具有抑菌促生作用的植物内生细菌的筛选
药用植物内生菌促生与生防作用研究进展
药用植物内生菌促生与生防作用研究进展作者：徐源清朱越韩佳妮徐桂雯黄轶勉周芳美来源：《农业灾害研究》2024年第02期摘要：我国幅员辽阔且气候多样，药用植物资源丰富的同时，蕴含着多样的内生菌资源。
药用植物内生菌和其宿主植物作为一个共生体，在长期协同进化的过程中，已经形成互惠共存的关系。
在药用植物生长过程中，内生菌既能通过促进植物对氮、磷、钾、铁等无机营养元素的吸收利用和生长激素的合成直接促进药用植物的生长，也能通过生物防治功能间接促进药用植物的生长。
综述了近年来药用植物内生菌促生与生防作用的研究及应用，并对药用植物内生菌的发展趋势进行了展望。
关键词：药用植物；内生菌；促生作用；生物防治中图分类号：S567 文献标志码：B 文章编号：2095–3305（2024）02–00-03植物内生菌是指其生活史的部分或全部阶段生活于健康植物表皮细胞层间隙或组织器官内部的一类微生物，不易受环境条件的影响，可以在宿主植物体内独立地分裂繁殖和传递，在与宿主植物长期协同进化过程中逐渐形成互惠共存的关系。
研究表明，从草本植物、木本植物到藤本植物，这些植物体的根、茎、叶、花、果实等组织器官都普遍存在内生菌，而我国药用植物资源极其丰富，内生菌资源更为多样[1]。
此外，药用植物内生菌的价值极高，在医药、农业等领域可以发挥重要作用。
综述了药用植物内生菌如何发挥促生作用，帮助宿主植物获取生长所需的资源和调节宿主植物生长发育及产生生物防治的效果，为解决某些药用植物繁殖率低、生长困难，致使资源日益枯竭和缓解其他珍稀药用植物生长困境及其他常见农作物供应不足等问题提供理论指导。
1 药用植物内生菌的种类随着对植物内生菌的深入研究，人们对内生菌资源的多样性及价值性认知不断提高，开发和利用不断广泛，这为促植物生长和植物疾病生物防治工作提供了新思路。
近年来，药用植物内生菌也越来越受到国内外研究者的关注。
研究表明，药用植物内生菌种类繁多，主要包括内生细菌、真菌和放线菌，在各种药用植物中分布广泛[2]。
一株抗玉米纹枯病内生细菌的分离鉴定及其抗病促生作用
一株抗玉米纹枯病内生细菌的分离鉴定及其抗病促生作用
辜运富;张云飞;张小平
【期刊名称】《微生物学通报》
【年(卷),期】2008(35)8
【摘要】玉米纹枯病是玉米主要的真菌病害,从优良玉米品种川单13号中分离到
一株对玉米纹枯病菌具有明显抑制作用并能够促进玉米生长的内生细菌.通过形态、生理生化特性分析以及16SrDNA序列同源性比较,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌.盆
栽试验表明,菌株能够抑制玉米纹枯病的发生,抑菌率为 43.01%,促生试验表明,该菌能够显著促进玉米苗的生长,促生作用与植物生长刺激素(IAA)和效果相似,显示出良好的开发前景.
【总页数】6页(P1240-1245)
【作者】辜运富;张云飞;张小平
【作者单位】四川农业大学资源环境学院,雅安,625014;农业部成都沼气研究所,成都,610041;四川农业大学资源环境学院,雅安,625014
【正文语种】中文
【中图分类】S4
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吴承祯;余蓉;陈秀珠
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油菜内生细菌多样性分析及菌株CanL-30生防潜力评估
油菜内生细菌多样性分析及菌株CanL-30生防潜力评估王梅菊;刘晨;吴明德;张静;杨龙;李国庆【摘要】为筛选防病促生的内生性细菌菌株,提高油菜的抗病性,对武汉地区甘蓝型冬油菜内生细菌进行了分离鉴定和多样性分析,同时对分离的内生细菌进行了拮抗菌株和促生菌株的筛选.结果表明:从采集的油菜样本中共分离得到134株内生细菌,基于16S rDNA序列分析,发现这些菌株属于18个细菌属中的33个种,其中芽孢杆菌属、假单胞菌属和寡养单胞菌属占优势,分别占分离物总数的46.27％、15.67％和11.94％.油菜根、茎和叶内生细菌分离物的香农多样性指数分别为2.847、2.808和2,356,辛普森指数分别为0.956、0.939和0.907.经过平板筛选、离体叶片筛选以及活体油菜接种筛选,发现枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株CanL-30对灰葡萄孢(Botrytiscinerea)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和油菜黑胫病菌(Leptosphaeeria biglobosa)有拮抗作用,还具有稳定的抑制核盘菌的效果.进一步试验表明,菌株CanL-30主要通过产生抗真菌物质抑制核盘菌生长.研究还发现CanL-30能促进拟南芥和油菜生长.上述结果说明冬油菜存在丰富的内生细菌资源,从中可以筛选得到防病促生的细菌菌株.%To investigate the biocontrol efficacy of rapeseed (Brassica napus) endophytic bacteria,bacteria were isolated from rapeseed seedlings in Wuhan,and their diversity was studied.Results showed that the obtained 134 strains included 33 genera and 18 species based on their 16S rDNA sequences.Among them,3 generaBacillus,Pseudomonas and Stenotrophomonas accounted for 46.27％,15.67％and 11.94％ respectively,of the total.The endophytic bacteria inroots,stems and leaves had Shannon diversity indices of 2.847,2.808 and 2.356 respectively,and had Simpson's indices of 0.956,0.939 and 0.907respectively.Bacillus subtilis strain CanL-30 was selected based on dual culturing screening using in vitro and in vivo screenings on leaves.It showed that CanL-30 inhibited Botrytis cinema,Rhizoctonia solani and Leptosphaeeria biglobosa on plates.It's suppression had high antifungal efficacy on Sclerotinia sclerotiorum on rapeseed leaves.Furthermore CanL-30 promoted plant growth of both rapeseed and Arabidopsis thaliana inside the plates possibly through volatiles.This study suggested that rapeseed endophytic bacteria were highly diverse,and could be the important biological resource of bacteria on both biocontrol and plant-growth promoting.【期刊名称】《中国油料作物学报》【年(卷),期】2018(040)002【总页数】11页(P258-268)【关键词】甘蓝型油菜;内生细菌;多样性;生物防治;植物促生作用【作者】王梅菊;刘晨;吴明德;张静;杨龙;李国庆【作者单位】华中农业大学,湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室,湖北武汉,430070;华中农业大学,湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室,湖北武汉,430070;华中农业大学,湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室,湖北武汉,430070;华中农业大学,湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室,湖北武汉,430070;华中农业大学,湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室,湖北武汉,430070;华中农业大学,湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室,湖北武汉,430070【正文语种】中文【中图分类】S565.4植物内生菌是指在植物生长的特定阶段或者全部阶段定殖在植物体内、并且不对植物造成伤害的一类微生物[1]。
植物内生细菌的分离、分类、定殖与应用
生命科学Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１８卷 第１期２００６年２月Ｖｏｌ． １８， Ｎｏ． １Ｆｅｂ．， ２００６植物内生细菌的分离冯永君＊植物内生细菌已成为国内外的研究热点其中有的具有促生与防治病害等对宿主植物有利的作用发现了有意义的定殖规律目前但它在农业上的巨大应用潜力业已彰显内生细菌； 共生定殖； 生物防治中图分类号２００５－０８－０１国家自然科学基金（Ｎｏ．３０４００００２）作者简介男杨新芳本科冯永君（１９７３男副教授１００４－０３７４（２００６）０１－００９０－０５人们已认识到化肥和农药在农业应用中的弊端而存在于土壤中或植物体内的具有控制病害与促生增产潜力的微生物将可能成为一个有效选择能够定殖在健康植物细胞间隙或细胞内绝大部分内生细菌对植物不造成实质性危害植物内生细菌在自然界中广泛存在它们在植物体中的数量很大而且它们的生物学功能多种多样［２￣６］国内外有关研究报道不断增加生物学功能以及定殖过程鉴定与分类自２０世纪中叶起９１第１期卢镇岳植物内生细菌的分离国内虽起步较晚富贵竹马尾松主要有以下几个属假单孢菌属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）其中属于芽孢杆菌属的菌株数在多种植物中都为最多一般在植物根部与种子中内生细菌的含量比较高有的根部最多马冠华例如一些地区常下酸雨体内内生细菌的总数以及各组织内的内生细菌数会有所变化内生细菌分离与鉴定的方法一般都依赖于传统的平板培养方法也容易普及因而不能准确判断植物内生细菌的数量与种类利用非培养方法检测微生物种群的技术应用于植物内生细菌研究对于现已分离得到的植物内生细菌后者指能在植物根际与土壤中分离得到而且种类居多第一类对植物的作用是中性的第二类对植物生长发育有促进作用或能通过固氮与分泌激素促进植物生长发育等但需要注意的是了解这些关系不仅有利于认识植物内生细菌在自然生态环境中的地位能抑制宿主植物病原菌生长的内生细菌王万能和肖崇刚［２４］从烟草根部分离的内生细菌１１８菌株能防治烟草黑胫病［２４］； 龙良鲲等［１１］从番茄健康植株根内分离获得的２３９株内生细菌中有１８株能在平板培养中拮抗番茄青枯病菌国内外对棉花内生细菌的研究相对较多其中包括能拮抗根腐菌的假单胞菌属一些菌株和拮抗黄曲霉菌的洋葱假单胞菌（Ｐｓ． Ｃｅｐａｃｉａ）辣椒与哈密瓜等植物中也分离到多株具有防治病原菌能力的内生细菌２．