非发酵菌2015
多重耐药菌感染与控制2015.修改
3 PDR 对表1中所有代表性抗菌药 物均不敏感。
MDR、XDR、PDR多重耐药菌暂行标准定义——国际专家建议
肠球菌属MDR、XDR、PDR定义的标准
1、MDR 对表2中11类抗菌药物中的 3类或3类以上(每类中1种 或1种以上)抗菌药物不敏 感。
2、XDR 对表2中11类抗菌药物中的 9类或9类以上（每类中１ 种或１种以上）抗菌药物 不敏感。
中国抗生素十年调查报告：恶性循环危及国人
2015年6月17日彭拜新闻
首份中国抗生素使用情况摸底结果显示--- 可怕的恶性循 环链条正在危害人类健康 人和养殖动物大量服用的抗生素绝大部分以原形排出体外， 进入水环境中，再通过水产等食物进入人体，从而增加人 体耐药性并影响健康。 调查分析认为，抗生素的使用量、预测环境浓度、地表水 环境中的细菌耐药率和医院的细菌耐药率存在正相关。其 中使用年代较短的新型抗生素正相关更显著。
3、PDR 对表2中所有代表性抗菌药 物均不敏感。
MDR、XDR、PDR多重耐药菌暂行标准定义——国际专家建议
肠杆菌科MDR、XDR、PDR定义的标准
MDR、XDR、PDR多重耐药菌暂行标准定义——国际专家建议
肠杆菌科MDR、XDR、PDR定义的标准
1、MDR 对表3中16类抗菌药物中的3类或3类以上(每类中的1种或1种以上)抗菌药物不敏感。 2、XDR 对表3中16类抗菌药物中的14类或14类以上(每类中1种或1种以上)抗菌药物不敏感。 3、 PDR 对表3中所有代表性抗菌药物均不敏感。
《抗菌素耐药：全球监测报告》
世卫组织发布首份全球抗生素耐药监测报告 2014年4月
报告的主要调查结果包括：
【临床微生物实验】_非发酵菌概述、假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌
表面生长
恶臭假单
胞菌在血 平板和中 国蓝平板 上菌落
脂溶性色素
水溶性黄绿色色素
Pseudomonas生化特征
氧化酶阳性
触酶阳性
Pseudomonas生化特征
氧化分解葡萄糖
VP、甲基红、吲哚均（－ ）
有单鞭毛 有菌毛 无芽孢 无荚膜
痰涂片中被吞噬的铜 绿假单胞菌
痰涂片中粘液型铜绿 假单胞菌
痰涂片中粘液型铜绿假单胞菌
Pseudomonas aureginosa 形态和培养特征
• 专性需氧（部分菌株可兼性厌氧）
• 营养要求不高
• 最适生长温度25~30℃，42℃生长， 4℃不生长
Pseudomonas aeruginosa
MexA-MexB-OprM及MecC-MexD-OprJ ④整合子携带耐药基因盒：1类，3类（多重耐药） ⑤生物膜形成阻碍抗菌药物进入
➢ 临床治疗假单胞菌感染常用抗菌药物 主要有：
β内酰胺类 氨基糖苷类 喹诺酮类
铜绿假单胞菌固有耐药种类 氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、厄
他培南、四环素/替加环素、复方磺胺甲 恶唑、氯霉素等
KEY POINTS
➢ The term nonfermenting bacilli (NFB) describes a large group of aerobic,non-fermentative, nonsporeing, grame-negative bacilli belonging to taxonomically diverse genera, species that all share the common phenotypic features.
2015年宁波市某二级医院细菌耐药性监测
2015年宁波市某二级医院细菌耐药性监测俞碧霞;赵韧;江梦娇;吴臻琦【摘要】目的了解宁波市镇海龙赛医院2015年临床分离细菌分布和耐药特征,为临床合理选择抗菌药物提供依据.方法收集临床分离的1083株非重复细菌,采用纸片扩散法(K-B)进行药敏试验,按CLSI 2014年版标准判读药敏试验结果,采用WHONET5.6软件进行数据分析.结果分离菌中革兰阴性菌726株占67.0％,革兰阳性菌357株占33.0％.居前3位的细菌依次为:大肠埃希菌25.5％、肺炎克雷伯菌11.5％、铜绿假单胞菌9.2％,而鲍曼不动杆菌仅为3.8％.大肠埃希菌、克雷伯菌属细菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)株的检出率分别为49.6％和53.6％.耐亚胺培南的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的比例分别为0.4％和0.8％.铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对所监测药物的耐药率都低于20％,其中碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌(CRAB)比例仅为9.8％,未分离到泛耐药的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNA)的检出率分别占金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌的53.2％和70.1％,未发现对万古霉素和替考拉宁耐药的葡萄球菌.未分离出耐万古霉素的链球菌属、肠球菌属细菌.万古霉素仍是对革兰阳性球菌抗菌活性最强的药物,碳青霉烯类药物对肠杆菌科等革兰阴性杆菌抗菌活性最强.结论与三甲医院细菌耐药性监测相比,本二级医院分离耐药菌的构成比及药物敏感性存在差异,鲍曼不动杆菌检出率低,耐药水平较低.【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2017(042)001【总页数】6页(P73-78)【关键词】抗菌药物;细菌耐药性监测;碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌【作者】俞碧霞;赵韧;江梦娇;吴臻琦【作者单位】宁波市镇海龙赛医院,宁波315200;宁波市镇海龙赛医院,宁波315200;宁波市镇海龙赛医院,宁波315200;宁波市镇海龙赛医院,宁波315200【正文语种】中文【中图分类】R978.1随着抗菌药物在临床上的广泛使用，细菌对抗菌药物的耐药性日趋严重，细菌耐药性监测工作可及时发现耐药细菌流行状况，掌握细菌耐药性变迁。
