设计实验——两种家兔肾功能不全复制模型方法学的比较
急性肾功能不全
氯化汞与家兔急性肾功能不全【摘要】目的学习用氯化汞复制急性肾功能不全的动物模型；观察急性肾功能不全时蛋白尿、血肌酐、肾酚红排泄率的变化，并根据实验结果分析和讨论致病因素及导致急性肾功能不全的可能发病机制。
方法本次实验共分为两大组，肾衰组和对照组。
用分光光度计测量吸光度的方法算出血肌酐、尿肌酐和酚红排出量，然后再通过计算公式计算出肌酐清除率和酚红排泄率。
结果肾衰模型组家兔肾脏体积变大，颜色较浅，外表出现颗粒，体重比正常组重得多，血清肌酐41.7mg%，尿肌酐12.25mg%；对照组血清肌酐7.97mg%，尿肌酐2.25mg%，酚红排泄率50%。
结论急性肾功能不全会引肾小管上皮细胞受损，从而导致起肾小管的重吸收功能障碍和分泌功能障碍。
【实验原理】肾脏是一个多功能的器官，具有排泄、调节、内分泌等功能。
引起急性肾功能不全主要原因有肾前性、肾性、肾后性三种。
氯化汞是重金属盐，家兔皮下或肌肉注射10g/L氯化汞，可引起以肾小管坏死为主的急性肾功能不全。
急性肾功能不全临床分为少尿型和非少尿型两种，前者多见。
少尿型一般出现少尿甚至无尿，等渗尿，尿钠浓度高，尿常规可发现血尿，镜检有多种细胞并有管型〔颗粒管型和细胞管型等〕。
血液尿素氮〔BUN〕和血浆肌酐进行性升高，肌酐从尿中排出障碍，尿肌酐/血肌酐<20，与功能性肾衰时>40有明显的区别。
急性肾功能不全评价的病理生理学指标有内生肌酐清除率、尿肌酐/血肌酐比值、肾脏酚红排泄率、钠排泄分数等，本实验主要测定酚红排泄率、内生肌酐清除率、尿肌酐/血肌酐比值及肾形态学的改变。
【关键词】急性肾功能不全酚红排泄率血清肌酐尿肌酐【材料和方法】1、材料：家兔；分光光度计，离心机，恒温水浴箱；氯化汞，氨基甲酸乙酯，酚红，NaOH，醋酸，碱性苦味酸，肌酐标准应用液，生理盐水，葡萄糖。
2、方法2.1本组作为对照组兔则皮下或肌肉注射等量的生理盐水。
麻醉固定将氨基甲酸乙酯以5ml/kg 的体重剂量由兔耳缘静脉内缓慢注入。
急性肾功能衰竭及肾功对药物作用的影响
急性肾功能衰竭及肾功对药物作用的影响肾脏是人体重要器官之一，对调节和维持人体内环境的稳定有重要作用。
当各种病因引起肾脏的泌尿功能在短期内急剧下降，机体内环境将会发生严重紊乱，临床表现有尿量和尿成份的变化、•氮质血症、高钾血症和代谢性酸中毒。
其发病机制主要与肾血液灌流减少、肾小管阻塞、肾小管原尿返漏等因素有关。
【实验目的】复制中毒性肾功能衰竭的动物模型。
观察急性肾功能衰竭时家兔出现的各种功能代谢变化，•进一步探讨急性肾功能衰竭发生的机理。
【实验原理】用升汞引起急性肾小管坏死（ATN）复制中毒性肾病，并观察少尿期主要机能代谢变化。
【实验对象】家兔(体重在2-2.5kg)【器材、药品】1%HgCl2、0.9%NaCl溶液、1%普鲁卡因、0.2%肝素钠溶液、肌酐标准应用液、苦味酸、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、3%焦锑酸钾溶液、无水乙醇、氢氧化钙、钠标准应用液、pH 12.0磷酸盐－氢氧化钠缓冲液、724型分光光度计、离心机、恒温水筒、5ml离心管、5ml 注射器、0.5ml、2ml、5ml•刻度吸管、手术器械、火焰光度计、血气分析仪。
【方法步骤与观察项目】本实验以一般状态、尿量、尿蛋白、血浆肌酐、尿肌酐、内生肌酐清除率、•血浆钠、尿钠、血浆钾、滤过钠排泄分数、酚红排泄率、肾形态学观察为观察指标。
(一)复制模型：在实验前•24•小时取两只家兔称重后，•一只肌肉(或皮下)注射1%HgCl2(1.2ml╱kg)造成急性肾功能衰竭，另一只在相同部位注射等量的生理盐水作为正常对照。
(二)取上述两只家兔分别称重固定于兔台上，耳缘静脉注射5%葡萄糖溶液（15ml/kg），以保证有足够的尿量。
(三)颈部剪毛、局麻、作颈动脉插管，取血置于盛有肝素的离心管内，离心(2000rpm，15min)后取血浆以备测定血中肌酐钠浓度。
(四)腹部剪毛、局麻，在耻骨联合上1.5cm处作腹正中切口，分离皮下组织，沿腹白线切开腹膜，暴露膀胱，抽取膀胱中的尿液以备作尿肌酐、尿钠浓度测定，•分离两侧输尿管，作输尿管插管，收集1h尿液，换算成每分钟排尿量。
家兔急性肾功能不全
取出置于冷水中冷却，用分光光度计测定尿素氮 的浓度（波长520nm）
试管
空白管 标准管 测定管
血浆 0.1
标准液 0.1
蒸馏水 显色剂
0.1
10
10
10
尿蛋白定性检查结果判断标准
结果 无混浊
微混浊 混浊 颗粒状混浊 絮状混浊 凝聚成块
符号 — ± ＋
＋＋
＋＋＋ ＋＋＋＋
蛋白质的大约含量（﹪） 无
0.01以下 0.01～0.05 0.05～0.20
0.20～0.50 0.50以上
细胞 管型 结晶
红细胞管型
白细胞管型
上皮细胞管型
透明管型颗Biblioteka 管型脂肪管型尿酸结晶
草
酸
钙
磷酸钙结晶
结 晶
发病机制：中心环节是肾小球滤过率降低
肾缺血
肾灌注压下降 肾血管收缩 肾血液流变学变化 肾缺血再灌注损伤
肾小球病变
肾小管阻塞
肾小管原尿返流
临床表现
尿的变化 少尿或无尿、尿钠、血尿、蛋白尿、管型尿
氮质血症 尿素、肌酐、尿酸
水、电解质、酸碱平衡紊乱 水中毒、高钾血症、代谢性酸中毒
实验原理
小结
预习下次实验
设计性实验
取5ml尿液于离心管中，离心5min、 1500r/min
上清夜做尿蛋白检查，取3ml上清夜放入试管
加热至沸腾，然后加入5﹪醋酸3～5滴，再加 热至沸腾，在黑色背景下观察
离心管底部沉渣用生理盐水（1：3）稀释摇 匀
取一滴滴在载玻片上，盖上盖玻片进行镜检
取1ml血液置于用草酸钾作抗凝处理的离心管内， 离心5min、3000r/min
急性肾衰竭动物模型的复制及实验性治疗
急性肾衰竭动物模型的复制及实验性治疗葛贺;李冰;黄晓莉;杨丽娟;陈立松;芦丽莉;刘艳波【摘要】Objective To copy the acute renal failure ( ARF) animal model and execute an experimental treatment of it in rabbits, to lay a foundation for the implementation of comprehensive experiment for undergraduate students. Method ARF model was set up through the injection of 50% glycerol (10 mL/kg). All the rabbits were monitored with ECG, Sodium bicarbonate solution, furosemide solution and CaCl2 solution were infused through the external jugular vein to the rabbits in the treatment group. Serum urea nitrogen ( BUN), serum creatinine (Cre)level,plasma pH,urine volume and urine creatinine changes