氮测定法操作规程

目的：制订氮测定法操作规程，明确其检查法的操作。

依据：《中华人民共和国药典》2010年版；
《中国药品检验标准操作规范》2010年版。

范围：氮测定法的操作。

责任：质检室主任、化验员。

内容：
1简述
1.1氮测定法（《中国药典》2010年版）适用于含氮有机物的含氮量测定。

1.2本法系将供试品在硫酸及催化剂作用下，经强热分解使有机氮转化为硫酸铵，再经强碱碱化使氨馏出并吸收于硼酸液，最后用硫酸滴定液滴定，求出氮含量。

简述为消化、蒸馏及滴定三步。

1.3氮测定法分第一法（常量法）与第二法（半微量法），应按该品种项下的规定或具体试验选用。

2仪器与试药
2.1仪器
2.1.1常量定氮仪由500ml凯氏烧瓶、氮气球和冷凝管组成。

2.1.2半微量定氮仪由1000ml圆底烧瓶、连有氮气球的蒸馏器和直形冷凝管等组成。

2.1.3分析天平感量0.1mg的天平，适用于精密称取0.1g以上者；感量为0.01mg的天平，适用于精密称取0.1g以下者。

2.1.4消化应用可调压电炉加热。

蒸馏可用可调压电炉或电热套加热。

2.1.5蒸馏连接用的乳胶管或橡胶管，应用氢氧化钠试液煮20min，洗去碱液后用水煮沸，洗净，晾干。

2.2试药
2.2.1试剂均为化学纯。

2.2.2滴定液的配制和标定应符合《标准溶液配制标准操作规程》。

硫酸滴定液（0.005mol/L）用硫酸滴定液（0.05mol/L）定量稀释制成。

2.2.3试液、指示液的配制均应符合《试液配制标准操作规程》及《指示液配制标准操作规程》。

2.2.4硫酸铜用作消化催化剂；硫酸钾（或无水硫酸钠）用以提高硫酸的沸点，也可将硫酸钾与硫酸铜按10:1比例混合研匀使用。

3操作方法
3.1第一法（常量法）
3.1.1称样取供试品适量（约相当于含氮量25～30mg），精密称定，置干燥的500ml凯氏烧瓶中。

供试品如为固体或半固体，可以用定量滤纸包裹加入，也可直接称入。

3.1.2消化在凯氏烧瓶中依次加入硫酸钾（或无水硫酸钠）10g和硫酸铜0.5g，再沿瓶缓缓加入硫酸20ml；若瓶颈上有少量供试品黏附，可用硫酸冲下（保证样品在硫酸液面以下）。

加玻璃珠或沸石2～3粒，在瓶口置一小漏斗并使烧瓶成45°斜置，用可调压电炉缓缓加热，此时烧瓶内物质炭化变黑、溶解；继续使溶液的温度保持在沸点以下，等泡沸停止，消化液由黑色渐变棕色时，强热至沸，俟溶液成澄清的绿色后，除另有规定外，继续加热30分钟，放冷，沿瓶壁缓缓加水250ml，摇匀，放冷。

3.1.3蒸馏沿瓶壁加40％氢氧化钠溶液75ml，使流至瓶底自成一液层，加锌粒数粒，用氮气球将凯氏烧瓶与冷凝管连接（氮气球可防止碱液溅入硼酸吸收液）。

另取2％硼酸溶液50ml，置500ml锥形瓶中，加甲基红－溴甲酚绿指示液10滴，将冷凝管尖端浸入硼酸溶液的液面下；轻轻摆动凯氏烧瓶，摇匀（防止温度骤然变化引起硼酸吸收液倒吸），加热蒸馏（蒸馏时不宜泡沸
过高，以免溅满氮气球），蒸至接受液的总体积约为250ml时，将冷凝管尖端提出液面，使蒸气冲洗约1分钟，用水淋洗尖端，停止蒸馏。

（蒸馏过程中不可突然降低温度，以免硼酸吸收液倒吸。

）
3.1.4滴定馏出液用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定结果用空白试验（空白馏出液的容积应与供试品所得馏出液的容积基本相等）校正。

每1ml的硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于1.401mg 的N。

3.1.5空白试验照供试品消化、蒸馏、滴定的全过程，以相同条件下做空白试验，用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定至相同的终点，其读数用于校正供试品滴定的读数。

3.2第二法（半微量法）
蒸馏装置如图：
图中： A为1000ml圆底烧瓶，
B为安全瓶，
C为连有氮气球的蒸馏器，
D为漏斗，
E为直形冷凝管，
F为100ml锥形瓶，
G、H为橡皮管夹。