非发酵菌的测定实验报告
一、实验目的1. 掌握非发酵菌的基本概念及分类；2. 熟悉非发酵菌的鉴定方法；3. 提高实验室操作技能，培养科学思维和严谨的工作态度。
二、实验原理非发酵菌是一类不发酵或不分解糖类的革兰氏阴性杆菌，主要包括假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。
非发酵菌的鉴定主要通过观察菌落特征、进行生化试验、动力与鞭毛观察等手段。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）非发酵菌菌种：假单胞菌、不动杆菌、产碱杆菌、莫拉菌、黄杆菌等；（2）培养基：普通琼脂平板、血琼脂平板、麦康凯琼脂平板、动力半固体培养基、氧化酶试验培养基等；（3）试剂：葡萄糖、乳糖、酵母提取物、酚红指示剂、氧化酶试剂等；（4）实验仪器：恒温培养箱、显微镜、酒精灯、无菌操作台等。
2. 实验仪器：（1）显微镜：用于观察菌落特征；（2）恒温培养箱：用于培养菌种；（3）酒精灯：用于无菌操作；（4）无菌操作台：用于无菌操作。
四、实验方法与步骤1. 菌落观察（1）将菌种接种于普通琼脂平板、血琼脂平板、麦康凯琼脂平板，分别于30℃、37℃培养24小时；（2）观察菌落特征，如菌落大小、形状、颜色、边缘、表面、透明度等；（3）记录观察结果。
2. 动力与鞭毛观察（1）将菌种接种于动力半固体培养基，30℃培养24小时；（2）观察菌种在半固体培养基中的生长情况，如是否有鞭毛、菌落是否呈指状、螺旋状等；（3）记录观察结果。
3. 氧化酶试验（1）将菌种接种于氧化酶试验培养基，30℃培养24小时；（2）观察菌种是否产生氧化酶，即菌落周围是否出现绿色；（3）记录观察结果。
4. 氧化-发酵（O/F）试验（1）将菌种接种于氧化-发酵试验培养基，30℃培养24小时；（2）观察菌种是否产生酸，即菌落周围是否出现红色；（3）记录观察结果。
5. 麦康凯琼脂平板生长情况（1）将菌种接种于麦康凯琼脂平板，30℃培养24小时；（2）观察菌种在麦康凯琼脂平板上的生长情况，如是否生长、生长速度等；（3）记录观察结果。
非发酵菌
生物学特性
直或微弯杆菌，有荚膜，单端 直或微弯杆菌，有荚膜， 根鞭毛， 有1根鞭毛，运动活泼 根鞭毛 严格需氧 最适生长温度35℃ 需氧， 严格需氧，最适生长温度 ℃， 4℃不生长，42℃生长 ℃不生长， ℃ 严格需氧，氧化利用葡萄糖 利用葡萄糖、 严格需氧，氧化利用葡萄糖、 MAC生长 生长
血平板上形成大而扁平， 血平板上形成大而扁平， 湿润，边缘不齐， 湿润，边缘不齐，有金属 光泽，有生姜气味的灰绿 光泽， 生姜气味的灰绿 色菌落，并形成透明溶血 色菌落，并形成透明溶血 环。 有时可产生水滴样样菌落， 有时可产生水滴样样菌落， 无色素不溶血（ 无色素不溶血（囊性纤维 化病人） 化病人）
嗜麦芽窄食单胞菌
嗜麦芽窄食单胞菌为有动力杆菌，具有丛极鞭毛， 嗜麦芽窄食单胞菌为有动力杆菌，具有丛极鞭毛， 丛极鞭毛 血平板上菌落粗糙呈淡黄色或浅绿色，有氨气味。 血平板上菌落粗糙呈淡黄色或浅绿色，有氨气味。 赖氨酸脱羧酶试验阳性和DNA酶阳性、氧化酶 酶阳性、 根据 赖氨酸脱羧酶试验阳性和 酶阳性 阴性可很容易与其他假单胞菌区别 可很容易与其他假单胞菌区别， 阴性可很容易与其他假单胞菌区别，本菌葡萄糖氧 化缓慢，可快速氧化分解麦芽糖。 化缓慢，可快速氧化分解麦芽糖。
不动杆菌属
广泛分布于自然和医院环境中， 广泛分布于自然和医院环境中，能在潮湿和干燥的表面 生存，也可存在于健康人的皮肤. 生存，也可存在于健康人的皮肤. 无动力、氧化酶阴性、 无动力、氧化酶阴性、硝酸盐还原阴性 醋酸钙不动杆菌 鲍曼不动杆菌
鲍曼不动杆菌
在非发酵菌中本菌是在临床标本中的分离阳性率仅次于铜 绿假单胞菌而居第二位的条件致病 居第二位的条件致病菌 绿假单胞菌而居第二位的条件致病菌，通常不动杆菌对健 康人体不致病，但对体弱者可引起感染。 康人体不致病，但对体弱者可引起感染。 本菌能够获得多重耐药性和能够在大多数环境表面生存， 本菌能够获得多重耐药性和能够在大多数环境表面生存， 所以由本菌引起的医院获得性感染有增加的趋势， 所以由本菌引起的医院获得性感染有增加的趋势，医院获 得性感染最常见的是呼吸道或手术部位、应用器械或ICU 得性感染最常见的是呼吸道或手术部位、应用器械或ICU 的住院患者。 的住院患者。
非发酵菌
美洛培南
庆大霉素
阿米卡星
多粘菌素B
环丙沙星
左旋氧氟沙星
11
14 May 2020
菌株量
%R
%I
%S
9828
36
0.1
63.9
10028
29.8
0.1
70
5412
34.8
14.6
50.6
10687
18.2
20.5
61.3
11010
23.6
5.3
71.1
10587
24.5
9.3
66.2
9902
31
23.4
50 45
40 35
30
25 20 15
10
5 0
哌哌拉拉西西林林/他唑头巴孢坦哌酮/舒巴坦
头孢他啶
头孢吡肟
亚胺培南
阿米卡星
环丙沙星左旋氧氟沙星
2006年 2007年 2008年
22
14 May 2020
鲍曼不动杆菌2006～2008年耐药趋势
耐药率%
80
70
60
50
40
30
20
10
0
氨苄西林/哌舒拉巴西坦林/他唑头巴孢坦哌酮/舒巴坦
13.8
52.8
1720
52.5
12.6
34.9
1934
43
6.7
50.3
893
30.6
24.7
44.7
1918
18.7
21.9
59.4
1958
3.5
4.9
91.6
370
30
22.2
47.8
非发酵菌舒普深
临床诊治的思考
2010 Mohnarin
全国 59 家医院革兰阴性菌分离情况
革兰阴性菌分布情况（%）
前 6 位占 90%
90%
2011 CHINET 15家 医院前 6 位革兰阴性菌菌种分布
细菌
大肠埃希菌 克雷伯菌属 不动杆菌属 假单胞菌属
株数
11860 6981 6723 6334
碳青霉烯临床应用不当，是
造成铜绿假单胞菌和不动杆菌多 药耐药的独立 危险因素 。
Clinical Infectious Diseases, 2006, 43: S43–S48.
