培养基对微生物的选择作用(上课用)
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– 鉴别培养基——在培养基中加入某种指示剂或 化学药品,用以鉴别不同种类的微生物,如：
• 伊红和美蓝,和大肠杆菌的代谢产物结合,使 菌落呈深紫色,并带有金属光泽,可以用来鉴 别大肠杆菌
选择培养基
• 加入青霉素的培养基 分离酵母菌、霉菌等真菌
• 加入高浓度食盐的培养基 分离金黄色葡萄球菌
• 不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌
7．灭菌:
将培养基转移至三角锥瓶中或试管 内，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入 高压蒸气灭菌锅，在压力为0.11MPa、 温度为121℃.
8．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃-60 ℃左右时，
在酒精灯附近倒平板或制成斜面。 （操作见课本第6页） 2d后观察平板，无杂菌污染才可用来 接种。
倒平板技术
（三）实验操作
（1）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用以培养细菌）
（三）实验操作
（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用以培养细菌）
牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼 脂 20.0g
将上述物质溶解后，添加水，定容至 1000mL
操作步骤
1．计算、称量 2．溶化 3．调pH： pH7.4 ~pH7.6 4．分装：分装过程中注意不要使培养基沾 在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污 染。分装三角烧瓶的量均为其容积的1/5（ 不超过三角烧瓶容积的一半为宜。） 5．加塞 6．包扎
微生物的筛选
• C：N=16:1且PH=5-6时，霉菌和 酵母菌为优势种；C：N=4:1且 PH=7.2-7.6时，细菌为优势种，霉 菌和酵母菌为优势种。当马铃薯葡 萄糖琼脂培养及丰富时，真菌为优 势种。
.菌落
1.定义： 单个 固体培养基上 或少数菌体 大量繁殖
2.特征：大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。
• 不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物
• 加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞
加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培 养基
分离杂交瘤细胞
在配制培养基时应该尽量利用廉价且易 于获得的原料
酵母菌单细胞蛋白（工业生产）
酵母菌单细胞蛋白是一种蛋白质还是 菌体本身？
是酵母菌
培养基对微生物的选择作用
二、灭菌
1.无菌技术的概念
无菌操作泛指在培养微生 物的操作中，所有防止杂菌污 染的方法。
成功地培养微生物的关键。
为什么要灭菌？
配制培养的各种营养物质和容 器等中含有不同的生物，所以配置 好后必须立即灭菌，及时杀死培养 基中的微生物，同时防止微生物大 量繁殖造成的培养基营养成分的改 变
2.消毒与灭菌的概念及两者的区别
一、培养基的制备
培养基（培养液）是由人工配 制而成的适合微生物生长繁殖或积 累代谢产物的营养基质。
作用：用以培养、 分离、鉴定和保存 各种微生物
怎么制备培养 基？
培养基的制备
是研究和利用微生物的最基本技术之一
培 养
培养基的配制
基
的
制
备
包
灭菌
括
关键：准确称量、调准PH、规范制作棉塞、
彻底灭菌
1.培养基的营养成分
1 3
①将灭过菌的 培养皿放在火 2 焰旁的桌面上， 右手拿装有培 养基的锥形瓶， 左手拨出棉塞。
4
倒平板技术
1 3
②右手拿锥形
2
瓶，使瓶口迅
速通过火焰。
4
1 3
倒平板技术
③ 用左手拇指 和食指将培养皿 打开一条稍大于 2 瓶口的缝隙，右 手将锥形瓶中的 培养基 倒入培养 皿，左手立即盖
上培养皿的皿盖。 4
思考
1.无菌技术除了用来防止实验室 的培养物被其他外来微生物污染外， 还有什么目的？
思考
1.无菌技术除了用来防止实验室 的培养物被其他外来微生物污染外， 还有什么目的？
答：无菌技术还能有效避免操作者 自身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需 要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适 的方法。
谢研究和获得大量菌体。
• 根据化学成分分
– 合成培养基——成分明确,常用于分类,鉴定 – 天然培养基——成分不明确,常用于工业生产
• 根据用途分
– 选择培养基——在培养基中加入某种化学物质, 以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微 生物的生长,如：
• 加高浓度的食盐,抑制多种细菌生长,分离到 金黄色葡萄球菌
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝 结水珠，凝固后的培养基表面的湿 度也比较高，将平板倒置，既可以 使培养基表面的水分更好地挥发， 又可以防止皿盖上的水珠落入培养 基，造成污染。
4.在倒平板的过程中，如果不小 心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部 位，这个平板还能用来培养微生物吗？ 为什么？
（1）消毒定义：用较温和的物理或化 学的方法杀死物体表面或内部的部分微 生物（不包括芽孢）
（2）灭菌的定义：用较强烈的理化因 素杀死物体内外的所有微生物，包括 芽孢
灭菌的方法：高温灭菌
1.灼烧灭菌
（2 ）干热灭菌：
160-170 ℃下加热12h。
（3）高压蒸气灭菌
0.11MPa、121 ℃下 维持20-30min.
