药物分析第四章定量分析与分析方法验证

标准偏差
三、专属性 系指在其它成份（如杂质、降解产物、辅料等） 系指在其它成份（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在 采用的方法能准确测定出被物的特性。 下，采用的方法能准确测定出被物的特性。 四、检测限（LOD） 检测限（ ） 指试样中被测物能被检出的最低浓度或量。 指试样中被测物能被检出的最低浓度或量。 五、定量限（LOQ） 定量限（ ） 指样品中被测物能被定量测定的最低量， 指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果具有 一定的准确度和精密度。 一定的准确度和精密度。 六、线性 系指在设计的范围内， 系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接 呈正比关系的程度，相关系数R-->1 ,用软件可得回归方程 用软件可得回归方程. 呈正比关系的程度，相关系数 用软件可得回归方程
VT 含量% = × 100% W
T—滴定度 滴定度;V—消耗滴定液体积 消耗滴定液体积;W—供试品取量 滴定度 消耗滴定液体积 供试品取量 校正因子F: 校正因子 当滴定液浓度与药典中规定浓度不相同时,要校正 要校正: 当滴定液浓度与药典中规定浓度不相同时 要校正 实际摩尔浓度 F= 规定摩尔浓度 在药检部门实验里的试剂瓶子一般不标浓度,而是 值 在药检部门实验里的试剂瓶子一般不标浓度 而是F值. 而是 实际滴定度:T’=TF 实际滴定度
二、光谱分析法 光照在物质上，物质内部发生能级跃迁而产生辐射， 光照在物质上，物质内部发生能级跃迁而产生辐射，利用 光谱进行定性或定量的结构分析称为光谱分析法。 光谱进行定性或定量的结构分析称为光谱分析法。 1、紫外-可见分光光度法（200nm—760nm) 、紫外 可见分光光度法 可见分光光度法（ (1)朗伯 比耳定律 朗伯-比耳定律 朗伯 A=ELC A-吸光度；L-液层厚度；C-溶液浓度；E-吸收系数 吸光度； 液层厚度 液层厚度； 溶液浓度 溶液浓度； 吸收系数 吸光度 （2）百分吸收系数 ）百分吸收系数E 1% 溶液浓度为1%（ 溶液浓度为 （W/V）厚度为 ）厚度为1cm的吸收度 E1cm 的吸收度 A （3）吸收系数法测含量 ） ×D 1% E1cm 含量%= ×100% W × l ×100 A-供试品吸光度；D-供试品稀释倍数； 供试品吸光度； 供试品稀释倍数 供试品稀释倍数； 供试品吸光度 W-供试品取量（标示量）（ ）； 液层厚度（cm） 供试品取量（ ）（g）； 液层厚度（ ） 供试品取量 标示量）（ ）；L-液层厚度
七、范围 指能达到一定精密度、准确度和线性， 指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的 高低限浓度或量的区间。 高低限浓度或量的区间。 八、耐用性 指在测定条件有小的变化时， 指在测定条件有小的变化时，测定结果不受影响的承受 程度，为常规检验提供依据。 程度，为常规检验提供依据。 根据具体情况确定需要验证的各项，不一定要八项都验证。 根据具体情况确定需要验证的各项，不一定要八项都验证。
每片含量= VKBrO3 FTD 标示量×W /W
×100%
---
W总 2.4220 W= = =0.1211g 20 20
16.10ml ×1.003×3.429mg / ml ×100/ 25 = ×100% =104.8% 0.1×1000mg ×0.2560/ 0.1211
(2)间接滴定法 间接滴定法: 间接滴定法 先加入定量过量的滴定液A,使其与被测物定量反应 使其与被测物定量反应,再用另 先加入定量过量的滴定液 使其与被测物定量反应 再用另 一滴定液B回滴定反应剩余的 回滴定反应剩余的A. 一滴定液 回滴定反应剩余的 本法需进行空白试验校正. 本法需进行空白试验校正
VT' VTF 含量% = × 100% = × 100% W W
