2第三章 红细胞血型检测
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2. 次侧交叉配血：受血者红细胞与供者血清(浆) 反应，检测供者血液中是否存在针对受血者红 细胞的抗体。
3. 自身对照：受血者红细胞与自身血清(浆)反应， 以排除自身抗体、直接抗球蛋白试验阳性及红 细胞缗钱状假凝集等干扰试验结果的因素。
第二节 盐水介质试验技术
重点提示
• 实验原理 • 实验方法 • 结果判读
• 原理：当需要确定某些被检血清的抗体特 异性时，可用已知血型物质辅助鉴定。如 怀疑血清中含有抗-P1时，可用商品化的P1 血型物质来确认
• 适用范围：用已知血型物质测定未知抗体 的特异性
第九节 红细胞血型分子生物学检测
重点提示
• 分子生物学检测技术介绍 • 红细胞血型检测中的应用
分子生物学检测技术介绍
适用范围
多用于抗球蛋白试验、ABO血型正/反定 型、交叉配血及其他血型系统抗原检测。 •中性胶 不含抗体，相当于试管的作用 •特异性胶 含特异性抗体，如抗-A、抗-B， 可进行AB抗原检测 •抗球蛋白胶 含抗球蛋白，可进行IgG类抗体 的检测
优点
操作简便、结果准确、灵敏度高、便于 保存、节约标本、标准化、使用安全
唾液中可溶性ABH血型物质的检测
• 原理：人体液中可检出ABH抗原物质，称 为分泌型；不存在ABH抗原物质，称为非 分泌型。H物质在A、B、O、AB四型分泌 型个体唾液中均存在， O型人含量最多
• 适用范围：用于ABO、MN等血型鉴定的辅 助试验
• 实验方法：抑制物处理，抗体标化
P1、I等血型抗原凝集抑制试验
• 输血前检查包括：ABO血型和RhD血型鉴定；不 规则抗体筛查和鉴定；交叉配血试验等。
• 应用于输血前检查的试验技术有盐水介质、酶介 质、凝聚胺介质试验技术和抗球蛋白试验、微柱 凝胶试验、吸收放散试验、凝集抑制试验以及分 子生物学检测技术，这些试验技术的应用大幅提 升了临床输血安全。
Thank you !
• RhD血型鉴定：红细胞上存在D抗原时，可与抗D分型血清产生特异性的抗原抗体反应，出现红 细胞凝集为RhD阳性，不凝集者为RhD阴性。
不规则抗体的筛查和鉴定
• 不符合ABO血型系统Landsteiner法则的血型抗体， 即抗-A、抗-B之外的血型抗体
• ABO系统中的亚型，变异型的抗-A1或某种抗-B等 抗体
凝集抑制试验简介
• 可溶性血型物质：人类血型抗原部分以游 离形式存在于血浆、唾液等液体中，如 ABH、Lewis、I、P、Chido、Rodger等
• 凝集抑制试验：用于鉴定存在于体液和(或) 非红细胞上的可溶性血型物质，利用这些 血型物质可以结合相应抗体这一性质，用 红细胞检测抗体是否被吸收或中和的情况， 以显示相应血型物质的存在。
红细胞血型检测中的应用
• ABO疑难血型的鉴定 • 发现ABO血型新等位基因 • ABO基因突变的研究 • 新生儿溶血病（HDFN）的辅助诊断 • 某些疾病的病理研究 • 法医个体识别
本章小结
• 输血前检查的目的是准确选择用于受血者的血液 或血液制剂，使输注的血液成分能在受血者体内 存活并发挥其有效作用。
结果判读
• 阳性结果 红细胞出现凝集反应或溶血 • 阴性结果 红细胞呈游离的混悬状态 • 溶血 阳性结果
第三节 酶介质试验技术
重点提示
• 实验原理 • 实验方法
