人神经元细胞培养

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Human Neurons

人神经元细胞

中枢神经系统的组织由两类细胞组成，它们可以广义地分为神经元和神经胶质。神经元是大脑的解剖、功能及营养上的单元。尽管神经元在大小和形状上有很大的差异，但它们都具有共同的形态学特征，而且它们是复杂的通信网络中的重要物质。神经元是动态极化的细胞，并且是神经系统中的主要信号物质。人类大脑包含1 x 10^11 神经元，而且每个神经元至少可与10000个其它神经元互通信息。

细胞培养说明

注意：冷冻保存的细胞非常脆弱。将小瓶置于37°C水浴，然后尽快移入培养物中，尽量减少操作。

启封

1.对于冰冻细胞：如果包装箱里干冰，并且你不想立即培养细胞，将冻存管立即放入液氮中。如果包装箱中没有干冰，立即融化培养细胞

2.对于增殖的细胞：用70%的酒精喷洒培养容器(瓶，板或slide)以消毒。将细胞放入37°C，5%二氧化碳培养箱中平衡两小时。细胞平衡好后，更换新鲜培养基。

经过以下步骤后开始培养细胞

1.用层粘连蛋白或多聚赖氨酸包被培养容器

神经元接种在层粘连蛋白或多聚赖氨酸包被的培养瓶中将促进细胞帖壁和神经突生长(多聚赖氨酸包被：浓度为2 μg/ml 包被培养瓶或培养板1小时，然后用无菌水洗三次)，这一点非常重要。

2.培养基的准备：用70%的酒精为培养基和添加物的外表面消毒，然后放到无菌的地方。在无菌环境下打开每一个添加物小管并用吸管加入到基本培养基中。用培养基冲洗每一个小管以保证添加物全部加入基本培养基中。

3.准备培养：为每一支冻存管准备一个T-45培养瓶。加入适量的培养基(推荐20 ml/T-45 培养瓶)，将培养瓶放入37°C，5%二氧化碳培养箱中至少平衡30分钟。

4.融化细胞：将小瓶入入37°C水浴中，握住并轻轻的旋转小瓶直到完全融化。将小瓶立刻移出水浴，擦干，用70%的酒精冲洗小瓶，然后放到无菌环境中。用70%的酒精冲洗小管，擦去多余的酒精。小心地打开盖子，注意手指不要碰到里面。

5.用1ml移液管在小管内轻轻地重悬细胞，然后转移到平衡过的培养容器中( 一个T-45 flask)。推荐接种密度大于10,000 cells/cm2

注意：细胞融化后不推荐稀释和离心，因为这些操作比培养基中DMSO残留物对细胞的伤害大。

6.盖好盖子，轻轻地摇晃培养瓶以使细胞分布均匀，如需气体交换则打开瓶盖。

7.为了得到良好的结果，在培养开始后至少16个小时内不要动培养物。第二天更换培养基以去除残留的DMSO和未贴壁的细胞，然后每隔一天进行如上操作。培养良好的细胞将呈现正常神经元形态，在多过程中细胞基不含液泡。

注意：处理人类来源的产品存在潜在的风险。尽管每一株细胞都经检测艾滋病毒，乙肝病毒，丙肝病毒呈阴性，检测不能达到100%准确，因此，必须采取适当的保护措施避免无意的暴露。操作这些产品时要带手套和安全镜。不要用嘴吸。我们推荐以下通用的程序来处理人类来源的产品，从而以最小的预防来对抗污染。

以上由北京裕恒丰科技有限公司提供

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