问题讨论
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃ 左右时，才能用来倒平板。你用什么办 法来估计培养基的温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的 锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚 不烫手时，就可以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通 过火焰？
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通 过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口 的微生物污染培养基。
4.在倒平板的过程中，如果不小 心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部 位，这个平板还能用来培养微生物吗？ 为什么？
答：空气中的微生物可能在皿 盖与皿底之间的培养基上滋生，因 此最好不要用这个平板培养微生物。
培养基的种类
• 根据物理性质分
– 固体培养基——用于微生物的分离、纯化、培养、 保存、计数
– 半固体培养基——观察微生物的运动 – 液体培养基——常用于工业生产、各种生理、代
实验：探究不同培养基中生长的 优势菌群
不同微生物对营养物质要求不一样 ，在相应的培养基上可形成大小、 形态各异的菌落
菌落：单个的菌体
或孢子在固体培养基 上大量繁殖会形成一 个肉眼可见的、具有 一定形态结构的细胞 群体
菌落的特征
湿润、粘稠、易用接种环挑起，菌落各 部位颜色一致，如： 霉菌菌落比较较疏松，唱呈绒毛状、 絮状或者蜘蛛网状，一般比细菌菌落 大几倍甚至是几十倍。
葡萄美酒
啤酒、果酒、食醋等
谷 氨 酸 钠 是 味 精 的 主 要 成 分
疫苗
百
卡
白
介
破
苗
青霉素 头孢霉素 红霉素 四环素
如何检测饮用水、牛奶中的细菌数
微生物技术
• 微生物：是一切肉眼看不见或看不清楚的 微小生物的总称。
• 分类
病毒
病毒界
微生物
细菌 放线菌
原核生物界
真菌
真菌界
原生动物 原生生物界
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻璃棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
2.请你判断以下材料或用具是否需 要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适 的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌； （3）需要消毒。
子细胞群体
3.功能： 鉴定菌种的重要依据
形态各异的菌落
1 3
倒平板技术
④等待平板冷
却凝固，大约
2
需5~10min。 然后，将平板
倒过来放置，
使皿盖在下，
4
皿底在上。
9．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室
中培养24—48小时，以检查灭菌是否 彻底。
问题讨论
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃ 左右时，才能用来倒平板。你用什么办 法来估计培养基的温度？
原生动物： pH 6.0~8.0
3.种 类：
（1）按物理状态分：固体培养基 和液体培养基、半固体培养基。
（2）按功能分：选择培养基和鉴 别培养基。
（3）按成分分：天然培养基和合 成培养基。
不同的微生物往往需要采用不 同的培养基配方
不管哪种培养基，一般都含有 水、碳源、氮源、 无机盐、生长因 子（特殊营养物质）等营养物质， 另外还需要满足微生物生长对pH、 以及渗透压等要求。
一般（基本）成分：碳源、氮源、水、微量 元素、无机盐
特殊成分：生长因子（包括维生素、氨基酸、嘌呤、 嘧啶等,牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有） 2.pH、渗透压的需求:细 菌： pH 7.0~8.0
放线菌：pH 7.5~8.5
酵母菌： pH 3.8~6.0 霉 菌：pH 4.0~5.8
初始pH
藻 类： pH 6来自百度文库0~7.0
• 伊红和美蓝,和大肠杆菌的代谢产物结合,使 菌落呈深紫色,并带有金属光泽,可以用来鉴 别大肠杆菌
选择培养基
• 加入青霉素的培养基 分离酵母菌、霉菌等真菌
• 加入高浓度食盐的培养基 分离金黄色葡萄球菌
• 不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌
7．灭菌:
将培养基转移至三角锥瓶中或试管 内，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入 高压蒸气灭菌锅，在压力为0.11MPa、 温度为121℃.
