雷替曲塞动脉给药的药代动力学及药效学研究
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2020/5/22
动脉化疗主要的给药方法
团注法：10-15min之内注射完药物
持续灌注化疗：于动脉内留置导管 /泵，以压力泵匀速泵入药物，持续 数小时
药物从导管口流出后，与周围的动脉血流迅 速混合，达到毛细血管时可以完全混匀
雷替曲塞动脉化疗需要解决的问题
动脉灌注期间局部药代动力学 动脉给药状态下，高浓度雷替曲
120min给药低剂量组（1mg） 120min给药高剂量组（4mg） 15min给药低剂量组（1mg） 15min给药高剂量组（4mg）
0.6---1.79ug/L 36.64ug/L 157ug/L 587ug/L 1013ug/L 3922ug/L
对于动脉给药而言，即使是1mg的低剂量给药2h， 其局部血药浓度也远远高于IC50，能够充分的保证 对癌细胞的杀伤作用
雷替曲塞持续灌注给药对HT-29 结肠癌细胞系的作用
50 45 40 35 30 25 20 15 10
5 0
100ug/L
250ug/L
2h 4h 8h
500ug/L
1000ug/L
雷替曲塞持续灌注给药对乏营养状 态下HT-29结肠癌细胞系的作用
抑制率(% ) = (1- A1/A0)×100%。
A1：各药物浓度组光吸收值(均值)，
A0：未加药物组(对照组)光吸收值(均值) 。
实验方法
临床给药时，当导管头位于不同动脉内的时候， 同一给药剂量下，局部组织内的浓度也会有差 别，故而将雷替曲塞配制成100: 250: 500: 100: 2000ug/L的浓度 每种浓度分别与肝癌及结肠癌细胞系作用不同 时间，分别检测各种给药环境下，雷替曲塞对 癌细胞的抑制率
2h
3h
给药方案
全身化疗（3mg/m2） 120min给药低剂量组（1mg） 120min给药高剂量组（4mg） 15min给药低剂量组（1mg） 15min给药高剂量组（4mg）
Cmax（μg/L）
833 157 587 1013 3922
2020/5/22
IC50与动脉灌注血药浓度比较
长期给药IC50 短期给药IC50
雷替曲塞动脉给药的药代动 力学及药效学研究
雷替曲塞为抗代谢类叶酸类似物。
通过细胞膜外还原型叶酸盐载体系统将本
品主动摄入细胞内，迅速代谢为多聚谷氨
酸化合物，并在细胞内长期滞留，半衰期 198h。 特异性抑制胸腺嘧啶脱氧核苷三磷酸盐 (TTP)合成过程的关键酶——胸苷酸合成酶 (TS)。 与5-FU或氨甲喋呤相比，雷替曲塞是直接 的和特异性的TS抑制剂。
一、雷替曲塞持续灌注给药的药效学
雷替曲塞持续灌注给药对HepG-2 肝癌细胞系的作用
60
50
40
2h
30
4h
8h
20
10
0 100ug/L
250ug/L
500ug/L
1000ug/L
雷替曲塞持续灌注给药对乏营养状 态下HepG-2肝癌细胞系的作用
雷替曲塞与其它化疗药联合对 HepG-2肝癌细胞系的作用
塞与癌细胞的作用特点
适合与雷替曲塞联用的化疗药的筛 选及联合应用方式的研究
雷替曲塞动脉给药的药代动力学
本实验选择北京科兴实验动物养殖 中心的提供的小型猪作为实验对 象，体重45-55Kg
1）动脉持续灌注化疗期间给药动脉的药代 动力学 2）动脉团注法给药期间给药动脉的药代动 力学
通过检测雷替曲塞在给药期间靶动脉内的 血药浓度，实时了解动脉给药期间癌组织/ 周围正常组织所处的化疗药环境
右侧股静脉 右侧股静脉 血管鞘
收集外周静脉血
穿刺部位 目标血管 所用导管 各通路用途
左侧股动脉 髂内动脉近端 2.8F 微导管 动脉灌注化疗
右侧股动脉 髂内动脉远端 5F Cobra导管 收集髂内动脉血
左侧股静脉 髂内静脉
5F Cobra导管 收集髂内静脉血
右侧股静脉 上腔静脉
5F Cobra导管 收集外周静脉血
2h持续灌注化疗低剂量组肝动脉 /肝静脉血药浓度（μg/L）
180
160
140
120
100 低浓度组给药动脉血药浓度
80
低浓度组回流静脉血药浓度
60
40
20