当今非发酵菌的耐药
Magiorakos AP, et al. CMI 2011
中国 16 家大型教学医院 HAP 主要病原菌耐药情况
碳青霉烯类耐药铜绿一般是多克隆播撒
我院 PFGE分型
碳青霉烯类耐药鲍曼一般是单克隆播撒
我院 PFGE分型 敏感菌株 A B
2009 年浙江省临床分离鲍曼 PFGE 结果
主要为3个克隆
为什么这几个克隆有播撒能力？ 为什么这几个克隆有生存能力？
我们终于明白了——
适当治疗
抗生素选择压力
关键：院感的控制 ＋ 抗生素的合理应用 降
Í ³ ² ¼ Ã ¹ Ë Ø
Á ³ Ã ¹ Ë Ø
2001 年浙医二院鲍曼耐药性（%）
80 70 60 50 40 30 20 10 0 ß À Î ÷ Á Ö Í ² æ ß ´ ç è ¿ Í ² æ ß Ë û ´ ¤ Ñ Ç ° ² Å ´ Ä Ï ° ¢ Ã ³ ¿ ¨ Ð Ç » ² ± û É ³ Ð Ç Í ² æ ß ß Á è ¿ ° ± Ç ú Ä Ï Í ² æ ß ß Í ª / Ê æ ° Í Ì ¹ Ì æ ¿ ¨ Î ÷ Á Ö / ¿ Ë À Î ¬ Ë µ ß À Î ÷ Á Ö / È ý ß ò ° Í Ì ¹ 0.6 1.9 26.9 50 30.4 22.2 21.6 45.1 25.9 18.1 75.9
实验：非发酵菌的鉴定
－
－ ＋
0
0 100
不动杆菌属主要菌种间的鉴别
醋酸钙 葡萄糖氧化 木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶 + － ＋ ＋ 鲍曼 + ＋ ＋ ＋ 溶血 琼氏 约翰逊 洛菲 － － ＋ －/＋ － － ＋ － +/－ － +/－ － － ＋ ＋ ＋
鸟氨酸脱羧酶
枸椽酸盐利用 明胶液化 生长温度: 37℃ 41℃ 42℃
实验：非发酵菌的鉴定
实验目的
1.掌握常见非发酵菌的形态、染色特性、生 化反应及鉴定依据； 2.熟悉常见的几种非发酵菌的鉴定程序及鉴 别方法。
器材和试剂
1.菌种：假单胞菌属细菌、不动杆菌属细菌 和窄食单胞菌属细菌； 2.鉴定试验：双糖管，葡萄糖OF管，枸椽 酸盐琼脂，尿素，鸟氨酸、精氨酸、赖氨 酸，明胶、七叶苷，DNA酶，硝酸盐，木 糖，乳糖，蔗糖。
方法：
1.形态观察； 2.菌落观察； 3.生化反应。
常见非发酵菌的鉴定依据
1.铜绿假单胞菌：
＋ ＋ ＋ － ＋/－ 97 97 98 0 85
单端鞭毛（三根以下） 动 力 氧化分解（O-F培养基） 葡萄糖 乳糖、蔗糖 木 糖
氧化酶
赖氨酸脱羧酶 精氨酸双水解酶
＋
－ ＋
100
0 99
鸟氨酸脱羧酶
＋
＋ － ＋ － －
＋
＋ － ＋ ＋ ＋
－
＋ ＋ ＋ － －
－
－ ＋ ＋ －
－
－ － － －
－
－ － ＋ － －
＋/－ ＋
嗜麦芽窄食单胞菌
氧化酶 动力 明胶 42ﾟC 七叶苷 赖氨酸 – + + +/+ +
非发酵菌
临床意义
• 常引起的是菌血症、脑膜炎、尿路感染、 附睾炎、结膜炎、心内膜炎、连续性腹膜 透析相关的腹膜炎、角膜炎以及广泛的皮 肤黏膜和软组织感染，也可引起医源性败 血症、肺炎等。引起本菌定植与感染的危 险因素有机械通气、广谱抗生素的预防性 应用、化疗、插管和中性粒细胞减少等。
耐药机制
• 1、细菌主动外拍泵的存在。 • 2、灭活抗生素的酶类的产生，如广谱β内
酰胺酶，超广谱β内酰胺酶，金属酶等。 • 3、外膜蛋白的改变或减少使抗生素进入细
菌的通道减少或缺如。 • 4、生物膜的存在使抗生素不能进入细菌细
非发酵菌
定义
非发酵菌是一大类不能以发酵形式利 用葡萄糖的需氧、无芽孢革兰阴性杆 菌的统称。
主要非发酵菌种类
非发酵菌
铜绿假单胞菌 假单胞菌属
伯克霍尔德菌属
洋葱伯克霍尔德菌
鲍曼不动杆菌 铜绿假单胞菌
窄食单胞菌属
嗜麦芽窄食单胞菌
嗜麦芽窄食单胞菌
产碱杆
不动杆菌属
菌属
鲍曼不动杆菌
黄杆菌属
脑膜败血黄杆 菌
非发酵菌共同特征
不动杆菌属
• 不动杆菌属广泛分布于自然界与医院环境 中，能在潮湿和干燥的表面生存，也可生 存于健康人的皮肤。最常见的种类有鲍曼 不动杆菌、洛菲不动杆菌、溶血不动杆菌 和约氏不动杆菌等。
鲍曼不动杆菌
• 鲍曼不动杆菌是仅次于铜绿假单胞菌而居 临床分离阳性率第2位的非发酵菌，为条件 致病菌。由于其能获得多重耐药性且能够 在大多数环境中生存，其引起的医院内感 染有增加趋势。
多重耐药菌与泛耐药菌株
• 多重耐药菌(MDR)是基糖苷类、红霉素、β－内酰胺类）或三类 以上抗菌药物同时耐药。
• 泛耐药菌株(PDR)指除多粘菌素类外，对几 乎所有测试抗菌素耐药。比如对氨基糖苷 、青霉素、头孢菌素、碳氢酶烯系类、四 环素类、氟奎诺酮及磺胺类等耐药。
非发酵菌群的分类鉴定
假单胞菌属 产碱杆菌属 无色杆菌属 土壤杆菌属 端毛菌 假单胞菌属 鞭毛染色 周毛菌 产碱杆菌属，无色杆菌属，土壤杆菌属 O/F O型 无色杆菌属，土壤杆菌属 还原硝酸盐后产气 + — 土壤杆菌属 无色杆菌属 — 产碱杆菌属
第四节、非发酵菌群的属内鉴别
一、假单胞菌属和 寡氧单胞菌属
