肝糖原的提取和鉴定

肝糖原的提取和鉴定

一、实验目的

1.了解肝糖原的性质并掌握其提取的方法。

2.熟悉肝糖原的鉴定方法。

二、实验原理

糖原属于高分子糖类化合物，是动物体内糖的主要储存形式，在肝脏内储量较为丰富。糖原在体内的合成与分解代谢，对血糖浓度的调节起着重要的作用。

糖原微溶于水，无还原性，与碘作用生成红色。常用的提取肝糖原的方法是将新鲜的肝组织与石英砂共同研磨以破坏肝组织，加入三氯醋酸溶液沉淀其中的蛋白质，离心除去沉淀。上清液中的肝糖原则通过加入乙醇沉淀而得。将沉淀的糖原溶于水，取一部分加入碘观察颜色反应，另一部分经酸水解成葡萄糖后，用斑氏试剂(Benedict)检验。

三、仪器和原料

仪器

研钵、离心机、离心管、电炉、广泛试纸、滤纸、试管等。

原料

新鲜动物肝脏（猪肝）

四、试剂

1. 10%的三氯醋酸溶液

2. 5%的三氯醋酸溶液

3. 95%乙醇

4. 浓盐酸

5. 20%的NaOH 溶液

6. 碘液：碘1g、碘化钾2g 溶于500mL 蒸馏水中。

7. 配制班氏试剂：将硫酸铜17.3g 溶于100mL 温蒸馏水中；将柠檬酸钠173g 和无水碳酸钠100g 溶于700mL 温蒸馏水中，冷却；将硫酸铜溶液搅拌下缓缓加入柠檬酸和碳酸钠混合液中，最后用蒸馏水稀释至1000mL。

五、操作步骤

(一)肝糖原的提取

称取1g 左右新鲜动物肝脏至研钵中，加入少许石英砂以及1mL10%的三氯醋酸溶液，研磨至糜状再加入2mL5%的三氯醋

酸继续研磨片刻，使成均匀糜浆，转入离心管中，2500r/min 离心10min。取上清液于另一离心管中，加入等体积的95%乙醇，混匀后静置片刻，使糖原呈絮状析出，再放入离心机2500r/min 离心10min。弃去上清液，将离心管倒置于滤纸上。

(二)肝糖原的鉴定

向肝糖原沉淀中加入1mL 蒸馏水，用细玻棒搅拌至溶解，得糖原溶液。

1.取小试管2支，一支加入糖原溶液10滴，另一支加入蒸馏水10滴，然后两管再各加入碘液2滴，混匀。观察管中颜色变化，并解释现象。

2.在剩余糖原溶液内加入浓盐酸3滴，放入沸水浴中加热10min，取出冷却，用20%的NaOH 溶液中和至中性(pH 试纸检测)。加入斑氏试剂2mL，再置沸水浴中加热5min，取出冷却。观察管中沉淀的生成，并解释现象。

（步骤简化：

（一）提取

1、称取肝脏约1g+10﹪三氯醋酸溶液1m L＜研磨＞→加5%三氯醋酸2m L＜研磨至肉糜烂状＞过滤（滤液收集在带刻度的离心管中）→加入等体积的95%的乙醇，混匀、静置10min→离心→弃去上清液、留沉淀，此步骤重复两次＜加蒸馏水1mL＞→搅拌溶解得到肝糖原待用

（二）鉴定

1、取试管2支①加入肝糖原溶液10滴②加蒸馏水10滴

各加1滴碘液，混匀，观察现象

2、剩余肝糖原液内+浓HCL3滴→沸水浴10min＜冷却＞→加入10﹪NaOH3~4滴至中性偏碱性→班氏试剂2ml→沸水浴5min＜冷却＞→观察现象

注意事项