红细胞血型及相关检测
冻干前后红细胞血型及生物活性指标的检测
冻干前后红细胞血型及生物活性指标的检测吴学忠;刘忠;吕蓉;李敏;李素萍;於娟;赵丹【摘要】目的检测冻干前、后红细胞血型抗原及其生物学活性,了解冻干前、后红细胞血型抗原及其生物学活性的变化情况.方法红细胞血型抗原的检测采用血型血清学方法,2,3-DPG和ATP用ELISA法.结果在ABO、Rh、MNSs、Kell、Duffy、P血型抗原中,冷冻前、冻干后红细胞血型抗原一致;在Lewis血型抗原中,冷冻前、冻干后红细胞血型抗原有变化.冷冻前、冻干后红细胞2,3-DPG和ATP含量均无明显变化.结论冷冻前、冻干后红细胞Lewis血型系统中的Lea和Leb血型抗原变化有明显差异;冷冻前、冻干后红细胞2,3-DPG和ATP含量变化无统计学意义.%Objective To detect the blood group antigens, the levels of 2,3-DPG and ATP of red blood cells (RBCs) before and after freeze-drying. Also the changes of blood group antigens and biological activity of RBCs beforeand after RBCs freeze-drying was observed. Methods The blood group antigens of RBCs were detected by the blood group serology, the levels of 2,3-DPG and ATP were detected by ELISA. Results The blood group antigens of RBCs were the same as before and after freeze-drying about ABO, Rh, MNSs, Kell, Duffy and P blood group systems. But the blood group antigens of RBCs of Lewis blood group systems were different before and after freeze-drying. The levels of 2,3-DPG and ATP of RBCs before and after freeze-drying didn't change significantly. Conclusion The Lea and Leb blood group antigens of RBCs before and after freeze-dryingof Lewis blood group systems have changed significantly. The levels of 2,3-DPG and ATP of RBCs before and after freeze-drying havn't chenged significantly.【期刊名称】《临床输血与检验》【年(卷),期】2011(013)004【总页数】4页(P316-319)【关键词】冷冻干燥;红细胞;血型;生物活性【作者】吴学忠;刘忠;吕蓉;李敏;李素萍;於娟;赵丹【作者单位】230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;大连医科大学检验医学院【正文语种】中文【中图分类】R318.52;R331.1+41真空冷冻干燥保存是一种理想的红细胞保存方法,但该技术尚处于实验探索阶段。
ABO血型检测(玻片法)
3．ABO红细胞血型检测波片法原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B 型、AB型、及O型四种。
可利用红细胞凝集试验即用已知抗A或抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原.ABO抗体有天然和免疫两种。
天然抗体是指未经可察觉的抗原刺激而产生的抗体.人在出生前尚未产生抗体，一般在出生几个月后才开始形成自己的抗体;到5-6岁时,具有较高的效价.样本:在操作前应先看说明书，有的厂商推荐用全血,有的厂商指定用盐水、血清或血浆悬浮的浓度较低的红细胞悬浮液。
试剂:有卫生部颁发的生产许可证和批准文号的厂家生产的经中国药品生物制品检定所批批检定合格，并贴有防伪标签的试剂。
试剂盒组成：1．有生产许可证的单克隆或多克隆抗A抗原抗体。
2．有生产许可证的单克隆或多克隆抗B抗原抗体。
3．有生产许可证的单克隆或多克隆抗A、B抗原抗体.4．玻璃载波片或划分成小格的检测板。