假单胞菌属属假单胞菌科，该属为严格的专性需 氧的革兰氏阴性杆菌，具有一端鞭毛，无荚膜、 无芽孢。该菌属在自然界中分布广泛，营养要求 不高，氧化酶试验均为阳性，是假单胞菌科的代 表菌属。
氧化酶阴性菌群
不动杆菌属，寡氧单胞菌属，付百日咳鲍特氏菌 动力 + 寡氧单胞菌属 （嗜麦芽寡氧单胞菌） — 不动杆菌属，付百日咳鲍特氏菌 在鲍—金二氏培养基上产 棕色素 麦康凯上生长 — + 不动杆菌属
+ —
付百日咳鲍特氏菌
）、氧化酶阳性菌群的 鉴别
氧化酶阳性菌群
假单胞菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属， 支气管败血鲍特氏菌，金氏杆菌属，无色杆菌属， 莫拉氏菌属，艾肯氏菌属，土壤杆菌属。 触酶 + 假单胞菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属， 支气管败血鲍特氏菌，无色杆菌属， 莫拉氏菌属，土壤杆菌属 动力 37℃ 18—24 ℃ — + 支气管败血 鲍特氏菌 + + 假单胞菌属 产碱杆菌属 无色杆菌属 土壤杆菌属 + 黄杆菌属 黄色素 — 莫拉氏菌属 — — 黄杆菌属 莫拉氏菌属 弱 F 金氏杆菌属 — 金氏杆菌属， 艾肯氏菌属 O/F — 艾肯氏菌属
绿棕红无 部分黄色 — 黄 —/棕 — — — — — —
+（周毛） O 型
+（周毛） O 型
非发酵菌群 氧化酶 + 假单胞菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属， 支气管败血鲍特氏菌，金氏杆菌属， 无色杆菌属，莫拉氏菌属，艾肯氏菌属， 土壤杆菌属。 — 不动杆菌属 寡氧单胞菌属 付百日咳鲍特氏菌
2015版抗菌药物临床应用指导原则的经验性用药品种选择
病情轻金金黄色葡萄球菌
宜选：局部治疗为主，莫匹罗星软膏、鱼石酯软膏。次选：SMZ/TMP，多西环素、米诺环素；病情复杂可用糖肽类或利奈唑胺
病情重，伴脓毒症金金黄色葡萄球菌
宜选：耐酶青霉素如苯唑西林或头孢唑啉或头孢呋辛。针对MRSA可选糖肽类。次选：SMZ/TMP、多西环素、米诺环素；针对MRSA感染可用糖肽类或利奈唑胺或替加环
重度感染
可选择四组方案
第一组：头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林/克拉维酸；第二组：亚胺培南/西司他丁、美罗培南、帕尼培南；第三组：第三代或第四代头孢菌素（头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟）+甲硝唑；第四组：环丙沙星+甲硝唑；氨曲南+甲硝唑；替加环素（可用于中重度有耐药危险因素的腹腔感染）。
社区获得性肺炎
肺炎链球菌
青霉素G。次选：阿莫西林、头孢唑啉、头孢呋辛。BSI肺炎链球菌多为青霉素敏感株，该菌对红霉素或克林霉素耐药者多见，需注意药敏试验结果。
尿路感染，腹腔、胆道感染，生殖系统感
大肠埃希菌
宜选：头三或β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂。
次选：1.无产ESBLs菌感染高危因素：头孢噻肟，曲松等头三，氟喹诺酮类，氨基糖苷类；2.有产ESBLs菌感染高危因素：碳青霉烯类，β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂。菌株之间对药物敏感性差异大，需根据药敏试验结果选药，并需注意对氟喹诺酮类耐药者多见。
需入院治疗、但不必收住ICU的患者
肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、混合感染（包括厌氧菌）、需氧革兰阴性杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎支原体、肺炎衣原体
第二代头孢菌素单用或联合四环素类、大环内酯类静脉给药；静脉滴注呼吸喹诺酮类；阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦单用或联合四环素类、大环内酯类静脉给药；头孢噻肟、头孢曲松单用或联合四环素类、大环内酯类静脉给药
不发酵革兰氏阴性菌
.微生物检验（检验程序）
（）分离培养与鉴定： 标本可接种于血琼脂平板培养基和选 择性培养基 鉴定根据镜下特征、菌落形态、生化 反应等
铜绿假单胞菌（. )
血平板上毛玻璃 样，金属光泽， 生姜味
可产生多种色素： 荧光素与绿脓
素
铜绿假单胞菌（. )
绿脓素
铜绿假单胞菌（. )
（）抗原检测：血清学分型、噬菌体分型 （）核酸检测：质粒指纹图分析、脉冲场凝胶
单胞菌和鲍曼不动杆菌，居临床分离阳性 率的第三位。
生物学特性
革兰阴性，端鞭毛，()根 有动力、无芽孢、无荚膜 生长温度为℃，℃不生长 血琼脂、普通培养基 菌落中等大小、圆形、光滑、湿润、产生
不溶血的黄色色素
生化鉴定：氧化酶阴性 液化明胶 水解七叶苷 赖氨酸脱羧酶阳性 氧化分解麦芽糖
微生物检验
分离培养与鉴定 需氧菌 生长温度℃ 普通培养基、血琼脂、麦康凯 生化鉴定 荧光直接法染色镜检，可快速诊断
四、嗜麦芽窄食单胞菌
分类 属于假单胞菌科的同源群Ⅴ 嗜麦芽窄食单胞菌（）和.
