蛋白质免疫印迹技术
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二、实验原理
第一部分 动物的常规免疫及抗血清的制备 第二部分 Western－blotting 检测抗血清
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第一部分 动物的常规免疫及抗血清的制备
将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间，动 物血清中可出现大量特异性抗体，这种含抗体的血清 称为免疫血清。
优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度和免疫 原性，以及动物应答的能力。此外，尚需考虑免疫途 径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因 素。
及中和反应等各种不同的反应类型。 因抗体主要存在于血清中，在抗原或抗体的检测中多采用
血清作试验，所以体外抗原抗体反应亦称为血清学反应 （serologic reaction）。
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二、印迹法（blotting）
印迹法是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应 的探测反应来检测样品的一种方法。
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（一）多克隆抗体的概念
抗原通常是由多个抗原决定簇组成的。 由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接
受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体 （Monoclone antibody）。 由多个抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种 各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起 就是多克隆抗体。 机体内所产生的抗体就是多克隆抗体。
人体血清中IgG含量最多， IgA次之， IgM较 少， IgD和IgE微量。
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抗原抗体反应（antigen-antibody reaction）
是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。可发 生于体内（in vivo），也可发生于体外（in vitro）。
体内反应可介导吞噬、溶菌、杀菌、中和毒素等作用； 体外反应：可出现凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应
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抗体的种类
抗体（antibodies，Ab)是专门对抗抗原特异 结构的球蛋白，故也称为免疫球蛋白 （immunoglobulins, Ig)。存在于血清、体液 中，是构成机体免疫作用的主要物质。
免疫球蛋白依据其理化性质及生化性质的不同， 分为五种类型： IgG、 IgA、 IgM、 IgD和 IgE。
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淋巴组织
免疫活性细胞
免疫活性介质
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免疫系统功能的生理和病理表现
功能名称
生理功能 病理表现
免疫防御
清除病原微生物及其它抗原性异物
超敏反应（强） 免疫缺陷病（弱）
免疫自稳 免疫监视
清除损伤或衰老细胞
清除突变或畸变细胞 防止肿瘤发生 杀伤病毒感染细胞
自身免疫性疾病
肿瘤或病毒持续性 感染
5 精品课件
在种系发育和进化过程中形成的免疫防御功能。
（二）适应性免疫应答（adaptive immune response） 又称获得性免疫应答，特异性免疫应答，是机体出
生后通过与抗原物质接触后所产生的一系列防御功能。 （具有特异性、多样性、记忆性、耐受性、自限性）
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抗原和免疫原性
抗原（antigens，Ag）是指能够刺激机体免疫活性细 胞产生抗体或致敏淋巴细胞，并在体内或体外发生特 异性反应的物质。
当外源异体物质，如细菌、病毒、蛋白质、多 糖等进入动物机体后，可以激活机体免疫系统， 产生对外源物质的排除作用，从而保护机体免 受外源物质的侵害。
机体的这一特异免疫应答功能的细胞基础是淋 巴细胞。
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免疫应答的类型
（一）固有性免疫应答（innate immune response) 又称先天性免疫应答，非特异性免疫应答：是机体
1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜 （NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段 的方法，称为Southern 印迹法。
人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对 RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的 蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法，对双向电 泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法
方法。
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蛋白质免疫印迹检测技术
一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器 四、操作步骤 五、实验结果与分析 六、思考题
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一、实验目的
学习掌握动物抗血清的制备原理及技术 通过实际操作学会动物抗血清的制备 掌握Western－blotting的基本原理 熟悉Western－blotting的实验操作
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三、蛋白免疫印迹的应用
免疫印迹法 (immunoblotting test,IBT)，亦称酶联 免疫电转移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB
是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术 相结合的杂交技术。
具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点。 是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的
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抗原的分类
抗原可以分为完全抗原和半抗原。 完全抗原：具有免疫原性和免疫反应性的抗原称
为完全抗原（complete antigen） 半抗原：只具有免疫反应性而无免疫原性的Leabharlann Baidu原
称为半抗原（hapten），也称为不完全抗原 (incomplete antigen)。与蛋白质结合后成为完 全抗原。半抗原能与相应的抗体或致敏淋巴细胞 发生特异性结合反应。绝大多数多糖和所有类脂 都属于半抗原。
常见的抗原有蛋白质、多糖、磷脂、脂多糖、结合蛋 白质、核酸、激素等有机物。
抗原具有两方面的特性：免疫原性（immunogenicity） 和免疫反应性（immunoreactivity）。
免疫原性（immunogenicity）是指抗原刺激机体引起免疫应 答的能力。
免疫反应性（immunoreactivity）是指抗原与相应免疫应答 产物(即抗体)在体内或体外发生特异性结合反应的能力。
实验二 蛋白质免疫印迹技术
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一、免疫学
研究抗原物质的结构和功能； 免疫应答产物的结构和功能； 抗原刺激机体产生免疫应答的规律。