of the rabbits were detected after 24 hours. Results The application of 50% glycerol intramuscular injection could replicate typical animal models with acute renal failure. Serum BUN and Cre levels concentration in the model group were obviously higher than those in the negative control group, the urine Cre concentration was also higher, while the urine volume per minute was less and a metabolic acidosis happened at the same time. In the treatment group, serum BUN and Cre levels were significantly lower than those in the model group, while urine volume per minute was more than that in the control group, and the metabolic acidosis was improved. The blood pressure of animals in the treatment group was a litter higher,but there was no difference compared with that in the negative control group, T wave was high and giant, and the QRS wave was widened in the model group compared withthose in the negative control group. After the treatment,ECG of the animals in the model group gradually returned to normal state. Conclusion The method of intramuscular injection of 50% glycerol could be reliable to replicate the animal model with acute renal failure, and can be taken as a comprehensive experimental teaching method and widely used in the teaching of medical functional experiment.%目的复制家免急性肾衰竭动物模型并进行实验性治疗,为本科学生综合性实验的实施奠定基础.方法通过肌肉注射50％甘油(10 mL/kg)复制家兔ARF模型,各组动物进行心电图监测,治疗组通过颈外静脉滴注碳酸氢钠溶液、呋塞米溶液及CaCl2溶液进行治疗,对比观察24h后血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Cre)水平、pH变化、尿量及尿肌酐变化.结果 50％甘油肌肉注射可复制出明显的急性肾衰的动物模型,模型组动物血清中BUN,Cre水平明显高于阴性对照组,其尿肌酐含量较高,每分钟尿量明显减少,并出现明显的代谢性酸中毒；而治疗组动物血清BUN,Cre水平明显低于模型组,其尿肌酐含量减少,每分钟尿量明显多于模型组,酸中毒缓解.模型组动物血压偏高,但与阴性对照组无明显差别,而心电图发现T波高耸,QRS波增宽.治疗后其心电图逐渐恢复正常.结论肌肉注射50％甘油复制急性肾衰模型的方法可靠,可作为综合性实验教学方法在基础实验教学中广泛应用.【期刊名称】《北华大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(014)001【总页数】4页(P39-42)【关键词】急性肾衰竭;甘油;综合性实验【作者】葛贺;李冰;黄晓莉;杨丽娟;陈立松;芦丽莉;刘艳波【作者单位】北华大学基础医学院,吉林吉林132013【正文语种】中文【中图分类】R586急性肾衰竭(acute renal failure，ARF)是指由各种原因引起的双肾泌尿功能在短期内急剧障碍，可导致代谢产物在体内迅速积聚，水、电解质和酸碱平衡紊乱，出现氮质血症、高钾血症和代谢性酸中毒，并由此发生的机体内环境严重紊乱的临床综合征［1］．ARF按发病可分为肾前性、肾性和肾后性三大类．ARF是临床常见的危重病之一，其病情复杂、发展急骤，常常伴有尿毒症的发生，死亡率较高，一直受到医学界的高度重视，因此在实验教学及基础研究中经常进行动物模型的复制［2］．本文以50%甘油大腿肌肉注射的方法复制家兔ARF的动物模型并进行实验性治疗，进而探讨ARF的发病机制及治疗原则，为后续临床课的学习奠定坚实的基础．1 材料与方法1．1 药品与器材BL-420E+生物机能实验系统;婴儿秤;兔手术台;哺乳动物手术器械一套;分光光度计;离心机;水浴锅;pH计;25%水合氯醛溶液;50%甘油;0．1%呋塞米溶液;10%葡萄糖酸钙溶液;5%碳酸氢钠溶液;肌酐测定试剂;尿素氮测定试剂等．1．2 实验动物成年家兔15 只，体质量2．5 ～3．0 kg，雌雄不限．1．3 ARF 造模方法1)实验前24 h，采血5 mL备用．然后称重，向其后腿肌肉内注射50%甘油溶液(10 mL/kg体质量)，在对照兔的相同部位肌内注射生理盐水(10 mL/kg)，注射后多喂蔬菜．2)24 h后捉拿家兔，称重并麻醉(耳缘静脉注射25%乌拉坦溶液4 mL/kg)，并仰卧固定于兔手术台上．3)自尿道口插入以液状石蜡润滑的导尿管导尿．如尿量过少，则下腹部剪毛，在耻骨联合处上1．5 cm处正中切口，长约4 cm，分离皮下组织，沿腹白线切开腹膜，暴露膀胱，并将膀胱翻向体外，在膀胱底部找到2条黄白颜色柔软的输尿管，在输尿管靠近膀胱处用线结扎．略等片刻(待输尿管略充盈后)，用眼科剪剪一小口，向肾盂方向插入导尿管，结扎固定，收集尿液，用于尿蛋白及尿液肌酐浓度测定．4)颈部剪毛，切口，分离一侧颈总动脉，做颈总动脉插管(以备取血用)，并与压力换能器相连，描记血压曲线．连接肢体导联电极，记录心电图变化．5)分离另一侧颈静脉，做颈外静脉插管后，输入5%葡萄糖溶液(100 mL/kg，速度为50滴/min)，以保证有足够的尿量，自输液开始记录1 h尿量．6)颈总动脉取血5 mL，离心(2 500 r/min，10 min)，取血清测定pH、尿素氮、肌酐等含量．1．4 治疗方法1)纠正酸中毒:当 pH＜7．2、或 CO2CP＜13．5 mmol/L时，在颈外静脉注射5%碳酸氢钠溶液4 mL/kg．2)纠正高钾血症:2 min后在颈外静脉缓慢注射10%葡萄糖酸钙溶液2 mL/kg．3)利尿剂:5 min后给予0．1%呋塞米溶液0．4 mL/kg静脉缓慢滴注．1．