维生素E(VE)含量检测试剂盒说明书 微量法

维生素E（VE）含量检测试剂盒说明书微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC1425
规格：100T/48S
产品内容：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体3mL×1瓶，4℃避光保存；
试剂二：液体2mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：无水乙醇2mL×1瓶，自备，RT保存；
试剂四：液体7mL×1瓶，4℃保存；
标准品：液体20mg×1支，-20℃避光保存。

临用前加入1mL无水乙醇，配成20mg/mL的标准品溶液。

产品说明：
维生素E（Vitamin E）是一种天然脂溶性抗氧化剂，是最主要的抗氧化剂之一。

能阻断机体不饱和脂肪酸的过氧化，维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能，并可清除超氧阴离子自由基，具有延缓衰老、预防溶血性贫血等作用。

VE还原Fe3+为Fe2+，Fe2+与1,10-菲罗啉产生有色络合物，在530nm有特征吸收峰。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、漩涡震荡仪、无水乙醇、EP管。

操作步骤：
一、维生素E的提取：
组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，匀浆后用提取液定至1mL，定至在漩涡混匀仪上震荡5min（充分抽提），于25℃，5000g离心5-10min，
取上层测定。

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细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）后在漩涡混匀仪上震荡5min（充分抽提），于25℃，5000g离心5-10min，取上层测定。

血清或其他液体：取0.1mL，加0.9mL提取液，漩涡仪混匀上震荡5min（充分抽提），于25℃，5000g 离心5-10min，取上层测定。

二、测定步骤：
1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm，无水乙醇调零。

2、将20mg/mL标准液用无水乙醇稀释为0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.008、0.004μg/mL的标
准溶液备用。

3、操作表：(在1.5ml离心管或96孔板中依次加入下列试剂)
对照管测定管标准管空白管样品（µL）100100--标准溶液（µL）--100-
无水乙醇（µL）---100
试剂一（µL）20202020
试剂二（µL）-202020
试剂三（µL）20---
充分混匀，立即记时，25℃反应5min
试剂四（µL）60606060充分混匀，将液体置于微量玻璃比色皿/96孔板中，测定530nm处吸光值，记为A对照管、A测定管、A标准管和A空白管，△A=A测定管-A对照管。

计算△A=A测定管-A对照管，△A标准=A标准管-A 空白管。

每个测定管需设一个对照管。

三、维生素E含量计算：
1、标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的△A标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将△A带入方程得到x（μg/mL）
2、维生素E含量的计算：
（1）按蛋白浓度计算
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VE含量（μg/mg prot）=x×V样÷（V样×Cpr）=x÷Cpr。

（2）按样本质量计算
VE含量（μg/g鲜重）=x×V样÷（V样×W÷V样总）=x÷W。

（3）按照细胞数量计算
VE含量（μg/104cell）=x×V样÷（V样×细胞数量（万个）÷V样总）=x÷细胞数量（万个）。

（4）按液体体积计算
VE含量（μg/mL）=x×V样总÷V液体=10x。

V样：加入样本体积，0.01mL；
V样总：加入提取液体积，1mL；
Cpr：蛋白浓度，mg/mL；
W：样本质量，g；
V液体：血清或其他液体体积，0.1mL。

注意事项：
1、若反应体系产生沉淀，需要将样品进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2、若用微量玻璃比色皿检测，比色皿时需用无水乙醇冲洗，勿用蒸馏水以防出现分层影响试验数据。

3、当△A大于0.7时，建议将样本用无水乙醇稀释后再进行测定。

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