实验原理
• 作用于红细胞表面的多糖链，减少红细胞 表面负电荷，缩短细胞间距，增强IgG抗体 与红细胞表面抗原的凝集反应
• 改变红细胞表面结构，暴露出某些隐蔽抗 原，使IgG类不完全抗体可以与酶处理的红 细胞在盐水介质中发生凝集反应
• 灵敏度高，可检出IgM和IgG类抗体
实验方法
• 两步：红细胞去电荷、红细胞复电荷 • 无抗体致敏的红细胞可在试验过程中产生
可逆的非特异性凝集，抗体致敏的红细胞 产生的凝集则不可逆 • 试剂：低离子介质、凝聚胺溶液、重悬液
第五节 抗人球蛋白试验技术
重点提示
• 实验原理 • 实验方法 • 临床应用
实验原理
•分子筛技术和免疫学技术相结合的产物 •游离红细胞和凝集红细胞是否能通过特 殊结构的凝胶介质，从而使不同状态的红 细胞得以分离
阴性反应 离心力作用下，未与抗体结合的游离红细 胞因体积小通过凝胶层，沉淀于底部，形成“细胞扣” 阳性反应 与特异性抗体结合的红细胞因体积大被凝 胶阻滞不能通过凝胶层，留于凝胶介质的顶部或悬浮于 凝胶中
吸收试验
原理：待检血清抗体加入已知抗原的红细胞，或待 检抗原红细胞加入已知效价的特异性抗血清，产生 抗原抗体反应，离心后分离经过抗原吸收的血清。 将吸收前与吸收后的血清用生理盐水作倍比稀释并 测定其效价差异，若吸收后的血清效价低于吸收前， 证明待检血清中含有与已知红细胞抗原对应的抗体， 或待检红细胞与加入的已知抗原的红细胞血型相同。
第二章 红细胞血型检测
目录
• 第一节 输血前免疫血液学检查 • 第二节 盐水介质试验技术 • 第三节 酶介质试验技术 • 第四节 凝聚胺介质试验技术 • 第五节 抗球蛋白试验技术 • 第六节微柱凝胶介质试验技术
目录
• 第七节 吸收放散试验技术 • 第八节 凝集抑制试验技术 • 第九节 红细胞血型分子生物学检测
实验原理
• 在盐水介质（saline medium）中，IgM类天 然抗体分子链较长可直接与含有相应抗原 的红细胞结合，并呈现肉眼可见的凝集。
• 仅能检出IgM类抗体，无法检出IgG类抗体。
实验方法
• 平板法 应用于常规ABO血型和RhD抗原定 型，易出现假阳性或假阴性结果。
• 试管法 定型试验或半定量试验，如测定抗 体效价，结果准确、可靠。
第七节 吸收放散试验技术
重点提示
• 吸收试验 • 放散试验 • 临床应用
吸收试验
• 根据被检标本中所含抗体的最适反应温度， 对其进行吸收。
• 冷抗体4℃反应最强，通常用冷吸收技术， 即自身抗体用自身红细胞吸收，同种抗体 用对应红细胞吸收，多为IgM抗体
• 温抗体 采用酶处理后的红细胞在37℃孵育， 多为IgG抗体
放散试验
• 通过改变物理条件把结合到红细胞膜上的 抗体解离下来
• 获得红细胞上致敏的抗体（自身抗体）用 于自身吸收
• 获得没有抗体吸附的红细胞，用于血型鉴 定和交叉配血
放散试验
• 试验方法：热放散技术、乙醚放散技术、 磷酸氯喹放散技术、冻融放散技术、柠檬 酸放散技术、氯仿/三氯乙烯放散技术、二 甲苯放散技术
临床应用
•鉴定存在于红细胞上的弱抗原，分离、鉴定 混合抗体、鉴定新生儿溶血病和免疫性输血 反应的抗体等 •IgM抗体检测时应使用冷吸收、热放散 •IgG抗体检测时应在37℃吸收、乙醚放散
第八节 凝集抑制试验
重点提示
• 凝集抑制试验概念 • 唾液中可溶性ABH血型物质的检测 • P1、I等血型抗原凝集抑制试验
实验原理