5 观察指标对比观察动物阴性对照、模型组及治疗组血肌酐、血尿素氮、血液pH、尿量、尿蛋白及尿肌酐的含量;对比观察血压及心电图的改变．1．6 统计学方法数据采用均数±标准差(±s)表示，采用SPSS 11．0统计软件包处理，用Excel作图．应用F检验进行方差分析，以q检验判断差异显著性．2 结果2．1 血压及心电图变化2．1．1 正常家兔血压、心电图描记应用BL-420E+生物机能实验系统描记家兔血压及心电图，其结果如图 1所示，家兔心率256次/min，收缩压约 96 mmHg，舒张压约77 mmHg，平均血压约80 mmHg;其二导联心电图为:P波振幅(0．082 ±0．008)mV，R 波(0．232 ±0．010)mV，T 波(0．093 ± 0．010)mV，PR 间期(52．940 ± 4．282)ms，QRS 间期 (138．20 ±1．083)ms，QT 间期(189．40 ± 5．235)ms，ST 间期(7．932 ±0．682)ms．图1 正常家兔血压及心电图Fig．1 Blood pressure and electrocardiogram in normal rabbits2．1．2 模型组家兔的血压、心电图描记如图2所示，模型组家兔心率为186次/min，收缩压约117 mmHg，舒张压约98 mmHg，平均血压约80 mmHg，与正常对照组比较，其心电图最明显的变化为T波高耸，QRS波增宽．图2 模型组家兔血压及心电图Fig．2 Blood pressure and electrocardiogram change in model group2．1．3 治疗组家兔血压、心电图描记如图3所示，治疗组家兔心率为235次/min，收缩压约115 mmHg，舒张压约93 mmHg，平均血压约80 mmHg，与模型组比较，其心电图逐渐恢复正常．图3 治疗组家兔血压及心电图Fig．3 Blood pressure and electrocardiogram change in treatment group2．2 血肌酐、尿素氮含量、血pH及尿肌酐检测为了判定家兔肾功能，对其血肌酐、血尿素氮、血pH及尿肌酐分别进行了检测，其结果见表1．表1 各组家兔血肌酐、尿素氮含量及pHTab．1 Creatinine，urea nitrogen contents in blood and plasm pH in each group*:与阴性对照组比较 P＜0．05;Δ:与模型组比较 P＜0．05．组别 c(血肌酐)/(μmol·L－1) c(血尿素氮)/(mmol·L－1) c(尿肌酐)/(μmol·L－1)pH阴性对照组11．25 ±6．02 3．48 ±1．16 25．25 ±9．34 7．42 ±0．02模型组 28．87 ±8．04* 7．23±2．12* 30．25 ±8．27 7．14 ±0．13治疗组 18．48±7．06Δ4．98±1．76Δ24．71 ±7．99 7．28 ±0．082．3 尿量变化3组动物经膀胱插管进行尿量检测，其结果如图4所示，与阴性对照组比较，模型组动物尿量明显减少，而治疗组动物尿量明显增加，表示肾功能逐渐恢复正常．图4 各组家兔尿量监测结果Fig．4 Urine volume monitoring results in each group3 讨论在机能实验学教学中，ARF动物模型的复制的方法主要有:给予硝酸铀，皮下注射HgCl2溶液，给予去甲肾上腺素，肾动脉夹闭及注射甘油溶液等．由于HgCl2、硝酸铀毒性较大，可对人及环境构成潜在危害，因而较少使用;而肾动脉夹闭法手术较繁琐，对于本科专业学生较难;注射去甲肾上腺素复制动物模型稳定性较差，因此，肌肉注射甘油简便可行，无毒，不污染环境，因此，是ARF模型复制常采用的方法［2］．确定ARF模型复制是否成功需测定血清中BUN和Cre的含量，而这两项指标与食物中的蛋白摄入量有关，因此，采用家兔这种非食肉动物复制ARF模型可减少食物蛋白干扰，同时有足够的血量进行实验，具备一定的优越性［3］．家兔肌肉注射甘油后，由于甘油的高渗透性造成局部体液外渗，肢体肿胀，引起血容量降低;同时血管受压，回来不畅，进一步加剧了有效循环血量的降低，导致交感神经系统兴奋性增加，使肾血流量减少;血浆外渗，血液黏度增高，肾血管阻力进一步增加，肾小球滤过率下降进一步降低，出现少尿及代谢产物在体内潴留;另外，甘油的高渗透性使肌肉及肌肉血管溶解，肌红蛋白、血红蛋白释放入血，短时间内产生大量肌红蛋白管型，阻塞肾小管导致管内压力升高，进而引起囊内压增加及肾小球有效滤过压的降低，过滤率随之减少［4-5］;高肌红蛋白血症使其滤过而进入肾小管，在酸性环境下易解离为铁色素及铁蛋白，通过铁色素脂质过氧化作用释放大量的氧自由基而直接损伤肾小管上皮细胞，进而引起原尿返流至肾间质，间质水肿反过来又压迫肾小管，使肾小球的滤过率进行性降低［6-7］．本实验发现，应用50%甘油10 mL/kg肌注，可复制出较稳定的ARF模型，模型组动物血清中BUN，Cre水平明显高于阴性对照组，血液pH降低，出现代谢性酸中毒．二导联心电图显示:其T波高耸，QRS波增宽，Q-T间期缩短，尿液中肌酐含量亦较高．经碳酸氢钠、氯化钙及呋塞米溶液治疗后，其血中尿素及肌酐含量明显降低，pH逐渐恢复正常，尿肌酐含量稍降低，但无统计学意义，而每分钟尿量明显增加，与模型组比较差异具有统计学意义(P ＜0．05)．鉴于此，本综合性实验在北华大学2009级临床医学及2009级影像学专业机能学实验教学中率先使用，结果证实该实验方法可靠，结果较稳定，重复性好．不仅能进一步加强学生对教材知识的理解，而且还能树立本科医学生动手能力及对科研的信心，为完善本科学生泌尿系统的综合性实验奠定了坚实的基础．综上所述，甘油复制ARF模型的特点是:建模简单易行，只需一次性注射，整个模型周期较短，模型稳定性及动物存活率都较高［8］．另外，甘油引起的ARF兼有肾缺血及内源性毒性物质对肾脏损伤的双重作用，对理解异型输血、挤压综合征等病因引起的肾衰具有重要指导意义［9］．参考文献:【相关文献】［1］李桂源．病理生理学［M］．北京:人民卫生出版社，412-421．［2］万洁，许崇泰．两种方法复制家兔急性肾衰模型的对比研究［J］．科技创新导报，2010(14):6-8．［3］ Wan Jie，Xu Chongtai．The Comparative Study in Rabbits with Acute Renal Failure Models Copied with Two Different Methods［J］．Technology Innovation Herald，2010，14:6-8．［4］ Chow K M，Szeto C C．Myoglobinuric Renal Failure［J］．J Emerg Med，2004，26(4):461-462．［5］ Rodrigo R，Bosco C，Herrera P，et al．Amelioration of Myoglobinuric RenalDamage in Rats by Chronic Exposure to Flavonol-Rich Red Wine［J］．Nephrol Dial Tmnsplant，2004，19(9):2237-2244．［6］ Singh D， Chander V， Chopra K． Carvedilol， an Antihypertensive Drug with Antioxidant Properties，Protects against Glycerol-induced Acute Renal Failure［J］．Am J Nephrol，2003，23(6):415-421．［7］ 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急性肾功能衰竭动物模型的复制之欧阳文创编