5．蘸试剂棒。
操作步骤:1．取清洁玻片，标明抗A、抗B、抗A、B,2．在标记好的洁净波片上滴一滴抗-A3．在另一标记好的洁净波片上滴一滴抗-B。
4．在每一波片的试剂上滴一滴已混匀的要检测的红细胞悬浮液（在盐水、血清或血浆）。
5．每一块波片用一个洁净的试剂棒将试剂和红细胞充分混匀，使混合物的面积大约为20mm x 40mm。
6．轻微倾斜波片2分钟.不要把波片放于发热的表面上。
7．判断，解释并记录所有的反应结果。
结果判读：见表:红细胞的ABO定型正向定型结果判读抗A 抗B抗A，B---O+-+ A-++ B+++ AB有明显的凝集块为阳性结果，2分钟后仍为均匀的红细胞悬液则为阴性结果。
注意:1．波片法较试管法更易使操作者接触样本，工作人员必须阅读厂商说明书上的安全措施2．波片法不适用于患者和供者血清中的抗体。
血型的鉴定方法及操作
方法学评价
灵敏度和准确性高，实验结果重复性好，可长时间保存 自动化程度高，实验过程标准化，ISO9000/CE认证 成本高
03
间接Coomb’s（indirect antiglobulin test, IDAT）
DAT：检查红细胞是否致敏
IDAT：检测血清中不完全抗体
原理和方法 低离子强度盐溶液（low ionic strength salt solution, LISS)：降低介质离子强度，增加抗原抗体结合 聚凝胺：中和红细胞表面负电荷，使红细胞发生非特异性凝集。 重悬液（resuspension)
正反定型不一致的可能原因（三）
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规则抗体和不规则抗体
规则抗体：ABO系统产生抗Ａ、抗Ｂ是有规律的。
Landsteiner规律： Ａ型－抗Ｂ，Ｂ型－抗Ａ，Ｏ型－抗Ａ，抗Ｂ
不规则抗体：除ABO 系统外，其他系统产生的抗体均不符合上述规律。
正常人血液中一般没有不规则抗体，又称为意外抗体（unexpected antibody）。
完全抗体和不完全抗体
血型（blood type)
红细胞血型原理与检测策略
红细胞血型原理与检测策略引言：红细胞血型是指红细胞表面的抗原和血清中的抗体的特异性反应。
根据不同的抗原和抗体的存在与否，可以将人类的红细胞血型分为A、B、AB和O型。
了解红细胞血型具有重要的临床意义，包括输血、器官移植和孕产妇管理等方面。
本文将介绍红细胞血型的原理以及常用的检测策略。
一、红细胞血型的原理红细胞血型是由红细胞表面的抗原和血清中的抗体决定的。
抗原是一种能够刺激机体产生抗体的物质，而抗体则是一种能够与抗原特异性结合的免疫球蛋白。
根据红细胞表面抗原的不同，人类的红细胞血型可分为A、B、AB和O型。
1. ABO血型系统：ABO血型系统是最常见和最重要的红细胞血型系统之一。
根据红细胞表面是否存在A抗原和B抗原，人类可以分为A型、B型、AB 型和O型。
A型红细胞表面有A抗原，B型红细胞表面有B抗原，AB型红细胞表面同时具有A抗原和B抗原，而O型红细胞表面则没有A抗原和B抗原。
2. Rh血型系统：Rh血型系统是另一个重要的红细胞血型系统。
Rh血型系统中最重要的抗原是Rh因子，也称为D抗原。
如果红细胞表面有Rh因子，则为Rh阳性；如果没有Rh因子，则为Rh阴性。
二、红细胞血型的检测策略红细胞血型的检测通常包括血型鉴定和抗体筛查两个方面。
1. 血型鉴定：血型鉴定是指确定个体的ABO血型和Rh血型。
常用的血型鉴定方法包括直接血细胞法和血清试剂法。
直接血细胞法是通过将被测血液与已知血型的抗血清混合，观察凝集反应来确定血型。
例如，将被测血液与抗A血清混合，如果出现凝集反应，则说明被测血液为A型；如果与抗B血清混合后出现凝集反应，则说明被测血液为B型。
血清试剂法是通过将被测血液与已知血型的红细胞混合，观察凝集反应来确定血型。
例如，将被测血液与A型红细胞混合，如果出现凝集反应，则说明被测血液为B型。
2. 抗体筛查：抗体筛查是为了检测血清中是否存在与红细胞抗原相对应的抗体，以避免输血引起的不良反应。
常用的抗体筛查方法包括交叉试验和抗人球蛋白试验。
血型的鉴定方法及操作全解
规则抗体：ABO系统产生抗Ａ、抗Ｂ是有规律的。 Landsteiner规律： Ａ型－抗Ｂ，Ｂ型－抗Ａ，Ｏ型－抗Ａ，抗Ｂ 不规则抗体：除ABO 系统外，其他系统产生的抗体 均不符合上述规律。 正常人血液中一般没有不规则抗体，又称为意外抗体 （unexpected antibody）。
完全抗体和不完全抗体
原理：根据IgM类抗体与红细胞膜上特异性抗 原能发生凝集反应。 正定型：已知血型抗体试剂 + 红细胞
鉴定红细胞上血型抗原
反定型：已知标准红细胞 + 血清
鉴定血清中抗体
反应条件：生理盐水介质，室温，肉眼可见凝 集反应 平板法，试管法，微孔板法，试管离心法最可 信赖。 应用：ABO血型定型、RhD抗原定型 （IgG+IgM，IgM单克隆抗体），交叉合血
