用蚕豆根尖细胞分析苯酚的遗传毒性及机理

苯酚能袭击核酸 ， 尤其是嘌呤和嘧啶的某些部位， 致 使碱基互换和 Ｄ Ａ损伤最终导致突变［］ Ｎ １。 ３
２２ 苯酚 诱导 的蚕 豆根尖微 核试 验 ．
来确定 ， 实验过程 按照 ｗｕ等 人口］ 其 的方法 来进
行 。将根 尖 组 织 切 成 小 片， 与 ５ 三 氯 乙酸 并 （Ｃ ） Ｔ Ａ 溶液 ２ ｍＬ混匀 。然后将匀浆放人新鲜的导 管中，７ ３ ℃放置 １ 后 ， ｈ 在室温下 １００ｒｍ ｎ ２０ ｉ 离心 ／ １ ｉ。取等量上清液和新配置的 ０ ６ ２ ２ｍ ｎ ． ８ 一硫代 巴比妥酸的 ２ Ｔ Ａ溶液放入 一个新 的导管 中， Ｏ Ｃ ９ ＂放置 ３ ｎ ５ Ｃ ０ ｍｉ。导管在冰浴 中放置 ２ ｎ ０ｍｉ 终止 反应后 ，００ ／ ｎ离心 １ ｉ， ５ ２ｎ １０ ０ｒｍｉ ５ｍ ｎ 于 ３ ｍ测定
１ ２ 苯酚处 理 ．
树脂制造 、 石油加工、 制药、 塑料或涂料制备等［ ］ １。
苯 酚 对水 生 生 物 、 物和 其 他生 物 体有 危 害作 植 用 ， 在生物 转化 过程 中充 当抑制 剂 ［ ， 并 ３ 被列入 我 国 ］ 水环 境重要 污染 物 的黑 名 单 ， 酚 对 哺乳 动 物 以及 苯
第 ２ 卷第 ３ ９ 期
２０１１ ５ 年 月
西安航空技术高等专科学校学报
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ’ ｎ Ａｅ ｏ ｅ ｈ ｉａ ｌｅ ｅ ｏ ｒ ａ ｆＸｉａ ｒ ｔｃ ｎ ｃ ｌ ｌｇ Ｃｏ
ｖ０ ．２９ＮＯ．３ １
Ｍ ａ ２ １ ｙ ０ １
用蚕 豆根 尖 细胞 分析 苯 酚 的遗 传 毒 性及 机 理
苯酚是环境中普遍存在的有毒环境污染物， 它
主要来 源 于工业 生产过 程诸 如炼 油 、 品加 工 、 食 工业
中浸泡 ２ ｈ 除去蚕豆外皮 ， ４， 然后置于两层湿 的脱脂
棉 中， 黑 暗环境 ２ ±１ 在 ３ ℃中催 芽 ， 到 新生 的根尖 直 长度 为 １０ ～２Ｏｃ 为止 。选 取 根尖 长 度大 致相 ．０ ．Ｏｍ 等 的根 尖幼苗 作为实 验材料 。
收稿 日期 ：０ １０ —２ ２ １—３０
基金项 目： 陕西省教育厅项 目（０ ０ Ｋ ４ ） 陕西省重点实验室项 目（Ｏ Ｏ Ｓ ２ ）榆林市科技计划项 目（ —Ｆ ９２ ） ２ １Ｊ ６ ８ ； ２ ＬＪ Ｏ ６ ； ＫＪＳ ０—５ 作者简 介： 张爱 宁（９ ８ ， ， １ ６ 一）女 陕西靖边人 ， 工程师 ， 从事环境污染分析方面 的研究 。
示各种功能障碍［ ］有关细胞在苯酚的诱变下， ８ ， － 如 细
胞微 核与 脂 质 过 氧 化 反 应 之 间 的关 系 较 少 有 研 究
报道 。
过 Ｓｈｆ试 剂 染 色 ， 着 色 完 全 的 根尖 细 胞 １ｍｍ ｅｉ 将