• 常用：木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶 • Rh、Kidd血型系统的检出效果最好 • 对M、N、S、s、Fya、Fyb抗原破坏较显著
实验方法
• 一步法 在血清和红细胞反应体系中直接加 入酶液促进抗体与相应红细胞反应，敏感 性较差
• 二步法 用酶液消化红细胞后，洗涤去净酶 液，增强红细胞抗原性，使不完全抗体与 之发生反应，出现特异性凝集
临床应用
• DAT：胎母血型不合新生儿溶血病的诊断、 免疫溶血性输血反应的调查、自身免疫性 溶血性贫血的诊断及药物诱发型溶血病的 诊断
• IAT：血型鉴定、交叉配血、器官移植、妊 娠所致免疫性血型抗体以及自身免疫性血 型抗体的检出和鉴定
第六节 微柱凝胶介质试验技术
重点提示
• 实验原理 • 适用范围 • 优点
实验方法
•经典的血清学试验方法，主要用于检测 IgG、IgA等抗体参与的抗原-抗体反应， 也可测定补体组分C3、C4片段参与的免疫 反应。 •直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验
DAT用于检测在患者体内致敏红细胞的不完全抗体和 （或）补体。 IAT用于检测血清中的不完全抗体，即在体外将人血 清与红细胞致敏，再与抗球蛋白试剂反应。
结果判读
• 阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管出 现凝集为阳性，不出现凝集判定为阴性。
• 阳性对照管不凝集或（和）阴性对照管出现凝集， 试验失败。分析原因，重新试验。
第四节 凝聚胺介质试验技术
重点提示
•实验原理 •实验方法
实验原理
• 凝聚胺是一种高价阳离子季铵盐多聚物， 可中和红细胞表面的负电荷，引起正常红 细胞可逆性的非特异性聚集。加入柠檬酸 重悬液(中和液)后，仅由凝聚胺引起的非特 异性聚集会因电荷中和而消失
wk.baidu.com
• 基本方法：利用DNA序列的特异性来间接 区分等位基因
• 包括：引物延伸法（PCR-SSP）、限制性片 段长度多态分析法（RFLP）、PCR-序列特 异性寡核苷酸探针（PCR-SSOP）、PCR-单 链构象多态（PCR-SSCP）、PCR反向点杂 交（PCR-RDB）、PCR-DNA测序、基因芯 片及PCR指纹图
实验原理
• 大部分IgG抗体与具有相应抗原的红细胞在 盐水介质中能够特异性结合，但不发生肉 眼可见的凝集反应，该类抗体称为不完全 抗体
• 抗球蛋白分子的Fab片段可与包被在红细胞 上的球蛋白分子的Fc片段结合，从而通过 抗球蛋白分子的搭桥作用使不完全抗体与 具有相应抗原的红细胞产生肉眼可见的凝 集反应
• 包括同种抗体和自身抗体 • 实验方法：盐水介质法、白蛋白介质法、低离子
强度介质法(LISS)、酶技术、抗球蛋白试验、凝 聚胺(polybrene)促凝技术和凝胶试验（Gel test） 等
交叉配血试验
1. 主侧交叉配血：受血者血清(浆)与供者红细胞 反应，检测受血者体内是否存在针对供者红细 胞的抗体。
第一节 输血前免疫血液学检查
重点提示
• ABO血型和RhD血型鉴定 • 不规则抗体的筛查和鉴定 • 交叉配血试验
ABO血型和RhD血型鉴定
• 原理：利用抗原与抗体之间特异性结合的凝集反 应来完成。
• ABO血型鉴定：正定型、反定型。
