高产细菌素乳酸菌的筛选
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产细菌素乳酸菌的筛选
• 抑菌作用的菌株在液体MRS培养24h后, 离 心, 测上清液的pH, 保存并备用 • 将指示菌配成悬液倒入铺有下层培养基的 平板上
• 取100μL被检菌离心上清液于培养基平 板 上，培养12h后检测抑菌圈的产生。
产细菌素菌株的确定
中和法排除有机酸
过氧化氢酶检测排除过氧化氢
实验材料
• • • • 泡菜 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌（用于抑菌试验） 碳酸钙(3%)30g、1mol/L NaOH、和HCl溶液、pH试纸、木瓜蛋白 酶、双氧水 MRS培养基(pH6.2～6.6):蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、柠 檬酸氢二铵2g、葡萄糖20g、吐温80 1mL、乙酸钠5g、磷酸氢二钾 2g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.25g、琼脂18g、蒸馏水1000mL,用于 乳酸菌分离纯化 牛肉膏蛋白胨培养基(pH7.0～7.2): 牛肉膏3g、蛋白胨5g、 NaCl3g、蒸馏水1000mL用于抑菌实验
目
简 介
录
材料与仪器
方法步骤
简 介 —— 细菌素
• 定义： 由细菌在代谢过程中通过核糖体合成 产生的一类具有抑菌活性的蛋白质或多肽 。 作用： 1、抑制DNA酶或RNA酶 2、通道形成穿膜蛋白，使膜去极化
•
简 介 —— 乳酸菌
• 1) 定义：指发酵糖类主要产物为乳酸的一 类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌。 • 2）作用：可以抑制或杀死一些病原菌和食 物腐败菌。 • 3）分类：一类是动物源乳酸菌，一类是 植物源乳酸菌 。
蛋白酶检测抑菌物质的蛋白质性质
将菌株置于液体MRS培养
乳酸菌的鉴定
• 将菌种接种到5~10ml的石蕊牛奶培养基中， 在37℃培养48h，石蕊应被还原为无色，牛 奶应呈正常凝固现象，培养基上层表面应 呈紫红色环。（菌种在培养基中的形态特 征和用革兰氏染色法在显微镜下观察到的 菌种形态以及菌种的生化指标对照乳酸菌 鉴定手册鉴定。）
•
•
石蕊牛奶培养基 （用于乳酸菌的鉴定）
实验器材
• 平皿，试管，锥形瓶，移液管 （1ml,5ml,10ml）,洗耳球，容量瓶，试管 架，酒精灯，超净台，烧杯，牛津杯，无 菌滴管，水浴锅，玻璃棒，电炉，离心机， 镊子，滤纸，天平电热恒温培养箱、高压 蒸汽灭菌锅、电热恒温水浴锅、电热恒温 鼓风干燥箱
实 验 方 案
乳酸菌的筛选
• 样品稀释 • 于有碳酸钙的MRS固体培养基上培养 • 挑取单菌落碳酸钙溶解圈
产生抑菌活性代谢产物乳杆菌的初筛
固体MRS接种初筛选细菌培养24h
指示菌在牛肉膏蛋白胨液体培养基中培养20h 取牛肉膏蛋白胨菌悬液10mL,与5mL上层培养基混 匀，倒入有检验菌的平板上培养12h
根据抑菌圈的形成判断被检菌抗性物质的产生
产细菌素乳酸菌的筛选
• 抑菌作用的菌株在液体MRS培养24h后, 离 心, 测上清液的pH, 保存并备用 • 将指示菌配成悬液倒入铺有下层培养基的 平板上
• 取100μL被检菌离心上清液于培养基平 板 上，培养12h后检测抑菌圈的产生。
产细菌素菌株的确定
中和法排除有机酸
过氧化氢酶检测排除过氧化氢
实验材料
• • • • 泡菜 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌（用于抑菌试验） 碳酸钙(3%)30g、1mol/L NaOH、和HCl溶液、pH试纸、木瓜蛋白 酶、双氧水 MRS培养基(pH6.2～6.6):蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、柠 檬酸氢二铵2g、葡萄糖20g、吐温80 1mL、乙酸钠5g、磷酸氢二钾 2g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.25g、琼脂18g、蒸馏水1000mL,用于 乳酸菌分离纯化 牛肉膏蛋白胨培养基(pH7.0～7.2): 牛肉膏3g、蛋白胨5g、 NaCl3g、蒸馏水1000mL用于抑菌实验
目
简 介
录
材料与仪器
方法步骤
简 介 —— 细菌素
• 定义： 由细菌在代谢过程中通过核糖体合成 产生的一类具有抑菌活性的蛋白质或多肽 。 作用： 1、抑制DNA酶或RNA酶 2、通道形成穿膜蛋白，使膜去极化
•
简 介 —— 乳酸菌
• 1) 定义：指发酵糖类主要产物为乳酸的一 类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌。 • 2）作用：可以抑制或杀死一些病原菌和食 物腐败菌。 • 3）分类：一类是动物源乳酸菌，一类是 植物源乳酸菌 。
蛋白酶检测抑菌物质的蛋白质性质
将菌株置于液体MRS培养
乳酸菌的鉴定
• 将菌种接种到5~10ml的石蕊牛奶培养基中， 在37℃培养48h，石蕊应被还原为无色，牛 奶应呈正常凝固现象，培养基上层表面应 呈紫红色环。（菌种在培养基中的形态特 征和用革兰氏染色法在显微镜下观察到的 菌种形态以及菌种的生化指标对照乳酸菌 鉴定手册鉴定。）
•
•
石蕊牛奶培养基 （用于乳酸菌的鉴定）
实验器材
• 平皿，试管，锥形瓶，移液管 （1ml,5ml,10ml）,洗耳球，容量瓶，试管 架，酒精灯，超净台，烧杯，牛津杯，无 菌滴管，水浴锅，玻璃棒，电炉，离心机， 镊子，滤纸，天平电热恒温培养箱、高压 蒸汽灭菌锅、电热恒温水浴锅、电热恒温 鼓风干燥箱
实 验 方 案
乳酸菌的筛选
• 样品稀释 • 于有碳酸钙的MRS固体培养基上培养 • 挑取单菌落碳酸钙溶解圈
产生抑菌活性代谢产物乳杆菌的初筛
固体MRS接种初筛选细菌培养24h
指示菌在牛肉膏蛋白胨液体培养基中培养20h 取牛肉膏蛋白胨菌悬液10mL,与5mL上层培养基混 匀，倒入有检验菌的平板上培养12h
根据抑菌圈的形成判断被检菌抗性物质的产生