有丝分裂期区域放在洁净的载玻片上， 滴上一滴去 离子水 ， 盖上盖玻片十字压片法压片， 使其成云雾状 为止 。对每个根尖计算每 １０ ０ 个细胞 中有丝分裂的
细胞 有丝分裂指数 明显 下降。蚕 豆根 尖细胞在不 同浓度 的苯 酚诱导 下， 细胞微核 率与脂质过 氧化之 间有明显 的相
关 关 系 ， 相 关 系数 Ｒ 一 ０ ９ 。 其 ｚ ． ５
关键词 ： 苯酚 ； 豆 ； 蚕 微核 ； 脂质过 氧化 中图分类号 ： ５ ２ 文献标识码 ： 文章编号 ：０８９ ３ （０ １ ０—０ ８０ Ｘ ０ Ａ １０ —２ ３ ２ １ ）３０ ５－４
养温度为 ２ ±１ 对照组用 自来水。恢复培养后 ， ３ ℃， 切取长度 ０ ５ ｍ 的根尖用卡诺 氏液固定过夜 ， ． ￣ｌ ｍ
然后用 ７ 酒 精在 ４Ｃ下长 时 间保 存 。 ０ ￣
１ ３ 细胞有 丝分 裂和微 核试 验 ．
在制片和镜检之前 ， 根尖经去离子水冲洗干净 ，
在 ６ ℃下用 １ｍｏ／ ＨＣ 解 离 ｌ ～ １ ｎ Ｏ ｌＩ 的 Ｉ ２ ５ｍｉ。经
苯酚诱变作用， 会产生细胞变异、 因突变 、 基 非正常 Ｄ ＮＡ合 成 、 染色体 畸变 和姐 妹染 色体互 换 ［ 。人类 ６ ］ 淋巴细胞体外研究证实苯酚能显著促使微核 的形成
和增 加游 离着丝 点微 核细胞 数 目［ 。由于活 性氧 对 ７ ］ 脂类 、 白质和 Ｄ 蛋 ＮＡ 的损 害 ， 胞 在 氧化 压 力下 显 细
１ 材料和方法
１１ 化 学试剂 和根 尖制 备 ．
个数即有丝分裂指数 ＭＩ 。在光学显微镜下 ， 放大
８０ ， ０ 倍 观测细胞的微核。每个实验组检测 ５０ 个 ０的数 目来 ００
苯酚购 于 Ｓ ｍａ 司 ， ｉ 公 ｇ 苯酚 溶液用 超纯 水现 配 。蚕豆种子在 ４ 下储存 。蚕豆种子在去离子水 ￣ Ｃ
按照 Ｍａ 等人［］ １的实验操作方法， １ 根尖细胞经
过 苯 酚溶液 （． ￣ ５ｍｇＬ） 理 １ｈ 然 后 在 自来 Ｏ５ ０ ／ 处 ２， 水 中恢 复培 养 ２ｈ ４ 。每 组 实 验 有 ５个平 行 样 品 ， 培
人类的遗传毒性有着广泛的研究［ 通过对实验动 ４ ，
物 和人 体 细胞系 研究 ， 现叙 利 亚 仓 鼠胚 胎 细 胞 经 发
第３ 期
张爱宁 ， ： 等 用蚕豆根尖 细胞分析苯酚 的遗传毒性及机理
５ ９
表述微核率 。
１４ 脂 质过 氧化 作用 的检 测 ．
（Ｎ Ｄ Ａ合成） Ｍ 期（ 到 分裂间期） 经历了一个较慢的 过程 。苯酚诱使细胞遗传损伤的一个可能的机理为
脂质过氧化作用是通过丙二醛 （ Ａ） ＭＤ 的含量
张爱宁， 严志刚， 刘永军
（ 西安建筑科技大学 环境与市政工程学院 ， 陕西 西安 ７ ０ ５ ） １０ ５
摘
要： 用蚕豆根尖细胞微核试验对水 中苯酚 的遗传 毒性和 细胞毒性 进行检 测， 一步研 究在 不 同浓度 苯酚诱 导 进
下， 细胞微核率与脂质过氧化物之 间的相关关 系。蚕豆根 尖细胞在 ２ Ｏｍｇ Ｌ苯酚诱导下 ， ～５ ／ 细胞微核 率 明显增加 ，