临床意义
为条件致病菌 呼吸道、泌尿道、伤口等部位感染，菌血
症及心内膜炎。 在不发酵菌引起的感染中，仅次于铜绿假
临床意义
空气－乳胶微粒传播 发病机制：①内毒素和细胞产生的多种酶
②裂解红细胞 ③消化卵黄囊
生物学特性
革兰阴性杆菌 菌体呈线状 无芽胞，无荚膜，有端 鞭毛或侧鞭毛 严格需氧 触酶阳性 可液化明胶 不分解糖类 部份菌株氧化酶阳性
微生物检验
临床标本：痰、气管分泌物、胸水和血 液为主。
－ OX
－
不动杆菌属
葡萄糖产酸 + 黄色素
非发酵菌的耐药及治疗对策
非发酵菌的耐药及治疗对策什么是非发酵菌？非发酵菌是一类不靠发酵代谢获取能量的微生物。
它们生长缓慢，对环境的适应能力相对较弱，更容易在人体内引发感染。
一些非发酵菌种类通常生长于惰性和污秽环境，例如水、土壤或食物中，而其他非发酵菌可以从人和动物的皮肤、口腔和肠道中分离出来。
非发酵菌的耐药性非发酵菌的耐药性往往比其他微生物更高，这意味着它们难以被常见的抗生素杀死。
与其他细菌不同，非发酵菌不使用发酵作为它们的主要代谢方式，而是使用其他化学物质来产生能量。
这使得它们在天然界中生长得更为广泛和适应各种条件，然而却也使得常见的抗生素对其产生的影响较小。
非发酵菌的高度耐药性意味着，它们所引起的感染更加难以治疗，并且药物疗效的预测性很差。
抗生素过度使用的问题也加剧了这个情况。
当前，治疗非发酵菌感染的首选药物是四环素类、氨基糖苷类、多黏菌素E、大环内酯类和喹诺酮类，但是已经发现存在多种产生了抗药性的非发酵菌，这些细菌对抗生素产生的耐药性，随着药品的不断使用而变得更加普遍。
治疗耐药性非发酵菌感染的策略做好预防措施由于非发酵菌的耐药性较强，更应注重预防。
保持好个人卫生、遵循医疗机构的感染预防措施，以及注意食品的选择和烹饪等措施都有利于预防非发酵菌感染。
准确诊断非发酵菌感染准确诊断非发酵菌感染有助于针对性治疗。
但是还需要考虑抗生素选择和使用的范围。
正确的药物治疗是准确诊断非发酵菌感染的前提。
没有明确的敏感性测试可能会导致不必要的药物使用，这不仅对病人没有益处，还可能带来消耗性医疗的问题。
合理使用抗生素一般来说，应该尽可能避免不必要的抗生素使用，以防止抗生素负荷增加和高耐药的情况恶化。
如果一些老年病人或者有免疫缺陷的病人一直使用抗生素，容易导致耐药菌的滋生。
坚持病原学领域的最佳实践，不是简单的使用抗生素，还需要注意抗生素使用的时间和剂量的合理性。
拓展非抗生素治疗选择随着医学技术的不断进步，新的非抗生素药物和新的治疗方法正在不断被开发出来，例如喂养益生菌、使用细胞保护剂和抗氧化剂进行治疗等。
非发酵革兰阴性菌
Department of Microbiology, Hebei North University
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四、防治原则
铜绿假单胞菌可由各种途径传播，但主要 是通过污染医疗器械、用具及带菌医护人员 引起医源性感染。
结合临床感染症状，如果无感染症状则作 为正常菌群（住院患者带菌率20%）。
临床治疗必须密切遵循药敏实验结果。
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第二节不动杆菌属 Acinetobacter
• 不动杆菌(Acinetobacter)为一群氧化酶阴性，不发酵糖
类、无动力的革兰阴性菌。主要包括：
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试验
葡糖氧化 木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶 鸟氨酸脱羧酶 苯丙氨酸脱氨酶 丙二酸盐利用 柠檬酸盐利用 明胶液化
生长温度37 ℃ 41 ℃
44℃
不动杆菌属主要菌种生化反应特征
醋酸钙 不动杆菌
+
—
+ + + + + + + +
—
—
鲍曼
溶血
琼氏
不动杆菌 不动杆菌 不动杆菌
约翰逊
洛菲
不动杆菌 不动杆菌
非发酵菌及检验
3、检先增菌，再转 种血平板和麦康凯平板分离；脓汁、分泌物、 尿可直接种于上述培养基分离培养。
（3）鉴定：根据菌落特征、色素、 生姜气味、菌体形态、氧化酶试验等 作出鉴定。对无色素的菌株应与其他 假单胞菌鉴别。
铜绿假单胞菌的检验程序：
血液 体液
脑脊液、胸腹水、脓汁、痰、尿液 粪便
分离培养 血、麦康凯
增 菌 营养肉汤
直接涂片染色
分离培养 SS、麦康凯
初步鉴定 菌落特征，色 素 菌体形态、氧化酶
最后鉴定
生化反应
分型：血清学
噬菌体
铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别
试 验 铜绿假 单胞菌 ＋ 荧光假 单胞菌 ＋ 恶臭假 单胞菌 ＋ 斯氏假 单胞菌 ＋ 嗜麦芽 假单胞 ＿ 鼻疽假 单胞菌 ＋/＿ 类鼻疽 假单胞 ＋
挑选可疑菌落
最后鉴定 生化反应
初步鉴定 KIA：底层、斜面不变 硝酸盐还原、氧化酶、 动力
不动杆菌属主要菌种生化反应特征
醋酸钙不 动杆菌 鲍曼不 动杆菌 溶血不 动杆菌 琼氏不 动杆菌 约翰逊 不动杆菌 洛菲不 动杆菌
葡萄糖氧化
