植物组织培养学(有图片)

0.0125 0.00125 0.00125 1.865 100 1.390
5.0
甘氨酸
2
0.1
烟酸
0.5
200
0.025
VB6
0.5
VB1
0.1
0.025 0.025
母液 定容 体积 （ml） 1000 500 500
1000
500
250
配1L MS 培养基 吸取量 （ml）
20 10 10
20
10
《植物组织培养学》实验
宜春学院生命科学与资源环境学院 园林教研室 杨育红 园艺教研室 卢其能 却志群
实验一 植物组织培养实验室参观
• 一、目的要求 • 通过本次实验，使学生掌握如何组建植物
组织培养实验室；同时熟悉组培中涉及的 各种仪器设备和器皿用具的使用方法。
• 二、仪器用具 • 组培室内的各种实验设备。 • 三、实验内容 • 1．介绍合理的组培室布局 • 2．介绍实验设备和用具 • 3．介绍实验的操作规程。 • 四、作业 • 将本此实训内容整理成实验报告。 • 每人设计一个植物组织培养室的组建方案。
•
或B5+2.4-D1.0+KT0.2
三、方法步骤
• 1．进入实验室后用水和肥皂洗净双手，穿上灭菌过
的专用实验服、帽子、鞋子。
• 2．打开超净工作台内的吹风和紫外灯，并打开无菌
操作室内的紫外灯，照射20分钟（进行紫外灭菌）
• 3．进行外植体预处理（即对植物组织进行修整，去
掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中 冲洗干净。）
度（mg/l）*配制培养基的体积（l））/母 液中某成分浓度（mg/l）
• （2）植物激素母液吸取量计算： • 吸取母液量（ml）=（培养基中激素浓度
（mg/l）*配制培养基体积（l））/激素母 液浓度（mg/ml）
实验四 愈伤组织的诱导
• 一、目的要求
•
本次试验，首先通过在无菌操作台上
进行无菌操作训练，使学生初步掌握组织
• 4．加蒸馏水定容后倒入锅中
• 5．加入琼脂：6.5g/l（视琼脂质量而定）,后调节PH值
(用1mol/l的NaOH或1mol/l的HCL)
• 6.熔化琼脂: 在电炉上加热溶液,并不断搅拌,使琼脂熔
化.
• 7.培养基的分装
四、作业
• 1．整理实验报告 • 注：（1）配制培养基时母液吸取量的计算： • 吸取量（ml）=（培养基中某成分的规定浓
1650 1900 370 440 170 6.2 22.3 8.6 0.83
82.5
50
95.0
18.5
100
22.0
100
8.5
0.31
1.115
0.43
50
0.0415
Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O Cocl2.6H2O Na2-EDTA FeSO4.7H2O
肌醇
0.25 0.025 0.025 37.3 27.8 100
（说明设计思路）
超净工作台
实验二 MS培养基母液的配制与保存
• 一、目的要求 • 通过MS培养基的母液配制和保存,掌握
配制和保存培养基母液的基本技能.
• 二、材料与用具
• 1 所需仪器及设备：天平、烧杯、定容瓶、
量筒、蒸馏水、母液瓶、标签、冰箱等。
• 2 所需药品及试剂：配制MS培养基所需的
• （2）储藏：将母液瓶储放在冰箱内备用。 • 四、作业 • 1．整理实验报告。 • 2．列一张配制MS培养基母液成分表。
母液种 类
大量元 素
母液 1
2
3
微量元 素
5
铁盐
4
有机成 分
6
配制MS培养基母液成分表
成分
规
扩
称
定
大
取
量
倍
量
（mg/l）
数
（g）
NH4NO3 KNO3 MgSO4.7H2O Cacl2.2H2O KH2PO4 H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O KI
5
实验三 MS固体培养基的配制
• 一 目的要求 • 通过 MS固体培养基的配制，掌握配制
培养基的基本技能。
二 材料与用具
• 1 所需仪器及设备：电炉、酸度计、高压湿热
灭菌器
• 2 所需药品及试剂：配制MS培养基的各种母液、
生长调节物质母液、 0.1mol/l NaOH、 0.1mol/l Hcl 、琼脂、蔗糖、蒸馏水
• 3 其他材料：移液管、量筒、定容瓶、培养瓶、
标签、铅笔。
三 方法步骤
• 1．按母液顺序和规定量，用吸管提取母液，放入盛有一
定量蒸馏水的量筒
• 母液一 20ml
母液二 10ml
母液三
10ml
• 母液四 10ml
母液五 20ml
母液六
5ml
• 2．加入生长调节物质： 适配制的培养基而定。
• 3．加入蔗糖：30g/l
培养的无菌操作技术。其次，通过本次实
验是了解并掌握愈伤组织诱导的基本程序
和方法。
二 材料与用具
• 1 所需仪器及工具：超净工作台、70%酒精、
95%酒精、接种器械（主要指剪刀、镊子
等）、培养材料或外植体、0.1%的升汞、
无菌水等。
来自百度文库
• 2 愈伤组织诱导培养基：
•
MS+2.4-D1.0+KT0.2
四、作业
• 1.整理实验报告。 • 2.接种一周后,观察接种材料的污染情况,
并分析污染原因。
• 3.25天后统计愈伤组织的诱导率，记录实
验现象。
实验五 月季茎段的离体培养
• 一、目的要求
•
通过本次试验，熟练掌握外植体的表
面灭菌方法，并巩固掌握无菌操作的基本
要领，重点掌握一般花卉的器官的离体培
药品、生长调节物质、蒸馏水、95%酒精、 0.1mol/l的NaOH、0.1mol/l的HCl
• 三、方法步骤
• 1．母液的配制 • 根据MS培养基配方表配制六种母液。（详见附表） • 2．母液的保存 • （1）装瓶：将配制好的母液分别倒入瓶中，瓶上
贴好标签，注明培养基名称、母液号、吸取量与 配制日期。
• 4．照射20分钟后，关闭紫外灯，打开照明灯，用
70%的酒精擦拭工作台和双手，准备进行外植体的消 毒和接种工作。
• 5．用蘸有70%的酒精的纱布擦拭装有培养基的培
养瓶，放进工作台。
• 6．把接种器械浸泡在95%酒精中，在火焰上灭菌
后，放在器械架上。
• 7．胡萝卜种子经75%乙醇浸泡30s，无菌水冲洗2
遍，再用0.1%升汞浸泡10分钟，无菌水冲洗3-5次 后，接种于不含任何激素的1/2MS固体培养基含 （1.5%蔗糖）上，于24℃暗培养条件下萌发7-10 天后，将子叶和下胚轴切成0.5cm的截段作为组织 培养的材料。
• 8.进行接种。
• 9.接种完毕后,清理和关闭超净工作台,并将培养
瓶放入培养室培养。