组织培养

组织培养

复习提纲：

一．名词解释

植物组织培养：在无菌条件下，植物体的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放

在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化形成完整植株的过程。

体细胞胚状体：在离体或活体条件下，体细胞经“原胚期-球形培期-心形培期-鱼雷培期-子叶期”等

阶段形成的胚。

细胞全能性：植物体任何一个细胞都携带着一套发育成完整植株的全部遗传信息。

人工种子：将植物离体培养产生的体细胞胚报埋在营养成分和保护功能的物质中，在适宜条件下

发芽出苗的颗粒体。

细胞质杂种：一方亲本的细胞核和细胞质及另一方亲本的全部细胞质融合，可使两种来源不同的

核外遗传与一个特定的核基因结合在一起，这种杂种称为细胞质杂种。

外植体：在组培中，从活植物体上取下以进行培养的部分。

茎段培养：带有腋芽（侧芽）或叶柄、长数厘米的茎段进行离体培养。

指示植物：可以呈现病毒在病的植物上出现的枯斑和某些病理症状来鉴别病毒的植物。

愈伤组织：在组培中，在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长、高度液泡化、呈无定形

态的薄壁细胞。

体细胞杂交：以原生质体培养技术为基础，借用动物细胞融合方法发展和完善的一门新型生物技术。

再分化：从愈伤组织再生出小植株的过程。

植物快速繁殖：应用组织培养技术,快速繁殖名优特新品种,使其在较短时间内繁衍较多的植株;快

速繁衍珍稀濒危植物,使物种得以保存。

衰退现象：长期继代培养的材料会逐渐衰退，丧失形态发生能力（生长不良，再生能力下降，增

值率下降）。

离体保存：将组织和细胞培养中的外植体或试管苗贮存在使其抑制生长\缓慢生长\无生长的条件下，达到长期保存的方法。

驯化现象：植物组织经长期继代培养，在其后加入少量或不加入生长调节物质就可以生长的想象。

原生质体融合：同体细胞杂交

脱分化：由高度分化的植物组织或器官产生愈伤组织的过程。细胞进入分裂状态。

细胞悬浮培养：用液体培养基对保持良好的分散状态的单个细胞或小的细胞聚集体于摇床上进行

培养的方法。

植物无糖培养技术：是指容器中的小植株在人工光照下，吸收CO2进行光合作用，以完全自养的方式进行生长繁殖

二．填空

1．离体器官的分化方式。

（1）由分生组织直接发芽

（2）由分生组织形成愈伤组织，经过分化实现细胞全能性

（3）游离细胞或原生质体形成胚状体，由它直接重建完整植株或制成人工种子后重建植株

2.培养基成分中糖的一般使用范围，其作用。使用浓度1-5%,个别7-15%;，其作用：作用为提供碳源、能量及调节渗透压

3.外植体消毒的常用药剂有：升汞：0.1% 酒精：75% NaClO：5~12%

4.组织培养的一般条件包括：温度光照湿度培养基渗透压气体

5.愈伤组织再分化形成再生植株的方式。（1）先生芽后长根（2）先生根后长芽（3）愈伤组织的不同部位分别形成根和芽

6.人工种皮制作的常用方法。（1）络合凝胶点滴法（2）模型法

7.脱毒苗常用的鉴定方法。（1）直接测定法（2）指示植物法（3）抗血清鉴定法（4）酶联免疫吸附法（5）电子显微镜检查法（6）免疫吸附电镜法

8.细胞悬浮培养的类型。（1）分批培养（2）连续培养

9.原生质体的融合方式有，（1）自发融合（2）诱导融合化学诱导融合方法有：融合剂(NaNO3\高PH-Ca处理\PEG=聚乙二醇处理)。，诱导融合的方法有：a.物理方法b.化学方法。

10.细胞质杂种产生途径。a).1正常的原生质体+1去核的原生质体融合

b).1正常的原生质体+1核失活原生质体融合

c).在异核体形成之后2个核中有1个消失

d).在较晚的时期染色体选择性地消除

11.超低温保存操作有。(1)快速冷冻法:(2)慢速冷冻法:(3)分步冷冻法:(4)脱水干燥法:(5)化冻操作:

12.离体保存的主要办法：（1）低温保存、（2）超低温保存

13.人工种子包括:（1）体细胞胚（2）人工胚乳（3）人工种皮

14.提高脱毒效果的方法有。(1)高温处理(温热疗法)(2)低温处理(冷疗法) (3)化学处理(化疗法)

15.细胞悬浮培养的三大条件。(1)悬浮培养物分散性良好,细胞团较小(2)均一性好,细胞形态和细胞团大小大致相同(3)生长迅速

16.超低温保存其保存液组成。(1)电解质平衡盐溶液(2)高渗溶液:葡萄糖\甘露醇\蔗糖(3)营养液:氨基酸\核苷类\葡萄糖

17.种质保存的主要方式。（1）原地保存：（建立自然保护区和天然公园）（2）异地保存（植物园、种质圃、种子库、离体保存）

18.植物快速繁殖的常见类型。器官型、器官发生型、胚状体发生型、原球茎型、球茎芽型、块茎型、鳞茎型、孢子型、根茎型、微枝扦插型

19.单细胞的分离方法。机械分离法、酶解分离法、愈伤组织分离法

20.细胞分批培养中其增长速率为何曲线对口向下抛物线，5个时期。滞后期、对数生长期、直线生长期、减慢期、静止期

21.原生质体的培养方式（法）有。平板培养、液体浅层培养、悬滴培养、固液结合培养、琼脂糖珠培养、饲养层培养

22.超低温保存常用的冰冻保护剂类型。有渗透型(DMSO\乙二醇\乙酰

胺\丙二醇\甘油)和非渗透型(PVP\蔗糖\葡聚糖\聚乙二醇)

抗冻剂

23.化冻后材料生活力和存活率检测方法有。A.再培养法:B.荧光素双醋酸酯(FAD)法:C.氯化三苯四氮唑(TTC)法:

24. 在植物组织培养中,小植株的生长方式有哪3种?（1）植物靠光合作用进行自然生长（2）植物体靠培养基中的糖进行异养生长（3）植物体既靠培养基中的糖又靠人工光照，同时进行异养和自然生长

三．综合题

培养基配方为MS+1.5mg/L 2,4—D+1.0mg/L BA+33g/L蔗糖+8g/L琼脂(PH=5.8)。配制500ml 用于以下材料培养。提供的母液浓度：MS1为50mL/L、MS2为1mL/L、MS3为10mL/L、MS4为10mL/L，2,4—D为0.5mg/mL、BA为0.5mg/mL。

1．请详细写出《花药/腋芽/茎尖培养》进行组培的全过程。

（1）所需的组培室：准备室、无菌操作室、缓冲间、培养室

（2）所需的设备和仪器：超净工作台、培养架、目光灯、培养基、无菌水、镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯、切割盘

（3）所需的试剂：酒精、升汞、无菌水、培养基

（4）培养基的配制、灭菌（准备工作、移取母液等、称量、定容、调PH值、煮培养基、分装包扎、高压灭菌）培养基的配制、灭菌（准备工作、移取母液等、称量、定容、调PH值、煮培养基、分装包扎、高压灭菌）：A.顺序排列好所需的培养基母液、生长调节物质、各种玻

璃器皿、吸管、玻棒等且放在指定位置。量取MS1为25mL、MS2为0.5mL、MS3为5mL、MS4为5mL，2,4—D为、BA为。

B.称好琼脂4g 、蔗糖16.5g

C.大烧杯内加250ml的水(免在加药液时溅出),移取母液、生长调节物质、加蔗糖等后定容。

D.调PH值:酸度计、用1mol/LNaOH(40g-1000ml)及1mol/LHCl(36.5g-1000ml)调节,培养基高压灭菌后由于某些成分的分解或氧化而酸度增加。

E.加热溶解:煮沸且琼脂要完全溶解

F.分装培养基:趁热分装；分量为容器的1/4-1/3

（5）外植体的选择、准备：选择最易表达全能性的部位,来源有保证,不易引起变易等，一般叶片、花瓣等面积为5mm2，茎段5mm。外植体进行消毒一般选用2种消毒剂交叉进行

（6）准备工作、外植体的接种（接种室、超净工作台、人手、外植体等消毒））：接种室的消毒：地面清洁—空气消毒(70%酒精或2%新洁尔灭)—紫外灯照射20分钟—超净工作台消毒檫洗—用具等