增强IgG抗体 的凝集作用
注意事项：
Rh血型不需作反定型 每次实验均需作阳性、阴性对照
方法学评价
简单经济
稳定性、准确性较差，不能检出MN、Duffy血 型系统
3.抗人球蛋白实验（Coomb’s test）
原理和方法
抗IgG
待测红细胞 + 抗RhD（IgG）
红细胞凝集
+ 抗人球蛋白
应用延伸：
红细胞血型
红细胞血型分类： ISBT（The International Society of Blood Transfusion)
2002年，29个系统，200多个抗原 目前，30个系统，300多个抗原
一、ABO血型系统
1. ABO血型抗原和抗体特性
2.ABO血型的遗传与生化
（1）ABO基因型与表型 A型——AA，AO B型——BB，BO AB型——AB O型——O
输血科红细胞血型抗体筛查标准操作规程
输血科红细胞血型抗体筛查标准操作规程红细胞血型抗体筛查标准操作程序红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1．ABO血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时；2．供血者血清抗体筛检；3．输血前受血者血清抗体检查；4．输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时；5．孕妇血清的抗体检查；6．新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查；7．直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体检查。
筛查方法一、盐水介质法：【方法原理】有些抗体能凝集盐水混悬的红细胞。
这些抗体通常是IgM类抗体，其中许多在22℃下反应最好。
在室温下有活性而在37℃无活性的抗体是没有什么临床意义的。
对患者或供血者的血样不需要用这种方法。
在37℃下也有活性的样本(如抗Kell，抗D)是有临床意义的，而这些抗体通常可用抗人球蛋白试验和酶技术来检查。
【试剂】1．试剂红细胞：由血型参比实验室或血液中心提供，或由各血库从供血者或工作人员中进行普查得到。
筛查红细胞以2个或3个人抗原互补的不同的红细胞为1套，单独分开分装，因为单一的筛查红细胞较混红细胞提供较高的敏感性。
因为许多抗体同双倍量抗原(纯合子)的红细胞反应比同单倍量抗原(杂合子)的红细胞反应要强得多，而不可能得到的都是纯合子红细胞，因此，筛查红细胞的抗原组成必须是互补，经提供尽可能多的必要的抗原。
筛查红细胞大多不包括低频率抗原，所以不可能检出低频率抗体。
这种抗体只有在抗体鉴定时被测到，或在交叉配血时被发现，或在新生儿出生后出现黄疽时被发现。
每一组筛查红细胞中至少有常见的抗原，而且是互补的。
如果某种抗体只能与一种特定抗原的纯合子细胞起反应，而筛查红细胞上这种特定抗原是杂合子，则该抗体可能被漏检。
合适的纯合子表现型的供血者是很少的，为了提供有重要抗原的纯合子细胞，需要使用来自3个供血者的红细胞。
2．血清标本：虽然血清和血浆中存在相同的红细胞抗体，但一般都采用血清进行抗体检查。
因为：①如果血浆中的凝血系统发生部分激活，就可产生纤维蛋白，干扰对凝集的解释；②只有通过激活补体的作用才能证实的抗体，不能在血浆中检出；③常用的抗凝剂是结合Ca2+来防止凝固，而Ca2+对于补体的激活是必不可少的。
红细胞血型检测技术
2）结果保存时间长：在室温条件下，凝胶试剂卡一 般可保存数天甚至数周，也可以拍照保留试验结果图 像存档备用。
3）标本用量少：标本用量为试管法的1/10～1/5，尤 其有利于新生儿及某些特殊血液标本的检测。
第二章 红细胞血型检测技术 P36
血型血清学检验的重要性
血型血清学检验是输血前检查的必要内容，是 输血安全的重要保证，同时也是新生儿溶血病、 器官移植等重要的实验室检查。
红细胞抗原抗体反应基本理论
红细胞抗原与相应抗体无论是在体内或是在体 外，均可发生反应。
体外试验红细胞抗原抗体反应的本质是凝集反 应，其中抗体以前多从人血清中提取（但现在 的抗A、抗B试剂一般为基因工程制备的单克 隆抗体），又称为血清学试验。
微柱凝胶试剂卡分类
应用
中性凝胶试剂卡：用于ABO血型正反定型、RhD抗原 测定、其他血型抗原鉴定及盐水介质交叉配血等；
特异性凝胶试剂卡：用于ABO血型正定型、RhD抗原 测定和其他血型鉴定；
抗球蛋白凝胶试剂卡：用于IgG抗D抗体鉴定RhD抗原， 红细胞不规则抗体筛查和交叉配血等。
卡式法的优点：
2. 原理 ：葡聚糖凝胶颗粒-凝胶微柱-微柱凝胶卡。