２植物内生细菌对宿主植物有直接促生作用细菌定殖于宿主植物体内便能获得独特的微生态环境进行生长繁殖［２８］固氮细菌定殖于植物体内的独特微生态环境中能免受氧气等不利因素的影响并已从多种非豆科植物中分离到具有固氮能力的内生细菌Ｋａｌｌａｒ草以及多种谷类与能形成块茎的植物其固氮酶活性能达到一种典型根瘤菌（Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）的２５％ ［３０］固氮基因ｎｉｆ在根瘤菌与这些固氮内生菌中是保守的然而不同固氮内生细菌采取不同的调控方式控制固氮酶的活性［３１￣３４］Ｅｇｅｎｅｒ等［３１］研究结果证明其中包括利用菌落的结构笔者研究表明并万方数据92生命科学第１８卷发现在该结构下ＹＳ１９会诱导表达出单体菌不具有的蛋白Ｐａｎ和Ｖｅｓｓｅｙ［３０］报道指出沈德龙等［３５］已证明水稻内生成团泛菌ＹＳ１９能分泌四种不同的植物生长激素一些固氮内生细菌同时具备分泌具有促生作用激素的能力［３３］具备收留有抗病促生作用的细菌作为内生细菌能力的植物由于植物内生细菌是普遍存在的袁红旭等［１２］从四个品种富贵竹茎叶中分离出６４个内生细菌谈家金等［３６］从健康马尾松茎部分离到一株内生细菌坚强芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ） ＧＤ２能诱发松材线虫病３植物内生细菌对宿主植物的侵染与定殖利用植物内生细菌作为生物制剂对植物进行生物预处理的确存在广阔的应用前景他们在实验中发现证明内生细菌能定殖在处于发育早期的植物中而是能在植物体内不同部位转移的研究了该菌对水稻的定殖情况在新根与根尖部分定殖的量比较高国内一些研究人员采用抗性基因标记的植物内生细菌也进行了类似的研究该菌对小麦纹枯病有明显的防治效果并能向茎基部用Ｂ９４６菌悬液浸种处理还发现细菌能定殖于根细胞间也能定殖于根细胞内而且对特定部位有所偏好该菌对番茄的青枯病具有防治作用且在根内的定殖能力大于茎内其定殖数量动态在根茎内均有一个但其在根内的数量变化明显较茎内平缓其对宿主的选择存在一定的专一性其结果表明并有明显的固氮能力其定殖能力之间也有区别他们使用ｇｆｐ基因对研究用细菌进行标记该泛菌与该苍白杆菌都能在植物胞间进行定殖内生细菌定殖不仅仅受植物品种与另一而且还受Ｒｅｍｕｓ等［４４］利用酶联免疫吸附的方法进行观察在植物液体培养的情况下内生细菌对植物的定殖能发生在发育的早期并且定殖的细菌在不同组织之间具有一定的流动性利用了不同的内生细菌标记与检测方法是一种传统而实用的方法９３第１期卢镇岳植物内生细菌的分离精度很低即把能使细菌发色的基因或常用的绿色荧光蛋白基因导入菌体冯永君和宋未［４５］已证明ＧＦＰ能在成团泛菌ＹＳ１９中稳定表达使用绿色荧光蛋白时需要使用特别波长激发的荧光蛋白［３７］人们越来越多意识到一个新的问题这些化学物质能诱导细菌发生特定的行为植物接受反馈信息后会再次产生新的信号通常对根际微生物与植物信号交流的深入研究会对揭示内生细菌定殖的起始步骤有重要作用植物内生细菌应用于农作物的病害防治与促生有明显的效果［１￣７］早在１９８６年已证明在水稻等５０多种植物上有增产抗旱成团泛菌 ＣＰＡ－２最初分离自苹果表面ＣＰＡ－２作为生物制剂的研究比较成熟其中包括温度认为竞争营养物是其中一种防治机制Ｔｅｉｘｉｄó等［５０］研究ＣＰＡ－２与碳酸盐联用作为防治手段的效果而且此浓度下的碳酸盐并不影响ＣＰＡ－２的生长是否能在合适的条件下进行培养可否与现有的安全可靠的防治手段联用分离内生细菌时所使用的植物体表灭菌方法对分离效果的影响内生细菌可能诱导宿主植物产生对人畜不利的性状还应该充分了解该菌的侵染因为一些内生细菌对于某些植物是有益或是无害的限制其传播是十分必要的而微生物的情况会更严重得多把一种微生物引入一个新的生态系统有可能影响很多土著微生物的生长内生菌的分离再回接我们对植物与微生物之间的关系不再是简单理解为生产者与分解者还可能帮助我们揭开植物研究中的某些谜团认识的持续提高ｇｅｎｅｔｉｃ， ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｓｐｅｃｔｓ． ＦＥＭＳ ＭｉｃｒｏｂｉｏｌＲｅｖ， ２０００， ２４： ４８７￣５０６万方数据94生命科学第１８卷［９］Ｓｔｕｒｚ Ａ Ｖ， Ｃｈｒｉｓｔｉｅ Ｂ Ｒ， Ｍａｔｈｅｓｏｎ Ｂ Ｇ， ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｈｉｃｈ ｃｏｌｏｎｉｚｅ ｒｅｄ ｃｌｏｖｅｒ ｎｏｄｕｌｅｓ，ｒｏｏｔｓ， ｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｆｏｌｉａｇｅ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ ｈｏｓｔ ｇｒｏｗｔｈ．Ｂｉｏｌ Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｏｉｌｓ， １９９７， ２５： １３￣１９［１０］Ｄｏｎｇ Ｚ Ｍ， Ｃａｎｎｙ Ｍ Ｊ， ＭｃＣｕｌｌｙ Ｍ Ｅ， ｅｔ ａｌ． Ａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ－ｆｉｘｉｎｇ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ ｏｆ ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｓｔｅｍｓ． Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ， １９９４，１０５： １１３９￣１１４７［１１］龙良鲲， 肖崇刚， 窦彦霞． 防治番茄青枯病内生细菌的分离与筛选． 中国蔬菜， ２００３， ２： １９￣２１［１２］袁红旭， 周立赖， 周锦兰， 等． 富贵竹内生细菌群落的生物效应研究． 中国生态农业学报， ２００５， １３（１）： ９５￣９７［１３］芦云， 罗明． 哈密瓜内生细菌的分离及拮抗菌的筛选．石河子大学学报， ２００４， ２２：１０４￣１０９［１４］邱思鑫， 何红， 阮宏椿， 等． 具有抑菌促生作用的植物内生细菌的筛选． 应用与环境生物学报， ２００４， １０（５）：６５５￣６５９［１５］何红， 蔡学清， 洪永聪， 等． 辣椒内生细菌的分离及拮抗菌的筛选． 中国生物防治， ２００２， １８（４）： １７１￣１７５［１６］崔林， 孙振， 孙福在， 等． 马铃薯内生细菌的分离及环腐病拮抗菌的筛选鉴定． 植物病理学报， ２００３， ３３（４）：３５３￣３５８［１７］罗明， 芦云， 张祥林． 棉花内生细菌的分离及生防益菌的筛选． 新疆农业科学， ２００４， ４１（５）： ２７７￣２８２［１８］兰海燕， 王长海， 宋荣． 棉花内生细菌及其研究进展． 棉花学报， ２００３， １２（２）： １０５￣１０８［１９］高增贵， 庄敬华， 陈捷， 等． 玉米根系内生细菌种群及动态分析． 应用生态学报， ２００４， １５（８）： １３４４￣１３４８［２０］李庚花鉴定及其分布特性． 植物学报， １９９９， ４１（９）：９２７￣９３１［２３］刘云霞， 张青文． 周明牂． 水稻体内细菌的动态研究． 应用生态学报， １９９９， １０（６）： ７３５￣７３８［２４］王万能， 肖崇刚． 烟草内生细菌１１８防治黑胫病的机理研究． 西南农业大学学报， ２００３， ２５（１）： ２８￣３１［２５］吴加志， Ｐｌｅｂａｎ Ｓ， Ｃｈｅｒｎｉｎ Ｌ， ｅｔ ａｌ． 植物土传ｓｗｉｔｃｈ－ｏｆｆ－ｌｉｋｅ ｓｉｇ－ｎａｌ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ ｏｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ａｍｔＢ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｉｆ ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ， ｎｉｔｒｏｇｅｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ， ａｎｄ ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｏｄｉ－ｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＮｉｆＨ ｉｎ Ａｚｏａｒｃｕｓ ｓｐ．ｓｔｒａｉｎ ＢＨ７２． Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ，２００２， １８４（８）： ２２５１￣２２５９［３３］Ｈｕｒｅｋ Ｔ， Ｒｅｉｎｈｏｌｄ－Ｈｕｒｅｋ Ｂ， Ｔｕｒｎｅｒ Ｇ Ｌ， ｅｔ ａｌ． Ａｕｇｍｅｎｔｅｄｒａｔｅｓ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｆｉｘａｔｉｏｎ ａｔ ｎａｎｏｍｏｌａｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ Ｏ２ ｉｎ ｈｙｐｅｒｉｎｄｕｃｅｄ Ａｚｏａｒｃｕｓｓｐ． ｓｔｒａｉｎ ＢＨ７２． Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ， １９９４， １７６（１５）： ４７２６￣４７３３［３４］Ｍｏｎｔｅｉｒｏ Ｒ Ａ， ｄｅ Ｓｏｕｚａ Ｅ Ｍ， Ｙａｔｅ Ｍ Ｇ， ｅｔ ａｌ． Ｆｎｒ ｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｏｘｙｇｅｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｓｅｒｏｐｅｄｉｃａｅＮ－ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ＮｉｆＡ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ． ＡｐｐｌＥｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｃｒｂｉｏｌ， ２００３， ６９（３）： １５２７￣１５３１［３５］沈德龙， 冯永君， 宋未． 内生成团泛菌ＹＳ１９对水稻乳熟期光合产物在旗叶植物内生细菌的分离、分类、定殖与应用作者：卢镇岳， 杨新芳， 冯永君， LU Zhen-Yue， YANG Xin-Fang， FENG Yong-Jun作者单位：北京理工大学生命科学与技术学院,北京,100081刊名：生命科学英文刊名：CHINESE BULLETIN OF LIFE SCIENCES年，卷(期)：2006,18(1)被引用次数：24次1.冯永君;宋未植物内生细菌[期刊论文]-自然杂志 2001(05)2.杨海莲;孙晓璐;宋未植物内生细菌的研究 1998(04)3.韩继刚;宋未植物内生细菌研究进展及其应用潜力[期刊论文]-自然科学进展 2004(04)4.刘云霞植物内生细菌的研究与应用 1994(05)5.文才艺;吴元华;田秀玲植物内生菌研究进展及其存在的问题[期刊论文]-生态学杂志 2004(02)6.孔庆科;丁爱云内生细菌作为生防因子的研究进展[期刊论文]-山东农业大学学报(自然科学版) 2003(02)7.阎孟红;蔡正求;韩继刚植物内生细菌在防治植物病害中的应用研究[期刊论文]-生物技术通报 2004(3)8.Steenhoudt O;Vanderleyden J Azospirillum,a free-living nitrogen-fixing bacterium closely associated withgrasses:genetic,biochemical and ecological aspects[外文期刊] 2000(4)9.Sturz A V;Christie B R;Matheson B G Biodiversity of endophytic bacteria which colonize 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2009(6)16.李欣龙.王涛.游玲.杨学贵.黄乃耀香樟内生细菌抑制植物病原真菌及对纤维素利用初步研究[期刊论文]-西南大学学报(自然科学版) 2009(2)17.张巍波.缪煜轩.冯永君成团泛菌YS19 symplasmata结构对菌体抵抗逆境的作用[期刊论文]-微生物学杂志 2009(1)18.王松.游玲.李涛.魏琴.王涛香樟产芽孢内生细菌的系统发育多样性[期刊论文]-微生物学通报 2010(8)19.孙侨南.李进才小麦内生细菌对全蚀病发生的影响[期刊论文]-天津农业科学 2008(5)20.常慧萍植物内生细菌及其开发与应用[期刊论文]-濮阳职业技术学院学报 2008(1)21.管珺.胡永红.杨文革.倪珏萍.马海军蜡样芽孢杆菌防治植物病虫害的研究进展[期刊论文]-现代农药 2007(4)22.刘姮.李银姣.邓汉斌棉花黄萎病的综合防治[期刊论文]-湖北植保 2011(6)23.卡依尔·玉素甫.谢仁娜依·甫拉提.玛丽帕·吐达洪1.马丽艳木·阿木东.艾尼江·尔斯曼.祖母拉提·阿布都热依木.艾尔肯·热合曼Ugan古河道胡杨可培养内生细菌的多样性[期刊论文]-微生物学报 2011(2)24.马元武.陈翠翠.何晴.冯永君周质空间蛋白的抗逆机制[期刊论文]-自然科学进展 2008(8)本文链接：/Periodical_smkx200601020.aspx。
防治烟草赤星病有益内生细菌的筛选及抑菌作用
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结果和分析
分离内生细菌的拮抗性测定
其中 CD4$"/、 CD4/E! 的抑制效果最好，其抑菌带 宽度达 $/2%++ 和 $-2/++， 对病原菌菌落扩展也具 有明显的抑制作用。拮抗菌除了产生明显的抑菌带 外， 对赤星病菌生长也有影响， 表现在菌落边缘和抑 菌带接触部位的菌丝溶解， 整个菌落的生长明显受 到抑制。赤星病菌菌落 （长 # 宽） 处理与对照相比， 对照病菌生长正常， 菌落铺展平板呈圆形扩展， 而受 拮抗的病原菌呈长条形生长， 且长、 宽度均受抑制。 菌株转移 CD4&%、 CD4$"/ 在平板上的拮抗作用见图 $， 抑菌带的宽度仍达 &2%++ 以上。 ! 代以上，
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作者简介： 易
龙 （"821 E ） ， 男， 四川都江堰人， 硕士， 研究方向为有益微生物的开发利用。 95:/;’： 0;’&D>0’@ 0/=&&( <&:( <D
收稿日期： 修回日期： #$$65$!5#"， #$$65$15#"
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广西亚热带植物根际促生菌的筛选、鉴定及促生作用研究