机能实验学实验设计大纲实验名称：急性肾功能衰竭动物模型的复制课题来源：自选设计班级：2004级临床本科乙班设计人员：庞路人杜泽东朱慕风黄波梁军设计日期：2006年9月30日指导老师：张晓荣成成都医学院实验技术教研室2006年制夹闭前 心率 血压 呼吸 A1A2…A10表1-2夹闭后（1-10min ） 心率 血压 呼吸B1B2B10表1-3夹闭后（10-30） 心率 血压 呼吸 B1B2…B10表1-4夹闭后（30-60min ） 心率 血压 呼吸B1B2…B10（5）统计数据分析：本实验采用计量资料来测定各种指标的数值，所有数据均采用平均数±标准差（±a）表示，A,B 两组间实验数据比较行完全随机单因素方差分析，组间两比较行q 检验.（1）平均数公式：x=x1+x2+…+xn/n= Σxi/n x=均数 Σ= 总和n =变量值的个数（标准差）：a=sqr(Σ(xi-u)^2/n) a:总体标准差 xi:观测数的各个变量u:总体均数四组间实验数据比较行完全随机单因素方差分析，如各组肺系数总体均值的比较，其方法如下：（1）建立检验假设 H0：1μ=2μ(A.B 两组间的各项生理指标相同）。
H1：1μ、2μ、不等或不全相等，α＝0.05。
（2）计算统计量A1A2…A10夹闭后（10-30min ） 心率 血压呼吸A1A2…A10夹闭后（30-60min ） 心率 血压 呼吸A1A2…A10（5）统计数据分析本实验采用计量资料来测定各种指标的数值，所有数据均采用平均数±标准差（±s）表示，A.B 间实验数据比较行完全随机单因素方差分析（1）建立检验假设H0：1μ=2μ（各组肺系数总体均值相等）。
H1：1μ、2μ、不等或不全相等，α＝0.05（2）计算统计量利用统计学专业软件SPSS 做One-wayANOVA 。
( 3 ) 查F 值表，确定P 值，得出结论。
家兔急性肾功能不全
家兔急性肾功能不全及其肾功能评价指标检测【实验目的】1、用氯化汞中毒方法复制家兔急性肾功能不全模型。
2、观察急性肾功能不全时肾功能评价指标变化。
肾功能评价指标：（1）测定血肌酐、尿肌酐，计算内生肌酐清除率（2）测定酚红排泄率（3）观察肾脏形态学改变。
【实验材料】器械家兔手术台、常用手术器械一套、止血钳、眼科剪、支架、照明灯、纱布、丝线、1ml、10ml、50ml注射器药品生理盐水、20% 氨基甲酸乙酯、0.6%酚红溶液、20%葡萄糖溶液对象家兔分组：1-4组——模型组(头部黄色标志 5-8组——对照组【实验方法】一、复制急性肾功能不全模型（已完成）：实验前24小时，取家兔两组，称重。
模型组——皮下注射1%氯化汞溶液 0.8-1ml/Kg体重；对照组——皮下注射等计量生理盐水二、急性肾功能不全指标检测1、家兔称重、麻醉和固定：取家兔一只，称重：2.16kg；20%氨基甲酸乙酯：5ml/kg体重，耳缘静脉缓慢注射，共注射10.8ml至呼吸深而慢、反射迟钝（角膜反射、夹肢反射）为止。
背位固定。
2、心脏采血—测血肌酐（颈动脉）左侧第3-4肋间，靠近胸骨，心跳最明显处垂直进针穿刺，取血3 ml，推入干燥试管，静置，——备用测血肌酐。
3、膀胱插管术—测尿肌酐、收集尿液1）如何进行膀胱插管，请按实际操作详细描述。
2）先用注射器取尿液2 ml于试管中，——备用测尿肌酐。
3）然后在输尿管下方穿线结扎尿道，再行膀胱切口，插管固定，排空膀胱。
4）准备小烧杯，收集尿液。
4、酚红排泄率测定1）0.6%酚红溶液1 ml/Kg体重，耳缘静脉头皮针注射，总共注射2.16ml。
计时—开始收集尿液。
2）然后20%葡萄糖溶液30 ml/Kg体重，耳缘静脉缓慢推注。
3）从注射酚红溶液起收集15分钟（对照组）、30分钟（模型组）尿液。
5、生化检测——血肌酐、尿肌酐、酚红排泄率1）测酚红排泄率收集注射酚红后的全部尿液-→250 ml量筒内-→然后加入10% NaOH 5 ml-→再加自来水至250 ml混匀-→取适量混合液-→小试管中与标准比色管进行比较即为15分钟、30分钟酚红排泄率。
两种家兔急性肾功能不全模型学生自主造模成功率比较
两种家兔急性肾功能不全模型学生自主造模成功率比较田玮;龚延萍;马尚寅【期刊名称】《实验技术与管理》【年(卷),期】2017(034)001【摘要】目的:比较学生应用HgCl2中毒和缺血再灌注两种方法复制家兔急性肾功能不全模型的成功率,以探索适合学生实验的,绿色、安全、快速、有效的急性肾功能不全动物模型的建立方法.方法:40组学生随机分为HgCl2中毒造模组和缺血再灌注造模组,分别采用实验24h前肌注1%的HgCl2溶液2mL/kg和实验时切除右肾并夹闭左肾动脉45min后再灌注15min的方法建立家兔急性肾功能不全模型,依据实验动物的血尿素氮和血肌酐两项指标,评价学生使用两种建模方式的成功率.结果:学生复制缺血再灌注肾功能不全模型成功率高于HgCl2中毒性模型(P<0.05).结论:缺血再灌注家兔急性肾功能不全模型建立方法安全无毒,无"三废"排放,可在有限的教学实验时间内完成,且操作难度适宜、便于实验前后对照、造模效果良好,可以用于机能学实验等医学生教学实验.【总页数】3页(P59-61)【作者】田玮;龚延萍;马尚寅【作者单位】内蒙古医科大学基础医学院,内蒙古呼和浩特 010110;内蒙古医科大学基础医学院,内蒙古呼和浩特 010110;内蒙古自治区人民医院,内蒙古呼和浩特010017【正文语种】中文【中图分类】G642.423;Q95-336【相关文献】1.比较2种造模方法对家兔膝骨关节炎模型的血清及关节液中炎性因子的影响 [J], 杨帆;袁芳;朱跃兰2.不同造模方法所致“热毒血瘀证”模型家兔血液流变学改变的比较研究 [J], 卞慧敏3.大鼠与家兔高脂血症模型造模方法及特点的比较 [J], 柳玉霞;王学林;李树良;杨旭丽4.两种造模方法建立大鼠冠脉微循环障碍模型比较研究 [J], 李磊;孟红旭;付建华;金龙;马彦雷;史跃;刘建勋5.两种造模方法致幼龄大鼠哮喘模型的比较和模型鼠死因分析 [J], 朱杨春;尚莉丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
肾衰竭机能实验
比色。
7．血清、标准液等试剂用量要准确。
分光光度计正确操ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ使用方法：
1. 接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热10分钟.
2. 将灵敏度开关调至“1”档(若零点调节器调不到“0”时, 需选用较高档.)
3. 根据所需波长转动波长选择钮.
4. 将空白液及测定液分别倒入比色杯 3/4处,用擦镜纸擦清外 壁,放入样品室内,使空白管对准光路.