连接蒸馏装置，A瓶中加水适量与甲基红指示液数滴，加稀硫酸成酸性，加玻璃珠或沸石数粒，从D漏斗加水约50ml，关闭G夹，开放冷凝水，煮沸A瓶中的水，当蒸气从冷凝管尖端而出时，移去火源，关H夹，使C瓶中的水反抽到B瓶，开G夹，放出B瓶中的水，关B瓶及G夹，将冷凝管尖端插入约50ml水中，使水自冷凝管尖端反抽至C瓶，再抽到B瓶，如上法放去。

如此将仪器洗涤2～3次.
3.2.1称样取供试品适量（约相当于含氮量1.0～2.0mg），精密称定，置干燥的30～50ml凯氏烧瓶中。

供试品如为固体或半固体，可以用定量滤纸包裹加入，也可直接称入。

3.2.2消化在凯氏烧瓶中加硫酸钾（或无水硫酸钠）0.3g与30%硫酸铜溶液5滴，再沿瓶壁用吸管滴加硫酸2.0ml，并加玻璃珠1～2粒，在烧瓶口放一小漏斗，并使烧瓶成45°斜置，用小火缓缓加热使消化液保持在沸点以下，并使小火保持在液面下，等泡沸停止，溶液由黑色变为棕黄色时，逐步加大火力强热至沸，俟溶液成澄明的绿色后，除另有规定外，继续加热10分钟，放冷，加水2ml，放冷。

3.2.3蒸馏按附图连接蒸馏装置，A瓶中加水适量与甲基红指示液数滴，加稀硫酸使成酸性，加玻璃珠或沸石数粒。

将连有氮气球的蒸馏器和直形冷凝管用水加热蒸气淋洗，并使水自冷凝管尖端反冲洗2～3次，从加样品口淋洗1次，洗涤液排出蒸馏管。

取2％硼酸溶液10ml,置100ml锥形瓶中，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液5滴，将冷凝管尖端浸入液面下；将凯氏烧瓶中已消化的内容物经漏斗移入连有氮气球的蒸馏器中，用水少量淋洗凯氏烧瓶及漏斗2～3次，每次约3～5ml，再加入40%氢氧化钠溶液10ml，用水少量洗涤漏斗1次，关闭漏斗（加少量水封闭出口），进行蒸馏（蒸馏时不宜泡沸过高，以免溅至氮气球），至硼酸液由酒红色变为蓝绿色时起，继续蒸馏约10分钟，将100ml锥形瓶下移至冷凝管尖端提出液面，使蒸气继续冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏。

3.2.4滴定馏出液用硫酸滴定液（0.005mol/L）滴定到溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白试验（空白馏出液的容积应与供试品所得
馏出液的容积基本相等）校正。

每1ml 硫酸滴定液（0.005mol/L ）相当于0.1401mg 的N 。

3.2.5空白试验 照供试品消化、蒸馏、滴定的全过程，以相同条件下做空白试验，用硫酸滴定液（0.005mol/L ）滴定至相同的终点，其读数用于校正供试品滴定的读数。

4注意事项
4.1消化过程应在通风橱中进行。

4.2蒸馏装置连接后应严密。

4.3消化时，若发现瓶壁上有黑点，可适当转动烧瓶，使硫酸回流时将黑点洗下，以保证消化完全。

4.4消化液应放冷后，再沿瓶壁缓缓加水，防止供试液局部过热爆沸，冲出瓶外。

4.5蒸馏过程中若无黑色CuO 析出，说明加入碱量不足，应补足碱量或重做实验。

4.6配制40%氢氧化钠溶液时，宜边加边振摇，避免未溶解部分沉积于容器底部而难于溶解。

4.7约80%以上的氮在最初1～2min 内蒸出，初蒸速度不宜太快，以免氨蒸出后未能及时被吸收而逸失。

4.8锥形瓶加入硼酸溶液和指示剂后应显酒红色；如显绿色，说明锥形瓶有碱性物质污染。

4.9蒸馏出的氨接收液应尽快滴定，以免放置时间过长，影响测定结果。

5记录与计算
5.1记录应记录天平型号及室温和相对湿度，供试品与试药的名称、规格及取用量，滴定液的名称（可用盐酸滴定液）、F 值及消耗量（ml ）。

5.2计算
含氮量X%=
W V V F T S )(0-⋅×100% 式中 T 为滴定度，mg ；
V S 与V 0分别为供试品与空白滴定时硫酸滴定液消耗的体积，ml ；
F为滴定液的F值；
W为供试品的重量，mg；
供试品应测定2份，常量定氮的相对偏差一般不得过0.5%，半微量定氮的相对偏差一般不得过1.0%；空白2份，极差不得大于0.05ml。

6附注
6.1取用的供试品如在0.1g以上时，应适当增加硫酸的用量，使消解作用完全，并相应地增加40%氢氧化钠溶液的用量。

6.2酰胺碱性水解法不属于本测定法范围。

6.3空白值常为0.02～0.3ml，空白值为0ml亦属正常。

6.4操作环境应避免氨及碱性气体的干扰。