广西亚热带植物根际促生菌的筛选、鉴定及促生作用研究王晶;李波;黎柳萍;韦靖;姜明国;周燕【期刊名称】《南京农业大学学报》【年(卷),期】2024(47)3【摘要】[目的]本文旨在从植物根际土壤中分离具有多种促生性能的菌株,并明确其促生特性和抗病效果。
[方法]采用选择培养方法从植物根际土壤中筛选具有固氮、产氨、溶磷、解钾、分泌吲哚乙酸(indole acetic acid,IAA)、产铁载体和产蛋白酶等特性的菌株,通过16S rRNA对菌株分类学鉴定。
测定其对小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、小麦冠腐病菌(Fusarium gramiuearum)、黄瓜织球壳菌(Plectosphaerella cucumerina)、香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)、交链格孢菌(Alternaria alternate)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的抑制作用,并通过盆栽试验探究植物根际促生菌对植物的促生效果。
[结果]从植物根际土壤中分离细菌191株,固氮及产氨菌171株,解有机磷菌66株,解无机磷菌62株,解钾菌28株,产铁载体菌98株,产IAA菌41株,产蛋白酶菌45株。
抑菌试验表明贝莱斯芽胞杆菌C32对6种致病菌均表现出较强的抑菌活性,抑菌率均在50%以上。
盆栽试验结果表明,1株IAA高产菌株川大肠杆菌0208对番茄和玉米植株促生效果最为显著。
与对照组相比,玉米盆栽株高、茎粗、根长、地上部鲜重和地下部鲜重分别增加21.49%、19.35%、42.98%、19.58%和56.67%,番茄盆栽分别增加53.51%、14.90%、12.28%、43.12%和48.62%。
[结论]从广西亚热带植物根际土壤中筛选到多株具有高效促生和防病功能的菌株,为微生物肥料的开发提供优质菌种资源。
【总页数】9页(P468-476)【作者】王晶;李波;黎柳萍;韦靖;姜明国;周燕【作者单位】广西民族大学海洋与生物技术学院/广西多糖材料与改性重点实验室/海洋生物资源开发与利用国际合作重点实验室【正文语种】中文【中图分类】S144【相关文献】1.植物根际促生菌(PGPR)解磷菌的筛选及其对番茄促生作用的研究2.高寒草地耐低温植物根际促生菌的筛选鉴定及特性研究3.3株水稻根际促生菌的筛选鉴定及促生作用研究4.一株根际解磷菌的筛选鉴定及促生作用研究5.2株青贮玉米根际固氮菌的筛选鉴定及促生作用研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一株生防细菌GB58的鉴定与抑菌能力测定
中国农学通报2016,32(6):198-204Chinese Agricultural Science Bulletin一株生防细菌GB58的鉴定与抑菌能力测定卢钰升1，顾文杰1，蒋瑞萍1，孙丽丽1，徐培智1，谭志远2，解开治1，李文英1，李夏1（1广东省农业科学院农业资源与环境研究所，农业部南方植物营养与肥料重点实验室，广东省养分资源循环利用与耕地保育重点实验室，广州510642；2华南农业大学农学院，广州510642）摘要：对从广东水稻土中获得能高效抑制植物病原菌的细菌GB58进行鉴定、抑菌广谱性测定，明确其潜在应用价值。
采用平板对峙法测定GB58抑菌广谱性，并参照细菌系统鉴定方法，通过形态、生理生化、分子生物学手段鉴定菌株。
抗菌广谱性试验结果表明：GB58对多达12种的植物真菌性病害和1种细菌性病害具有较好的拮抗作用。
细菌常规鉴定试验结果显示：GB58为芽孢杆菌属，碳源利用分析表明GB58能够利用46种碳源物质以及耐酸耐盐，通过16S rRNA、gyrA序列进行系统发育分析，确定GB58为解淀粉芽孢杆菌。
GB58是一株抗菌范围广，营养竞争能力强的生防细菌，具备适应华南酸性土壤复杂环境的繁殖和代谢能力。
关键词：生防细菌；鉴定；系统发育；抗菌广谱性中图分类号：S182，S432.4文献标志码：A论文编号：casb15100004Identification and Antimicrobial Broad-spectrum Analysis of a Biocontrol Bacteria Strain GB58Lu Yusheng1,Gu Wenjie1,Jiang Ruiping1,Sun Lili1,Xu Peizhi1,Tan Zhiyuan2,Xie Kaizhi1,Li Wenying1,Li Xia1 (1Institute of Agricultural Resources and Environment,Guangdong Academy of Agricultural Sciences,Key Laboratory of Plant Nutrition and Fertilizer in South Region,Ministry of Agriculture,Guangdong Key Laboratory of Nutrient Cycling and Farmland Conservation,Guangzhou510642;2College of Agriculture,South China Agricultural University,Guangzhou510642)Abstract:This article presented the identification and antimicrobial broad-spectrum analysis of the biocontrol bacteria strain GB58obtained in rice soil of Guangdong Province,which could inhibit plant pathogens,and aimed to clarify its potential application value.The antibacterial broad-spectrum of GB58was determined by the plate confrontation method,and the bacterial strain was identified by morphological,physiological, biochemical and molecular biology methods which were the reference for bacteria system identification.The antimicrobial broad-spectrum result showed that GB58had better antagonism to twelve plant fungal diseases and one plant bacterial disease.In the meantime,common bacterial identification test showed that GB58was bacillus and the carbon utilization analysis showed that GB58could utilize46kinds of carbon sources and was able to tolerate acid and salt.Moreover,the phylogenetic analysis through16S rRNA and gyrA sequence concluded that GB58was bacillus amyloliquefaciens.All the results suggested that GB58was a biocontrol bacteria strain with wide antibacterial range and high nutrition competitive ability,which had the ability of基金项目：广东省科技计划项目“基于菜园退化土壤的功能性微生物接种剂研发与应用”(2013B020310001)；广东省科技计划项目“橄榄有机无机专用肥的研制与应用”(2013B020419009)；广东省科技计划项目“广东省新型肥料与高效施肥工程技术研究中心建设”(2014B090904068)；广东省科技计划项目“广东省新型肥料科技创新与服务平台建设”；广东省财政厅项目“多功能生物复合型有机营养液肥的研发与应用”；广州市农业局农业科技攻关招标项目“城郊结合处集约化畜禽养殖场固体废弃物无害化与资源化综合利用研究”(GZCQC0902FG06017)。
荒漠植物根际解磷细菌的筛选及抑菌和促生特性研究
第 45 卷第 1 期 Vol.45 No.12024 年 3 月Mar. 2024农业科学研究Journal of Agricultural Sciences荒漠植物根际解磷细菌的筛选及抑菌和促生特性研究杜艺，周波，袁娜娜，姚佳妮，代金霞（宁夏大学生命科学学院，宁夏银川750021）摘要：从荒漠植物根际筛选解磷菌株并研究其促生效应，为推动荒漠区微生物资源的开发和利用提供有效的参考。
采用平板培养和钼锑抗比色法筛选荒漠植物根际土壤中具有解磷活性的细菌菌株，测定其促生和抑菌活性，并利用盆栽接种试验分析代表菌株对柠条幼苗生长的促进作用。
结果表明：筛选出6株溶解无机磷的菌株，溶磷量为52.82~63.93 mg/L，其中菌株IP6的溶磷量最高；筛选出4株溶解有机磷的菌株，溶磷量为2.33~2.80 mg/L；多数解磷菌同时具备固氮、产IAA和分泌铁载体能力，所有菌株对玉米大斑病菌和马铃薯干腐病菌都能产生明显的抑制作用。
与不接菌对照相比，接种沙雷氏菌IP6使柠条幼苗的株高、根长和鲜质量显著提高12.39%、9.85%和30.68%；接种假单胞菌OP2使柠条幼苗的株高、根长和叶片数显著提高13.29%、8.62%和19.56%，鲜质量和干质量显著增加46.32%和37.98%，二者促生效果显著，具有进一步开发为微生物肥料的潜能。
关键词：根际细菌；解磷菌；抑菌活性；促生作用中图分类号：S182 文献标志码：A磷是植物营养中仅次于氮的最重要的关键元素，它在植物的光合作用、能量传递、信号传导、大分子生物合成和呼吸等主要代谢过程中发挥着重要作用[1]。
植物所利用的磷素主要来源于土壤，虽然土壤中含有大量且丰富的磷元素，但绝大部分以难溶性的无效磷形式存在，仅有0.1%的总磷可被植物利用，致使植物生长发育所需的有效磷含量不能够得到满足，限制了植物生长[2]。
尽管化学磷肥的添加能够提高作物产量，但长期施用会改变土壤微生物的群落结构，使土壤中有益微生物数量和多样性降低，土壤质量下降，从而导致土壤肥力的丧失和环境退化[3]。
铁皮石斛根系促生内生真菌的筛选
铁皮石斛根系促生内生真菌的筛选李昆华;杨丹;苏娟;李锋;岳健【摘要】[目的]开展铁皮石斛根系促生内生真菌的筛选,为铁皮石斛的批量化生产提供生物防治基础.[方法]采用组织分离法对铁皮石斛根系内生真菌进行分离纯化,再通过单一回接试验将已分离内生真菌回接到铁皮石斛组培苗中,40d后观察铁皮石斛根系生长情况,60d后统计成活率.通过铁皮石斛根系生长指标,筛选出对根系促生作用最显著的内生真菌.[结果]从铁皮石斛根系中共分离得到21株内生真菌,筛选出8株优势促生根系内生真菌,其中回接菌株F5的铁皮石斛组培苗生根率最高,达99.00％,回接菌株F14的铁皮石斛苗成活率达100.00％,为对照组的395％.[结论]该研究成功解决了铁皮石斛移栽成活率低的难题.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2017(045)001【总页数】3页(P128-129,132)【关键词】铁皮石斛;内生真菌;筛选;根系生长;成活率【作者】李昆华;杨丹;苏娟;李锋;岳健【作者单位】云南山里红生物科技有限公司,云南昆明650206;云南山里红生物科技有限公司,云南昆明650206;云南山里红生物科技有限公司,云南昆明650206;云南山里红生物科技有限公司,云南昆明650206;云南山里红生物科技有限公司,云南昆明650206【正文语种】中文【中图分类】S567.23+9铁皮石斛(Dendrobium candidum)是兰科石斛属多年生附生植物，在医药领域的研究与开发方面应用广泛，具有润肺清热、滋阴养胃、清肝明目、抵抗癌症、降低血糖等药用价值[1-5]，集中分布于福建、浙江、安徽、广西、云南等地[6-7]。
但由于铁皮石斛的自然繁殖率低，对环境条件要求较严格，产区药农长期采挖等因素导致自然资源已濒临灭绝。
而铁皮石斛又因为种子微小，没有胚乳，因此自然条件下不利于获得大批量铁皮石斛幼苗[8]。
当前，石斛组织培养体系已成功建立，可大量繁殖石斛无性苗，但无性苗移栽成活率低、生长缓慢、生长周期长等问题，成为石斛无性苗人工栽培瓶颈[9-10]。
辣椒疫病生防菌筛选及其防效
辣椒疫病生防菌筛选及其防效
赵沛;邢敏;康萍芝
【期刊名称】《中国蔬菜》
【年(卷),期】2024()5
【摘要】为筛选可用于防治辣椒疫病的生防菌株,从辣椒植株内分离得到1株内生细菌菌株S39,通过平板对峙法和牛津杯法测定了菌株S39及其代谢产物对辣椒疫霉菌的抑制效果;并对其抑菌谱、防病促生效果、对根际土壤微生物种群的影响及其生防因子进行分析。
结果表明:菌株S39对辣椒疫霉菌平板对峙抑菌率为
83.00%,其次生代谢产物抑菌率达到75.17%;且菌株S39对多种病原菌都有抑制作用,抑菌率为63.80%~86.33%。