是利用凝胶颗粒之间的间隙形成的分子筛作用，在微柱凝胶介质 中红细胞与相应抗体结合，经低速离心，凝集成块的红细胞因体 积大被凝胶阻滞不能通过凝胶层，留于凝胶介质的上层或中间， 即阳性反应；未凝集游离红细胞因体积小而通过凝胶之间的间隙 沉积于微柱凝胶检测管底部，形成细胞扣，即阴性反应。
7）药物：药物如低分子右旋糖酐、聚乙烯吡 咯烷酮及静脉注射某些造影剂，血液粘滞性增 高，可使红细胞凝集而类似凝集表现。
红细胞血型系统及其检测PPT课件
红细胞血型系统
主要内容： 红细胞血型系统免疫学基础 ABO血型系统 Rh血型系统 其他红细胞血型系统 多凝集红细胞
一、免疫学基础原理
（一） 抗原（antigen）
免疫原(immunogen）是能够刺激机体免疫 系统引起特异性免疫应答的非己物质。它可以 在体内和体外与其特异性抗体或致敏淋巴细胞 结合,产生免疫反应。
抗原抗体反应的特点
高度特异性 可逆性 比例性 两个反应阶段：致敏和凝集阶段
影响红细胞凝集反应的因素
抗原抗体的比例 反应温度 溶液的pH值 孵育时间 离子强度 红细胞间距离
常用红细胞抗原和抗体鉴定试验
生理盐水法
saline agglutination test
抗球蛋白试验 antiglobulin test , Coombs
抗原抗体反应的特异性
抗原的功能
抗原能够刺激缺乏此物质的机体发生体液 免疫（humoral response）或细胞免疫（cellmediated response) 反应。
前者通过浆细胞合成抗体输送到血液或体液 中；后者由淋巴细胞介导，出现延迟性超过敏反 应或排斥移植物的生物效应。
影响抗原免疫原性的因素
红细胞 红细胞
自然状态下的红细胞
黄色表示红细胞 表面的负电荷层
红细胞之间保持 24nm的距离
蓝色表示红细胞 周围的正电荷层
按抗体与抗原反应的最适温度，分为两种 冷型抗体 cold antibody 温型抗体 warm antibody
按照抗体与相应抗原的依存关系
规则抗体 不规则抗体（意外抗体）
输血前检查的要求
▪ 输入的红细胞 ▪ 输入的血浆成份
在受血者体内必须 不凝集或不溶血
血型鉴定与输血不良反应的实验诊断
血型鉴定与输血不良反应的实验诊断(一)血型鉴定及交叉配血常用试验及其意义1.红细胞血型系统：(1)ABO血型系统1)ABO血型抗原及基因：2)ABO血型抗体IgM抗体：天然获得IgG抗体：后天免疫获得IgM与IgG抗体的特性(2)Rh血型系统1)Rh血型抗原：D抗原，临床检测Rh(D)，汉人≥99.7%C/E/c/e抗原：弱，不检测2)Rh血型抗体：IgG抗体：70%的Rh(-)者可通过免疫获得3)Rh血型的变异型：弱D型：有D抗原，但弱表达部分弱D型：部分D缺失，弱表达DEL：D抗原完全或大部分缺失，不表达2.白细胞血型（略）3.血小板血型(1)血小板非特异性抗原：相关抗原HLA抗原：HLA-I类抗原红细胞血型抗原：ABO血型抗原——血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR)：原因复杂，免疫/非免疫/未明确因素。
免疫因素中主要由HLA 抗原引起(2)血小板特异性抗原（Human Platelet Antigen,HPA)——输血后紫癜(post-transfusion purpura, PTP)：输血/怀孕史患者输血后5-10天突然出现的PLT减少。
文献报道多为HPA-1a 引起（欧美研究多）——新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAIT)：母体抗胎儿HPA IgG（来源于父方）。
原发性血小板减少性紫癜母亲的免疫性抗体引起(二)血型鉴定与交叉配血常用试验1.红细胞血型鉴定(1)ABO 血型鉴定正定型(forward grouping)：细胞定型反定型(reverse grouping)：血清定型1)吸收放散法可鉴定弱A或弱B型2)临床意义①输血：正反定型结果一致。
同型相输。
否则——急性溶血性输血反应②实体器官移植：ABO血型相同。
否则——超急性排斥反应③评估ABO新生儿溶血病患病风险(2)Rh血型鉴定1)RhD细胞定型：Rh(+) / Rh(-)2)临床意义输血：同型相输的原则，紧急时？——弱D供血者亦视为阳性预防新生儿溶血病(Rh-HDN)实体器官移植：超急性排斥反应(3)红细胞交叉配血试验1)主侧配血：受者血清+供者RBC2)次侧配血：供者血清+受者RBC 结果均为阴性——发现不规则抗体方可接受输血3) 自身对照：受者血清+受者RBC——发现自身抗体2.血小板血型鉴定(1)血小板抗原分型：HPA分型：血清法或分子生物学法HLA分型：分子生物学法(2)血小板抗体检测：ELISA法HLA抗体：在血小板同种抗体免疫中重要(＞79.9%)HPA抗体：与HLA抗体共同形成了血小板同种抗体(17.6%)(三)血型鉴定及交叉配血的主要临床应用1.临床输血主要相容：同型相输次要相容：必要时可接受的2.