蔗糖酶的专一性实验上课讲义

蔗病糖原酶菌的多专基一因调性控研机究制研究 （P69）
实验目的
• 通过对酵母蔗糖酶专一性的研究，加深对酶专一 性的理解
• 了解酵母蔗糖酶催化水解何种糖苷键
2、葡萄糖、果糖和半乳糖
D/α L/β
• 3、淀粉的结构与其水解产物
6
5
4
1
32
直链淀粉：200~300个α-葡萄糖以α-1，4糖苷键相连 支链淀粉：由α-1，4糖苷键和α-1，6糖苷键在直链淀粉的基础上， 分支而成
混匀后，40ºC温育30min，再加入2ml班氏试剂， 沸水浴中作用3min，观察各管颜色变化，并作记录。
注意事项：
（1）充分研磨酵母 （2）脱脂棉先用蒸馏水浸湿 （3）沸水时间不可过长
思考题： （1）试管5经长时间沸水浴后，颜色可能会变成黄 绿色，为什么？ （2）按专一性分，蔗糖酶分类属于何种专一性？ （3）蔗糖酶水解何种糖苷键？
淀粉、蔗糖和棉籽糖都不能反应，而它们的水解产物（如葡 萄糖和果糖）能够发生本尼迪特反应。因此，可以利用观察 有无颜色沉淀，判定蔗糖酶是否对淀粉、蔗糖和棉籽糖具有 水解作用。
实验材料
• 器材：50和1000μL可调移液枪、试管、水浴锅等。 • 试剂：（略，见教材）
操作步骤 （1）蔗糖酶液的制备：秤取1g干酵母粉，分次加入 7ml水，研磨5min，过滤后，滤液用水稀释三倍（蔗 糖酶液），待用。 （2）取7支大试管，标号，按下列表格操作：
还原性：无
水解产物：人体内，在淀粉酶的催化下生成麦芽糖；麦芽糖在麦芽 糖酶的催化下，彻底水解成解成葡萄糖。
• 4、棉籽糖的结构与其水解产物
β-1，6糖苷键
46 5
32
1 12
3
α-1，2糖苷键
5 46
分子组成：α-半乳糖、 α-葡萄糖和α-呋喃果糖聚合而成 还原性：无 彻底水解产物： α-半乳糖、 α-葡萄糖和α-呋喃果糖
• 5、蔗糖的结构与其水解产物
6
5
1
4
1
32
2
5
3
4 6
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α-1，2糖苷键
分子组成：α-葡萄糖和α-呋喃果糖缩合而成的二糖 还原性：无 彻底水解产物：α-葡萄糖和α- 呋喃果糖
• 6、本尼迪特（Benedict）反应
本尼迪特试剂（班氏试剂）：碱性硫酸铜溶液，具有一定的 氧化能力，能与还原性单糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应 ，生成氧化亚铜沉淀，砖红色或黄绿色。