0 0min 5min 15min 25min 40min 60min 80min 100min 120min 140min 160min 180min
实验分组
持续动脉灌注
低剂量组：1mg，持续动脉灌注2h 高剂量组：4mg，持续动脉灌注2h
团注法给药
低剂量组：1mg，持续动脉灌注15min 高剂量组：4mg，持续动脉灌注15min
给药及采血通路
穿刺部位 目标血管 所用导管 各通路用途
左侧股动脉 肝固有动脉 5F RH导管 动脉灌注给药 右侧股动脉 肝左/右动脉 2.8F 微导管 收集肝动脉血 左侧股静脉 肝左/右静脉 5F Cobra导管 收集肝静脉血
12
肝固有动脉及肝静脉造影
肝右动脉插入微导管采血
血药浓度的检测
高效液相色谱法（HPLC）
样品的前处理
用固相萃取法进行样品的前处理。 甲醇4ml加入固相萃取柱中，活化柱子两遍 用PH3.5磷酸盐缓冲液4ml活化 MX-F漩涡混合器震荡血浆样品2min，精密吸取1ml含药血浆过已活化
的C18固相萃取柱。 PH3.5磷酸盐缓冲液2ml洗去杂质。 乙腈-乙酸3ml萃取。 萃取液用试管浓缩仪（50℃水浴）浓缩。 用甲醇100μl溶解，离心10分钟，取上清液50ul进样。
雷替曲塞动脉给药的药效学
MTT原理
MTT可被活细胞中的琥珀脱氢酶还原为蓝紫色结晶甲瓒 并沉积在细胞中，而死细胞无此功能；结晶物能被二甲 基亚砜（DMSO）溶解，用酶联免疫检测仪测定其光吸 收值，可间接反映活细胞数量。
实验方法
将对数期生长的细胞系接种于96孔培养板 上，按实验计划加入化疗药。药物与细胞 系作用预定时间后，洗脱药物，更换空白 培养液继续培养至72h，依次加入MTT及 DMSO，在酶标仪上以570nm波长检测各孔 吸光度值(OD值，A值）。
2h持续灌注化疗高剂量组肝动脉 /肝静脉血药浓度（μg/L）
15min团注法给药的低剂量组和高剂 量组肝动脉血药浓度 （μg/L）
4500
4000
3500
3000
2500
低剂wenku.baidu.com组
2000
高剂量组
1500
1000
500
0
10min 20min 30min 40min
1h
1h10min 1h20min 1.5h
动脉化疗主要的给药方法
团注法：10-15min之内注射完药物
持续灌注化疗：于动脉内留置导管 /泵，以压力泵匀速泵入药物，持续 数小时
药物从导管口流出后，与周围的动脉血流迅 速混合，达到毛细血管时可以完全混匀
雷替曲塞动脉化疗需要解决的问题
动脉灌注期间局部药代动力学 动脉给药状态下，高浓度雷替曲
120min给药低剂量组（1mg） 120min给药高剂量组（4mg） 15min给药低剂量组（1mg） 15min给药高剂量组（4mg）
0.6---1.79ug/L 36.64ug/L 157ug/L 587ug/L 1013ug/L 3922ug/L
对于动脉给药而言，即使是1mg的低剂量给药2h， 其局部血药浓度也远远高于IC50，能够充分的保证 对癌细胞的杀伤作用
雷替曲塞持续灌注给药对HT-29 结肠癌细胞系的作用
50 45 40 35 30 25 20 15 10
5 0
100ug/L
250ug/L
2h 4h 8h
500ug/L
1000ug/L
雷替曲塞持续灌注给药对乏营养状 态下HT-29结肠癌细胞系的作用
抑制率(% ) = (1- A1/A0)×100%。
A1：各药物浓度组光吸收值(均值)，
A0：未加药物组(对照组)光吸收值(均值) 。
实验方法
临床给药时，当导管头位于不同动脉内的时候， 同一给药剂量下，局部组织内的浓度也会有差 别，故而将雷替曲塞配制成100: 250: 500: 100: 2000ug/L的浓度 每种浓度分别与肝癌及结肠癌细胞系作用不同 时间，分别检测各种给药环境下，雷替曲塞对 癌细胞的抑制率
2h
3h
给药方案
全身化疗（3mg/m2） 120min给药低剂量组（1mg） 120min给药高剂量组（4mg） 15min给药低剂量组（1mg） 15min给药高剂量组（4mg）
Cmax（μg/L）
833 157 587 1013 3922
2020/5/22
IC50与动脉灌注血药浓度比较