新生儿溶血病HDNABO血型不合：常见，程度较轻; Rh血型不合：少见，程度较重HDN发生原理：（以Rh-HDN为例）抗人球蛋白法检测HDN：IgG类抗体不发生肉眼可见凝集反应加入中间试剂：抗人IgG免疫球蛋白发生肉眼可见的凝集反应产前检查（不完全抗体、RBC、抗人球蛋白）[目的]预测夫妻间HDN发生的可能性[结果] 配合——不会发生HDN; 不配合——测抗体，阳性者测效价[正常范围]ABO抗体效价≥512，Rh抗体效价≥16→密切监控，Rh抗体效价≥32且有溶血史者考虑换血 产后检查：新生儿IgG抗体测定（检测新生儿血清中是否含有母源IgG抗体）直接抗球蛋白试验(direct antiglobulintest, DAT)：（不完全抗体、RBC、抗人球蛋白）检测新生儿RBC是否被母体IgG致敏游离抗体试验：亦称间接抗球蛋白试验(indirect antiglobulin test, IDAT)：（不完全抗体、RBC、抗人球蛋白）抗体释放试验：与DAT同，但敏感度高于DAT（不完全抗体、O型RBC/酶处理O型RBC、抗人球蛋白）——释放条件：热释放、冷释放、乙醚释放等——诊断HDN的最有力证据3.不规则抗体筛查与鉴定(1)概念：规则抗体(regular antibody)：——ABO系统中的抗-A、抗-B的IgM抗体不规则抗体(irregular antibody)：——除规则抗体之外的血型抗体(2)特点：抗体效价较弱，易漏检(3)筛查方法：受者血清+抗体筛选细胞(4)鉴定方法：筛查阳性者血清+谱细胞(5)意义：发现有临床意义的不规则抗体，确保输入合适的抗原阴性的血液三、不规则抗体筛查与鉴定(四)常见输血不良反应的实验诊断常见输血不良反应的发生率血小板输注无效特殊的输血不良反应，即指各种因素导致的输注血小板后无“适当反应”诊断标准：1h/24h血小板回收率(PPR)和血小板纠正值(CCI)为指标。
红细胞血型检测ppt课件
3)红细胞致敏：受免疫球蛋白致敏的红细胞，在含 高蛋白介质的试剂中，可发生凝集。
4)异常基因型：ABO亚型的检查中，A、B抗原可能
为弱抗原，难以检出。 .
12
5)近期输血：试验前曾输入过其它ABO血型不一致的 血液，使血液标本成为混合血型的红细胞悬液，定 型时显示“混合外观凝集”现象。
6)嵌合体血型：这种血型者体内有两类血型红细胞群 体，定型时可以出现“混合外观凝集”现象。
主要程序：受血者血液标本的处理、ABO血型和 RhD血型鉴定、红细胞同种抗体筛查和鉴定、交 叉配血。
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3
一、受血者标本的处理
（一） 标本的采集
输血除了需要达到预期的治疗效果外，必须确
保输血安全。血样由临床护士完成，应严格遵守一 次只能为一位受血者抽取标本，标本不得从输液管 或输液侧筋脉中抽取。
（二）标本的接收
反定型：用标准A细胞及B细胞与被检血清反应，检测血清中 是否存在抗体。
由于ABO血型系统抗体多数为IgM类，在室温盐水介质中就 能出现明显的凝集反应。
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• 正反定型不符分析的基本程序： • 1、重新采集标本 • 2、查询受血者既往病史、输血史和用药史等 • 3、新鲜生理盐水多次洗涤标本和试剂红细胞 • 4、应用抗-AB、抗-A1和抗-H检测红细胞 • 5、分析O型筛选细胞检测结果
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ABO定型试验中的常见问题：
造成这种正反定型不一致的原因主要有：
1)技术和管理错误：这是ABO定型中产生异常结果 的主要原因，包括：标本或试剂搞错；器材不洁；
试剂污染或失效；离心过度或不足；阳性反应产 生溶血现象未能识别；漏加试剂；结果记录或判 断错误；细胞与血清间比例不适当。
红细胞血型检测
05
红细胞血型检测的挑战 与展望
检测技术的改进
自动化检测
随着科技的发展，红细胞血型检 测正在逐步实现自动化，减少人
为误差，提高检测效率。
微流控技术
微流控芯片技术可以用于红细胞血 型检测，具有快速、准确、高通量 的优点，为血型检测提供了新的手 段。
分子生物学技术
利用分子生物学技术，如基因测序 ，可以更准确地确定红细胞血型， 为稀有血型和不规则抗体的检测提 供有力支持。
详细描述
AB型血的人可以接受任何类型的血液，因为他们的红细胞表 面同时存在抗原A和抗原B，不会与任何其他血型的抗体发生 反应。然而，AB型血的人只能给A型、B型或AB型的人捐献 血液。
04
红细胞血型检测的应用
输血配型
输血前必须进行血型检测，以确 保供血者和受血者的血型相容。
血型检测可以预防因血型不匹配 而引起的输血反应，如溶血反应 ，对患者的生命安全至关重要。