温室盆栽试验结果表明其对辣椒疫病的防效可达75.87%;且对辣椒植株具有显著促生效果,根长增长率为21.05%。
同时,菌株S39能显著增加植株根际土壤中细菌及放线菌的数量;能产生蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、葡聚糖酶等抗菌物质,作为生防制剂具有良好的应用前景。
【总页数】7页(P84-90)
【作者】赵沛;邢敏;康萍芝
【作者单位】宁夏农林科学院植物保护研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S64
【相关文献】
1.辣椒疫病生防放线菌筛选及其对辣椒根系微生物区系的影响
2.生防菌制剂对日光温室辣椒疫病的防效研究
3.辣椒疫病生防菌的筛选、鉴定及其抑菌机理初探
4.辣椒疫病生防菌的初步筛选
5.辣椒疫病生防菌的筛选及其抑菌机制初探
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玉米内生菌研究进展
玉米内生菌研究进展李晔;田红琳;张丕辉【摘要】植物内生菌作为一种新型的微生物资源,受到越来越多研究者的青睐.到目前为止,许多研究者从不同的植物中分离出大量内生菌,在生防、促生长、抗非生物胁迫方面表现出较好的应用潜力.玉米作为中国重要的粮食作物,对其内生菌进行研究具有重要意义.从玉米内生菌的多样性、种群分布特性、生物学特性等方面概述了当前有关玉米内生菌研究的主要成果和最新进展,以期为玉米内生菌相关研究提供借鉴.%As a new type of microbial resource,endophyte is attracted by more and more researchers.So far,a large number of endophytes were isolated from different plants,and showed great potential in biocontrol,growth promoting and abiotic stress resistance.It is significant to study about the endophyte in maize,the largest food crop in China.The main achievements and latest progress in diversity,population distribution,biological characteristics of maize endophytes were summarized in order to provide references for the related researches about maize endophytes.【期刊名称】《作物研究》【年(卷),期】2017(031)006【总页数】4页(P709-712)【关键词】内生菌;玉米;促生;抗病【作者】李晔;田红琳;张丕辉【作者单位】重庆市农业科学院玉米研究所,重庆401329;重庆市农业科学院玉米研究所,重庆401329;重庆市农业科学院玉米研究所,重庆401329【正文语种】中文【中图分类】S432.1植物内生菌是指其生活史中某一阶段或整个阶段生活在生长健康的植物组织或细胞内，并对宿主植物没有引起明显病害症状的一类微生物群［1］。
辣椒根腐病拮抗细菌的筛选、鉴定及其抑菌促生作用
Ａｂｓ ｒ ｃ ：Ｗ ｉ ｕ ａ ｉｍ ｏａ ｉａ ｎ ｉａｏ ． ｏ ｒａ ｔｇ ｎｓｉ ｂ ｃｅｉ ｒ ｅｅ ｔｄ ｆ ｍ ｈ ｔａ ｔ ｔ Ｆ ｓｒ ｈ ｕ ｓ ｌｎ ｓ ｉｄｃ ｔｒ ｆｕ ｎａ ｏ ｉｔ ａ ｔｒ ｗｅｅ ｓ ｌｃｅ ｒ ｃ ａ ０ ｔｅ
曲春鹤 。 ，何付 丽 １ 刘培福 ， ２ ，纪 明山 ，赵长 山 ，高黎 力
（． １ 东北农业大学农学院 ，哈尔滨 １０ ３ ；２ 沈阳农业大学植物保护学院，沈阳 １０ ６ ：３ 黑龙江省农药管理检定站 ５００ ． １１１ ． 哈尔滨 １ ０９ ５ ００）
摘
要 ：采 用 平 板 对 峙 一 根 试验 一 栽 试 验 系统 筛选 方 法 ， 以 Ｆ ｓｒ ｍ ｌｎ 为 指 示 菌 ，从 黑 龙 江 省 辣 椒 根 胚 盆 ｕａｉ ｓ ａ ｉ ｕ ｏ
ＧＡ ｉ（．Ｓ ｈ ｏ ｏ ｇｉｕ ｕｅ ｏｔｅ ｓ ｇｉ ｌ ｒｌＵ ｉ ｒｉ，Ｈ ｒｉ １ ０ ３ ，Ｃ ｉ ；２ Ｏ Ｌｌ １ ｃ ｏ ｌ ｆ ｒ ｌ ｒ，Ｎ ｒ ａ ｔＡ ｒ ｕｔ ａ ｎｖ ｓ ｙ ａ ｂ ０ ０ ｈｎ ｉ 。 Ａ ｃｔ ｈ ｃ ｕ ｅ ｔ ｎ ５ ａ ．
际土壤 中 筛选得 到 ４ 桔 抗 细 菌 ，分 别命 名 为 菌株 Ｄ ２ 、１ ２ 、１一 — 、１ — — 。菌株 Ｄ ２ 对 大豆 疫病 菌 株 ２ １ １ １ ５ ｌｌ ９２ ３ ６ ２１
（ ｈ ｔ ｈｈｒ ｏ ｅ 、大 豆 茵 核 病 菌 （ｃ ｒｔ ｉ ｌ ｏ ｎｒｍ） Ｐ ｙｏ ｔｏａｓ ａ ） ｐ ｊ Ｓｌ ｏ ｎａｓ ｅ ｔ ｏｕ 、黄 瓜 枯 萎 病 茵 （ ｏｙｐｒｍ） ｅ ｉ ｃ ｒｉ ｘｓｏｕ 、黄 瓜 立 枯 病 菌 （ ｈ ｏｔｎ。ｓｌｎ） 小麦根 腐 病 菌 （ ｉ ｌｒ ∞ｒｋ ｉｎ ） Ｒ ｉ ｃ ｉ ｏ ｉ、 ｚ ｏ ａ Ｂｐ ａｉ ｏ ｉ ａ ａ 、棉 花 黄 萎病 菌（ ｅ ｉｌｕ１ ａ ｌ ｅ 、水稻 恶 苗病 菌 ｏ ｓ ｎ Ｖｒｃｌ １ ｄ ｈｉ ） ｔ ｉｉ７ ， ａ （ ｍ ｎｌｏ ） ｏ ｉ 恍 具有 明显拮抗 作用 ，对辣椒胚根 生长具有促进作 用。经形态学、生理生化鉴定及 １Ｓｒ Ｎ ｉ ｆ ６ Ａ分析 ， Ｄ
大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及其对大豆植株的促生效应
浙江农业学报!"#$!%&'"()#(&$*+,*-'$.%*./'/!!"!#!#$"%#$&$#!)&$'&*++,$--.../012345/62孙秀娟!徐伟慧!王志刚/大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及其对大豆植株的促生效应&7'/浙江农业学报!!"!#!#$"%#$&$#!)&$'&/89:$&";#(<(-1/=>>2/&""'?&$!';!"!!&&!"收稿日期 !""C?"!基金项目 黑龙江省重点研发计划项目"Z O !&i ""%!Z e !"!&""<%#作者简介 孙秀娟"&((C +#!女!黑龙江鸡西人!硕士研究生!主要从事根际微生物研究,D ?E F =G $&$C$!C('C$IJJ/6H E !通信作者!王志刚!D ?E F =G $.F 2S 0*=S F 2S IJJ*]V/W ^V/62大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及其对大豆植株的促生效应孙秀娟 徐伟慧 王志刚!"齐齐哈尔大学生命科学与农林学院!黑龙江齐齐哈尔&<&""<#摘K 要 为探究大豆根瘤内生细菌对大豆的促生效应!以大豆根瘤为实验材料!分离筛选根瘤内生细菌!测定其分泌植物激素能力及其对大豆株高%茎粗%干重%鲜重和根系生长方面的促生能力,结果表明$共筛选出&%株根瘤内生细菌!经生理生化和&<N ]8T O 鉴定!有&"株为芽孢杆菌属"Q $"'))(/#!#株为巨大普里斯特氏菌属"G &'*/#'$#!其余'株分别为肠杆菌属"M .#*&1S $"#*&#%克雷伯氏菌属"U )*S /'*))$#%不动杆菌属"!"'.*#1S $"#*&#和农杆菌属"!%&1S $"#*&'(C #,通过溶血试验和&<N ]8T O 鉴定筛选出&"株促生能力强的菌株!其中!U )*S /'*))$NC 的吲哚乙酸":O O #分泌量最高!为&'%;$$E S -P )&(赤霉素"Z O >#分泌量最高的为!%&1S $"#*&'(C N&"!分泌量达#(;#'E S -P )&(Q $"'))(/N#的铁载体活性最高!为%";$%L (&"株菌株处理的大豆株高%根长%干鲜重和茎粗均显著高于对照,综上所述!筛选的大豆根瘤内生细菌!对大豆具有较强的促进作用,关键词根瘤(内生细菌(大豆(溶血试验(促生能力中图分类号 N&'';#(N$<$;&文献标志码 O 文章编号&""'?&$!'"!"!##"%?&$#!?&"K &'0,%)'+,+()(#+%)")$,%)'+'"#+('-./%)$8,$%#*),"*'6&'/8#,++'(30#,+(%.#)*#""#$%&'+&'/8#,+-0,+%NX TQ =V1VF 2!Q XR W =*V=!R O T Ze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`=+3H BQ $"'))(/N#.F >+*W *=S *W >+F +%";$%L/[*W ,G F 2+*W =S *+!]H H +G W 2S +*!^]3B ]W >*.W =S *+F 2^>+W E^=F E W +W ]H B >H 35W F 2+]W F +W ^53+*W >W &">+]F =2>.W ]W >=S 2=B =6F 2+G 3*=S *W ]+*F 2+*H >W H B +*W 6H 2+]H G /:26H 26G V>=H 2!+*W W 2^H ,*3+=65F 6+W ]=F >6]W W 2W ^=2+*=>W 4,W ]=E W 2+*F ^>+]H 2S S ]H .+*?,]H E H +=2S W B B W 6+H 2>H 35W F 2S ]H .+*/Copyright ©博看网. All Rights Reserved.9#/:'*(&$]H H+2H^VG W(W2^H,*3+=65F6+W]=VE(>H35W F2(*W E H G3>=>+W>+(S]H.+*?,]H E H+=2S F5=G=+3KK大豆"H)8"'.*C$5#是主要的油料和高蛋白质农作物!种植面积和用途非常广泛!它的营养价值高!在国家粮食战略安全和农产品国际贸易中占有重要地位&&',为保证大豆产量!采取的主要措施是大量施用化肥&!',过度使用化肥会导致化肥利用率降低和土壤状态恶化%作物减产%环境污染等问题&#'!这迫使人们寻找一种高效的%绿色的施肥方法,内生菌"W2^H,*3+W#的概念是由德国科学家%植物病理学之父8W i F]3于&CC<年提出!其认为凡是在植物体内的微生物均为内生菌&'',随着研究者们对植物内生细菌的不断深入研究!发现内生细菌能与宿主植物形成长期相互依存%相互促进的共生关系!通过产生植物激素类物质直接促进宿主植物的生长!如产生吲哚乙酸":O O#%赤霉素"Z O>#等!因此!内生细菌在农业%医药%食品等方面具有重要的应用价值&$',植物与多种促进植物生长的内生微生物共同生活,根瘤菌与豆科植物建立共生关系!最终形成共生体根瘤!除了结瘤细菌外!根瘤中还定居着许多与根瘤菌不同的细菌!单独接种植物多数不会结瘤!称为非结瘤细菌&<)C',根瘤内生细菌进入根瘤的途径很多!可以通过根%茎和叶等组织或器官进入植物体内!在宿主体内移动!对植物有广泛的生物学作用&(',钟宇舟等&&"'研究表明!大豆根瘤内生细菌8O&<?$对大豆表现出较好的促生效果,赵龙飞等&&&'从大豆根瘤内分离出的溶磷菌株对大豆生长有促进作用,尽管人们对内生细菌及其在可持续农业中用作生物肥料的研究越来越感兴趣!但与植物其他组织内生菌相比!大豆根瘤内生菌的研究甚少,因此!本研究通过分离和鉴定大豆根瘤内生细菌!研究其植物激素分泌情况和对大豆的促生效果!旨在为大豆专化型微生物肥料开发利用提供技术支持,&K材料与方法&;&K大豆根瘤采集大豆样地位于黑龙江省齐齐哈尔市黑土区,将大豆根系轻轻从土壤中分离出来!取附着在&"株大豆根系的根瘤!立即包在硫酸纸里!'c储存!备用,&;!K培养基配方酵母甘露醇"@g O#培养基"&P#$甘露醇&" S!酵母浸粉&S!U!Y_9'";$S!g S N9'";!S!T F\G";&S!琼脂!";"S!,Y值<;C M%;"(液体培养基不加琼脂&&!',牛肉膏蛋白胨"T i#培养基"&P#$琼脂!"S!牛肉膏$S!T F\G C S!蛋白胨&"S!,Y值%;"(液体培养基不加琼脂,铁载体"g U i#培养基"&P#$酪蛋白氨基酸$;"S!甘油&$;"E P!U!Y_9'!;$S!g S N9'-%Y!9";!S!琼脂!";"S!,Y值%;"(液体培养基不加琼脂,淀粉培养基"&P#$蛋白胨&"S!T F\G$S!牛肉膏$S!可溶性淀粉!S!琼脂&$M!"S&&#',油脂培养基"&P#$蛋白胨&"S!T F\G$S!牛肉膏$S!香油或花生油&"S!&;<L中性红水溶液&E P!琼脂&$M!"S!,Y值%;!&&#',蛋白胨水培养基"&P#$蛋白胨&"S!T F\G$S!,Y值%;<&&#',糖发酵培养基$蛋白胨水培养基&P!&;<L 溴甲酚紫乙醇溶液&M!E P!,Y值%;<!另配!"L乳糖和葡萄糖溶液各&"E P&&#',&;#K根瘤内生细菌的分离&;#;&K菌株筛选挑选个大%饱满%粉红色的&"个大豆根瘤置于试管内!用无菌水清洗#次!用质量分数!;$L 的Y S\G!表面消毒!E=2!再用无菌蒸馏水冲洗$次!并用无菌研磨机磨碎根瘤,为确保充分的表面消毒!取最后一次漂洗后的&""!P无菌蒸馏水!涂抹在@g O平板上!!C c培养'^后!没有发现细菌生长,用根瘤浸渍液在@g O培养基上划线!在!C c培养'^!