正定型，检测红细胞表面是否存在A抗原和(或)B抗原；反 定型，检测血清中是否存在抗-A／抗-B抗体（凝集素）。
3. 自身对照：受血者红细胞与自身血清(浆)反应， 以排除自身抗体、直接抗球蛋白试验阳性及红 细胞缗钱状假凝集等干扰试验结果的因素。
第二节 盐水介质试验技术
重点提示
• 实验原理 • 实验方法 • 结果判读
• 原理：当需要确定某些被检血清的抗体特 异性时，可用已知血型物质辅助鉴定。如 怀疑血清中含有抗-P1时，可用商品化的P1 血型物质来确认
• 适用范围：用已知血型物质测定未知抗体 的特异性
第九节 红细胞血型分子生物学检测
重点提示
• 分子生物学检测技术介绍 • 红细胞血型检测中的应用
分子生物学检测技术介绍
适用范围
多用于抗球蛋白试验、ABO血型正/反定 型、交叉配血及其他血型系统抗原检测。 •中性胶 不含抗体，相当于试管的作用 •特异性胶 含特异性抗体，如抗-A、抗-B， 可进行AB抗原检测 •抗球蛋白胶 含抗球蛋白，可进行IgG类抗体 的检测
优点
操作简便、结果准确、灵敏度高、便于 保存、节约标本、标准化、使用安全
唾液中可溶性ABH血型物质的检测
• 原理：人体液中可检出ABH抗原物质，称 为分泌型；不存在ABH抗原物质，称为非 分泌型。H物质在A、B、O、AB四型分泌 型个体唾液中均存在， O型人含量最多
• 适用范围：用于ABO、MN等血型鉴定的辅 助试验
• 实验方法：抑制物处理，抗体标化
P1、I等血型抗原凝集抑制试验
• 输血前检查包括：ABO血型和RhD血型鉴定；不 规则抗体筛查和鉴定；交叉配血试验等。
• 应用于输血前检查的试验技术有盐水介质、酶介 质、凝聚胺介质试验技术和抗球蛋白试验、微柱 凝胶试验、吸收放散试验、凝集抑制试验以及分 子生物学检测技术，这些试验技术的应用大幅提 升了临床输血安全。
Thank you !
• RhD血型鉴定：红细胞上存在D抗原时，可与抗D分型血清产生特异性的抗原抗体反应，出现红 细胞凝集为RhD阳性，不凝集者为RhD阴性。
不规则抗体的筛查和鉴定
• 不符合ABO血型系统Landsteiner法则的血型抗体， 即抗-A、抗-B之外的血型抗体
• ABO系统中的亚型，变异型的抗-A1或某种抗-B等 抗体
凝集抑制试验简介
• 可溶性血型物质：人类血型抗原部分以游 离形式存在于血浆、唾液等液体中，如 ABH、Lewis、I、P、Chido、Rodger等
• 凝集抑制试验：用于鉴定存在于体液和(或) 非红细胞上的可溶性血型物质，利用这些 血型物质可以结合相应抗体这一性质，用 红细胞检测抗体是否被吸收或中和的情况， 以显示相应血型物质的存在。
红细胞血型检测中的应用
• ABO疑难血型的鉴定 • 发现ABO血型新等位基因 • ABO基因突变的研究 • 新生儿溶血病（HDFN）的辅助诊断 • 某些疾病的病理研究 • 法医个体识别
本章小结
• 输血前检查的目的是准确选择用于受血者的血液 或血液制剂，使输注的血液成分能在受血者体内 存活并发挥其有效作用。
结果判读
• 阳性结果 红细胞出现凝集反应或溶血 • 阴性结果 红细胞呈游离的混悬状态 • 溶血 阳性结果
第三节 酶介质试验技术
重点提示
• 实验原理 • 实验方法
实验原理
• 作用于红细胞表面的多糖链，减少红细胞 表面负电荷，缩短细胞间距，增强IgG抗体 与红细胞表面抗原的凝集反应