8．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃-60 ℃左右时，
在酒精灯附近倒平板或制成斜面。 （操作见课本第6页） 2d后观察平板，无杂菌污染才可用来 接种。
倒平板技术
（三）实验操作
（1）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用以培养细菌）
（三）实验操作
（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用以培养细菌）
牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼 脂 20.0g
将上述物质溶解后，添加水，定容至 1000mL
操作步骤
1．计算、称量 2．溶化 3．调pH： pH7.4 ~pH7.6 4．分装：分装过程中注意不要使培养基沾 在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污 染。分装三角烧瓶的量均为其容积的1/5（ 不超过三角烧瓶容积的一半为宜。） 5．加塞 6．包扎
微生物的筛选
• C：N=16:1且PH=5-6时，霉菌和 酵母菌为优势种；C：N=4:1且 PH=7.2-7.6时，细菌为优势种，霉 菌和酵母菌为优势种。当马铃薯葡 萄糖琼脂培养及丰富时，真菌为优 势种。
.菌落
1.定义： 单个 固体培养基上 或少数菌体 大量繁殖
2.特征：大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。
• 不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物
• 加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞
加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培 养基
分离杂交瘤细胞
在配制培养基时应该尽量利用廉价且易 于获得的原料
酵母菌单细胞蛋白（工业生产）
酵母菌单细胞蛋白是一种蛋白质还是 菌体本身？
是酵母菌
培养基对微生物的选择作用
二、灭菌
1.无菌技术的概念
无菌操作泛指在培养微生 物的操作中，所有防止杂菌污 染的方法。
成功地培养微生物的关键。
为什么要灭菌？
配制培养的各种营养物质和容 器等中含有不同的生物，所以配置 好后必须立即灭菌，及时杀死培养 基中的微生物，同时防止微生物大 量繁殖造成的培养基营养成分的改 变
2.消毒与灭菌的概念及两者的区别
一、培养基的制备
培养基（培养液）是由人工配 制而成的适合微生物生长繁殖或积 累代谢产物的营养基质。
作用：用以培养、 分离、鉴定和保存 各种微生物
怎么制备培养 基？
培养基的制备
是研究和利用微生物的最基本技术之一
培 养
培养基的配制
基
的
制
备
包
灭菌
括
关键：准确称量、调准PH、规范制作棉塞、
彻底灭菌
1.培养基的营养成分
1 3
①将灭过菌的 培养皿放在火 2 焰旁的桌面上， 右手拿装有培 养基的锥形瓶， 左手拨出棉塞。
4
倒平板技术
1 3
②右手拿锥形
2
瓶，使瓶口迅
速通过火焰。
4
1 3
倒平板技术
③ 用左手拇指 和食指将培养皿 打开一条稍大于 2 瓶口的缝隙，右 手将锥形瓶中的 培养基 倒入培养 皿，左手立即盖
上培养皿的皿盖。 4
思考
1.无菌技术除了用来防止实验室 的培养物被其他外来微生物污染外， 还有什么目的？
思考
1.无菌技术除了用来防止实验室 的培养物被其他外来微生物污染外， 还有什么目的？
答：无菌技术还能有效避免操作者 自身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需 要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适 的方法。
谢研究和获得大量菌体。
• 根据化学成分分
– 合成培养基——成分明确,常用于分类,鉴定 – 天然培养基——成分不明确,常用于工业生产
• 根据用途分
– 选择培养基——在培养基中加入某种化学物质, 以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微 生物的生长,如：
• 加高浓度的食盐,抑制多种细菌生长,分离到 金黄色葡萄球菌
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝 结水珠，凝固后的培养基表面的湿 度也比较高，将平板倒置，既可以 使培养基表面的水分更好地挥发， 又可以防止皿盖上的水珠落入培养 基，造成污染。
4.在倒平板的过程中，如果不小 心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部 位，这个平板还能用来培养微生物吗？ 为什么？
（1）消毒定义：用较温和的物理或化 学的方法杀死物体表面或内部的部分微 生物（不包括芽孢）
（2）灭菌的定义：用较强烈的理化因 素杀死物体内外的所有微生物，包括 芽孢
灭菌的方法：高温灭菌
1.灼烧灭菌
（2 ）干热灭菌：
160-170 ℃下加热12h。
（3）高压蒸气灭菌
0.11MPa、121 ℃下 维持20-30min.