根据菌落大小%形态和颜色分离出不同的菌落!反复划线纯化&&!',将纯化后的菌株接种于T i液体培养基!#"c!&!"]-E=2)&振荡培养过夜!&!"""f%离心!E=2后保留沉淀!)C"c冷藏备用,&;#;!K溶血试验将菌株点样接种于血平板培养基!置于#"c-##$&-孙秀娟!等/大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及其对大豆植株的促生效应Copyright©博看网. All Rights Reserved.恒温培养&C M!'*后!观察菌落周围有无溶血圈,&;#;#K&<N]8T O菌种鉴定将保存的细菌于牛肉膏蛋白胨液体培养基中活化!'*后!取&E P菌液!&!"""f%离心&E=2!倒掉上清液!用细菌基因组8T O提取试剂盒提取细菌8T O,选择细菌通用引物!%A"$o?O Z O Z[[[Z O[\\[Z Z\[\O Z?#o#和&'(!a"$o?Z Z[[O\\[[Z[[O\Z O\[[?#o#进行&<N]8T O序列的扩增,_\a扩增产物经&;"L琼脂糖凝胶电泳检测后!送至生工生物工程"长春#有限公司测序,获得测序结果后在T\i:数据库中进行序列比对,使用g D Z O$;"软件构建系统进化树,&;#;'K菌株生理生化特性测定淀粉水解试验$将灭菌淀粉培养基制成平板!把菌株接种在平板上!#%c培养!'*!观察菌株的生长情况!滴入少量卢戈氏碘液!旋转平板!使碘液均匀铺满平板,如菌苔周围出现无色透明圈!说明淀粉已被水解!为阳性!即产生胞外淀粉酶活力,油脂水解试验$将菌株接种在灭菌油脂培养基所制的固体平板上!#%c培养!'*!如出现红色斑点!说明脂肪水解!为阳性反应,糖发酵试验选乳糖和葡萄糖,将蛋白胨水培养基分装于试管!每管内放&个倒置的德汉氏小管!使充满液体,每管在无菌条件下分别加入!"L无菌糖溶液";$E P,将菌株接种在试管内!#%c培养!'M'C*!观察试管颜色变化!以及德汉氏小管中有无气泡!如黄色无气泡和黄色有气泡!为阳性&&#',&;'K菌株分泌激素和产铁载体能力测定&;';&K:O O分泌量测定采用分析纯:O O制备标准曲线!将!""!S-E P)&的:O O标准液梯度稀释为"%!$%$"%%$%&""%&!$%&$"和&%$!S-E P)&!采用NF G dH.>d=显色法测定吸光度"@$'"#&&'',标准曲线方程为8h";"&<$5b";""(<!J!h";((C$,将冻存的菌株接种到T i液体培养基中!培养!'*制作种子液,按&L的接种量将种子液分别接入含有!""E S-P)&色氨酸的液体T i培养基中!#"c!&!"]-E=2)&振荡培养'C*,根据标准曲线计算:O O分泌量,每组#个平行,&;';!K铁载体能力测定吸取&E P种子液接种于g U i液体培养基中!#"c!&!"]-E=2)&振荡培养'C*,将上清液与\O N检测液各#E P均匀混合!反应&*!<#" 2E处测定吸光值"@<#">#&&$',对照组为不接菌的g U i液体培养基!测定方法同上"@<#"]#!每组#个平行实验,按照以下公式计算铁载体活性"I#&&$',I h"@<#"])@<#">#-@<#"],"&#&;';#KZ O>分泌量测定将分析纯Z O>溶于%"L乙醇中!配制成&"" !S-E P)&的Z O>标准液!梯度稀释为"%&"%!"% #"%'"和$"!S-E P)&!取各浓度的Z O>溶液";$ E P!分别与';$E P(CL硫酸混匀并定容至!"E P!于'&!2E处测定吸光度"@'&!#,标准曲线方程为8h";"<"$5b";""#!J!h";(('%,按&L的接种量将种子液转接T i培养基中!#"c!&!"]-E=2)&振荡培养'C*,取";$E P 上清液测定菌株Z O>浓度!以确定各菌株最大Z O>分泌量&&<'!每组#个平行实验,&;$K植物促生长试验&;$;&K浸种促生试验将筛出的根瘤内生细菌发酵液接种于T i液体培养基中!#"c!&!"]-E=2)&培养至@<""h&!用";(L T F\G溶液分别稀释&"倍%!"倍和#"倍!以";(L T F\G溶液为对照,挑选大小一致的大豆种子置于底部铺!M#层滤纸的培养皿中!每个培养皿放<粒大豆种子!每个处理重复#次!共计#"颗,置于!%c恒温人工气候箱培养!&<*光照%C*黑暗,观察记录大豆发芽情况!直到连续#^无新的发芽种子出现!测量根长&&%',&;$;!K温室条件下的植物接种试验大豆种子首先用水洗净!放在体积分数%$L 乙醇中浸泡#E=2!再转至";&L次氯酸钠中浸泡!E=2!然后用无菌水冲洗<M&"次!将消毒好的种子播种到盛有灭菌蛭石的塑料盆中!#M'^后种子即发芽&&C',将根瘤内生细菌接种在T i培养基上活化!然后转接在T i液体培养基中!!C c!&!"]-E=2)&振荡培养'C*!用无菌";(LT F\G溶液将菌体浓度调至&f&"C\A X-E P)&,将大豆幼苗移栽到蛭石里!并在大豆根附近-'#$&-浙江农业学报K第#$卷K第%期Copyright©博看网. All Rights Reserved.接种&"E P 根瘤内生细菌混悬液!&周浇&次g N 营养液和菌液,将植株置于白天!$M #"c %夜间&$M !"c %每天光照C *的温室中培养,培养'"^后收获,以不接种根瘤内生细菌为全空白对照&&('!每处理设#次重复,每天随机调换花盆位置,&;<K 数据处理用N_NN !!;"软件对数据进行方差分析!并用8V26F 2法进行多重比较(采用Z ]F ,*_F ^_]=>E C;";!软件统计分析相关数据和制图,!K结果与分析!;&K根瘤内生菌的筛选与鉴定从大豆根瘤中共分离到&%个菌株!经&<N ]8T O序列分析!有&"株为芽孢杆菌属"Q $"')N )(/#!#株为巨大普里斯特氏菌属"G &'*/#'$#!其余'株分别为肠杆菌属"M .#*&1S $"#*&#%克雷伯氏菌属"U )*S /'*))$#%不动杆菌属"!"'.*#1S $"#*&#和农杆菌属"!%&1S $"#*&'(C #"图&#,溶血试验结果显示!有'株细菌的菌落周围产生了溶血圈!判断这'株菌株具有溶血性,通过&<N ]8T O 鉴定最终确定了&"株内生细菌!其中芽孢杆菌属$株"编号N&M N$#!其余$株菌分别为G &'*/#'$属"N<#%M .#*&1S $"#*&属"N%#%U )*S N /'*))$属"NC #%!"'.*#1S $"#*&属"N(#和!%&1S $"#*&'N (C 属"N&"#,&"个菌株的生理生化特性如表&所示!N&%N!%N#%N$和N<具有水解淀粉能力!说明$株菌株均产生淀粉酶(N'%N%%NC %N(和N&"具有水解图;<基于&<N ]8T O 序列的内生细菌进化树=)1>;K_*3G H S W 2W +=6+]W W H B W 2^H ,*3+=65F 6+W ]=F 5F >W ^H 2&<N ]8T O>W JVW 26W >-$#$&-孙秀娟!等/大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及其对大豆植株的促生效应Copyright ©博看网. All Rights Reserved.表;<内生细菌的部分生理生化特性,80#;K_*3>=H G H S=6F G F2^5=H6*W E=6F G6*F]F6+W]=>+=6>H B W2? ^H,*3+=65F6+W]=F菌株编号N+]F=2 T H/淀粉水解试验N+F]6**3^]H G3>=>+W>+油脂水解试验9=G*3^]H G3>=>+W>+乳糖发酵试验P F6+H>WB W]E W2+F+=H2+W>+葡萄糖发酵试验Z G V6H>WB W]E W2+F+=H2+W>+N&b)b bN!b)b bN#b)b bN')b)bN$b)b)N<b)))N%)b b bNC)b b bN()b)bN&")b b))b*表示阳性!))*表示阴性,)b*=>,H>=+=`W!))*=>2W S F+=`W/油脂能力!说明细胞外存在脂肪酶(N&%N!%N#% N$%N%%NC和N&"具有分解乳糖的能力(N&%N!% N#%N'%N%%NC和N(具有分解葡萄糖的能力,!;!K菌株分泌激素和产铁载体的能力由图!?O可知!根瘤内生细菌均具有分泌:O O的能力!其中NC分泌量最高!为&'%;$$E S-P)&(N'%N%和N&"也具有较高的:O O分泌量!分别为'&;('E S-P)&%&"";"!E S-P)&和<";'!E S-P)&!且经过多次传代后产:O O特性稳定,通过铁载体活性测定筛选出<个菌株产生铁载体(其中!N#的铁载体活性最高!为%";$%L(N&%N!% N'%N<和NC的铁载体活性分别为&;C(L%$&;<CL%!&;!'L%'(;%&L和';C'L"图!?i#,由图!?\可知!Z O>分泌量最高的为N&"菌株!达#(;#'E S-P)&!其余菌株分泌量在&';#C M#!;C& E S-P)&,!;#K植物促生试验图#?OM图#?D显示!浸种%^后有$个菌株在稀释#"倍时大豆的根最长!分别是N&"$;<<% 6E#%N!"%;$$"6E#%N$"(;<%$6E#%NC"C;&#"6E#和N&""<;!!"6E#,由图#?A%图#?Z可知!有!个菌株在稀释!"倍时大豆的根最长!分别是N#"<;'%$6E#和N("$;C##6E#,有#个菌株在稀释&"倍时大豆的根最长!分别是N'"$;"## 6E#%N<"<;(##6E#和N%"%;#<%6E#"图#?Y%图#?:%图#?7#,综上所述!筛选得到的&"个菌株均柱上无相同小写字母表示差异显著"G k";"$#,下同,8F+F H2+*W5F]>E F]dW^.=+*H V++*W>F E W G H.W]6F>W G W++W]=2^=6F+W^>=S2=B=6F2+^=B B W]W26W>F+G k";"$/[*W>F E W F>5W G H./图@<供试菌株分泌:O O Z O>和铁载体的能力=)1>@KO5=G=+3H B+*W+W>+W^>+]F=2>+H>W6]W+W:O O S=55W]? W G G=2F2^>=^W]H,*H]W>可以促进大豆幼苗根系发育,通过盆栽试验!进一步确认植物的生长促进特性!结果如图'所示,接种&"个菌株的大豆株高%根长%地上部鲜重%地下部鲜重%地上部干重均显著高于对照组!接种N&%N<和NC的大豆植株株高比对照组分别高#!L%&(L%!'L!接种N$的大豆根长比对照组显著增加#(L!接种N#%N(和N&"的大豆植株地上部鲜重分别比对照组显著增加(CL%C&L%C<L!接种N!%N'%N%和N&"的大豆植株地下部鲜重分别比对照组显著增加&#"L%&$%L%&!<L%&$&L!接种N&%N#%N'%N$%N(和N&"的大豆植株地上部干重分别比对照组显著提高C$L%(CL%(#L%%%L%((L和&!!,除接种N&%N<%N%%NC%N(的大豆幼苗地下部干重与-<#$&-浙江农业学报K第#$卷K第%期Copyright©博看网. All Rights Reserved.对照无显著差异外!接种其他菌株的大豆地下部干重均显著大于对照组!其中!接种N'的大豆植株地下部干重比对照组显著提高&''L ,除接种N<%NC 菌株的大豆茎粗与对照组差异不显著外!接种其他菌株的大豆茎粗均显著大于对照组!其中!接种N#%N'%N&"的大豆植株茎粗与对照相比显著增加!CL %#&L %#"L ,综上!如图'?A 所示!与对照组相比!加入根瘤内生菌的大豆各项指标都有所提高!说明菌株对大豆具有促生效果,#K讨论根瘤中同时定居着很多与根瘤菌不同的内生菌!其中非共生细菌也生活于根瘤中!但不引起植物病害!即根瘤内生细菌&!"',目前!豆科植物有&C""多种!在豆科植物根瘤中常见的内生细菌有假单胞菌属"G /*(A1C 1.$/#%肠杆菌属%芽孢杆菌属%克雷伯氏菌属%农杆菌属!由于所有这些属的物种在土壤中都很常见!因此!内生细菌可以看成是根际细菌的一个亚种群&!&)!!',本研究分离的&"株菌包括芽孢杆菌属%巨大普里斯特氏菌属%克雷伯氏菌属%肠杆菌属%农杆菌属和不动杆菌属!均不具有溶血性,芽孢杆菌由于其优良的抗菌%对植物种子发芽与根系生长的促进作用!能提高作物产量!已成为中国种植业中使用最普遍抗菌剂之一&!#)!'',克雷伯氏菌分布于植株的根部和土壤中!在长期进化和系统发育过程中与植物建立了紧密的合作关系!对植物的生长与代谢起间接促进作用&!$',克雷伯氏菌能够定殖在玉米植株内!为内生固氮菌!对幼苗期玉米具有显著的促生长作用&!<'!本研究通过溶血试验证明克雷伯氏菌属具生物安全性,豆科植物根瘤内生菌在体外表现出不同的植幼苗生长图#个为&个处理!从左至右依次是\U %稀释&"倍%!"倍和#"倍,[*W +*]W W >W W ^G =2S S ]H .+*,G H +>F ]W H 2W +]W F +E W 2+!B ]H EG W B ++H ]=S *+F ]W \U !^=G V+W ^&"+=E W >!!"+=E W >F 2^#"+=E W >/图A<内生细菌对大豆种子的促生作用=)1>A KZ ]H .+*,]H E H +=2S W B B W 6+H B W 2^H ,*3+=65F 6+W ]=F H 2>H 35W F 2>W W ^-%#$&-孙秀娟!等/大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及其对大豆植株的促生效应Copyright ©博看网. All Rights Reserved.A!