——
——
蒸馏水
0.2
——
——
——
——
焦锑酸钾
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
血钠、尿钠的测定方法与步骤，数据整 理及注意事项、分光光度计的使用
注意事项
1．心脏取血时注射器不用抗凝。
2．颈外静脉插管时套管内应充满肝素。 3．膀胱插管时套管内应充满蒸馏水。 4．每次给药后观察尿量计时应从尿液改变后开始。 5．给速尿及酚红后，必须倒掉之前收集的尿液后才 能重新收集尿液，然后从中取尿样。 6．测尿钠时加无水乙醇后用力振荡，并且操作后立即
功能，致使肾小管的阻塞和回漏，导致尿量明显减
少。
急性肾功能不全模型的复制
• 给动物注射 HgCl2→ Hg2+ 进入血液循环→经肾小球 滤出→与肾小管上皮细胞膜蛋白质的巯基结合 →Hg2+经吞噬作用聚集在细胞内→与细胞器质膜结 合并引起结构和功能破坏→肾小管上皮细胞功能和 结构的显著改变。
3、影响肾小球滤过率的因素
实验材料
1、动物 家兔，2.5～3.0kg，雌雄均可 2、药品 氯化钠、20％乌拉坦、酚红、 速尿、去甲肾 上腺素、葡 萄糖、氢氧化钠、焦锑酸钾、
无水乙醇、肝素。
3、器材 722分光光度计、离心机、婴儿秤、托盘天平、哺 乳动物手术器械一套、静脉套管、膀胱套管、动脉夹、 试管架、试管、离心管、刻度吸管、量杯、烧杯，注 射器等
三种兔肾VX2肿瘤模型制作方法的比较
三种兔肾VX2肿瘤模型制作方法的比较曾功君;高云华;刘政;谭开彬;朱铭;卞爱娜【期刊名称】《西部医学》【年(卷),期】2004(16)4【摘要】目的探讨三种建立兔肾VX2肿瘤模型方法的有效性.方法研究对象为健康家兔36只,动物模型建立采用三种方法:①超声引导下肿瘤组织混悬液注射法;②手术直视下肿瘤组织块包埋;③手术直视下肿瘤组织混悬液注射法.结果健康成年家兔36只,成功建立VX2肿瘤模型共26只家兔.其中采用超声引导下肿瘤组织混悬液注射法接种22只家兔的28个肾脏,其中10只家兔接种成功,成功率为(10/28)35.71%;手术直视下肿瘤组织块包埋法接种12只家兔,接种成功4个左肾,成功率(4/12)33.33%;手术直视下肿瘤组织混悬液注射法接种14只家兔左肾,成功12只,成功率(12/14)85.71%.结论三种建立兔肾VX2肿瘤模型的方法是可行的,其中手术直视下肾内VX2肿瘤组织混悬液注射法建立兔肾VX2肿瘤模型的成功率较其他两种方法高.【总页数】3页(P296-298)【作者】曾功君;高云华;刘政;谭开彬;朱铭;卞爱娜【作者单位】第三军医大学新桥医院超声科,重庆,400037;第三军医大学新桥医院超声科,重庆,400037;第三军医大学新桥医院超声科,重庆,400037;第三军医大学新桥医院超声科,重庆,400037;第三军医大学新桥医院超声科,重庆,400037;第三军医大学新桥医院超声科,重庆,400037【正文语种】中文【中图分类】Q95-33【相关文献】1.兔VX2肌肿瘤模型制作方法的改良及超声评价 [J], 吴菲;曹兵生;邓娟;史迎昌2.兔肾VX2肿瘤模型的建立及超声造影监测的实验研究 [J], 张婷;谭旭艳;贾译清3.经肝、经脾接种VX2瘤株建立兔肝脏肿瘤模型的比较 [J], 史博;平勇;王永中;李智岗4.CT引导下经皮肝穿刺接种兔肝VX2肿瘤模型的建立及其肿瘤的CT、MRI评估[J], 陈天鸣;潘耀振5.CT引导下经皮肝穿刺接种兔肝VX2肿瘤模型的建立及其肿瘤的CT、MRI评估[J], 陈天鸣;潘耀振因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
机能实验报告_肾衰
一、实验背景肾脏作为人体的重要器官，负责调节水电解质平衡、排泄代谢废物、生成红细胞生成素等功能。
肾功能不全（肾衰）是指肾脏功能部分或完全丧失，导致代谢废物和多余水分不能正常排出体外，从而引起一系列生理和代谢紊乱。
本实验旨在通过模拟急性肾功能不全动物模型，观察肾脏形态学变化和肾功能指标检测，探讨肾衰的发生机制及其临床表现。
二、实验目的1. 复制急性中毒性肾衰动物模型。
2. 通过对肾功能指标的检测及肾脏形态学改变的观察，了解中毒动物肾功能的变化。
3. 判断和分析致病因素和可能的治疗方法。
三、实验材料与方法1. 实验动物：成年家兔3只，体重约2.5kg。
2. 实验试剂：氯化汞、生理盐水、肝素钠、EDTA-K2、0.9%氯化钠溶液、碱性苦味酸、硫酸铵、酚红、苯巴比妥钠等。
3. 实验仪器：手术显微镜、电子天平、离心机、生化分析仪、显微镜等。
4. 实验方法：（1）建立急性中毒性肾衰动物模型：将家兔随机分为实验组和对照组，实验组给予氯化汞灌胃，对照组给予等量生理盐水灌胃。
（2）检测肾功能指标：实验前后分别采集家兔血液，检测血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿量、尿蛋白等指标。
（3）观察肾脏形态学变化：处死实验动物后，取肾脏进行常规石蜡切片，显微镜下观察肾脏组织形态学变化。
四、实验结果1. 实验组家兔在给予氯化汞灌胃后，Scr、BUN水平明显升高，尿量减少，尿蛋白阳性，表明实验动物出现急性肾功能不全。
2. 对照组家兔Scr、BUN水平及尿量、尿蛋白等指标无明显变化。
3. 显微镜下观察，实验组家兔肾脏出现肾小球肿胀、肾小管扩张、间质水肿等病理变化。
五、讨论与分析1. 急性肾功能不全的发生机制：氯化汞是一种重金属，具有肾毒性，可导致肾小管细胞损伤，从而引起肾功能不全。
本实验通过给予氯化汞灌胃建立急性中毒性肾衰动物模型，成功模拟了急性肾功能不全的临床表现。
2. 肾功能指标的检测：Scr、BUN是反映肾功能的重要指标，急性肾功能不全时，Scr、BUN水平明显升高。
两种方法复制家兔急性肾衰模型的对比研究
两种方法复制家兔急性肾衰模型的对比研究
万洁;许崇泰
【期刊名称】《科技创新导报》
【年(卷),期】2010(000)014
【摘要】目的:研究两种方法复制家兔急性肾功能衰竭(ARF)模型的成功率、稳定性及应用.方法:皮下注射1%HgCl<,2>(1.5mL/kg·bw,H组)、肌肉注射50%甘油(10mL/kg·bw,G组)复制家兔ARF模型,测定24h和48h血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cre)水平和尿常规检查,观察比较各组模型复制的成功率、存活率及稳定性.结果:两组均能成功复制ARF模型;G组BUN,Cre较H组低;尿常规检查均可见蛋白尿和肾衰管型,但G组程度轻;G组的存活率及稳定性显著高于H组.结论:两种模型复制方法各有优缺点,应根据不同研究目的选择相应的模型.
