设计实验——两种家兔肾功能不全复制模型方法学的比较

两种家兔急性肾功能不全模型复制方法学比较

设计者：###

临床医学本科 2003级##班

指导老师：###

一、实验目的

制备中毒性肾功能不全的家兔模型，比较高浓度甘油和氯化高汞两种方法复制动物模型的差异。

二、立题依据

急性肾功能不全是由于肾小球滤过率急剧减少或肾小管发生变性坏死而引起的一种严重的急性病理过程，多数为少尿或者无尿型。其中，肾性肾功能不全由肾实质器质性病变引起，临床上以肾缺血和肾毒物引发的急性肾小管坏死最多见。

常见的制备中毒性肾功能不全的动物模型有两种方法：肌注50％甘油和1％氯化高汞。其中50％甘油由于能造成挤压综合症，产生大量坏死脱落的肌红蛋白，入血后形成肾小管腔内压、肾小球囊内压均升高，引发肾血流重布，肾皮质缺血，髓质淤血，造成肾小球滤过率降低而引起少尿。

1％氯化高汞在临床上可作为非金属器皿的消毒剂使用。氯化高汞对人体组织有腐蚀作用，且其中的重金属Hg²+对各种动物均可造成“坏死性肾病”，故用来制备中毒性肾功能不全的动物模型，主要作用部位是肾脏近端小管。

临床上尿常规检验包括尿液的蛋白质定性检验和沉渣镜检两种。正常情况下，尿液中蛋白质含量极微，不能用普通方法检出，在尿液沉渣中也只偶有少量白细胞，上皮细胞和个别红细胞。如在尿液当中检出蛋白质，在尿液沉渣中发现有较多红细胞、白细胞、上皮细胞，特别是各种管型，即表示肾脏已有实质性损害。

肾功能发生障碍时，体内代谢产物尿素的排泄量减少，血浆中尿素氮含量升高。因此，通过测定血浆中尿素氮的含量来反映肾的功能。尿素与二乙酰肟在酸性溶液中经Fe³+的翠华发生缩合，并在氨基硫脲的存在下，生成3－羟基－5，6二甲基－1，2，4－三嗪，使溶液转为红色，利用比色法对血浆尿素氮进行定量测定。

参考文献

[1] 赵自刚，牛春雨，侯亚利等. 甘油致家兔急性肾功能衰竭血黏度及凝血功能的变化.中国微循环，2004，8(3):146-148

[2] 赵自刚，牛春雨，侯亚利等. 两种家兔急性肾功能衰竭模型复制方法的比较，河北北方学院学报，2004，21（5）

三、实验方法及技术路线

实验材料：家兔、兔手术台、手术器械、试管、试管夹、恒温水浴、注射器、玻璃分针、塑料插管、光学显微镜、载玻片、离心机、离心管、752型紫外分光光度计、50％甘油、1％Hgcl2 、生理盐水、1％普鲁卡因、50％葡萄糖溶液

实验分组：甘油组：肌注50％甘油

氯化高汞组：皮下注射1％HgCl

2

对照组：注射生理盐水

观察指标：血浆尿素氮，尿液沉渣，尿蛋白

实验方法与步骤：

1、实验前24小时，分别为甘油组兔肌内注射50％甘油10.0ml/kg.bw，氯

化高汞组兔皮下注射1％HgCl

2

1.5ml/kg.bw，以制备急性中毒性肾功能不全模型。对照组注射等量生理盐水。

2、实验时，兔称重后仰卧固定于兔手术台，相应手术野局部麻醉。

气管插管；开腹腔——→膀胱取5ml尿液做尿常规检查；输尿管插管——→收集两侧输尿管尿液做尿常规检查。动脉插管取血1ml，立即置于预先加有草酸钾抗凝剂的离心管内，轻轻搅匀后离心，供测定血浆尿素氮含量使用。再从耳缘静脉输注50％葡萄糖溶液10ml/kg，以保证足够尿量。

3、尿常规检验：

（1）尿液沉渣的镜检：

取自输尿管或膀胱中收集的尿液5ml，离心5min，倾去上清液(供尿蛋白检查用)，离心管底部沉渣用适量生理盐水稀释（1：3）后摇匀，滴在载玻片上，涂匀后镜检。镜检时光线应较弱，先用低倍镜将涂片全面检视一遍，以免遗漏管型等物体。用高倍镜检视5～10个视野，看是否有管型、结晶及血细胞等。

（2）尿蛋白的定性检查：

将尿液离心后的上清液约3ml放入试管中，用试管夹夹住试管，在酒精灯上加热至沸腾（试管口对着窗外，并不断转动试管以免受热不均而炸裂），沸腾后加入5％醋酸3～5滴，再加热至沸腾，然后在黑色背景下按下表检验：结果符号蛋白质的大约含量％

无混浊

微混浊

混浊

颗粒状混浊絮状混浊凝聚成块－

＋/－

＋

＋＋

＋＋＋

＋＋＋＋

无

0.01以下

0.01～0.05

0.05~0.20

0.20~0.50

0.50以上

（3）血浆尿素氮测定。

将用草酸钾作抗凝剂处理的血液离心5min（3000r/min）后分离出血浆，按

下表加入显色剂，然后在沸水中加热10min，取出置于冷水中冷却，用752型分

光光度计直接测定血浆中尿素氮的浓度（波长520nm）。测定时一般用低标准液（含尿素氮20mg/100ml），当血浆尿素氮含量超过40mg％（14.28mmol/L）时换

用高标准液（含尿素氮50mg/100ml）。

试管血浆（ml）尿素氮标准液（ml）蒸馏水（ml）尿素氮显色剂（ml）空白管0.1 10.0

标准管0.1 10.0

测定管0.1 10.0

实验观察记录

动物血浆尿素氮（mg/ml）尿蛋白（％）尿沉

渣甘油组兔

氯化高汞组兔

对照组兔

分析比较两种复制动物急性肾功能不全的方法。

四、实验结果预测：

1、50％的甘油和1％氯化高汞都能复制急性肾功能不全的动物模型。

2、使用氯化高汞复制该模型比高浓度甘油造病更简便易行，效果更明显。