微生物细胞数量的显微镜直接计数法

南京林业大学实验报告
食品科学与工程专业1201091年级120109112姓名：马天柔日期：2014/04/20 实验六微生物细胞数量的显微镜直接计数法
一．实验目的：
掌握实用血球计数板进行微生物细胞数量的计数办法。

二．实验器材：
显微镜，血球计数板，盖玻片，酵母菌悬液，滴管。

三．实验方法：
1．将细胞悬液加适量的无菌水充分混匀并稀释至每小格约有5-10个菌体为宜。

2．制片：
先将血球计数板和盖玻片用纱布或绸布擦干净后，把盖玻片盖在计数板的刻度上，用滴管取少量稀释的菌体从盖玻片的一端注入，使菌液沿两玻片空隙间渗入，注意不可有气泡产生，用吸水纸吸干沟槽中流出的多余菌液，切勿将盖玻片抬高。

3．镜检计数：
静置几分钟后，将血球计数板置于载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后转换成高倍镜进行计数，按对角线方向数5中格即80小格，计数每一小方格细胞的平均数。

由于菌体细胞在血球计数室中处于不同的位置，要在不同焦距下才能看到，因为要求观察时要不断调节微调螺旋，防止遗漏，如菌体细胞位于小格的线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。

4．结果计算：
每小格的室容积=（1×1×0.1）/（16×25）=0.1ul/400
计数：数5个中方格（80个小格）
每小格的平均细胞数=A/（5×16）=A/80
每ul细胞数=（A/80）×4000
5．清洗：
血球计数板用完后，一定要用清水冲洗干净，晾干后保存，注意不可用粗糙物品擦中央平板，以免损坏小格刻度。

用血球计数板在显微镜下直接计数微生物细胞的数量是一种比较方便而快速的
计数方法，但只能测得微生物细胞的总数，分辨不出活细胞还是死细胞。

四.实验结果：
每小格的室容积=（1×1×0.1）/（16×25）=0.1ul/400
计数：数5个中方格（80个小格共有406个）
每小格的平均细胞数=A/（5×16）=A/80=406/80≈5.075
每ul细胞数=（A/80）×4000=20300
五.心得体会：
1）取待测稀释菌悬液像血球计数板加样前，必须将菌悬液充分摇匀；
2）加样过程中，应避免将菌液滴在盖玻片；
3）由于菌体在计数室中处于不同空间位置，须在不同焦距下才能观察到，故观察时续不断调节微调，计数菌液中全部菌体，尽量避免遗漏。