第十一章 薄层色谱法

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一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
１.
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常用的固定相 （1）硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸 性、中性物质分离。 （2）氧化铝：碱性极性固定相，适用于碱 性、中性物质分离 。 （3）聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适 用于酚类、醇类化合物的分离。 （4）纤维素：含有羟基的极性固定相，适 用于分离亲水性物质。
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复习题
1.了解色谱法的发展概况及色谱过程。 了解色谱法的发展概况及色谱过程。 了解色谱法的发展概况及色谱过程 2.掌握 吸附、分配、离子交换、 2.掌握 吸附、分配、离子交换、分子排阻色谱法 的原理、固定相及流动相的选择。 的原理、固定相及流动相的选择。 3.掌握薄层色谱法的原理 固定相、 掌握薄层色谱法的原理、 3.掌握薄层色谱法的原理、固定相、展开剂的选 及基本操作方法。 择、及基本操作方法。 4.掌握分配系数 掌握分配系数、 吸附等温线、流出曲线、 4.掌握分配系数、Rf值、吸附等温线、流出曲线、 正相色谱法、反相色谱法的定义。 正相色谱法、反相色谱法的定义。
（一）概述 １.概念 固定相被涂布在玻璃板上，形成 薄薄的平面涂层。干燥后在涂层的一 端点样，用合适的流动相借毛细作用 向上移动，经过在两相之间的多次吸 附-溶解作用，将混合物中各组分分离 成孤立的样点。
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一、薄层色谱法（TLC)
2. 特点
（1）设备简单，操作方便。 ）设备简单，操作方便。 分析原理与经典柱上色谱相同、 （2）分析原理与经典柱上色谱相同、但是在敞开 的薄层上可以检查混合物的成分是否分开可观察。 的薄层上可以检查混合物的成分是否分开可观察。 快速，展开的时间短。 （3）快速，展开的时间短。 适于分析小量样品(一般儿到几十微克) （4）适于分析小量样品(一般儿到几十微克)，也 适于大量样品的分离（ 适于大量样品的分离（可以分离出几毫克甚至几十 毫克组分）。 毫克组分）。
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一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
⑷显色，计算Rf值 显色，计算
选择合适的显色方法显色。量出展开剂和各 选择合适的显色方法显色。 组分的移动距离，计算各组分的相对移动值。 组分的移动距离，计算各组分的相对移动值。
紫外光显色： 紫外光显色：不破坏组分结构 碘蒸气法：碘是一种简便、 碘蒸气法：碘是一种简便、灵敏非破坏性和可逆的通用 显色剂。 显色剂。 化学显色：不可逆的化学反应。 化学显色：不可逆的化学反应。 如：氨基酸 + 茚三酮 = 兰紫色化合物
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Rf的合适范围为 :0.2＜Rf ＜0.8 ＜
一、薄层色谱法（TLC)
（二）固定相和展开剂 固定相和展开剂 １. 固定相选择 柱色谱中所用的吸附剂 柱色谱中所用的吸附剂 要求吸附剂的粒度更小。 要求吸附剂的粒度更小。商品吸附剂区分 色谱级（用于柱色谱） 为色谱级（用于柱色谱）和薄层色谱级 用于薄层色谱）。 （用于薄层色谱）。
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一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
3.方法原理(图示) 方法原理(图示) 方法原理 薄层色谱分离法是将固定相吸附 剂均匀地涂在玻璃上制成薄层板，试 样中的各组分在固定相和作为展开剂 的流动相之间不断地发生溶解、吸附、 再溶解、再吸附的分配过程。不同物 质上升的距离不一样而形成相互分开 的斑点从而达到分离。
பைடு நூலகம்
固定相：滤纸 利用纸上吸着的水分. 固定相：滤纸——利用纸上吸着的水分. 利用纸上吸着的水分 流动相： 流动相：有机溶剂 操作：点样、展开、干燥、显色、测定（ 操作：点样、展开、干燥、显色、测定（定性和 定量） 定量）
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二、纸色谱法的应用
葡萄糖、麦芽糖和木糖混合糖类的分离 展开剂：正丁醇：冰醋酸：水＝4：1：5 显色：用硝酸银氨溶液喷洒，即出现Ag的褐色斑 点。 定性：由Rf值可判断是哪种糖；葡萄糖的Rf为 0.16，麦芽糖的Rf为0.11．木糖的Rf是0.28。
⑵药物和药物代谢 ⑶化学和化工 ⑷医学和临床 ⑸毒物分析和法医化学 23 ⑹农药
二、纸色谱法 （paper chromatography） ）
1．方法原理 方法原理 原理： 原理：纸上色谱分离法是根据不同物质在固定相和流
动相间的分配比不同而进行分离的。 动相间的分配比不同而进行分离的。 分配比不同而进行分离的
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一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
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一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
比移值Rf Rf1＝a／c Rf2＝b／c
b a
起始线 溶剂前沿
c
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一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
比移值(Rf) 比移值 Rf = 0 表明该组分不被展开剂所溶解，仍停 表明该组分不被展开剂所溶解， 留在原点。 留在原点。 Rf = 1表明该组分不被固定相吸附，而随流 表明该组分不被固定相吸附， 表明该组分不被固定相吸附 动相同速移动。 动相同速移动。 0＜Rf ＜1表明固定相和流动相选择比较合 ＜ 表明固定相和流动相选择比较合 理。