综合能力评价,A!D`F G VF+=H2H B6H E,]W*W2>=`W F5=G=+3/图B<菌株对大豆植株促生影响与综合能力评价=)1>B KD B B W6+H B W2^H,*3+=65F6+W]=F H2S]H.+*,]H E H+=H2H B>H35W F2,G F2+>F2^6H E,]W*W2>=`W F5=G=+3W`F G VF+=H2物生长促进机制!包括植物激素的产生!如吲哚乙酸%固氮和磷酸盐溶解&!%',本研究获得的所有菌株都能够以色氨酸为前体合成:O O!同时分泌Z O>!并且超过一半的菌株能产生铁载体!对大豆植株的生长有不同程度的促进效果,赵晓妍等&!C'从大豆叶片中分离得到产:O O的内生菌菌株@8Q&'!该菌株可以促进小麦幼苗的生长,作为植物生命进程的开始!种子萌发在农业上很重要,用本试验筛选的内生细菌浸种处理大豆种子!可以明显促进大豆根的生长!说明筛选的菌株对大豆幼苗生长有较好的促进效果!但是不同浓度菌液和不同菌种对大豆种子的促生作用效果不同!有的菌液浓度反而抑制种子根的伸长!出现这种情况的原因可能是不同浓度内生细菌的代谢产物量不一样或者不同细菌的生长规律%特性不同!需进一步研究,内生菌与其宿主植物这种互利共生的关系!是在长期的协同进化过程中形成的!通过内生菌自身代谢产物来促进植物生长&!(',所筛选的&"株菌株均对大豆植株的株高%根长%茎粗和地上-C#$&-浙江农业学报K第#$卷K第%期Copyright©博看网. All Rights Reserved.地下部生物量具有较强的促生作用!可能是与菌株分泌:O O和Z O>等有密切关系,有研究表明!芽孢杆菌U\?&和g8&!?!具有产生:O O的能力!并且对大豆的株高和生物量有显著促生效果&#"'!这与本研究结果一致,从大豆中分离出的'"株芽孢杆菌中!巨大芽孢杆菌NT&"D&能够使豆芽长度提高'&L&#&',衡楠楠等&#!'将从大豆根瘤中分离的内生菌株N\O X>C接种大豆植株!不仅植株的株高%鲜重等指标显著提高!而且大豆植株产量比不接种也增产了!&;'L M!(;%L,丁玮&##'用(株泡桐根瘤内生细菌接种泡桐幼苗!结果显示!其中地下生长量平均提高&(;%L%苗高生长量平均提高!#;'L,e*F2S 等&#''分离鉴定的&种内生细菌高地芽孢杆菌对不同植物的生长有促进作用,何建清等&#$'筛选出的菌株Na&"?<能显著促进黑青稞株高%根长等的生长!可作为开发和推广黑青稞专用生物肥料的优良菌种,本研究结果表明!从大豆根瘤中分离到的内生细菌在体外具有植物生长促进特性!是一种很好的微生物肥料候选材料,综上所述!本文从大豆根瘤中筛选了&%株根瘤内生细菌!通过&<N]8T O和溶血试验最终确定了&"株根瘤内生细菌!它们均产生:O O和Z O>!有<株产生铁载体(这&"株菌株对大豆的萌发!以及大豆植株的株高%根长等有促进作用,参考文献 H#"#*#+$#&&&'K杨红旗!郝仰坤/我国大豆产业回顾%现状与发展对策&7'/广东农业科学!!"&"!#%"&#$&CC)&(&/@O T ZYn!Y O9@U/Y=>+H]=6F G]W`=W.!6V]]W2+>=+VF+=H2F2^^W`W G H,E W2+6H V2+W]E W F>V]WH B\*=2W>W>H35W F2&7'/H($.%A1.%!%&'"()#(&$)4"'*."*/!!"&"!#%"&#$&CC)&(&/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&!'K黄国东!宋清晖!王晓慧!等/含枯草芽孢杆菌肥料对大豆叶片光合作用及土壤酶活性的影响&7'/土壤与作物!!"!&!&""&#$(()&"%/Y X O T ZZ8!N9T ZnY!R O T ZQY!W+F G/D B B W6+>H B B W]?+=G=0W]>6H2+F=2=2S Q$"'))(//(S#')'/H2,*H+H>32+*W>=>H B>H35W F2G W F`W>F2^>H=G W203E W F6+=`=+=W>&7'/41')/$.A9&1O/!!"!&!&""&#$(()&"%/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&#'K柏琼芝!肖石江!王晓瑞!等/化肥减量配施生物有机肥对秋马铃薯产量的影响&7'/土壤与作物!!"&(!C"!#$&$C)&<$/i O:ne!Q:O9N7!R O T ZQa!W+F G/D B B W6+H B]W^V6W^6*W E=6F G B W]+=G=0W],G V>5=H G H S=6F G B W]+=G=0W]H2F V+VE2,H+F+H3=W G^&7'/41')/$.A9&1O/!!"&(!C"!#$&$C)&<$/"=2\*=?2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&''K刘江苇!刘颖!徐婷!等/水稻内生菌研究进展及展望&7'/生命科学研究!!"!&!!$"##$!#!)!#(/P:X7R!P:X@!Q X[!W+F G/O^`F26W>F2^,]H>,W6+>H B]=6W W2^H,*3+W>&7'/V'2*4"'*."*J*/*$&",!!"!&!!$"##$!#!)!#(/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&$'Kj O a8Y O a O7X P ON!NU eO!U a:NY T O_a O NO8j X a X U9T?8ON N!W+F G/_G F2+S]H.+*,]H E H+=2S W2^H,*3+W>F2^+*W=]=2+W]?F6+=H2.=+*,G F2+>+H F G G W`=F+W F5=H+=6>+]W>>&7'/9(&&*.#Q'1#*",N.1)1%8!!"&%!<"##$!$!)!<#/&<'K_D:QO!a O g v a D e?i O Y D T Og Y!j D P w e n X D eD!W+F G/i F6+W]=F G F>>H6=F+=H2>.=+*G W S VE W>&7'/9&'#'"$)J*7'*R/'.G)$.#4"'*."*/!!"&$!#'"&-!-##$&%)'!/&%'Ke Y O9PA!Q X@7!NX Ta!W+F G/:^W2+=B=6F+=H2F2^6*F]F6?+W]=0F+=H2H B+*W W2^H,*3+=6,G F2+S]H.+*,]H E,+W]Q$"'))(/9*N&*(/>+]F=2E J!#=>H G F+W^B]H E41O,1&$O G H,W6V]H=^W>]H H+2H^?VG W>&7'/Q&$:')'$.L1(&.$)123'"&1S'1)1%8!!"&&!'!"!#$$<%)$%$/&C'Ke Y O9PA!8D T ZeN!@O T ZR n!W+F G/8=`W]>W]*=0H5=FF>>H6=F+W^.=+*41O,1&$$)1O*"(&1'A*/S]H.2=2^=B B W]W2+]W S=H2>H B P H W>>_G F+W F V=2\*=2F&7'/48/#*C$#'"$.A!O O)'*A3'"&1S'N1)1%8!!"&"!##"C#$'<C)'%%/&('K赵龙飞/我国大豆根瘤内生菌资源多样性研究&7'/广东农业科学!!"&'!'&"(#$&$)&(/e Y O9P A/a W>W F]6*H2]W>H V]6W^=`W]>=+3H B>H35W F2&H)8"'.*C$5"P/#g W]]'2H^VG W W2^H,*3+W>=2\*=2F&7'/H($.%A1.%!%&'"()#(&$)4"'*."*/!!"&'!'&"(#$&$)&(/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&&"'K钟宇舟!余秀梅!陈强!等/四川盆地大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及促生效果&7'/应用与环境生物学报!!"&%!!#"&#$'<)$#/e Y9T Z@e!@XQg!\Y D Tn!W+F G/:>H G F+=H2!=^W2+=B=?6F+=H2F2^,G F2+S]H.+*,]H E H+=H2F5=G=+3W`F G VF+=H2H B+*W W2?^H,*3+=65F6+W]=F=>H G F+W^B]H E>H35W F2]H H+2H^VG W=2N=6*VF2i F>=2&7'/9,'.*/*L1(&.$)12!O O)'*A$.A M.7'&1.C*.#$)Q'N1)1%8!!"&%!!#"&#$'<)$#/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5?>+]F6+#&&&'K赵龙飞!徐亚军!曹冬建!等/溶磷性大豆根瘤内生菌的筛选%抗性及系统发育和促生&7'/生态学报!!"&$!#$"&##$''!$)''#$/e Y O9P A!Q X@7!\O987!W+F G/N6]W W2=2S!]W>=>+F26W!,*3G H S W23F2^S]H.+*,]H E H+=2SH B,*H>,*H]V>>H G V5=G=0=2S5F6+W]=F=>H G F+W^B]H E>H35W F2]H H+2H^VG W>&7'/!"#$M"1)1%'N"$4'.'"$!!"&$!#$"&##$''!$)''#$/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&&!'KA D a\Y:\Y:T![9X U O i a:R!i9X P O a D NN g!W+F G/:?>H G F+=H2!=^W2+=B=6F+=H2F2^,G F2+S]H.+*,]H E H+=H2F5=G=+3H BW2^H,*3+=65F6+W]=F F>>H6=F+W^.=+*G V,=2W]H H+2H^VG W S]H.2-(#$&-孙秀娟!等/大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及其对大豆植株的促生效应Copyright©博看网. All Rights Reserved.=2[V2=>=F2>H=G&7'/!&",'7*/123'"&1S'1)1%8!!"&(!!"&"&"#$&###)&#'(/&&#'K黄秀梨!辛明秀/微生物学实验指导&g'/!版/北京$高等教育出版社!!""C/&&''K李培根!要雅倩!宋吉祥!等/马铃薯根际产:O O芽孢杆菌的分离鉴定及促生效果研究&7'/生物技术通报!!"!"!#<"(#$&"()&&</P:_Z!@O9@n!N9T Z7Q!W+F G/:>H G F+=H2F2^=^W2+=B=?6F+=H2H B:O O?,]H^V6=2S Q$"'))(/>,H2,H+F+H]*=0H>,*W]W F2^=+>S]H.+*?,]H E H+=2S W B B W6+&7'/Q'1#*",.1)1%8Q())*#'.!!"!"!#<"(#$&"()&&</"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5?>+]F6+#&&$'K徐伟慧!吕智航!史一然!等/西瓜复合根际促生菌剂构建与促生效应研究&7'/浙江农业学报!!"&C!#""$#$%%C)%C</Q XR Y!P@Xe Y!NY:@a!W+F G/D>+F5G=>*E W2+H B6H E?,G W4S]H.+*?,]H E H+=2S]*=0H5F6+W]=FB H].F+W]E W G H2F2^,]H?E H+=2S W B B W6+H2.F+W]E W G H2]H H+>&7'/!"#$!%&'"()#(&$*+,*N-'$.%*./'/!!"&C!#""$#$%%C)%C</"=2\*=2W>W.=+*D2S?G=>*F5>+]F6+#&&<'K徐伟慧!刘泽平!符春敏!等/根际芽孢杆菌对水稻根系的促生效应&7'/河南农业科学!!"&C!'%"'#$$()<#/Q XR Y!P:Xe_!A X\g!W+F G/_]H E H+=2S W B B W6+H B Q$N"'))(/]*=0H5F6+W]=F H2]=6W]H H+&7'/L1(&.$)12[*.$.!%&'N"()#(&$)4"'*."*/!!"&C!'%"'#$$()<#/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&&%'K陈峥!刘波!邓文琼!等/&'株芽孢杆菌菌株的分子鉴定及其促生机理分析&7'/热带作物学报!!"!&!'!"##$%C()%((/\Y D Te!P:Xi!8D T ZR n!W+F G/g H G W6VG F]=^W2+=B=6F?+=H2F2^S]H.+*,]H E H+=2S E W6*F2=>E>H B&'Q$"'))(/>+]F=2>&7'/9,'.*/*L1(&.$)12D&1O'"$)9&1O/!!"!&!'!"##$%C()%((/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&&C'K薛晓昀!冯瑞华!关大伟!等/大豆根瘤菌与促生菌复合系筛选及机理研究&7'/大豆科学!!"&&!#""'#$<&#)<!"/KQ X DQ@!A D T ZaY!Z X O T8R!W+F G/N6]W W2=2S F2^F?2F G3>=>B H]W B B=6=W2+6H?