【总页数】2页(P6-7)
【作者】万洁;许崇泰
【作者单位】广东医学院,广东东莞,523808;广东医学院,广东东莞,523808
【正文语种】中文
【中图分类】R586
【相关文献】
1.两种方法复制水肿模型的实验比较 [J], 赵迅霞;杨晓玲;李桂忠;姜怡邓;田珏;贾月霞
2.中药肾复康对家兔急性肾衰模型的病理改变及肾功检测相关性研究 [J], 赫炎光;
张鑫智
3.急性心力衰竭家兔模型复制及治疗效果 [J], 杨丽娟;李冰;陈立松;刘艳波
4.急性肾衰竭动物模型的复制及实验性治疗 [J], 葛贺;李冰;黄晓莉;杨丽娟;陈立松;芦丽莉;刘艳波
5.机能学实验家兔失血性休克模型复制及抢救常见问题的处理 [J], 李淑元; 王新芳; 王岩眉; 王俊亚; 张冬梅
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设计实验——两种家兔肾功能不全复制模型方法学的比较
两种家兔急性肾功能不全模型复制方法学比较设计者：###临床医学本科 2003级##班指导老师：###一、实验目的制备中毒性肾功能不全的家兔模型，比较高浓度甘油和氯化高汞两种方法复制动物模型的差异。
二、立题依据急性肾功能不全是由于肾小球滤过率急剧减少或肾小管发生变性坏死而引起的一种严重的急性病理过程，多数为少尿或者无尿型。
其中，肾性肾功能不全由肾实质器质性病变引起，临床上以肾缺血和肾毒物引发的急性肾小管坏死最多见。
常见的制备中毒性肾功能不全的动物模型有两种方法：肌注50％甘油和1％氯化高汞。
其中50％甘油由于能造成挤压综合症，产生大量坏死脱落的肌红蛋白，入血后形成肾小管腔内压、肾小球囊内压均升高，引发肾血流重布，肾皮质缺血，髓质淤血，造成肾小球滤过率降低而引起少尿。
1％氯化高汞在临床上可作为非金属器皿的消毒剂使用。
氯化高汞对人体组织有腐蚀作用，且其中的重金属Hg²+对各种动物均可造成“坏死性肾病”，故用来制备中毒性肾功能不全的动物模型，主要作用部位是肾脏近端小管。
临床上尿常规检验包括尿液的蛋白质定性检验和沉渣镜检两种。
正常情况下，尿液中蛋白质含量极微，不能用普通方法检出，在尿液沉渣中也只偶有少量白细胞，上皮细胞和个别红细胞。
如在尿液当中检出蛋白质，在尿液沉渣中发现有较多红细胞、白细胞、上皮细胞，特别是各种管型，即表示肾脏已有实质性损害。
肾功能发生障碍时，体内代谢产物尿素的排泄量减少，血浆中尿素氮含量升高。
因此，通过测定血浆中尿素氮的含量来反映肾的功能。
尿素与二乙酰肟在酸性溶液中经Fe³+的翠华发生缩合，并在氨基硫脲的存在下，生成3－羟基－5，6二甲基－1，2，4－三嗪，使溶液转为红色，利用比色法对血浆尿素氮进行定量测定。
参考文献[1] 赵自刚，牛春雨，侯亚利等. 甘油致家兔急性肾功能衰竭血黏度及凝血功能的变化.中国微循环，2004，8(3):146-148[2] 赵自刚，牛春雨，侯亚利等. 两种家兔急性肾功能衰竭模型复制方法的比较，河北北方学院学报，2004，21（5）三、实验方法及技术路线实验材料：家兔、兔手术台、手术器械、试管、试管夹、恒温水浴、注射器、玻璃分针、塑料插管、光学显微镜、载玻片、离心机、离心管、752型紫外分光光度计、50％甘油、1％Hgcl2 、生理盐水、1％普鲁卡因、50％葡萄糖溶液实验分组：甘油组：肌注50％甘油氯化高汞组：皮下注射1％HgCl2对照组：注射生理盐水观察指标：血浆尿素氮，尿液沉渣，尿蛋白实验方法与步骤：1、实验前24小时，分别为甘油组兔肌内注射50％甘油10.0ml/kg.bw，氯化高汞组兔皮下注射1％HgCl21.5ml/kg.bw，以制备急性中毒性肾功能不全模型。
急性肾功能不全(打印)
急性肾功能不全【实验目的】学习用氯化汞复制急性中毒性肾功能不全的动物模型。
观察急性肾功能不全时动物尿蛋白、血肌酐、尿肌酐、肾酚红排泄率的变化以及肾脏的形态改变，分析和讨论其致病因素及发生机制。
【实验原理】采用肾毒物重金属氯化汞溶液造成家兔急性肾小管坏死，复制急性肾功能不全的动物模型，通过观察动物的尿蛋白、血肌酐、尿肌酐、肾酚红排泄率的变化以及肾脏的形态改变，学习急性肾衰时内环境的变化。
1 材料家兔；分光光度计，光学显微镜，离心机，恒温水浴箱；1%氯化汞溶液，氨基甲酸乙酯溶液，生理盐水，酚红，NaOH,醋酸，碱性苦味酸，肌酐标准应用液，葡萄糖；兔台，手术器械，1ml和5ml注射器，试管，滴管，漏斗，吸管，试管夹，酒精灯，试管架，颈动脉插管。
2 方法2.1 急性肾功能不全模型复制（已完成）：取家兔两组，于实验前24小时称重后，一组为正常对照组，一组为中毒实验组。
实验兔皮下或肌肉注射1%氯化汞（按0.8～1.0ml/kg），造成急性肾功能不全模型；对照兔则在相同部位注射同量的生理盐水，作为对照。
2.2麻醉固定：用200g/L的氨基甲酸乙酯按5ml/kg体重剂量给家兔耳缘静脉注射麻醉，将家兔仰卧位固定于固定架上。
2.3 心脏采血：先用手摸到第3、4肋间，心脏活动最为活跃处，垂直进针，有落空感，缓慢抽取血液约2ml于干燥试管中，作血肌酐检查。
2.4 采集尿液：下腹部剪毛，从耻骨联合向上沿中线作约4cmd切口，沿腹白线打开腹腔，暴露膀胱，用注射器抽取膀胱内尿液2ml于干燥试管中，作尿肌酐、尿常规检查。
2.5 输尿管插管：在膀胱底部仔细分离两侧输尿管。
用出线结扎近膀胱处的两侧输尿管，以阻断尿流，结扎固定。
将两侧导尿管外端用线扎在一起，用于收集尿液。
手术完毕后，用温热的生理盐水纱布覆盖腹部的创伤。
2.6 实验观察2.6.1血清和尿肌酐含量测定：将各组装有血液的试管放入离心机内，静置10min后，3000r/min离心15min。
机能学设计性实验急性肾衰竭动物模型的建立讲解
【实验目的】
1.学习复制急性肾衰竭动物模型的方法 。 2.观察急性肾衰竭时机体的典型表现及血 酐水平的变化。 3.掌握急性肾衰竭的概念及发病机制 。
【实验原理】
急性肾功能衰竭 指各种原因在短期内引起肾脏泌尿功能
急剧障碍，以致机体内环境出现严重紊乱的 病理过程，临床表现有水中毒、氮质血症、 高钾血症和代谢性酸中毒等
S 0.01
内生肌酐清除率：血 尿中 中肌 肌酐 酐含 含量 量 尿量（ml/min） ml/min
肌酐(mg%)88.402 mol/L
【观察项目】
表2 处理前和处理后对照组家兔各指标变化
组 血压 呼吸 别 （mmHg)
处理前│处理后
尿量 心率 血肌酐 尿肌酐 内生肌酐清除率
（滴/分） （次/分） （ %）
（%）
（%）
处理前│处理后
处理前│处理后 处理前│处理后 处理前│处理后
1兔 2兔 3兔 4兔 5兔 6兔
表3 处理前和处理后实验组家兔各指标变化
组 血压 呼吸 尿量 心率 血肌酐
尿肌酐 内生肌酐清除率
别 （mmHg)
处理前│处理后
（滴/分） （次/分） （ %）
（%）
急性肾功能不全的分类 根据病因学，临床上将急性肾功能不全
分为肾前性、肾性、肾后性三种。
急性肾功能的发病机制
肾缺血
肾中毒
血流动力学异常
肾小管损伤
皮质缺氧
髓质充血 肾小管阻塞 外髓部供氧
原尿反漏
GRF
少尿
滤过膜受损 滤过系数
【实验动物】
健康家兔，雄性，体重1.5~1.8Kg
【实验器材和药品】
• 20%乌拉坦溶液、庆大霉素注射液（1ml:4万单位）、 150U/ml肝素、0.9%生理盐溶液、苦味酸
氯化汞引起的家兔急性肾功能不全
氯化汞引起的家兔急性肾功能不全摘要【目的】学习用氯化高汞复制急性中毒性肾功能不全的动物模型；观察急性肾功能不全时尿蛋白、血肌酐、尿肌酐、肾酚红排泄率的变化及肾形态学的改变，并根据实验结果分析和讨论致病因素及导致急性肾功能不全的可能发病机制。
【方法】采用苦味酸沉淀蛋白法对正常家兔和急性肾功能不全的家兔血肌酐、尿肌酐、酚红排泄率进行测定，对数据进行统计学的处理，肉眼肾形态学的改变。
【结果】与正常组的家兔对比，实验组急性肾功能不全的家兔的血清肌酐升高，尿肌酐（P<0.05）明显降低，每分钟的尿量（P<0.01）减少，内生肌酐清除率显著下降，酚红排泄率下降，肾系数略有增大。
【结论】重金属等毒物可直接损害肾小管，引起肾脏急性中毒性肾功能不全。
急性肾功能不全会引起家兔肾小球滤过率下降，引起肾小管上皮细胞变性、坏死，引起肾血管收缩，肾血流减少，肾灌注压下降，肾小管排泌功能、肾小管上皮细胞重吸收功能障碍。