问题讨论
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃ 左右时，才能用来倒平板。你用什么办 法来估计培养基的温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的 锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚 不烫手时，就可以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通 过火焰？
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通 过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口 的微生物污染培养基。
4.在倒平板的过程中，如果不小 心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部 位，这个平板还能用来培养微生物吗？ 为什么？
答：空气中的微生物可能在皿 盖与皿底之间的培养基上滋生，因 此最好不要用这个平板培养微生物。
培养基的种类
• 根据物理性质分
– 固体培养基——用于微生物的分离、纯化、培养、 保存、计数
– 半固体培养基——观察微生物的运动 – 液体培养基——常用于工业生产、各种生理、代
实验：探究不同培养基中生长的 优势菌群
不同微生物对营养物质要求不一样 ，在相应的培养基上可形成大小、 形态各异的菌落
菌落：单个的菌体
或孢子在固体培养基 上大量繁殖会形成一 个肉眼可见的、具有 一定形态结构的细胞 群体
菌落的特征
湿润、粘稠、易用接种环挑起，菌落各 部位颜色一致，如： 霉菌菌落比较较疏松，唱呈绒毛状、 絮状或者蜘蛛网状，一般比细菌菌落 大几倍甚至是几十倍。
葡萄美酒
啤酒、果酒、食醋等
谷 氨 酸 钠 是 味 精 的 主 要 成 分
疫苗
百
卡
白
介
破
苗
青霉素 头孢霉素 红霉素 四环素
如何检测饮用水、牛奶中的细菌数
微生物技术
• 微生物：是一切肉眼看不见或看不清楚的 微小生物的总称。
• 分类
病毒
病毒界
微生物
细菌 放线菌
原核生物界
真菌
真菌界
原生动物 原生生物界
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻璃棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
2.请你判断以下材料或用具是否需 要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适 的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌； （3）需要消毒。
子细胞群体
3.功能： 鉴定菌种的重要依据
形态各异的菌落
1 3
倒平板技术
④等待平板冷
却凝固，大约
2
需5~10min。 然后，将平板
倒过来放置，
使皿盖在下，
4
皿底在上。
9．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室
中培养24—48小时，以检查灭菌是否 彻底。
问题讨论
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃ 左右时，才能用来倒平板。你用什么办 法来估计培养基的温度？
原生动物： pH 6.0~8.0
3.种 类：
（1）按物理状态分：固体培养基 和液体培养基、半固体培养基。
（2）按功能分：选择培养基和鉴 别培养基。
（3）按成分分：天然培养基和合 成培养基。
不同的微生物往往需要采用不 同的培养基配方
不管哪种培养基，一般都含有 水、碳源、氮源、 无机盐、生长因 子（特殊营养物质）等营养物质， 另外还需要满足微生物生长对pH、 以及渗透压等要求。
一般（基本）成分：碳源、氮源、水、微量 元素、无机盐
特殊成分：生长因子（包括维生素、氨基酸、嘌呤、 嘧啶等,牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有） 2.pH、渗透压的需求:细 菌： pH 7.0~8.0
放线菌：pH 7.5~8.5
酵母菌： pH 3.8~6.0 霉 菌：pH 4.0~5.8
初始pH
藻 类： pH 6来自百度文库0~7.0