=2H6VG F+=H2>3>+W E H B>H35W F2]*=0H5=FF2^,G F2+S]H.+*?,]H E H+=2S]*=0H5F6+W]=F&7'/418S*$.4"'N*."*!!"&&!#""'#$<&#)<!"/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&&('K李晶!蔡少丽!林金新/高效紫云英根瘤菌的选育&7'/南方农业!!"&C!&!"&C#$&C')&C$/P:7!\O:N P!P:T7Q/i]W W^=2S H B]*=0H5=F=>H G F+W^B]H E\*=2W>W E=G d`W+6*.=+**=S*W B B=6=W263&7'/41(#,9,'.$!%N&'"()#(&*!!"&C!&!"&C#$&C')&C$/"=2\*=2W>W#&!"'K邱并生/根瘤内生细菌&7'/微生物学通报!!"&#!'""##$$''/n:XiN/T H^VG W W2^H,*3+=65F6+W]=F&7'/3'"&1S'1)1%89,'N.$!!"&#!'""##$$''/"=2\*=2W>W#&!&'K张淑婷!周利华!赵文卓/植物内生细菌对植物健康的作用&7'/植物医生!!"!"!##"&#$<)&&/e Y O T ZN[!e Y9XP Y!e Y O9R e/[*W]H G W H B,G F2+W2?^H,*3+W>=2,G F2+*W F G+*&7'/G)$.#@1"#1&!!"!"!##"&#$<)&&/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&!!'K刘杰!汪恩涛!陈文新/豆科植物根瘤内生细菌的发现及其研究进展&7'/微生物学报!!"&&!$&"C#$&""&)&""</KP:X7!R O T Z D[!\Y D T R Q/8=>6H`W]3F2^]W>W F]6*,]H S]W>>H B W2^H,*3+=65F6+W]=F=2+*W]H H+2H^VG W>H B G W S?VE W>$F]W`=W.&7'/!"#$3'"&1S'1)1%'"$4'.'"$!!"&&!$&"C#$&""&)&""</"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&!#'K张翠绵!贾楠!马佳!等/番茄根际多功能益生芽孢杆菌的筛选与鉴定&7'/河北农业科学!!"&(!!#"'#$'%)$!/Ke Y O T Z\g!7:OT!g O7!W+F G/N6]W W2=2S F2^=^W2+=B=6F?+=H2H B E VG+=B V26+=H2F G5W2W B=6=F G Q$"'))(/=2+H E F+H]*=0H?>,*W]W>H=G&7'/L1(&.$)12[*S*'!%&'"()#(&$)4"'*."*/!!"&(!!#"'#$'%)$!/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&!''Kg:P7O U9j:\8!g O a:T U9j:\7![O g:T8x:\Z!W+F G/D B B W6+H B,G F2+S]H.+*,]HE H+=2S Q$"'))(/>,,/H2S W]E=2F+=H2F2^>W W^G=2S S]H.+*H B>H35W F2&7'/V*%(C*J*/*$&",N$.0.N#*&.$#'1.$)L1(&.$)!!"!!!'$"'#$'C%)'(&/&!$'K李梦娇!彭晟!徐绍忠!等/克雷伯氏菌在农业与环境治理上的应用&7'/生物技术进展!!"&'!'"<#$'&$)'!"/P:g7!_D T ZN!Q XN e!W+F G/O,,G=6F+=H2H B U)*S/'*))$>,,/=2F S]=6VG+V]W F2^W2`=]H2E W2+F G E F2F S W E W2+&7'/9(&N&*.#Q'1#*",.1)1%8!!"&'!'"<#$'&$)'!"/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&!<'K韩梅!罗培宇!肖亦农!等/玉米内生固氮菌的分离鉴定及其促生长作用研究&7'/沈阳农业大学学报!!"&"!'&"&#$(')(%/Y O Tg!P X9_@!Q:O9@T!W+F G/:>H G F+=H2H B W2^H,*3+?=6T!?B=4=2S5F6+W]=F H B6H]2]=6W F2^+*W=]B V26+=H2B H],]H E H?+=2S S]H.+*&7'/L1(&.$)124,*.8$.%!%&'"()#(&$)6.'7*&/'#8!!"&"!'&"&#$(')(%/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&!%'KZ O a\v O?A a O:P D_!\O a a9P!a9i P D89g!W+F G/J,'N :1S'(C,]H E H+W>2H2?G W S VE W>S]H.+*F2^JVF G=+3=2>W`W]F G,]H^V6+=H2>+W,>$+H.F]^>F5=H B W]+=G=0F+=H2H B W^=5G W]F.`W S W?+F5G W>*W F G+*3B H]*VE F2>&7'/G V14?.*!!"&!!%"$#$W#C&!!/K&!C'K赵晓妍!曹越!董芮萌!等/一株野生大豆内生细菌@8Q&'菌株的分离%鉴定及促生效应研究&7'/大豆科学!!"!&!'""!#$!!')!#&/e Y O9Q@!\O9@!89T Zag!W+F G/:>H G F+=H2!=^W2+=B=?6F+=H2F2^S]H.+*,]H E H+=2S W B B W6+H B F2W2^H,*3+=65F6+W]=F@8Q&'=2.=G^>H35W F2&7'/418S*$.4"'*."*!!"!&!'""!#$!!')!#&/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&!('K丁文珺!王珊珊!任婧祺!等/植物内生菌研究进展&7'/生物技术进展!!"&$!$"<#$'!$)'!C/-"'$&-浙江农业学报K第#$卷K第%期Copyright©博看网. 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番茄青枯病生物防治研究进展
番茄青枯病生物防治研究进展陈志龙;陈杰;许建平;张永春【摘要】番茄青枯病的防治是农业生产上面临的一大难题,该病在番茄生产上造成了巨大的经济损失.本文介绍了近年来在番茄青枯病生物防治方面所取得的一些研究成果,并对生物防治存在的相关问题及应用前景进行了讨论.【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2013(041)008【总页数】4页(P131-134)【关键词】番茄青枯病;青枯菌;生物防治;研究进展【作者】陈志龙;陈杰;许建平;张永春【作者单位】江苏省耕地质量保护站,江苏南京210013;江苏省农业科学院农业资源与环境研究所/农业部江苏耕地保育科学观测实验站,江苏南京210014;江苏省农业科学院农业资源与环境研究所/农业部江苏耕地保育科学观测实验站,江苏南京210014;江苏省农业科学院农业资源与环境研究所/农业部江苏耕地保育科学观测实验站,江苏南京210014【正文语种】中文【中图分类】S476随着番茄栽培面积的不断扩大，栽培品种单一，栽培模式和栽培管理技术不当，番茄病虫害也越来越严重，特别是在保护地栽培的番茄，病虫害更为严重。
番茄青枯病是其中一种非常严重的病害，在我国南方各省(市)番茄种植区域均有严重发生。
该病害是由茄科劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum，简称青枯菌)引起的一种世界范围的毁灭性土传细菌病害，在高温、高湿的条件下容易暴发，广泛分布于热带、亚热带和温带地区[1]，甚至在部分低温地区同样发现青枯菌的存在，给全球农作物生产带来了极大的威胁[2]。
该病害一旦发生就难以控制，往往造成作物大面积萎蔫死亡甚至绝收，导致番茄产量严重下降，严重制约着番茄产业的发展和经济效益的提高。
防治番茄青枯病的常用策略包括化学农药、土壤改良、抗病品种、嫁接与轮作等，但效果均不稳定[3]。
此外，过量施用化学农药带来的环境污染和食品安全问题，引起了人们的广泛关注和担忧。
因此，必须发展环境友好型的防病措施(如生物防治)，实现减少农药用量、抑制病害发展、恢复土壤健康和提高食品安全的多重目标。
珊瑚菜内生真菌的分离鉴定与抑菌活性
珊瑚菜内生真菌的分离鉴定与抑菌活性侯晓强;明月梅;乔洁;付亚娟;刘平;贾敏【摘要】为探明珊瑚菜内生真菌的抑菌活性,采用植物组织分离法和分子鉴定法对珊瑚菜内生真菌进行分离和鉴定,以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色假丝酵母为指示菌株,研究其抑菌活性.结果表明:分离得到珊瑚菜内生真菌68株,其中,22个菌株具有抑菌活性,占内生真菌总数的32.35％,分别对金黄色葡萄球菌(17株)、大肠杆菌(6株)和白色假丝酵母菌(3株)具有抑制作用.经分子鉴定,此22株真菌分属5目7科8属11种.珊瑚菜植物中存在多种抑菌活性内生真菌,为新型抑菌活性物质的发现奠定了基础.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2015(043)009【总页数】4页(P157-160)【关键词】珊瑚菜;内生真菌;抑菌活性;真菌鉴定【作者】侯晓强;明月梅;乔洁;付亚娟;刘平;贾敏【作者单位】廊坊师范学院,河北廊坊065000;河北省高校食药用菌应用技术研发中心,河北廊坊065000;廊坊师范学院,河北廊坊065000;廊坊师范学院,河北廊坊065000;河北省高校食药用菌应用技术研发中心,河北廊坊065000;廊坊师范学院,河北廊坊065000;河北省高校食药用菌应用技术研发中心,河北廊坊065000;廊坊师范学院,河北廊坊065000;廊坊师范学院,河北廊坊065000【正文语种】中文【中图分类】S567.23珊瑚菜(Glehnia littoralis Fr. Schmidt ex Miq.)为伞形科植物，主要分布于山东、辽宁、河北、江苏等地，生长于沿海沙地。
其干燥根为传统中药材北沙参，主要用于治疗肺热燥咳，劳嗽痰血，胃阴不足，热病津伤，咽干口渴等病症[1]。
由于珊瑚菜的生境遭受破坏，野生资源十分稀少。
1999年，珊瑚菜被列为国家Ⅱ级重点保护野生植物[2]。
近年来，珊瑚菜引种、栽培技术日趋成熟，河北省安国市、山东省莱阳市已成为北沙参药材的主产地。
药用植物内生真菌的研究进展
谢海伟，冯嘉琪，付晓晴，等．药用植物内生真菌的研究进展［Ｊ］．江苏农业科学，２０２０，４８（１４）：１－６．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２０．１４．００１药用植物内生真菌的研究进展谢海伟，冯嘉琪，付晓晴，江坤生，陈佳茹（惠州学院生命科学学院，广东惠州５１６００７） 摘要：植物内生真菌广泛存在于药用植物体内，具有丰富的生物多样性，对寄主植物有着积极的作用，内生真菌的次生代谢产物有着抗肿瘤、抗氧化、抗菌等活性，在医药、农业、食品等行业有着巨大的应用前景。
本文综述了近年来药用植物内生真菌的研究进展，在药用植物内生真菌的分离筛选技术、检测方法、鉴定技术等方面进行阐述，在药用植物内生真菌的种属多样性、代谢产物生物多样性方面进行分析；对药用植物内生真菌在医药行业和农业中的应用等进行总结，并对现今药用植物内生真菌的相关研究存在的问题进行分析，并对内生真菌的未来应用提出展望。
关键词：药用植物；内生真菌；分离筛选；多样性；应用 中图分类号：Ｑ９４９．９５；Ｓ１８２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－１３０２（２０２０）１４－０００１－０５收稿日期：２０１９－０７－２４基金项目：广东省级大学生创新创业训练计划（编号：２０１８１０５７７０５３、２０１８１０５７７００７）；广东省高校特色创新项目（编号：２０１７ＫＴＳＣＸ１７２）；惠州学院教授／博士科研启动经费（编号：２０１８ＪＢ００２）。
作者简介：谢海伟（１９７８—），男，吉林桦甸人，博士，教授，主要从事微生物、抗菌肽研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉｅｈａｉｗｅｉ３２４＠１６３．ｃｏｍ。
药用植物内生真菌是天然药物的重要组成部分，其活性代谢产物丰富多样，包括各种结构类型独特、具有潜在应用前景的活性物质，已成为发现新高效、新颖、低毒的天然活性物质的重要资源。
目前发现内生真菌的种类多达１００万种［１］。
目前的主要研究集中于宿主植物与内生真菌共生机制和内生真菌天然代谢产物的功能关系等方面，植物内生真菌的次级代谢产物具有抗氧化性、抑制病原微生物、抗肿瘤、抗虫等功能，能被广泛应用于医药、农业、环境保护等方面。
丹参内生细菌的抑菌活性研究