用溴酸钾法测定异烟肼[M(C6H7N3O)=137.14]的含量 例:用溴酸钾法测定异烟肼 用溴酸钾法测定异烟肼 的含量 溴酸钾滴定液的规定摩尔浓度0.01667mol/L. 时,溴酸钾滴定液的规定摩尔浓度 溴酸钾滴定液的规定摩尔浓度 3C6H7N3O+2KBrO3===3C6H5NO2+3N2+2KBr+3H2O (1)计算滴定度 计算滴定度T 计算滴定度 T=0.01667× (3/2) ×137.14=3.429mg/ml × (2)测定原料中异烟肼含量 测定原料中异烟肼含量: 测定原料中异烟肼含量 实验中配制的溴酸钾浓度为0.01672mol/L,取原料药 取原料药0.2012g, 实验中配制的溴酸钾浓度为 取原料药 100ml定容 取25ml用溴酸钾滴定 消耗溴酸钾 定容,取 用溴酸钾滴定,消耗溴酸钾 求含量? 定容 用溴酸钾滴定 消耗溴酸钾14.25ml,求含量 求含量
第四章 药物定量分析与分析方法验证 §4.1 药品质量标准分析方法验证 验证目的：证明采用的方法适合相应检测的要求。 验证目的：证明采用的方法适合相应检测的要求。 验证内容：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、 验证内容：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、 线性、范围和耐用性。 线性、范围和耐用性。 一、准确度 系指用该方法测定的结果与真实值或参比值接近的程度。 系指用该方法测定的结果与真实值或参比值接近的程度。 一般以回收率表示（ 一般以回收率表示（%）
试计算每1ml硫酸铈滴定液 硫酸铈滴定液(0.01mol/L)相当于生育酚的质量 相当于生育酚的质量? 试计算每 硫酸铈滴定液 相当于生育酚的质量 解:
a 1 T = M × × B = 430.7 × × 0.01 = 2.154 g / L = 2.154mg / ml b 2
2、百分含量计算 、 (1)直接滴定法 直接滴定法: 直接滴定法
偏差 平均值
d
RD=------------- X 100% = ------- X 100%
X
3、标准偏差（SD或S） S = 、标准偏差（ 或 ） 4、相对标准偏差（RSD） 、相对标准偏差（ ）
( xi x) 2 ∑ n 1
S ×100% RSD=----------------X100%= X 平均值
测定平均值 - 空白值
回收率（ 回收率（%）=--------------------------X100% --------------------------X100%
加入量 要求：测定值最少9次，每个浓度取3个样，3个不同浓度。 要求：测定值最少9 每个浓度取3个样， 个不同浓度。
二、精密度 系指在规定的测试条件下，同一均匀样品， 系指在规定的测试条件下，同一均匀样品，经多次取样 测定所得结果之间的接近程度。 测定所得结果之间的接近程度。 1、偏差： 、偏差： d=测得值 - 平均值 测得值 Xi X = 2、相对偏差（RD） 、相对偏差（ ）
2、水解后测定法： 、水解后测定法： ①直接回流水解后测定 适用于含卤素的有机药物， 适用于含卤素的有机药物，经加热回流水解后作用转变 为无机卤素离子，然后测定： 为无机卤素离子，然后测定： 例：三氯叔丁醇含量的测定： 三氯叔丁醇含量的测定： CCl3-C(CH3)2-OH + NaOH ②硫酸水解后测定法： 硫酸水解后测定法： 例：硬脂酸镁含量测定： 硬脂酸镁含量测定： Mg(C17H35COO)2 + H2SO4 ------- Mg2+ 3、氧化还原后测定法： 、氧化还原后测定法：
CKBrO3 (实际) 0.01672 F= = =1.003 CKBrO3 (规定) 0.01667
原料药含量=
=
VKBrO3 × F ×T × D W
14.25ml ×1.003×3.429mg / ml ×100/ 25 = 97.73% 0.2012×1000mg
(3)测定异烟肼片含量 测定异烟肼片含量: 测定异烟肼片含量 标示量0.1g),精称 精称(2.4220g),研细精称 研细精称0.2560g,置 取20片(标示量 片 标示量 精称 研细精称 置 100ml定容 取25ml用溴酸钾滴定 消耗溴酸钾 定容,取 用溴酸钾滴定,消耗溴酸钾 求含量? 定容 用溴酸钾滴定 消耗溴酸钾16.10ml,求含量 求含量
T = M ×供试品与滴定液摩尔比 滴定液浓度 供试品与滴定液摩尔比;M-- 供试品摩尔质量 供试品与滴定液摩尔比 例：羟苯乙酯含量测定: 先加入定量过量的氢氧化钠 羟苯乙酯含量测定 先加入定量过量的氢氧化钠, 硫酸滴定,(羟苯乙酯分子量 求滴定度T 用0.5mol/L硫酸滴定 羟苯乙酯分子量 硫酸滴定 羟苯乙酯分子量166.2)求滴定度 求滴定度
酸或碱条件
----
Cl-