• 改变红细胞表面结构，暴露出某些隐蔽抗 原，使IgG类不完全抗体可以与酶处理的红 细胞在盐水介质中发生凝集反应
• 灵敏度高，可检出IgM和IgG类抗体
实验方法
• 两步：红细胞去电荷、红细胞复电荷 • 无抗体致敏的红细胞可在试验过程中产生
可逆的非特异性凝集，抗体致敏的红细胞 产生的凝集则不可逆 • 试剂：低离子介质、凝聚胺溶液、重悬液
第五节 抗人球蛋白试验技术
重点提示
• 实验原理 • 实验方法 • 临床应用
实验原理
•分子筛技术和免疫学技术相结合的产物 •游离红细胞和凝集红细胞是否能通过特 殊结构的凝胶介质，从而使不同状态的红 细胞得以分离
阴性反应 离心力作用下，未与抗体结合的游离红细 胞因体积小通过凝胶层，沉淀于底部，形成“细胞扣” 阳性反应 与特异性抗体结合的红细胞因体积大被凝 胶阻滞不能通过凝胶层，留于凝胶介质的顶部或悬浮于 凝胶中
吸收试验
原理：待检血清抗体加入已知抗原的红细胞，或待 检抗原红细胞加入已知效价的特异性抗血清，产生 抗原抗体反应，离心后分离经过抗原吸收的血清。 将吸收前与吸收后的血清用生理盐水作倍比稀释并 测定其效价差异，若吸收后的血清效价低于吸收前， 证明待检血清中含有与已知红细胞抗原对应的抗体， 或待检红细胞与加入的已知抗原的红细胞血型相同。
第二章 红细胞血型检测
目录
• 第一节 输血前免疫血液学检查 • 第二节 盐水介质试验技术 • 第三节 酶介质试验技术 • 第四节 凝聚胺介质试验技术 • 第五节 抗球蛋白试验技术 • 第六节微柱凝胶介质试验技术
目录
• 第七节 吸收放散试验技术 • 第八节 凝集抑制试验技术 • 第九节 红细胞血型分子生物学检测
实验原理
• 在盐水介质（saline medium）中，IgM类天 然抗体分子链较长可直接与含有相应抗原 的红细胞结合，并呈现肉眼可见的凝集。
• 仅能检出IgM类抗体，无法检出IgG类抗体。
实验方法
• 平板法 应用于常规ABO血型和RhD抗原定 型，易出现假阳性或假阴性结果。
• 试管法 定型试验或半定量试验，如测定抗 体效价，结果准确、可靠。
第七节 吸收放散试验技术
重点提示
• 吸收试验 • 放散试验 • 临床应用
吸收试验
• 根据被检标本中所含抗体的最适反应温度， 对其进行吸收。
• 冷抗体4℃反应最强，通常用冷吸收技术， 即自身抗体用自身红细胞吸收，同种抗体 用对应红细胞吸收，多为IgM抗体
• 温抗体 采用酶处理后的红细胞在37℃孵育， 多为IgG抗体
放散试验
• 通过改变物理条件把结合到红细胞膜上的 抗体解离下来
• 获得红细胞上致敏的抗体（自身抗体）用 于自身吸收
• 获得没有抗体吸附的红细胞，用于血型鉴 定和交叉配血
放散试验
• 试验方法：热放散技术、乙醚放散技术、 磷酸氯喹放散技术、冻融放散技术、柠檬 酸放散技术、氯仿/三氯乙烯放散技术、二 甲苯放散技术
临床应用
•鉴定存在于红细胞上的弱抗原，分离、鉴定 混合抗体、鉴定新生儿溶血病和免疫性输血 反应的抗体等 •IgM抗体检测时应使用冷吸收、热放散 •IgG抗体检测时应在37℃吸收、乙醚放散
第八节 凝集抑制试验
重点提示
• 凝集抑制试验概念 • 唾液中可溶性ABH血型物质的检测 • P1、I等血型抗原凝集抑制试验
实验原理
• 常用：木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶 • Rh、Kidd血型系统的检出效果最好 • 对M、N、S、s、Fya、Fyb抗原破坏较显著