木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶
＋
＿ ＋ ＋
＋
＋ ＋ ＋
+/_
+/_ ＿ ＋
琼氏不动杆菌
约翰逊不动杆菌
一、生物学性状
形态与染色 革兰阴性球杆菌，常成双排列， 不易退色，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。 培养特性 专性需养，营养要求不高。
最适温度35℃ ，鲍曼不动杆菌42℃可生长。 血平板上 圆形凸起、2~3 mm ，光滑、边 缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶 血不动杆菌可形成 β -溶血环）； 不产生色素。 麦康凯平板 形成粉红色菌落。
非发酵菌的基本特点和种类
非发酵菌是一大类不能以发酵形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞革兰阴性杆菌的统称，主要存在于外界环境中，有的是人体皮肤黏膜表面的正常菌群组成部分。
非发酵菌的基本特点主要包括：
不能利用或仅能以氧化形式利用葡萄糖。
多数为机会致病菌，即在人体免疫功能低下时容易引发感染。
对多种抗生素具有耐药性，且耐药性较强，容易形成多重耐药性。
非发酵菌的种类繁多，主要包括假单胞菌属、不动杆菌属、黄杆菌属、产碱菌属等。
其中，铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌等在非发酵菌中占有重要地位，并且由非发酵菌引起感染的报告逐渐增多，特别是在医院感染中。
以上内容仅供参考，如需更多信息，建议查阅非发酵菌的相关资料或咨询相关研究学者。
非发酵菌检验程序(详细版)
非发酵菌是一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、条件致病菌。
【氧化酶试验】铜绿、粪产碱为阳性，醋酸钙不动杆菌为阴性【非发酵菌生化编码管鉴定】原理：该系列鉴定共有9种生化培养基，共10项试验，参照下述方法，将试验结果换算成4位数字, 加以数值化后查表。
例：某一分离菌株，具有下列鉴定结果，数值化后为1734，查表得知：可能为施氏假单胞菌和洋葱单胞菌，再按表中要求做硝酸盐产气补充实验区分。
无芽胞的革兰阴性杆菌；多为- 4组0-F厌顿2分需氧1分结果：需氧得分匸12组氧化輕分枸携酸2分麦芽犍1分+ + +73纠精氨就4分甘露醇2分木糖1分-+ +4组硝还4分DNA酶2分乙酰胺4分观察结果时按表中说明进行。
—、O-F试验接种2支编码管，1支加无菌石蜡油，另1支不加。
原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。
发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。
本试验又称氧化发酵（0/F或Hugh —Leifson , HL）试验，可用于区别细菌的代谢类型。
培养基均不产酸（颜色不变）为阴性；培养基表面和底部都产酸（变黄）为发酵型；培养基表面变为深蓝色为产碱型；培养基表面变黄、底部不色变为氧化型。
二、硝酸盐还原试验原理：某些细菌能还原培养基中的硝酸盐，生成亚硝酸盐和氮气等。
硝还试验是测定还原过程中生成的亚硝酸盐。
如培养基中有亚硝酸盐存在，则亚硝酸盐与醋酸生成亚硝酸，亚硝酸与对氨基苯磺酸生成重氮苯磺酸，后者与a -萘胺结合成N- a -萘胺偶氮苯磺酸。
假单胞菌等能使硝酸或亚硝酸盐还原为氮气，此为脱硝化或脱氮化作用。
结果解释：/变红一®性沿试验管加AB液各少许变一加锌粉-不变r阳性，产气\变红阴性注意事项：若加入硝酸盐试剂不出现红色，需检查硝酸盐是否已被还原，可于原试管内再加入少许锌粉，如出现红色，表示硝酸盐仍然存在；若不出现红色，表示硝酸盐已衩还原为氨和氮。
铜绿假单胞菌
绿脓素、红脓素、青脓素、荧光素 荧光素 荧光素 未定名黄色素 未定名黄色素、紫色素 未定名色素
蓝、红、黑、黄色 黄绿色 黄绿色 黄色 黄色、紫色 淡红褐色
假单胞菌属Pseudomonas
抵抗力：较强，对多种抗生素耐药 临床意义：分布广泛，条件致病菌，
主要引起皮肤粘膜受损部位感染和各种医 院内感染
铜绿假单胞菌
蒋月婷
非发酵菌(Nonfermentative Bacilli) 定义---- 一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利
用葡萄糖的需氧或兼性厌氧的革兰阴 性无芽胞杆菌
发酵型
氧化型
产碱型
概述
非发酵菌：G-b 葡萄糖O/－ 需O2或兼性厌O2 动力+ /－ 氧化酶+ /－
分类： 假单胞菌属 产碱杆菌属 不动杆菌属 黄杆菌属 莫拉杆菌属 窄食单胞菌属 金氏杆菌属 艾肯菌属 土壤杆菌属 丛毛单胞菌属 等
各种抗生素治疗铜绿假单胞菌所致感染过程中都可 能发生耐药。初代敏感菌株在治疗3－4天后可能发 生耐药，有必要重复分离菌株
本菌对多种抗生素天然耐药，常用三代头孢和氨基 糖苷类联合治疗
鉴定结果分析
从临床标本中分离出来的铜绿假单胞菌， 需要排除污染因素
铜绿假单胞菌下呼吸道感染需连续三次痰 培养阳性才能确立。
典型型（普通平板上）
