BAP——圆形凸起、灰白色、光滑、边缘整
异性，其抗体对不同血清型细菌感染 有保护作用
抵抗力：
• 较其他无芽胞细菌强，对干燥及紫外线的抵 抗力较强。在潮湿的环境中能长期生存
• 对多种抗生素不敏感
耐药机制：细胞外膜对药物的通透性低 产生破坏抗生素的酶类 外膜存在独特的药物主动外排系统 细菌生物被膜形成
微生物学检验
标本采集： • 根据病情采集相应标本，如血液、CSF、
• 几乎可感染人体的任何组 织和部位
• 表现为局部和全身化脓性 炎症。多见于烧伤和创伤 后感染
• 婴儿：流行性腹泻
生物学特性
• 形态结构： G-杆菌，细长且长短不一
有鞭毛——运动活泼 临床分离株常有菌毛
培养特性
• 专性需氧菌，4℃不生长、42℃生长， 可与荧光假单胞菌等区别
产生多种色素： • 绿脓素—为蓝绿色，可溶于水和氯仿，
于正常人体皮肤、呼吸道及肠道，构成人 体正常菌群，为条件致病菌 • 医院感染的主要病原菌之一
临床意义——致病物质：
• 黏附素（菌毛、非菌毛样黏附素） • 荚膜样物质 • 内毒素 • 外毒素A.B.C.S • 绿脓素 • 弹性蛋白酶 • 磷脂酶C
所致疾病：
• 多见于皮肤粘膜损伤与机 体免疫力下降病人
复习要点
• 不发酵G-杆菌的共同特点 • 铜绿假单胞菌、不动杆菌的鉴定及
鉴别要点
33
染色法
O/F试验
• 不发酵菌对葡萄糖的代谢特点是氧化型， 产生微量酸
• 发酵菌发酵糖产生大量酸 • 常用的糖发酵试验培养基中蛋白胨和糖类
的含量比例为2：1 • O/F试验中蛋白胨和糖的比例为0.2：1
O—F培养基：0.2%蛋白胨 、1%糖 指示剂溴麝香草酚蓝
氧化型：开管产酸
闭管不变
发酵型：开管产酸
第四节 不动杆菌属 (Acinetobacter)
• 为一群不发酵糖类、氧化酶和硝酸 盐还原试验（-）、无动力的G-杆菌
临床标本中常能分离菌种有：
醋酸钙不动杆菌、鲍曼不动杆菌、洛菲 不动杆菌、琼氏不动杆菌、约翰逊不动 杆菌、溶血不动杆菌
临床意义
• 广泛存在于自然界 • 是人类皮肤、呼吸道、泌尿道的正常菌群 • 条件致病菌 • 引起各种感染和医院感染 • 大多数菌株对多种抗生素天然耐药
KIA - - - -
MIU - - -
微生物学检验
• 标本采集： 根据病情采集适当标本
• 涂片镜检： CSF沉淀物及除血液外其他标本均
可直接涂片染色镜检，可见G-球菌或 球杆菌、常呈双排列，有的存在于 吞噬细胞内，易误诊为奈瑟菌
分离培养：
• 血液、CSF→增菌→分离培养（BAP） • 其他标本接种BAP和MAC
闭管产酸
产碱型：开管不变
闭管不变
发酵型
氧化型
产碱型
第二节 假单胞菌属
• G-、直或微弯的杆菌，无芽胞、有鞭毛， 专性需氧菌，氧化酶(+)
• 分布广泛，种类繁多，已超过200种 • 铜绿假单胞菌 • 荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假
单胞菌等
铜绿假单胞菌
• 假单胞菌属的代表菌种，俗称绿脓杆菌 • 广泛分布于自然界水、土壤、空气。存在
齐的菌落，直径2~3mm，部分菌株呈黏液状， 无溶血环（溶血不动杆菌β溶血） • 洛菲不动杆菌菌落小，直径为1~1.5mm • MAC——无色/粉红色菌落（产生色素） • SS——部分菌株生长
鲍曼不动杆菌在MAC上粉红色菌落
生化反应：
氧化酶（-）、触酶（+） 葡萄糖O/F——氧化型或产碱型 吲哚、H2S、甲基红、V—P、硝酸盐 还原均（-）
无荧光 • 荧光素—为绿色荧光素，溶于水而不
溶于ห้องสมุดไป่ตู้仿
• 普通琼脂平板：
圆形、大小不一、边 缘不整齐、扁平、湿润 的菌落，呈亮绿色
• BAP：
大而扁平、湿润、有 金属光泽、蓝绿色菌落， 有透明溶血环，有生姜 味
•SS、 MAC：
微小、半透明菌落，
48h菌落中心常呈棕绿
色
MAC
•肉汤： 18～24 h液面可形成菌 膜，细菌在深层发育不 良、呈微混浊或透明状， 菌液上层为蓝绿色
生化反应：
• 氧化酶（+） • 葡萄糖O/F试验——氧化型 • 不分解乳糖、蔗糖、麦芽糖 • 枸橼酸盐、精氨酸双水解酶试验（+） • 还原硝酸盐且产生N2 • 吲哚、赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶试验（-）
• KIA - - - - MIU + - +/-
抗原构造与分型：
• O 抗原、H抗原 • O抗原包括两种成分： 脂多糖——型特异性，用于分型 外膜蛋白——具有强免疫原性，属特
鉴定：
• 形态染色、动力（-） • 氧化酶（-）硝酸盐还原（-） • 不发酵葡萄糖 • KIA - - - - MIU - - • 生化反应进一步鉴定
鉴别试验：
• 氧化酶（-）、动力（-）——可与 假单胞菌属鉴别
• 硝酸盐还原（-）、不发酵葡萄糖— —可与肠杆菌科鉴别
• 氧化酶（-）——可与奈瑟菌鉴别
第十二章 非发酵菌检验
概述:
• 是指一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形 式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、能 在普通培养基生长的G-杆菌
• 存在于外界环境中 • 条件致病菌 • 医院内感染常见病原菌之一
假单胞菌属、不动杆菌属、窄食单胞菌属、 产碱杆菌属、莫拉菌属等
• 氧化酶试验 (+/-) • 葡萄糖O/F（氧化/发酵）试验 • 动力试验：需氧菌用悬滴法或鞭毛
胸腹水、尿液、脓液以及分泌物等 • 医院环境中各种标本 • 消毒灭菌效果监测的抽检物
标本直接检查：
• 直接涂片镜检 • 脓液、分泌物可直接涂片 • CSF、胸、腹水可直接涂片或离心后
取沉淀物涂片
• 抗原检测： 血清学分型、噬菌体分型——有24种 • 核酸检测： 质粒指纹图分析 脉冲电场凝胶电泳分析 基因芯片技术、PCR等
分离培养：
• 血液、体液——增菌 • 脓液、分泌物、尿液——BAP、MAC • 无正常菌群存在的标本——BAP • 有正常菌群存在的标本或外环境标
本——MAC、SS
鉴定：
• 菌落特征、色素（约10%菌株不产生 色素）、生姜气味
• 氧化酶（+）、葡萄糖O/F-氧化型 • 动力（+）、4℃不生长42℃生长 • 精氨酸双水解酶（+） • 还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生N2