实验方法
• 一步法 在血清和红细胞反应体系中直接加 入酶液促进抗体与相应红细胞反应，敏感 性较差
• 二步法 用酶液消化红细胞后，洗涤去净酶 液，增强红细胞抗原性，使不完全抗体与 之发生反应，出现特异性凝集
临床应用
• DAT：胎母血型不合新生儿溶血病的诊断、 免疫溶血性输血反应的调查、自身免疫性 溶血性贫血的诊断及药物诱发型溶血病的 诊断
• IAT：血型鉴定、交叉配血、器官移植、妊 娠所致免疫性血型抗体以及自身免疫性血 型抗体的检出和鉴定
第六节 微柱凝胶介质试验技术
重点提示
• 实验原理 • 适用范围 • 优点
实验方法
•经典的血清学试验方法，主要用于检测 IgG、IgA等抗体参与的抗原-抗体反应， 也可测定补体组分C3、C4片段参与的免疫 反应。 •直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验
DAT用于检测在患者体内致敏红细胞的不完全抗体和 （或）补体。 IAT用于检测血清中的不完全抗体，即在体外将人血 清与红细胞致敏，再与抗球蛋白试剂反应。
结果判读
• 阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管出 现凝集为阳性，不出现凝集判定为阴性。
• 阳性对照管不凝集或（和）阴性对照管出现凝集， 试验失败。分析原因，重新试验。
第四节 凝聚胺介质试验技术
重点提示
•实验原理 •实验方法
实验原理
• 凝聚胺是一种高价阳离子季铵盐多聚物， 可中和红细胞表面的负电荷，引起正常红 细胞可逆性的非特异性聚集。加入柠檬酸 重悬液(中和液)后，仅由凝聚胺引起的非特 异性聚集会因电荷中和而消失
wk.baidu.com
• 基本方法：利用DNA序列的特异性来间接 区分等位基因
• 包括：引物延伸法（PCR-SSP）、限制性片 段长度多态分析法（RFLP）、PCR-序列特 异性寡核苷酸探针（PCR-SSOP）、PCR-单 链构象多态（PCR-SSCP）、PCR反向点杂 交（PCR-RDB）、PCR-DNA测序、基因芯 片及PCR指纹图
实验原理
• 大部分IgG抗体与具有相应抗原的红细胞在 盐水介质中能够特异性结合，但不发生肉 眼可见的凝集反应，该类抗体称为不完全 抗体
• 抗球蛋白分子的Fab片段可与包被在红细胞 上的球蛋白分子的Fc片段结合，从而通过 抗球蛋白分子的搭桥作用使不完全抗体与 具有相应抗原的红细胞产生肉眼可见的凝 集反应
• 包括同种抗体和自身抗体 • 实验方法：盐水介质法、白蛋白介质法、低离子
强度介质法(LISS)、酶技术、抗球蛋白试验、凝 聚胺(polybrene)促凝技术和凝胶试验（Gel test） 等
交叉配血试验
1. 主侧交叉配血：受血者血清(浆)与供者红细胞 反应，检测受血者体内是否存在针对供者红细 胞的抗体。
第一节 输血前免疫血液学检查
重点提示
• ABO血型和RhD血型鉴定 • 不规则抗体的筛查和鉴定 • 交叉配血试验
ABO血型和RhD血型鉴定
• 原理：利用抗原与抗体之间特异性结合的凝集反 应来完成。
• ABO血型鉴定：正定型、反定型。
正定型，检测红细胞表面是否存在A抗原和(或)B抗原；反 定型，检测血清中是否存在抗-A／抗-B抗体（凝集素）。