实验3 吸收放散试验、效价

2．3%-5%A型及B型试剂红细胞
3．生理盐水
标本: 静脉血
操
作(已做好)
1. 冷吸收：受检红细胞洗涤3次，末次洗涤除
尽盐水，取1份压积红细胞加3份人源抗-A/抗-B 分型血清混合，置4℃ 30-60min，每隔10min将
试管振摇1次，充分冷吸收 (最好4℃过夜)。（
最好加做一个Ｏ细胞－－－阴性对照） 2.洗涤：离心去除上清液，以4℃冷盐水洗涤 红细胞3次，留取压积红细胞。
结果判定
1、放散液和A型红细胞凝集与B型红细胞不 凝集被检血型为A型，反之为B型； 2、放散液和A型与B型红细胞均凝集，被检 血型为AB； 3、如均不凝集为O型。
注意事项
1.吸收血清为人源强；
2.洗涤红细胞时盐水尽可能去尽。
3.吸收温度4℃（冷吸收，对ABO系统IgM类抗体），
37℃（热吸收，对Rh系统等IgG类抗体）； 4.吸出尽可能多的放散液，离心去除吸收细胞。 5.放散时注意温度、时间。 6.放散液中的Ab易变性，立即用于定血型（新生儿
凝集强度判断标准



4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3+ 红细胞凝集成一大块，数小块，血清尚清晰。 2+ 红细胞凝块分散成许多小块，血清尚清晰。 l+ 肉眼可见小颗粒，周围有较多游离红细胞，血清混浊 ± 轻摇时细胞非呈现细沙状流下，有缺口。镜下可见数个 红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。 mf 混合凝集外观（mixed field）指镜下可见少数红细胞凝 集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。 － 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布，呈现细沙 状流下。
2.加样：从2号开始各管分别加生理盐水0.05ml； 1、 2管各加血清加血清0.05ml。 3.倍比稀释：将2号管混匀，从中吸出0.05ml移入第 3管，混匀；再从第3管吸出0.05ml移入第4管，以
此类推，至最后一管，吸出0.05ml弃去。
4.加悬红：每管各加0.05ml，混匀。 5.观察结果：3000r／min离心15秒，直接观察结果。
操
作
3.放散：加等容积生理盐水，置56℃水浴中10min（ 前1min用手振摇后，56℃环境静置9min）。立刻
1000g离心3min（离心时套管内放温水，温度保持
56℃），离心Βιβλιοθήκη Baidu立即将上清液（放散液）转移到另一
干净试管中。
4.检测：放散液均分两管，用A型和B型试剂红细胞 鉴定抗体，即可检出受检红细胞血型。
注意事项
1.更换滴管，防止干扰。
2.防止前带现象，看结果从高稀释度开始
3.试剂细胞。 4.稀释液体积越小，产生误差越大。
作 业
IgG抗体效价如何进行检测？
吸收放散试验与血型抗体 效价测定（IgM）
临检教研室
吸收放散试验
（一个班四组，四管吸收液）
目的 掌握红细胞抗体吸收放散试验的原理、方法 原理 1.吸收试验：间接证明红细胞上的血型抗原及其强 度，常用于ABO亚型鉴定。受检细胞加入已知效价 的抗-A及抗-B血清后，若红细胞上有相应的抗原， 便吸收血清中的抗体。再以已知抗原红细胞来滴定， 比较吸收前后抗体的效价，证明受检红细胞上有无 相应抗原及其强度。 2.放散试验：红细胞上的抗原与抗体在适合条件下 发生凝集或致敏。可逆结合，如果改变某些物理条 件，抗体可从细胞上放散出来，再以相应红细胞鉴 定放散液内抗体的种类，测定其强度，判定原来红 细胞上抗原的型别。
吸收试验
待 检 红 细 胞
已知 效价 的抗 A和 抗B 血清
滴定
吸收液
已知抗原 的红细胞 比较吸收 前后血清中 抗体效价
间接判定待检 红细胞血型 及其亚型种类 红细胞上 有无相应 抗原及其强度
放散试验
器材:小试管、滴管、试管架、记号笔、
冰箱、离心机、56℃水浴箱
试剂:
1．抗-A及抗-B分型血清
溶血病、亚型）
血型抗体效价测（IgM）
（两个同学一组，抽一管血）
实验目的：掌握抗体效价的测定方法。
实验原理：Ab经过倍比稀释加入悬浮红细胞，以肉
眼可见“+”凝集的最高稀释倍数为抗体效价。
器材：小试管、记号笔、滴管、离心机。
试剂：悬浮红细胞、生理盐水。
标本：血清。
实验步骤
1.标记：1、2、4、8、16、32。