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一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
展开方式：上行、 展开方式：上行、下行展开
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一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
展开方式：二纬展开 3 3 2
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1 1 2
展开时的注意事项
边缘效应：用混合溶剂展开时， 边缘效应：用混合溶剂展开时，同一组 分的斑点在薄层中部比在边缘移动速度 要慢的现象。 要慢的现象。 产生原因：展开槽未被展开剂饱和。 产生原因：展开槽未被展开剂饱和。 消除方法： 消除方法：展开槽内溶剂蒸气达饱和后 再展开。 再展开。 可以采取的措施：在展开前， 可以采取的措施：在展开前，在槽内壁 竖贴一大滤纸。 竖贴一大滤纸。
一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
⑶展开 吹干样点， 吹干样点，竖直放入盛有展开剂的有盖 展开瓶中。展开剂要接触到吸附剂下沿， 展开瓶中。展开剂要接触到吸附剂下沿， 但切勿接触到样点。 但切勿接触到样点。 盖上盖子，展开。 盖上盖子，展开。待展开剂上行到一定 时间（由试验确定适当的展开高度）， ），取 时间（由试验确定适当的展开高度），取 出薄层板，再画出展开剂的前沿线。 出薄层板，再画出展开剂的前沿线
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一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
5、定性定量： 、定性定量：
Rf值
溶剂前沿
目视比较法 洗脱法 薄层扫描
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标 准 品
b a
c
起始线
薄层扫描
W D λR
PMR
λS
双波长薄层扫描
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PMT
一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
薄层色谱应用特点： 薄层色谱应用特点：
⑴可用于判断两个化合物是否相同（同一展开条件下是否 可用于判断两个化合物是否相同（ 两个化合物是否相同 有相同的移动值）； 有相同的移动值）； ⑵可用于确定混合物中含有的组分数； 可用于确定混合物中含有的组分数； 组分数 ⑶可用于为柱色谱选择合适的展开剂，监视柱色谱分离状 可用于为柱色谱选择合适的展开剂，监视柱色谱分离状 展开剂 况和效果； 况和效果； ⑷可用于检测反应过程。 可用于检测反应过程。 反应过程
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一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
⑵点样
将试样用最少量展开剂溶解， 将试样用最少量展开剂溶解，用毛细 管蘸取试样溶液，在薄层板上点样。 管蘸取试样溶液，在薄层板上点样。在样 点上轻轻画出一条平行于玻璃板底边的细 薄层色谱板载样量有限， 线。薄层色谱板载样量有限，勿使点样量 过多。 过多
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薄层色谱法在各个学科中的应用
⑴食品和营养
食品中的营养成分是蛋白质、氨基酸、糖类、油和脂肪、 食品中的营养成分是蛋白质、氨基酸、糖类、油和脂肪、 维生素、食用色素等。 维生素、食用色素等。与食品和营养有害的物质则有残留 农药、致癌的黄曲霉素等。 农药、致癌的黄曲霉素等。这些成分都可用薄层色谱法定 性和定量。 性和定量。
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一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
（三）薄层色谱法的基本技术
板的制备 点样 展开 显色 定性定量分析
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一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
⑴制板（以硅胶板为例） 制板（以硅胶板为例）
选择合适的玻璃板， 选择合适的玻璃板，依次用水和乙醇洗 晾干。取适量薄层色谱用的硅胶， 净，晾干。取适量薄层色谱用的硅胶，加 适量蒸馏水调成糊。调制时慢慢搅拌， 适量蒸馏水调成糊。调制时慢慢搅拌，勿 使产生气泡。将糊倒在玻璃板上， 使产生气泡。将糊倒在玻璃板上，摇动摊 晾干。使用前放入烘箱内， 105平，晾干。使用前放入烘箱内，在105左右烘干40 50分钟 冷却后使用。 40- 分钟。 115oC左右烘干40-50分钟。冷却后使用。
第十一章 色谱分析法概述
第四节 平面色谱法
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第四节 平面色谱法
♦ 薄层色谱 TLC) 薄层色谱(
(thin layer chromatography. TLC
♦ 纸色谱 (PC) ♦ (paper chromatography. PC)
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一、薄层色谱法
（thin layer chromatography; TLC)
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一、薄层色谱法（TLC) 薄层色谱法（
展开剂选择： ２.展开剂选择： 展开剂选择
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薄层色谱展开剂的选择和柱色谱一样，一般 薄层色谱展开剂的选择和柱色谱一样， 根据“相似相溶”的原理。 根据“相似相溶”的原理。更多地采用试验 的方法，在一块薄层板上进行试验。 的方法，在一块薄层板上进行试验。 一种溶剂不能很好地展开各组分时 溶剂不能很好地展开各组分时， 当一种溶剂不能很好地展开各组分时，常选 择用混合溶剂作为展开剂。 混合溶剂作为展开剂 择用混合溶剂作为展开剂。