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免疫学的研究范围很广，与很多相关学科交织在 一起，并且发展成了很多学科，如免疫生物学、 免疫遗传学、血液免疫学、肿瘤免疫学等。
随着免疫生物学的发展，人们发现在高等动物体 内存在着具有免疫功能的组织结构（即免疫系 统）。
二、实验原理
第一部分 动物的常规免疫及抗血清的制备 第二部分 Western－blotting 检测抗血清
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第一部分 动物的常规免疫及抗血清的制备
将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间，动 物血清中可出现大量特异性抗体，这种含抗体的血清 称为免疫血清。
优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度和免疫 原性，以及动物应答的能力。此外，尚需考虑免疫途 径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因 素。
及中和反应等各种不同的反应类型。 因抗体主要存在于血清中，在抗原或抗体的检测中多采用
血清作试验，所以体外抗原抗体反应亦称为血清学反应 （serologic reaction）。
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二、印迹法（blotting）
印迹法是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应 的探测反应来检测样品的一种方法。
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（一）多克隆抗体的概念
抗原通常是由多个抗原决定簇组成的。 由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接
受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体 （Monoclone antibody）。 由多个抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种 各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起 就是多克隆抗体。 机体内所产生的抗体就是多克隆抗体。
人体血清中IgG含量最多， IgA次之， IgM较 少， IgD和IgE微量。
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抗原抗体反应（antigen-antibody reaction）
是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。可发 生于体内（in vivo），也可发生于体外（in vitro）。
体内反应可介导吞噬、溶菌、杀菌、中和毒素等作用； 体外反应：可出现凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应
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抗体的种类
抗体（antibodies，Ab)是专门对抗抗原特异 结构的球蛋白，故也称为免疫球蛋白 （immunoglobulins, Ig)。存在于血清、体液 中，是构成机体免疫作用的主要物质。
免疫球蛋白依据其理化性质及生化性质的不同， 分为五种类型： IgG、 IgA、 IgM、 IgD和 IgE。
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淋巴组织
免疫活性细胞
免疫活性介质
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免疫系统功能的生理和病理表现
功能名称
生理功能 病理表现
免疫防御
清除病原微生物及其它抗原性异物
超敏反应（强） 免疫缺陷病（弱）
免疫自稳 免疫监视
清除损伤或衰老细胞
清除突变或畸变细胞 防止肿瘤发生 杀伤病毒感染细胞
自身免疫性疾病
肿瘤或病毒持续性 感染
5 精品课件
在种系发育和进化过程中形成的免疫防御功能。
（二）适应性免疫应答（adaptive immune response） 又称获得性免疫应答，特异性免疫应答，是机体出
生后通过与抗原物质接触后所产生的一系列防御功能。 （具有特异性、多样性、记忆性、耐受性、自限性）
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抗原和免疫原性
抗原（antigens，Ag）是指能够刺激机体免疫活性细 胞产生抗体或致敏淋巴细胞，并在体内或体外发生特 异性反应的物质。
当外源异体物质，如细菌、病毒、蛋白质、多 糖等进入动物机体后，可以激活机体免疫系统， 产生对外源物质的排除作用，从而保护机体免 受外源物质的侵害。
机体的这一特异免疫应答功能的细胞基础是淋 巴细胞。
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免疫应答的类型
（一）固有性免疫应答（innate immune response) 又称先天性免疫应答，非特异性免疫应答：是机体
1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜 （NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段 的方法，称为Southern 印迹法。
人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对 RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的 蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法，对双向电 泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法
方法。
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蛋白质免疫印迹检测技术
一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器 四、操作步骤 五、实验结果与分析 六、思考题
精品课件
一、实验目的
学习掌握动物抗血清的制备原理及技术 通过实际操作学会动物抗血清的制备 掌握Western－blotting的基本原理 熟悉Western－blotting的实验操作
精品课件
三、蛋白免疫印迹的应用
免疫印迹法 (immunoblotting test,IBT)，亦称酶联 免疫电转移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB
是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术 相结合的杂交技术。
具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点。 是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的
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抗原的分类
抗原可以分为完全抗原和半抗原。 完全抗原：具有免疫原性和免疫反应性的抗原称
为完全抗原（complete antigen） 半抗原：只具有免疫反应性而无免疫原性的Leabharlann Baidu原
称为半抗原（hapten），也称为不完全抗原 (incomplete antigen)。与蛋白质结合后成为完 全抗原。半抗原能与相应的抗体或致敏淋巴细胞 发生特异性结合反应。绝大多数多糖和所有类脂 都属于半抗原。
常见的抗原有蛋白质、多糖、磷脂、脂多糖、结合蛋 白质、核酸、激素等有机物。
抗原具有两方面的特性：免疫原性（immunogenicity） 和免疫反应性（immunoreactivity）。
免疫原性（immunogenicity）是指抗原刺激机体引起免疫应 答的能力。
免疫反应性（immunoreactivity）是指抗原与相应免疫应答 产物(即抗体)在体内或体外发生特异性结合反应的能力。
实验二 蛋白质免疫印迹技术
精品课件
一、免疫学
研究抗原物质的结构和功能； 免疫应答产物的结构和功能； 抗原刺激机体产生免疫应答的规律。
精品课件
免疫学的研究范围很广，与很多相关学科交织在 一起，并且发展成了很多学科，如免疫生物学、 免疫遗传学、血液免疫学、肿瘤免疫学等。
随着免疫生物学的发展，人们发现在高等动物体 内存在着具有免疫功能的组织结构（即免疫系 统）。