检测。
缺点
准确度不高，易受环境 温度、盐浓度等因素影
响。
酶法
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02
03
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原理
利用酶促反应，使红细胞表面 的抗原或抗体与相应试剂发生
反应，从而判断血型。
步骤
将待测血液与酶反应试剂混合 ，观察红细胞的反应情况，从
而确定血型。
优点
准确度高，特异性好，适用于 多种血型抗原的检测。
缺点
操作相对复杂，成本较高，需 要专业人员操作。
进行准确的血型检测。
新技术的应用与展望
人工智能与机器学习
人工智能和机器学习技术在红细胞血型检测中具有广阔的 应用前景，可以通过数据分析和模式识别提高检测的准确 性和效率。
生物信息学
红细胞血型抗体的分类及检测
红细胞血型抗体是人体免疫系统产生的针对不同血型抗原的抗体。
这些抗体可以在特定情况下引起血型不合适的输血反应或妊娠并发症。
红细胞血型抗体通常根据它们对不同血型抗原的反应以及它们可能引起的输血反应类型进行分类。
以下是一些常见的红细胞血型抗体分类及检测方法：
1. IgM 类抗体：这些抗体属于较早产生的类型，通常在初始免疫应答时形成。
常见的IgM类抗体包括反A抗体（抗A抗体）和反B抗体（抗B抗体）。
2. IgG 类抗体：这些抗体属于较晚产生的类型，通常在再次暴露于特定抗原后产生。
这些抗体更小，能更容易进入胎盘，因此在妊娠期间可能引发问题。
例如，Rh（D）抗体是IgG类抗体，可能导致Rh血型不合适的妊娠并发症。
检测红细胞血型抗体的常见方法包括：
1. 凝集试验：将被测血清与已知血型抗原混合，观察是否出现凝集反应。
如果出现凝集，表示血清中存在相应抗体。
2. 间接抗人球蛋白试验（间接抗人球蛋白试验，IAT）：这是一种常用于检测患者血清中的抗体的方法。
患者的血清与已知血型的红细胞混合，然后添加抗人球蛋白血清，观察是否出现凝集反应。
3. 直接抗人球蛋白试验（直接抗人球蛋白试验，DAT）：这种方法用于检测已凝集在患者红细胞表面的抗体。
通常用于检测新生儿溶血性疾病。
4. 流式细胞术：这是一种现代化的方法，利用流式细胞仪对红细胞进行检测，可以精确地确定血液中的不同抗体。
这些方法在临床上常用于血型鉴定、输血前筛选和处理妊娠期间的血型不合适问题。
需要强调的是，红细胞血型抗体的分类和检测方法可能会随着医学科技的进步而有所变化，因此在实际操作中应遵循当前的标准和指南。
红细胞血型检测
红细胞血型检测摘要】目前红细胞血型至少已发现有26个血型系统，400多种血型抗原。
ABO血型是最早发现的一个血型系统，也是对人类影响最大的一个系统。
本节重点介绍ABO和Rh两个血型系统。
【关键词】红细胞类型检验(一)ABO血型系统1.ABO血型的分类人类红细胞表面有两种抗原，分别为A抗原和B抗原，A型红细胞表面含A抗原；B型红细胞表面含B抗原，AB型红细胞表面含有A和B两种抗原，O型红细胞既不含有A抗原也不含有B抗原。
在人的血清中，存在着两种天然抗体，一种叫抗A抗体，一种叫抗B抗体，在A型人的血清中含有抗 B抗体，在B型人的血清中含有抗A抗体，在AB型人的血清中既不含有抗A抗体也不含有抗B抗体，O型人的血清中含有抗A和抗B两种抗体。
两种抗体可分别与相应的A或B抗原发生免疫反应。
2.ABO抗原与血型物质 ABO系统的血型抗原有A、B、H三种，它们属于多糖类抗原，主要存在于红细胞表面，与脂质、蛋白质结合在一起，不溶于水，可溶于乙醇，抗原成分由多糖和多肽组成。
多肽部分决定血型的抗原性，多糖部分决定血型的特异性，H抗原是A、B抗原基础物质。
ABO各型红细胞上都有H抗原，O型最多，其顺序分别为O>A2>A2 B>B>Al B。
ABH抗原在胎儿37天时便能检出，以后反应的敏感性不断增强，至出生时红细胞 ABH抗原的敏感性已是成人的20％，至20岁时达高峰，抗原性终生不变，所以，初生儿不易鉴定血型。
3.ABO血型抗体 ABO血型系统抗体若按产生的原因又分、为“天然抗体”和“免疫性抗体”。
(1)天然抗体：没有可以觉察的抗原刺激，在体内自然存在的抗体称为天然抗体，如人体血清中的抗A、抗B抗体，就属于天然抗体。
天然抗体大多数都是IgM，分子量100万，分子的长度为95 nm，由于分子量大，不能通过胎盘，不耐热，70℃加热l小时便破坏，能在等渗盐水中与含有相应抗原的红细胞发生凝集，因此，又叫凝集素或盐水抗体或完全抗体。
红细胞血型检测
另加染液，以区别。 A亚型应用抗A1抗体鉴定。
(2)单克隆抗体：
• 近年来血型单克隆抗体作为新型的诊断试剂取代了传统人血 清制备的抗体，进一步确保了输血安全。