关键词：氯化汞；肾功能不全；血清肌酐；尿肌酐Abstract:【Objective】learn to use chlorinated high mercury copy acute toxic renal insufficiency of animal model. Acute renal not observe full-time urine protein, creatinine, serum creatinine, renal phenol red urine discharge rate changes and renal morphology change, and according to the analysis of experimental results and discussion of pathogenic factors and results in acute renal insufficiency may pathogenesis.【Method】the GuWeiSuan protein deposition method to study and normal acute renal all serum creatinine, urine rabbit serum creatinine, phenol red excretion rate for the determination of the statistical data, the processing, the naked eye kidney the morphology of the change.【Aesult】the normal group and the rabbit, and the contrast of acute renal insufficiency rabbit serum creatinine, urine creatinine increased (P < 0.05) reduced significantly, and each minute of urine output (P < 0.01), reduce the endogenous creatinine clearance decreased significantly, phenol red excretion rate, renal coefficient increases slightly.【Conclusion】other kinds of heavy metals can be directly damage caused renal tubular, acute toxic renal insufficiency. Not all the cause acute renal rabbit glomerular filtration rate drop, cause renal tubular epithelial cells degeneration and necrosis, cause renal vascular contraction, renal decreased blood flow, renal perfusion pressure drop, renal tubular row secrete function, renal tubular epithelial cells heavy absorption function obstacle. Keyword: Chlorinated mercury; Renal insufficiency; Serum creatinine; Urine creatinine肾脏是一个多功能的器官，具有排泄、调节、内分泌等功能。
家兔缺血再灌注型急性肾功能不全模型在实验教学中的应用
家兔缺血再灌注型急性肾功能不全模型在实验教学中的应用田玮;马尚寅;龚延萍;白志慧;哈斯巴根;钢苏和【摘要】目的评价以缺血再灌注方法复制的家兔急性肾功能不全模型的教学实用性、实验效果及稳定性等,探索适合学生实验的安全、快速、有效的急性肾功能不全动物模型建立方法.方法对20只家兔采取切除右肾并夹闭左肾动脉45 min后再灌注15 min的方法建立急性肾功能不全模型,对比缺血再灌注前后肾脏形态、血肌酐(Cre)及尿素氮(BUN)、尿蛋白等指标.结果缺血再灌注肾脏含血量显著下降,肾脏大体形态与缺血再灌注前有肉眼可见的显著区别.缺血再灌注后血样BUN、Cre 值较前均有所提高(P<0.05).结论缺血再灌注家兔急性肾功能不全模型建立方法安全无毒,可在有限的实验教学时间内完成,且操作难度适宜,便于实验前后对照,实验效果良好,可用于机能学实验等教学.【期刊名称】《卫生职业教育》【年(卷),期】2017(035)003【总页数】3页(P96-98)【关键词】急性肾功能不全;缺血再灌注;动物模型;家兔;实验教学【作者】田玮;马尚寅;龚延萍;白志慧;哈斯巴根;钢苏和【作者单位】内蒙古医科大学基础医学院,内蒙古呼和浩特 010110;内蒙古自治区人民医院,内蒙古呼和浩特 010017;内蒙古医科大学基础医学院,内蒙古呼和浩特010110;内蒙古医科大学蒙医药学院,内蒙古呼和浩特 010110;内蒙古医科大学蒙医药学院,内蒙古呼和浩特 010110;内蒙古医科大学蒙医药学院,内蒙古呼和浩特010110【正文语种】中文【中图分类】G424.4急性肾功能衰竭是急性肾功能不全的晚期阶段，在临床上两者往往属于同一概念而不加区别[1]。
该病病情发展急，病死率高，是临床常见的危重病之一，一直受到医学界的广泛关注，常应用于医学实验教学和基础医学研究。
根据急性肾功能不全病因的不同，复制动物模型的方法也不同，如去甲肾上腺素滴注法、低灌注法、顺铂诱导、油酸法、结扎双侧输尿管，等等[2]。
家兔肾功能不全
3、蛋白尿，血尿
4、显微镜下观察管型尿
（六）发生机制
• l、臀部肌肉丰满注入1％ HgCl2溶液(按1～ 1.5 ml／kg)。
• 2、将注射HgCl2溶液的家兔，仰卧固定于兔台上
• 耳中央动脉采血
导尿
导尿也可以通过膀胱插管进行
• 3、蛋白尿测定：
4显微镜下尿液图片检查
5、制备电镜观察切片和病理切片
(五) 实验结果：1、剖检结果
2、光镜电镜结果
病理生理学实验
家兔肾功能不全
内蒙古农业大学动物医学专业病理生理学
(一) 实验目的
• 1、复制中毒性肾病的动物模型。 • 2、观察中毒性肾脏形态结构的
变化,检测尿液成份的改变，并分 析发病机理。
(二) 实验动物
• 雄性家兔，体重 2.5-3.5 kg。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
(三) 实验药品与器材
(四) 实验方法与步骤
14.家兔急性肾功能不全
(acute renal falure)
学习制备中毒肾功能不全动物模型 观察氯化高汞对家兔肾功能的影响
掌握尿常规检查法、血浆尿素氮的
测定方法
概念 临床表现 分类 实验室检查
定义：各种原因在短期内引起肾脏秘尿功能
急剧障碍，以致机体内环境出现严重 紊乱的病理过程
肾前性(肾灌流不足)：低血容量、低血压 肾性(肾实质损坏)：肾小球、肾小管病变 肾后性（原尿排除障碍)：输尿管、膀胱、 尿道受阻
表2 血浆尿素氮测定加样步骤
试管 血浆（ml） 标准管（ml） 蒸馏水（ml） 显色剂（ml）
空白管 标准管 测定管
Hale Waihona Puke 0.10.1 0.1
10 10 10
实验前1天肌肉注射1%的氯化高汞1.5ml/kg 实验时，固定家兔，局麻下颈动脉插管,暴 露膀胱，用注射器抽取尿液5ml备用 输尿管插管（耳缘静脉输注10%葡萄糖50ml/k g），收集尿液，做尿常规检查 颈总动脉插管，做血浆尿素氮检查
Hgcl2中的汞离子可使蛋白质变性，沉淀， 使肾小球滤过率降低和肾小管结构受损，主要 损伤部位在近端肾小管。
表3 家兔急性肾功能不全实验结果
动物
对照兔 实验兔
血浆尿素氮
（mg/ml)
尿蛋白(%)
尿沉渣