菌落中央凸起 边缘扁平 表面粗糙
粗糙型（麦康凯平板）
菌落圆形凸起 似大肠埃希菌菌落
大肠型（麦康凯平板）
常见非发酵菌初步分群鉴定
试验
假单胞 不动杆 产碱杆 黄杆 莫拉
菌属 菌 属 菌 属 菌属 菌属
氧化酶
+
-
+++
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非发酵菌是一群需氧、无芽孢、氧化分 解利用糖类或是不利用糖做为能量来源 的革兰阴性杆菌。
非发酵菌与其它苛养非糖发酵的革兰阴 性杆菌之间的界限只是传统意义上的， 并不是根据明确的遗传或表型特点来划 分。
非发酵菌的共同特征
1、为需氧菌，KIA培养基中无酸产生，斜面和底 部均呈红色，葡萄糖O/F试验为氧化型或产碱型
本属包括铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、 恶臭假单胞菌、斯氏假单胞菌等。
药敏试验
非发酵革兰阴性杆菌除铜绿假单胞菌、 不动杆菌属、洋葱伯克霍尔德菌和嗜麦 芽寡养单胞菌外药敏试验不能用纸片法 ，可用稀释法
铜绿假单胞菌
生物学特性
细长革兰阴性杆菌， 极单鞭毛，严格需氧，氧 化利用葡萄糖、 MAC生长
临床意义
分布广泛，是非发酵菌中最具临床意义的细菌， 也是医院内感染最多见的细菌，主要引起条件 感染。
感染多发生于烧伤、急性白血病、器官移植病 人等正常防御机制改变或缺损的患者，感染多 位于潮湿部位，如气管造口、留置的导管、创 面、外耳道、角膜等
囊性纤维化病人呼吸道分离的铜绿假单胞菌具 有生物膜（大量藻酸盐包围了菌体），导致本 病的治疗困难其淡蓝色脓性渗出物及闻到绿脓 素的生姜样气味具有特征性。
嗜麦芽窄食单胞 菌, 2.9%
屎肠球菌, 3.1%
阴沟肠杆菌, 2.6%
凝固酶阴性葡萄球 菌, 6.6%
大肠埃希菌, 22.8%
粪肠球菌, 7.6%
铜绿假单胞菌, 7.7%
金黄色葡萄球菌, 7.9%
鲍曼不动杆菌, 9.8%
肺炎克雷伯菌, 13.7%
假单胞菌属
直或微弯无芽孢革兰阴性杆菌， 氧化酶+ ，动力+（一个或多个极鞭毛），严格需 氧，氧化利用葡萄糖、触酶阳性、 MAC 生长，可产水溶性色素。
过血液制品而致菌血症的患者。
不动杆菌属
属于莫拉氏菌科。根据DNA-DNA杂 交和营养特征分为25个基因种 – 醋酸钙不动杆菌 – 鲍曼不动杆菌 – 溶血不动杆菌 – 琼氏不动杆菌 – 约氏不动杆菌 – 洛菲不动杆菌
生物学特性
严格需氧、氧化葡萄糖、无动力、氧化酶阴性、 硝酸盐还原阴性的革兰染色阴性球杆菌。
氧化酶阴性，有动力 嗜麦芽寡养单胞菌
氧化酶阳性，无动力 莫拉菌属 金黄杆菌属
氧化酶阳性，有动力 产碱杆菌 洋葱伯克菌 类鼻疽伯克菌
铜绿假单胞菌及其他大部 分假单胞菌
革兰阴性杆菌菌的检验程序
血液
脑脊液、胸腹水、脓汁、痰、尿液
粪便
增菌 营养肉汤
分离培养 血、麦康凯
直接涂片染色
初步鉴定
菌落特征，色 素、 氧化酶、KIA、动
2、氧化酶阳性（不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌 阴性），但并非所有氧化酶阳性的革兰阴性杆菌 都是非发酵菌。
3、大多动力阳性（不动杆菌、金色杆菌、莫拉 菌属阴性）
4、在分类学上分别属于不同的科、属、种，多 为条件致病菌
分类、命名
主要的非发酵革兰阴性杆菌属被分成6个科： 假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群
常似双球菌，有时不易脱色，易误认阳性菌； 血平板培养24小时后，形成光滑，不透明，凸
起，无色素形成；溶血不动可产生β溶血 大多数菌株麦康凯平板上生长良好，呈无色或
淡粉红色
鲍曼不动杆菌革兰染色
鲍曼不动杆菌42 ℃可生长
鲍曼不动杆菌菌落特征
临床意义
该菌广泛存在于自然界，属条件致病菌， 在非发酵菌中分离阳性率仅次于铜绿假单 胞菌，可引起呼吸道、消化道和泌尿生殖 道感染。
产碱杆菌属(Alcaligenes) 无色杆菌属(Achromobacter) 莫拉菌属(Moraxella)
黄单胞菌属(Xanthomonas) 丛毛单胞菌属(Comamonas) 食酸菌属（Acidovorax）
2013年瑞金医院的菌种构成 （5596株）
奇异变形杆菌, 无乳链球菌, 2.8% 2.6%
非发酵菌常见菌属
假单胞菌属(Pseudomonas)
金氏杆菌属(Kingella)
不动杆菌属(Acinetobacter)
金黄杆菌属(Chryseobaterium)
寡养单胞菌属(Stenotrophmonas) 艾肯杆菌属(Eikenella)
伯克菌属（Burkholderia）
土壤杆菌属(Agrobacterium)
2007各医院铜绿假单胞菌对各种抗菌药物 的耐药率
医院 HSH BJH TJH PUH ZJH RJH GZH PED SCH GSH 716 616 530 473 443 329 329 170 137 68
头孢他啶 39.7 43 16.7 27.7 25.5 22.2 33.1 5.5 29.9 4.7 头孢吡肟 33 42.6 22.7 18.9 24.1 14.3 33.7 1.2 4.4 7.6