• 优点： （1）特异性抗体，不含其它血型抗体、冷凝集素，使结果更 准确，不受干扰。 （2）不含HBV、HCV、HIV等病毒，避免了使用者受感染。 （3）可以形成工业性生产，节约了大量人血清的原料。
4、ABO血型鉴定出现异常的原因
1、原因： 技术和管理上的问题：
责任心方面 技术方面 标本红细胞或血清本身的问题： 血清方面（抗体效价低或被抑制、假凝集） 红细胞方面（弱A、类B）
(1) 假凝集（串钱状凝集）
较多见，本身不是抗原与抗体的反应。 原因：
A 某些肝病、肾病等所致的纤维蛋白原及球 蛋白的增高。
• 第二阶段
真凝集阶段
直接法可检查受检者的红细胞是否已被不完全抗体致敏； 间接法可用于鉴定Rh血型及血清中是否存在不完全抗体
间接抗球蛋白试验
假阳性 抗球蛋白试剂不纯 红细胞洗涤已凝集
红细胞质量 不抗凝标本 漏加试剂 离心过度 盐水保存不当 红细胞直抗阳性
假阴性
红细胞、血清 及试剂质量
洗涤不充分 操作过程不连 续
血型鉴定和交叉配血
目的：选择与患者血型配合的各种血液成分， 使之能在患者体内有效地存活，无不良反应， 从而达到安全、有效输血的目的。
输血前实验室检测
输血前实验室检测内容包括以下几方面。
一、患者的病史和标本等的检查、核对及 处理 二、受血者和献血者ABO和Rh 血型鉴定 三、交叉配血试验 四、特殊不规则抗体的筛选和鉴定 五、血小板输注前的检查配血 六、标签和发血
红细胞血型
动电位＝红细胞表面负电荷与
介质阳离子的电位差
滑动面
红细胞 表面负 电荷 介质的阳离子
红细胞表面负电荷及动电位
动电位（zeta potential）
由红细胞表面的静电荷与正离子团外自由 正离子间形成的电位差。动电位的大小取 决于红细胞表面负电荷的程度与介质中的 离子浓度，也决定了红细胞间距，与凝集 反应的发生有密切关系 。
（二）红细胞血型抗体（Antibody）的命名
红细胞血型抗体的命名一般在抗原前加 “抗” 与半字线，如抗-A、抗-M等。
（三）红细胞血型写字母右 下方加角注； 2、Kell及P血型等用一大一小字母表示，如 K-k+、K+k+、P及p等；
第八章 红细胞血型（Blood Group）
第一节 概论
许冰莹 教授 昆明医科大学法医学院
血型（blood group）
血液的遗传学差异统称为血型。人类的血 型包括红细胞血型、白细胞血型、血清型。 红细胞的遗传学差异称为红细胞血型（red cell blood group）。
血型（Blood type）具有个体特异性和 终身不变的特征，作为人类遗传标记在法 医学个体识别和亲子鉴定具有重要的意义。 血型在临床输血、器官移植及人类学研究 中也是重要的遗传标记。
血液 Blood
红细胞
血细胞
血液
白细胞 血小板
水
血浆 (细胞间质) 血浆蛋白，糖，维生素，激 素，代谢产物及无机盐等
一、 血型的命名
（一）红细胞血型抗原（Antigen）的命名 1、用大写字母命名，如A、B、M、N等； 2、用大小写字母命名，如K、k、S、s等； 3、有些亚型抗原用右下角码表示，如A1、 A2等 ； 4、有些用一大一小两个字母后加右上角码命 名，如Lea、Fya等。
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交叉配血的主次侧
（一）盐水介质交叉配血试验
• 本质凝集反应，直接凝集试验
• 检测IgM类抗体
• 方法：试管法
• ABO同型配血，主侧和次侧均无凝集及溶血，表示
抗球蛋白配血方法
患
者
37 ℃
主 侧
献 血 者
次 侧
37℃ 水浴30分钟
三洗
抗球蛋白方法配血方法
加 抗 球 蛋 白
阳 性
离心 看结果
阴 性
结果判读
• 直接抗球蛋白试验 • 阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管 凝集，判定为阳性 • 阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管 不凝集，需要做阴性确认后判定结果（无凝集 的被检管中加入IgG抗-D致敏红细胞后离心， 出现凝集判阴性，否则重新试验 • 阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集， 结果不可信不发报告，分析原因重做
结果判读
• 间接抗球蛋白试验
• 阳性对照管呈现凝集反应，阴性对照管未呈现
凝集反应，被检管呈现凝集反应为阳性结果，
被检者血清内含有抗体，如果自身对照无凝集 ，同种抗体；如果被检者结果阴性，被检者血 清中未被查出意外抗体。 • 阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管出现凝
• （二）盐水介质玻片法
• （三）微柱凝胶血型定型检测卡法
• （四）质量保证：试管法、玻片法、卡式 • （五）方法学评价 • （六）临床应用 • （七）不一致原因及解决方法