实验前对离心管做好抗凝处理 颈总动脉放血 尿液加热时应缓慢移动试管,避免加热不均匀 导致试管破裂,试管口不能对着人 输尿管如能收集到足够的尿液,用该尿液做尿 常规检查,如收集不到,则用膀胱中抽取的尿液 先用低标定标,如浓度超过40mg/ml,则改用高 标定标
尿的变化: 少尿或无尿、蛋白尿、血 尿、低比重尿、高钠尿 内环境变化: 水中毒、高钾血症、 酸中毒、氮质血症
家兔急性肾功能不全
草
酸
钙
磷酸钙结晶
结 晶
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符号 — ± ＋
＋＋
＋＋＋ ＋＋＋＋
蛋白质的大约含量（﹪） 无
0.01以下 0.01～0.05 0.05～0.20
0.20～0.50 0.50以上
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9
红细胞管型
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10
白细胞管型
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11
上皮细胞管型
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12
透明管型
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13
颗粒管型
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14
脂肪管型
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15
尿酸结晶
取血0.1ml浆加入显色剂，在沸水中加热10min
取出置于冷水中冷却，用分光光度计测定尿素氮 的浓度（波长520nm）
试管
空白管 标准管 测定管
血浆 0.1
标准液 0.1
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蒸馏水 显色剂
0.1
10
10
10 7
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8
尿蛋白定性检查结果判断标准
结果 无混浊
微混浊 混浊 颗粒状混浊 絮状混浊 凝聚成块
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5
取5ml尿液于离心管中，离心5min、 1500r/min
上清夜做尿蛋白检查，取3ml上清夜放入试管 加热至沸腾，然后加入5﹪醋酸3～5滴，再加
热至沸腾，在黑色背景下观察
离心管底部沉渣用生理盐水（1：3）稀释摇匀 取一滴滴在载玻片上，盖上盖玻片进行镜检
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6
取1ml血液置于用草酸钾作抗凝处理的离心管内， 离心5min、3000r/min
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两种家兔急性肾功能不全模型复制方法学比较
设计者：###
临床医学本科 2003级##班
指导老师：###
一、实验目的
制备中毒性肾功能不全的家兔模型，比较高浓度甘油和氯化高汞两种方法复制动物模型的差异。
二、立题依据
急性肾功能不全是由于肾小球滤过率急剧减少或肾小管发生变性坏死而引起的一种严重的急性病理过程，多数为少尿或者无尿型。
其中，肾性肾功能不全由肾实质器质性病变引起，临床上以肾缺血和肾毒物引发的急性肾小管坏死最多见。
常见的制备中毒性肾功能不全的动物模型有两种方法：肌注50％甘油和1％氯化高汞。
其中50％甘油由于能造成挤压综合症，产生大量坏死脱落的肌红蛋白，入血后形成肾小管腔内压、肾小球囊内压均升高，引发肾血流重布，肾皮质缺血，髓质淤血，造成肾小球滤过率降低而引起少尿。
1％氯化高汞在临床上可作为非金属器皿的消毒剂使用。
氯化高汞对人体组织有腐蚀作用，且其中的重金属Hg²+对各种动物均可造成“坏死性肾病”，故用来制备中毒性肾功能不全的动物模型，主要作用部位是肾脏近端小管。
临床上尿常规检验包括尿液的蛋白质定性检验和沉渣镜检两种。
正常情况下，尿液中蛋白质含量极微，不能用普通方法检出，在尿液沉渣中也只偶有少量白细胞，上皮细胞和个别红细胞。
如在尿液当中检出蛋白质，在尿液沉渣中发现有较多红细胞、白细胞、上皮细胞，特别是各种管型，即表示肾脏已有实质性损害。
肾功能发生障碍时，体内代谢产物尿素的排泄量减少，血浆中尿素氮含量升高。
因此，通过测定血浆中尿素氮的含量来反映肾的功能。
尿素与二乙酰肟在酸性溶液中经Fe³+的翠华发生缩合，并在氨基硫脲的存在下，生成3－羟基－5，6二甲基－1，2，4－三嗪，使溶液转为红色，利用比色法对血浆尿素氮进行定量测定。
参考文献
[1] 赵自刚，牛春雨，侯亚利等. 甘油致家兔急性肾功能衰竭血黏度及凝血功能的变化.中国微循环，2004，8(3):146-148
[2] 赵自刚，牛春雨，侯亚利等. 两种家兔急性肾功能衰竭模型复制方法的比较，河北北方学院学报，2004，21（5）
三、实验方法及技术路线
实验材料：家兔、兔手术台、手术器械、试管、试管夹、恒温水浴、注射器、玻璃分针、塑料插管、光学显微镜、载玻片、离心机、离心管、752型紫外分光光度计、50％甘油、1％Hgcl2 、生理盐水、1％普鲁卡因、50％葡萄糖溶液
实验分组：甘油组：肌注50％甘油
氯化高汞组：皮下注射1％HgCl
2
对照组：注射生理盐水
观察指标：血浆尿素氮，尿液沉渣，尿蛋白
实验方法与步骤：
1、实验前24小时，分别为甘油组兔肌内注射50％甘油10.0ml/kg.bw，氯
化高汞组兔皮下注射1％HgCl
2
1.5ml/kg.bw，以制备急性中毒性肾功能不全模型。
对照组注射等量生理盐水。
2、实验时，兔称重后仰卧固定于兔手术台，相应手术野局部麻醉。
气管插管；开腹腔——→膀胱取5ml尿液做尿常规检查；输尿管插管——→收集两侧输尿管尿液做尿常规检查。
动脉插管取血1ml，立即置于预先加有草酸钾抗凝剂的离心管内，轻轻搅匀后离心，供测定血浆尿素氮含量使用。
再从耳缘静脉输注50％葡萄糖溶液10ml/kg，以保证足够尿量。
3、尿常规检验：
（1）尿液沉渣的镜检：
取自输尿管或膀胱中收集的尿液5ml，离心5min，倾去上清液(供尿蛋白检查用)，离心管底部沉渣用适量生理盐水稀释（1：3）后摇匀，滴在载玻片上，涂匀后镜检。
镜检时光线应较弱，先用低倍镜将涂片全面检视一遍，以免遗漏管型等物体。
用高倍镜检视5～10个视野，看是否有管型、结晶及血细胞等。
（2）尿蛋白的定性检查：
将尿液离心后的上清液约3ml放入试管中，用试管夹夹住试管，在酒精灯上加热至沸腾（试管口对着窗外，并不断转动试管以免受热不均而炸裂），沸腾后加入5％醋酸3～5滴，再加热至沸腾，然后在黑色背景下按下表检验：结果符号蛋白质的大约含量％
无混浊
微混浊
混浊
颗粒状混浊絮状混浊凝聚成块－
＋/－
＋
＋＋
＋＋＋
＋＋＋＋
无
0.01以下
0.01～0.05
0.05~0.20
0.20~0.50
0.50以上
（3）血浆尿素氮测定。
将用草酸钾作抗凝剂处理的血液离心5min（3000r/min）后分离出血浆，按
下表加入显色剂，然后在沸水中加热10min，取出置于冷水中冷却，用752型分
光光度计直接测定血浆中尿素氮的浓度（波长520nm）。
测定时一般用低标准液（含尿素氮20mg/100ml），当血浆尿素氮含量超过40mg％（14.28mmol/L）时换
用高标准液（含尿素氮50mg/100ml）。
试管血浆（ml）尿素氮标准液（ml）蒸馏水（ml）尿素氮显色剂（ml）空白管0.1 10.0
标准管0.1 10.0
测定管0.1 10.0
实验观察记录
动物血浆尿素氮（mg/ml）尿蛋白（％）尿沉
渣甘油组兔
氯化高汞组兔
对照组兔
分析比较两种复制动物急性肾功能不全的方法。
四、实验结果预测：
1、50％的甘油和1％氯化高汞都能复制急性肾功能不全的动物模型。
2、使用氯化高汞复制该模型比高浓度甘油造病更简便易行，效果更明显。