长期给药IC50 短期给药IC50
雷替曲塞动脉给药的药代动 力学及药效学研究
雷替曲塞为抗代谢类叶酸类似物。
通过细胞膜外还原型叶酸盐载体系统将本
品主动摄入细胞内，迅速代谢为多聚谷氨
酸化合物，并在细胞内长期滞留，半衰期 198h。 特异性抑制胸腺嘧啶脱氧核苷三磷酸盐 (TTP)合成过程的关键酶——胸苷酸合成酶 (TS)。 与5-FU或氨甲喋呤相比，雷替曲塞是直接 的和特异性的TS抑制剂。
一、雷替曲塞持续灌注给药的药效学
雷替曲塞持续灌注给药对HepG-2 肝癌细胞系的作用
60
50
40
2h
30
4h
8h
20
10
0 100ug/L
250ug/L
500ug/L
1000ug/L
雷替曲塞持续灌注给药对乏营养状 态下HepG-2肝癌细胞系的作用
雷替曲塞与其它化疗药联合对 HepG-2肝癌细胞系的作用
塞与癌细胞的作用特点
适合与雷替曲塞联用的化疗药的筛 选及联合应用方式的研究
雷替曲塞动脉给药的药代动力学
本实验选择北京科兴实验动物养殖 中心的提供的小型猪作为实验对 象，体重45-55Kg
1）动脉持续灌注化疗期间给药动脉的药代 动力学 2）动脉团注法给药期间给药动脉的药代动 力学
通过检测雷替曲塞在给药期间靶动脉内的 血药浓度，实时了解动脉给药期间癌组织/ 周围正常组织所处的化疗药环境
右侧股静脉 右侧股静脉 血管鞘
收集外周静脉血
穿刺部位 目标血管 所用导管 各通路用途
左侧股动脉 髂内动脉近端 2.8F 微导管 动脉灌注化疗
右侧股动脉 髂内动脉远端 5F Cobra导管 收集髂内动脉血
左侧股静脉 髂内静脉
5F Cobra导管 收集髂内静脉血
右侧股静脉 上腔静脉
5F Cobra导管 收集外周静脉血
2h持续灌注化疗低剂量组肝动脉 /肝静脉血药浓度（μg/L）
180
160
140
120
100 低浓度组给药动脉血药浓度
80
低浓度组回流静脉血药浓度
60
40
20
0 0min 5min 15min 25min 40min 60min 80min 100min 120min 140min 160min 180min
实验分组
持续动脉灌注
低剂量组：1mg，持续动脉灌注2h 高剂量组：4mg，持续动脉灌注2h
团注法给药
低剂量组：1mg，持续动脉灌注15min 高剂量组：4mg，持续动脉灌注15min
给药及采血通路
穿刺部位 目标血管 所用导管 各通路用途
左侧股动脉 肝固有动脉 5F RH导管 动脉灌注给药 右侧股动脉 肝左/右动脉 2.8F 微导管 收集肝动脉血 左侧股静脉 肝左/右静脉 5F Cobra导管 收集肝静脉血
12
肝固有动脉及肝静脉造影
肝右动脉插入微导管采血
血药浓度的检测
高效液相色谱法（HPLC）
样品的前处理
用固相萃取法进行样品的前处理。 甲醇4ml加入固相萃取柱中，活化柱子两遍 用PH3.5磷酸盐缓冲液4ml活化 MX-F漩涡混合器震荡血浆样品2min，精密吸取1ml含药血浆过已活化
的C18固相萃取柱。 PH3.5磷酸盐缓冲液2ml洗去杂质。 乙腈-乙酸3ml萃取。 萃取液用试管浓缩仪（50℃水浴）浓缩。 用甲醇100μl溶解，离心10分钟，取上清液50ul进样。
雷替曲塞动脉给药的药效学
MTT原理
MTT可被活细胞中的琥珀脱氢酶还原为蓝紫色结晶甲瓒 并沉积在细胞中，而死细胞无此功能；结晶物能被二甲 基亚砜（DMSO）溶解，用酶联免疫检测仪测定其光吸 收值，可间接反映活细胞数量。
实验方法
将对数期生长的细胞系接种于96孔培养板 上，按实验计划加入化疗药。药物与细胞 系作用预定时间后，洗脱药物，更换空白 培养液继续培养至72h，依次加入MTT及 DMSO，在酶标仪上以570nm波长检测各孔 吸光度值(OD值，A值）。
2h持续灌注化疗高剂量组肝动脉 /肝静脉血药浓度（μg/L）
15min团注法给药的低剂量组和高剂 量组肝动脉血药浓度 （μg/L）
4500
4000
3500
3000
2500
低剂wenku.baidu.com组
2000
高剂量组
1500
1000
500
0
10min 20min 30min 40min
1h
1h10min 1h20min 1.5h