ABO血型鉴定原理
正向定型：已知的特异性抗体（标准血清）检查红细胞的未知抗原
A抗原 B抗原 A和B抗原
无A和B抗原
反向定型：已知的血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体
先加红细胞悬液，再加血浆或抗体试剂 红细胞悬液和血浆各加50ul 按照说明书操作
（五）方法学评价
试管法：常用，广泛，较玻片法灵敏，结果准确，反应时间短， 结果不能保存，人为因素大 玻片法：操作简单、无需特殊仪器，适用于血型普查；灵敏度差
，反应时间长，不能用于反定型，结果不能保存，人为因素影响大
重新采集献血者与受血者血液标本
查询受血者既往病史及输血史和用药史等
多次洗涤标本红细胞
应用抗-AB、抗-A1、抗-H检测红细胞
ABO正反定型不一致的原因
技术和 操作 受血者 红细胞 或血清
错加试剂或标本
试剂失效或污染
细胞与血清间 比例不适当
溶血现象未能识 别 漏加试剂 结果记录或判断错 误
血清异常 红细胞致敏 近期输血 疾病导致抗原 减弱 抗体减弱 不规则抗体 年龄 近期进行大量 血浆置换治疗
主要内容
ABO血型鉴定 RhD血型鉴定 交叉配血试验 红细胞抗体筛查及鉴定 血型鉴定和交叉配血自动分析 吸收放散试验
教学目标
• 掌握ABO和Rh血型鉴定、交叉配血试验原理、方
法和质量控制 • 熟悉红细胞不规则抗体筛查及鉴定方法 • 了解吸收放散试验
一、ABO血型鉴定
• （一）盐水介质试管法
RhD定型及其常见问题
1.Rh定型 RhD定型，试管法最经典，多使用微柱凝胶卡 2.RhD阴性确认 IgM抗-D阴性
三个厂家IgG抗-D进行 确认
抗人球蛋白法进行确认
三种IgG抗-D试剂均为阴性，报RhD阴性
一种或一种以上IgG抗-D试剂为阳性，报弱D
三、交叉配血试验
概念：检测受血者和供血者血液中是否含有不相
体
• 间接试验：是检查血清中游离的不完全抗体
抗人免疫球蛋白 自身抗体
直接Coombs试验
同种异型抗体
抗人免疫球蛋白
间接Coombs试验
抗人球蛋白交叉配血法示意图
1红细胞彼此之间有一定的间距
2不完全抗体可以结合在红细胞 表面,但是不能和两个红细胞 同时结合（致敏）。 3加入抗人球蛋白
4抗人球蛋白可以同时和两 个不完全抗体的FC段结合， 从而把红细胞连接在一起
，易发生血液污染 微柱凝胶血型定型检测卡法：特异性强、灵敏度高，结果准确， 保持时间长，标本和试剂用量少，操作可以标准化、自动化，减少 了医源性污染，但需要专门离心设备和试剂卡，成本较高
ABO正反定型的临床意义
输血治疗的首要步骤
组织器官移植
新生儿溶血病
ABO正反定型不符分析基本程序
首先重复试验
结果判定
新乡医学院第三临床检验教研室
微孔板法
（四）质量保证
试管法 标记 加样量、加样顺序 溶血是一种阳性反应 玻片法 标记 正定型 显微镜阴性确认
（四）质量保证
微柱凝胶血型定型检测卡
血清标本应完全取出纤维蛋白，血浆标本建议
EDTA-K2或枸橼酸盐康宁
C、粘液：亲和柱中有一层粘液，作用与“试剂 或盐水层”相同。
原理：凝胶分子筛和亲和效应
微柱凝胶柱中填充凝胶（葡聚糖），及相应试 剂（抗体或抗原）。凝胶分子间的间隙只允许游 离红细胞通过，分子排阻层析原则将发生凝集反 应的红细胞阻滞于凝胶之内，而未凝集的游离红 细胞则穿过微孔运动到管底，从而判定有无凝集 反应。
5
试管法
红细胞凝集强度判断标准
试管法结果判定
瓷板法
结果判定
凝胶技术的原理
反 应 室 反 应 室 底 孔 外管壁 亲和凝 胶
内 套 管壁
特殊粘液
试剂或 盐水 凝胶或 玻璃珠
凝胶技术的原理：
A、反应室：下端底孔很小，液体在孵育过程中 不会流入下方微柱中。 B、试剂或盐水层：红细胞在离心力作用下穿越 该层，红细胞与反应室中的血清分离并与该层 液体中的试剂反应。
抗A抗体 抗8/11/24
4
ABO血型鉴定结果判断
正向定型 （标准血清+被检者红细胞） 抗A + + 抗B + + -
反向定型 （标准红细胞+被检者血清） A型红细胞 B型红细胞 O型红细胞 + + + + -
结果判断 A B AB O
2018/11/24
无输血禁忌，可以输血
盐水介质配血方法
患 者
主 侧 献 血 者 侧
阳 性
离心 次 看结果
阴 性
（二） 抗球蛋白介质交叉配血试验
抗人球蛋白试验：又称Coombs试验，是一种检
查不完全抗体的敏感方法
分类：直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验
抗球蛋白试验原理
• Coombs利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接 与红细胞表面抗原结合的特异抗体，使红细胞 凝集。 • 直接试验：是检查被检红细胞上有无不完全抗