含卤素有机芳环药物（ 键比较牢固） 还原剂 含卤素有机芳环药物（C-X键比较牢固）+还原剂 ---------------键比较牢固 --------------无机卤化物 无机卤化物
例：碘番酸含量的测定 碘番酸在醋酸条件下用锌粉还原,使碳 碘键断裂,形成 使碳—碘键断裂 碘番酸在醋酸条件下用锌粉还原 使碳 碘键断裂 形成 无机碘化物,后用银量法测定 后用银量法测定; 无机碘化物 后用银量法测定
3、氧瓶燃烧法 、 将有机药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中进行燃烧， 将有机药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中进行燃烧，并将 燃烧所产生的欲测物用吸收液吸收，再进行分析。（装置P68） 。（装置 燃烧所产生的欲测物用吸收液吸收，再进行分析。（装置 ） 吸收液： 吸收液：多数用水或水加氢氧化钠 例：
氧瓶燃烧
§4.2 定量分析的前处理 在分析含金属或卤素的有机物之前，需做适当处理， 在分析含金属或卤素的有机物之前，需做适当处理，其 分析方法分两大类： 分析方法分两大类： 不经有机破坏的分析方法 经有机破坏的分析方法 一、不经有机破坏的分析方法 1、直接测定法： 、直接测定法： 适用金属原子不直接与碳原子相连的有机金属药物， 适用金属原子不直接与碳原子相连的有机金属药物， 在水中可以电离，然后测定。 在水中可以电离，然后测定。 富马酸亚铁的含量测定： 例：富马酸亚铁的含量测定： 富马酸亚铁 + 稀酸 ------- Fe2+
例：泛影酸含量的测定P81 泛影酸含量的测定
二、经有机破坏的分析方法 含有金属或含卤素的有机药物结构中金属原子， 含有金属或含卤素的有机药物结构中金属原子，卤素与碳原子 结合牢固者，必须采用有机破坏方法将药物分子破坏， 结合牢固者，必须采用有机破坏方法将药物分子破坏，使之转化 成无机化合物， 成无机化合物，方可测定 。 1、湿法破坏 、 适用于血、 组织等生物样品，一般采用强酸、 适用于血、尿、组织等生物样品，一般采用强酸、加热 湿法破坏法。 湿法破坏法。 2、干法破坏 、 将有机物灼烧灰化达到分解的目的。 将有机物灼烧灰化达到分解的目的。 供试品----坩埚 坩埚-----加热 加热-----炭化 炭化-----高温灼烧 高温灼烧-----炭化完全。 炭化完全。 供试品 坩埚 加热 炭化 高温灼烧 炭化完全
T=0.5X(2:1)X166.2=166.2(mg/ml)
维生素E中游离生育酚 例:维生素 中游离生育酚 维生素 中游离生育酚[M(C29H50O2)=430.7g/mol]的检查 的检查 方法如下: 方法如下 取本品0.10g加无水乙醇 加无水乙醇5ml溶解后 加二苯胺试液 滴,用硫酸铈 溶解后,加二苯胺试液 取本品 加无水乙醇 溶解后 加二苯胺试液1滴 用硫酸铈 滴定液(0.01mol/L)滴定 消耗硫酸铈滴定液 滴定,消耗硫酸铈滴定液 滴定液 滴定 消耗硫酸铈滴定液(0.01mol/L)不得超 不得超 反应如下: 过1.0ml,反应如下 反应如下
含 %= 量
(VB空白 VB供试品)FBTA W
×100%
例:P90 司可巴比妥钠的含量测定 VB空=23.21ml 空 VB供试=15.73ml F(Na2S2O3) =1.038 供试
T(Br2)=0.05mol/L×(1/1) × 260.23g/mol=13.01(mg/ml) ×
(23.2115.73) ×1.038×13.01 = ×100% = 98.8% 0.1022×1000(mg)
§4.3 定量分析方法 一、容量分析法 采用滴定的方法，由滴定终点时， 采用滴定的方法，由滴定终点时，所消耗的滴定液体积及浓度 计算被测药物的含量。 计算被测药物的含量。 1、滴定度 ： aA+bB====cC+dD 、滴定度T： 某摩尔浓度的滴定液所相当的被测药物的重量。 每1ml某摩尔浓度的滴定液所相当的被测药物的重量。 某摩尔浓度的滴定液所相当的被测药物的重量 药典中用mg/ml表示） 表示） （药典中用 表示 a
NaOH吸收
含碘有机药物-----------------I 2--------------NaI+NaIO3 含碘有机药物 I --------------NaI+NaIO
溴+醋酸 KI 硫代硫酸钠
----------HIO ---------I -------------NaI ----------HIO3---------I2-------------NaI