丹参内生细菌的抑菌活性研究代跃厅;韩巨才;刘慧平【摘要】DS-1是从丹参叶片中筛选出的一株细菌,为研究其对病原真菌的抑菌效果,本实验采用平板对峙法和生长速率法测定了DS-1菌株及其发酵液对梨黑斑病菌、番茄早疫病菌、小麦赤霉病菌等8种病原真菌的抑菌活性.结果表明DS-1对这8种病原菌都有很好的抑制作用,其中对梨黑斑病菌的抑菌率达到了90.57％;过滤处理的发酵液对病原菌的抑制率最高达到83.87％,但经过高温处理的发酵液活性出现不同程度的下降.【期刊名称】《山西农业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2014(034)004【总页数】3页(P325-327)【关键词】丹参;内生细菌;抑菌活性【作者】代跃厅;韩巨才;刘慧平【作者单位】山西农业大学农学院,山西太谷030801;山西农业大学农学院,山西太谷030801;山西农业大学农学院,山西太谷030801【正文语种】中文【中图分类】S43植物病害是农业生产的大敌，使粮食产量遭受了严重的损失，据联合国粮农组织（FAO）统计，每年因植物病害造成的平均损失为总产量的10%～15%［1］。
其中80%以上的植物病害则是由真菌引起的。
真菌病害是阻碍植物生长、影响作物产量的主要因素［2］，控制真菌病害对于提高农作物产量极为重要。
长期以来植物病害主要以化学药剂来防治，一方面容易造成病原菌抗药性的产生，增加防治成本，另一方面容易给环境造成污染。
因此，符合环保、健康、持续发展理念的高效、低毒、低残留、与环境相容的农药的开发就成为当今农药研究的主题。
植物内生细菌是一个多样性十分丰富的生物类群，在植物内生细菌中，有的是对植物病原菌产生拮抗而保护植物免受病原菌侵害的卫士，有的可能对植物某些活性成分的形成具有重要的作用，有的可能产生与寄主植物类似的活性成分，并且具有对人、畜、农作物和环境安全等特点。
因此，利用生防细菌防治植物病害的这一系列优点，已经成为国内外学者研究的重要方向［3，4］。
植物内生菌的筛选及其抗性测定
目录
植物内生菌的筛选 确定活性菌株 防病促生 内生菌扩展研究
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实验大致方向
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1.1、拮抗菌初筛
平板对峙法：致病菌用打孔器打成 4mm 的 菌饼培养于平板中央，距其 2cm 处四周以 十字交叉法接种于培养基上培养 7d 的供试 内生菌，28±1 ℃下培养，定期观察是否产 生抑菌圈及测量抑菌圈的大小，初步选择 具有抑菌活性的菌株。
3.1.2、植株生理指标测量：将菌株的 SNB 发酵液拌土，每克土接种量约为 108cfu·g-1，采取花盆育苗，第 1 片真叶 展平后进行移栽，30d 后重复浇灌发酵菌 液。60d 后开始取样，测定植株的地上部 株高以及植物的鲜重和干重等，分析待测 菌对盆栽青稞的促生效果。
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3.1.3、叶绿素含量测定：取 0.1g 新鲜青稞 绿色叶片，在无菌研钵中剪碎，加入少量 石英沙及 0.5mL 丙酮进行研磨，后再加 10mL 80%丙酮继续研磨。过滤提取液用 80%丙酮 25mL 定容。CK：80%丙酮溶液， 分别在 645、652、663 和 470nm 时的光 密度，计算叶绿素 a、b 和胡萝卜素的浓度 （mg·L-1）以及叶绿体色素含量。
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1.2、复筛拮抗菌
具体步骤：对初筛后的优良内生菌，用打孔器打成 4mm 菌饼，将 3 块接种于 150ml 的液体培养基内，28℃， 180r/min 培养 60h，后于冷冻离心机上 8000r/min 离心 20min，上清液既为待测发酵液。将上述处理后的内生菌 发酵液 3ml 与 20ml 的培养基充分摇匀混合制平板，待培 养基冷却后在平板中央接种直径为 4mm 各植物致病菌菌 块，以加灭菌水的 PDA 培养基为对照。试验设 3次重复， 28℃暗培养 3d，观察测量并记录菌落直径。记录结果并 计算抑制率。
11种植物提取物对4种病原细菌的抑菌活性筛选
11种植物提取物对4种病原细菌的抑菌活性筛选植物源杀菌剂具有选择性高、环境友好、对非靶标生物安全、低毒、低残留等优点，从植物中寻找抑菌活性物质，是研发新型杀菌剂的热点之一。
目前，中国开发与应用的植物源杀菌剂主要有苦参碱、黄岑苷、小檗碱、丁子香酚、香芹酚、儿茶素、大蒜素、乙蒜素、大黄素甲醚等。
但前述产品多集中于对植物真菌病害的防治，对植物源杀细菌剂的研究大多侧重于食品污染菌的控制，且大多数还处于室内筛选阶段。
魏希颖等研究发现泡桐花提取液对金黄色葡萄球菌有很强的抑制作用。
叶舟测定了木麻黄（Casuarina equisetifolia Forst）小枝提取液的抑菌活性，发现对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌表现出较强的抑制活性。
崔彦等的研究证明五倍子、丁香、地榆对黄瓜细菌角斑病菌表现出显著的抑制作用，其中五倍子提取物的活體防效可达60%，具有一定的开发潜力。
李玉玲发现竹焦油对甘蓝黑腐病菌、番茄细菌性斑点病菌、茄青枯病菌等多种供试细菌都有不同程度的抑制活性。
为了获得对植物细菌病害有广泛抑菌谱的植物源物质，本研究选取已报道过的具有广泛抑菌活性的11种植物提取物，对魔芋软腐病菌、猕猴桃溃疡病菌、核桃黑斑病菌、白菜软腐病菌4种常见的病原细菌进行室内抑菌活性筛选，旨在为新型植物源杀细菌剂的开发研究提供线索。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 供试菌种魔芋软腐病菌（Erwinia carotovora pv. carotovora）、猕猴桃溃疡病菌（Pseudomonas syringae pv. actinidiae）、白菜软腐病菌（Erwinia carotorora）均由西北农林科技大学无公害农药研究服务中心提供；核桃细菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris pv. juglandis）由西北农林科技大学林学院提供。
1.1.2 供试植物源物质及试剂大黄提取物（其中大黄素含量为0.30%）、博落回提取物（其中血根碱含量为0.57%）、狼毒提取物（其中狼毒素含量为1.90%）、皂荚提取物（其中皂荚素含量为6.90%）、苦参提取物（其中苦参碱含量为2.15%）均由山西德威生化有限公司提供。
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具有抑菌促生作用的植物内生细菌的筛选 !
" 邱思鑫+， ! 何 红, ! 阮宏椿+ ! 关 雄+ ! 胡方平+!!
&" )* 供试植物
辣椒离体果疫病试验品种为湖南湘研的青皮尖椒 4$+#&2 "’ $//""’ +" ,-." 1(/5"’， 用于促生作用测定番茄品种为西 安三星种苗有限公司的厚皮番茄 6*-(+.%#&-"’ .#-"1./3"’ ##$" 4"13"’ ,-." 7"15$%."
&" %* 拮抗能力的测定
)* 结果与分析
)" &* 拮抗病原菌的内生细菌的筛选
从 &’( 株植物体内分离筛选的对黄瓜枯萎或番茄青枯病 菌有拮抗作用的细菌中筛选出 &/ 株对辣椒疫病菌有较强抑制 活性 的 菌 株 （ 表 &） ， 三 明 治 法 测 得 其 抑 菌 率 为 %)" (@ B /6" %@ ， 其中以 HA) 菌株的效果最好， 抑菌率为 /6" %@ ， 显著 此 &/ 株生 地高于其余菌株" 对黄瓜枯萎病菌的拮抗测定表明， 防菌对黄瓜枯萎病菌也有较好的拮抗作用， 其抑菌率达55" 8@ B (’" :@ " 相关性分析表明， 生防菌对辣椒疫病菌和黄瓜枯萎 病菌拮抗作用有明显的相关性 （ % O :" 568 ； %:" :6， ， 除 &8 O :" 56’ ） 5 号、 &( 号和 HKP& 等少数几个菌株外对疫病菌拮抗作用强的 菌对黄瓜枯萎病菌也有较好的抑制效果" 从表 & 中可知， H+’ 、 ) 号、 &% 号、 ): 号、 HKP) 、 QR+& 、 HA) 菌株对黄瓜枯萎病菌、 辣椒 疫病菌以及番茄青枯病菌均有拮抗作用，说明自然植物体内 存在一些对病原菌具有广谱拮抗作用的细菌， 这对植物病害生 物防治具有重要意义"
［+］ 理想 6 近年来研究表明， 植物体内存在着大量的对植物病害
用的植物土传病害、 维管束病害和系统性病害的防治更显示其
［"］ 独特的优势 6 这些内生细菌定殖于植物体内， 不易受外界环
境的影响， 可长期持续作用， 而且许多内生细菌具有固氮、 促
［" ’ $］ 生、 抗旱等生物功能， 具有良好开发利用前景 6 目前已从水
（ + 福建农林大学植保学院农药与化学生物学教育部重点实验室! 福州! ,%###" ） （ " 福建省农科院蔬菜研究中心! 福州! ,%##+, ） （ , 湛江海洋大学农学院! 广东湛江! %"$#-- ）
!
摘! 要! 从 +&- 株分离自茄科作物体内的对黄瓜枯萎病菌或番茄青枯病菌有拮抗作用的细菌中， 筛选出 +( 株对辣椒 疫病菌有较好拮抗作用的菌株， 其中 " 号、 +, 号、 "# 号、 ./& 、 .01" 、 .2" 和 34/+ 5 个菌株对以上 , 种病原菌都有一定 "" 号、 ./& 、 .2+ 、 .2" 和 47/- 共 & 株对番茄有较好促生作用， 的拮抗作用6 从拮抗辣椒疫病菌的菌株中筛选出 "# 号、 防病作用最佳的 .2" 菌株菌 对辣椒采后果实疫病有一定控制效果， 且能进入番茄和辣椒体内的菌株6 试验结果表明， $ ’ +# 8 防治辣椒采后果实疫病的效果达 %%6 %&9 ’ +##9 ； 促生作用最佳的 .2+ 菌株可使番 液喷雾处理后接种病菌， 干重增长 &&6 "%9 6 经鉴定， & 株有抑菌、 促生的内生细菌均为芽孢杆菌 （ !"#$%%&’ :;6 ） ， 其中 茄苗鲜重增长 +#%6 -$9 ， 47/- 和 "" 号菌株鉴定为枯草芽孢杆菌 （ !( ’&)*$%$’） 6 表% 参关键词! 内生细菌；促生作用；抑菌作用；筛选 #$#! 1$,&
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1789:;<9! F>@STSS@ >:BUNTS: >@H>V>T>@C <6-*/26*6/0" #"2’$#$ WSXS :GXSS@S8 BIT YXBZ +&- >:BUNTS:，WH>GH S?;XS::S8 THS N@TNCB* @>:Z NCN>@:T THS CXBWTH BY =&’"0$&7 /F-’2/0&7 Y6 :;( #&#&7,0$4&7 BX C"%’*/4$" ’/%"4"#,"0&7( EZB@C THSZ，:S[S@ >:BUNTS:， ./& ， "， +, ， "# ，.01" ， .2" N@8 34/+ GBIU8 >@H>V>T THS CXBWTH BY THS THXSS ;NTHBCS@:， WH>US :>? >:BUNTS: "# ， "" ， ./& ， .2+ ， .2" N@8 47/- GBIU8 U>[S >@ GN;:>GIZ N@8 TBZNTB，N@8 ;XBZBTS THS CXBWTH BY TBZNTB N@8 GB@TXBU THS YXI>T ;S;;SX ;H\TB;HTHBXN VU>CHT BY GN;:>GIZ6 .HS :TI8\ >@8>GNTS8 THNT GB@TXBU SYY>GNG\ BY >:BUNTS .2" TB THS ;S;;SX YXI>T ;H\TB;HTHBXN VU>CHT WN: %%6 %&9 ’ +##9 WHS@ THS ;NTHBCS@: WSXS >@BGIUNTS8 NYTSX $ ’ +$ 8N\:6 <:BUNTS .2+，:SS8 8>;;>@C W>TH THS VNGTSX>NU :I:;S@:>B@，GBIU8 >Z;XB[S THS YXS:H WS>CHT N@8 8X\ WS>CHT BY TBZNTB]: :SS8U>@C: V\ +#%6 -$9 N@8 &&6 "%9 XS:;SGT>[SU\ NT THS +" TH 8N\ NYTSX :SS8* U>@C: SZSXCS@GS6 .HS :>? S@8B;H\T>G VNGTSX>NU >:BUNTS: THNT GBIU8 >@H>V>T THS CXBWTH BY ;NTHBCS@: N@8 ;XBZBTS THS CXBWTH BY TB* ZNTB WSXS >8S@T>Y>S8 N: !"#$%%&’ :;6 N@8 TWB BY THSZ N: !( ’&)*$%$’( .NV % ，DSY =>?@A:B8! S@8B;H\T>G VNGTSX>N；;UN@T CXBWTH ;XBZBT>@C；N@T>;NTHBCS@；:SUSGT>B@ #$#! 1$,& 目前化学农药 ! ! 植物病害是影响农业生产的主要因素之一， 仍是防治植物病害的主要措施， 但易造成残留污染、 诱发病原 菌抗药性和伤害非靶标生物等不利影响6 在寻求安全有效的防 治措施过程中， 植物病害的生物防治日益引起人们的关注6 利 用植物外部环境中的拮抗细菌防治植物病害已有许多研究报 道， 但由于这些生防菌易受外界环境条件的影响， 防病效果不
稻、 棉花、 玉米、 马铃薯等作物体内筛选出多种对植物病害有较 好防治效果的内生细菌， 但对茄科作物的内生细菌的研究相对
［$ ’ 5］ 较少 6 作者针对农作物主要病害， 从烟草、 番茄、 茄子、 辣椒