有医学意义的产碱杆菌有 粪产碱杆菌 皮氏产碱杆菌
大部分感染是条件致病，主要来自潮湿环境， 如雾化器、呼吸机和灌洗液等，血、痰、尿 是常见发现部位。
产碱杆菌属
粪产碱杆菌
– 不分解糖类，某些菌株可产生特征性水果香 味并使血平板变绿
金黄杆菌属
金色杆菌属氧化酶阳性，动力阴性，吲哚 阳性，氧化葡萄糖，产黄色色素
本菌对多种抗菌药物（氨苄西林、四环素、一、二代 头孢菌素、头霉素、大环内酯类、磺胺等）天然耐药
各种抗生素治疗铜绿假单胞菌所致感染过程中都可能 发生耐药性改变。
铜绿假单胞菌对-内酰胺类抗菌药物的 耐药机制
膜孔蛋白缺失：亚 胺培南
外排泵：美罗培南
-内酰胺酶水解： 所有
L. Silvia Munoz-Price & Robert A. Weinstein. N Engl J Med. 2008;358:1271-81.
铜绿假单胞菌的分型
血清学分型：菌体O抗原 噬菌体分型 重复序列PCR 脉冲场凝胶电泳
脉冲场凝胶电泳
荧光假单胞菌
产青脓素（荧光素），但不能产绿脓素， 4℃生长, 42℃ 不生长, 单端鞭毛3根以上，明胶液化阳性 。
见于水和土壤中，是人类少见的条件致病菌 具有嗜冷性，和污染的血制品关系密切，可见于近期受
引起本菌定植和感染的危险因素有：机械通 气、广谱抗生素的应用、化疗、插管和中性粒细 胞减少等。
伯克霍尔德菌属Burkholderia
本属菌包括13个种，其中假鼻疽伯克霍 尔德菌B. pseudomallei、洋葱伯克霍尔德 菌B. cepacia、唐菖蒲伯克霍尔德菌B. gladioli和皮氏伯克霍尔德菌B. pickettii与 人类疾病相关
舒普深 26.4 39.7 19.6 22.3 16 18.6 23.5 1.8 8 3 特治星 45.8 47.9 27.3 33.7 26.9 22.9 27.4 1.8 21.9 6.5 亚胺培南 47.8 50.6 22.5 34.1 39.1 23.7 36.5 7.3 27.7 3.2 阿米卡星 30.6 15.7 22.4 17.4 19.6 16.1 13.1 1.2 4.4 3 环丙沙星 50.4 27.8 25.9 25.4 28.2 24.4 35.4 1.2 2.2 15.4
莫拉菌属
莫拉菌属的生物学特征：
– 细菌形态呈微小、无动力、 革兰阴性双球菌或双杆菌
– 血平板培养24h后菌落小呈针尖样 – 氧化酶阳性（与不动杆菌区别）、不能氧化
糖类（与奈瑟菌区别）
本菌可引起中耳炎、结膜炎、角膜炎、 慢性鼻窦炎、心内膜炎及脑膜炎等
非发酵菌初步鉴定
氧化酶阴性，无动力 不动杆菌属
在普通琼脂平板上产生特征性的蓝绿色水溶性绿 脓素和黄绿色青脓素（荧光假单胞菌和恶臭假单 胞菌也可产生）
血平板上形成扁平，湿润，边缘不齐，有金属光 泽，有生姜气味的灰绿色菌落，并形成透明溶血 环
有时可产生水滴样样菌落，无色素不溶血（囊性 纤维化病人）
最适生长温度35℃，4℃不生长，42℃可生长
可从各种水源和潮湿表面分离到，能在某些 消毒剂中生长
极丛鞭毛，氧化酶弱阳性（ 93%） 是非发酵菌中仅有的两种赖氨酸脱羧酶阳性
的细菌之一 可用于纸片法药敏试验的抗菌药物：甲氧苄
氨嘧啶/磺胺甲噁唑、美罗培南、米诺环素和 头孢他啶
产碱杆菌属
为氧化酶阳性的革兰氏阴性杆菌，通过周鞭毛 运动，在含蛋白的肉汤中产氨。在肉汤培养基 表面形成菌膜，管底有粘性沉淀
本菌的一个重要特征是对氨基糖苷类抗生素、 碳青霉烯类天然耐药，但对TMP/SMZ敏感。
可用于纸片法药敏试验的抗菌药物：甲氧苄氨 嘧啶/磺胺甲噁唑、米诺环素和左氧氟沙星
嗜麦芽寡养单胞菌端丛鞭毛
临床意义
嗜麦芽寡养单胞菌分布广泛，是一种重要的 医院获得性病原体，可分离于几乎所有部位，居 临床分离的非发酵菌第3位
– 产吲哚金黄杆菌 – 脑膜脓毒金黄杆菌
自然存在于土壤、水、植物和粮食中， 在医院主要存在于有水的环境，不是人体 正常军群
金黄杆菌属
产吲哚金黄杆菌是本属临床标本中最常分 离到的菌株，其菌落呈深黄色有水果香味
脑膜脓毒金黄杆菌产生很浅的黄色素，是 使人类致病最相关的菌种，对早产儿具有 高度致病性，可致新生儿脑炎，可在婴儿 室引起流行
能够在大多数环境表面生存，医院获得性 感染最常见的是呼吸道或手术部位、应用 器械或ICU的住院患者
超级细菌：泛耐药鲍曼不动杆菌（伊拉克 菌）
瑞金医院鲍曼不动杆菌敏感率变化趋势
窄食单胞菌属
窄食单胞菌属有5个菌种，最常见为嗜麦 芽窄食单胞菌
1961年根据其鞭毛特征命名为嗜麦芽假单 胞菌
力
直接涂片染色
分 离 培 养SS 麦康凯…..
最后鉴定 生化反应 分型：血清学