免疫血清学检验技术(ppt)

三、 间接凝集反应
间接凝集反应(indirect agglutination)： 将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体
表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电 解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。 载体种类： RBC（醛化）；聚苯乙烯胶乳颗粒（羧化）； 金黄色葡萄球菌。
（一）间接凝集反应的类型 1、正向间接凝集试验
大分子抗原和长时间扩散（＞48h）：C=k×d2 小分子抗原和较短时间（24h）：logC=k×d
（二）双向琼脂扩散试验
可溶性抗原与相应抗体在含适量电解 质的琼脂凝胶板的对应孔中，各自向四周 扩散，若两者分子比例适当，则在扩散的 一定时间后在两孔之间相遇并生成白色沉 淀线。
加入定量的抗体在中间孔，按一定距离在 四周打数个小孔，分别加入不同稀释度的 抗原可见粗细不等的沉淀线，从而可判定 抗原的效价。
优点: 快速，只需1小时左右；灵敏度提
高，约为10μg／ml。
（四）火箭电泳 Rocket Electrophoresis
又称免疫扩散，是把单向免疫扩散同电 泳结合在一起的方法。抗原在含有定量抗体 的琼脂中泳动，两者比例适宜时，在较短时 间内生成锥形的沉淀峰。在一定浓度范围内， 沉淀峰的高度与抗原含量成正比。此法的特 点是需时较短，故可用于快速沉淀标本中抗 原的含量。
凝集反应特点： IgM的作用比IgG大数百倍 IgG与抗原结合后，常不出现凝集现象， 称不完全抗体 临床意义： 进行细菌的抗原分析、鉴定及分型，也 可应用已知细菌检查未知血清的抗体。
多克隆抗体
肌红蛋白
单克隆抗体
上清液
肉眼可见的凝集现象
二、 直接凝集反应
直接凝集反应(direct agglutination)： 颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解
三孔型双向免疫扩散可能的结果
（三）对流免疫电泳试验
概念: 在电场中进行的双向免疫扩散。 原理: 将抗原加至近阴极孔内，抗体加至
近阳极孔内。抗原与抗体在pH 8.6的缓冲 液中均带负电荷，通电后，抗原因带负电 荷向阳极泳动，而抗体球蛋白等电点高， 所带负电荷少，加之分子量较大，向阳极 的位移小于受电渗作用向阴极的位移，形 成抗原抗体相向移动。二者结合，在比例 适宜处形成白色沉淀线。
Titer
64 8
512 <2 32 128 32
4
（三）反向胶乳凝集试验
（四）明胶凝集试验
将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色 明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用 时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼 可见的粉红色凝集
（五）间接凝集反应的应用
抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病原体
的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质 成分。 抗体的检测
六、沉淀反应 precipitation reaction
可溶性抗原(如细菌、外毒素、血清 蛋白等)与相应抗体特异性结合后，在一 定条件(适量的电解质、合适的酸碱度和 温度)下，经一定时间，于比例合适处形 成肉眼可见的沉淀现象。
环状沉淀反应
液体内沉淀反应 絮状沉淀反应
沉
淀
免疫浊度测定
反
应
免疫电泳
检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产 生的抗体。
四、自身红细胞凝集试验
未经致敏的受检 者新鲜红细胞 试剂：抗人O型 红细胞的单克隆 抗体 临床应用：HIV 检测、HBV检测
五、 抗球蛋白试验（Coombs试验）
（一）直接Coombs试验 检测红细胞上的不完全抗体
（二）间接Coombs试验 检测血清中的不完全抗体
用抗原致敏载体--检测抗体
2、反向间接凝集试验
用抗体致敏载体----检测抗原
3、间接凝集抑制试验
用抗原致敏载体--检测抗原
4、协同凝集试验 coagglutination test：以金黄色葡萄球菌 菌体为反应的载体。人及多种哺乳动物（猪、 兔、豚鼠等）血清中IgG抗体的FC段与菌体 表面的A蛋白（SPA）非特异性结合后，IgG 的两个Fab段仍然暴露在菌体表面，保持着 结合抗原的活性和特异性。当与特异性抗原 相遇时，能出现特异的凝集现象。
火箭电泳示意图
第二节 放射免疫测定技术
早期的放射免疫技术是基于竞争性结合反应 原理的放射免疫分析(RIA)，稍后又发展了 非竞争性结合的免疫放射分析(IRMA)。该类 技术具有灵敏度高、特异性强、重复性好、 样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化 等优点，广泛应用于生物医学研究和临床诊 断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药 物和肿瘤标志物的定量分析。
凝胶沉淀反应
双向琼脂 扩散试验
琼脂扩散试验
单向琼脂 扩散试验
对流免疫 电泳试验
（一）单向琼脂扩散试验
制成含有适宜抗体浓度的琼脂凝胶板。 以适当距离打孔，孔中加入可溶性抗原。抗 原向周围扩散，当抗原与抗体比例适宜时， 在琼脂中形成抗原－抗体复合物的晶格和沉 淀。沉淀环的直径与抗原浓度呈正相关。
扩散圈出现呈两重沉淀环的双环现象， 表明存在但抗原性相同，而扩散率不同的两 种组分。
SPA--(Fc)IgG(Fab)--Ab
SPA：staphylococcal protein A
（二）正向间接血凝试验
血凝试验强度
Patient
1 2 3 4 5 6 7 8
正向间接血凝试验
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024 Pos. Neg.
质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。
（一）玻片凝集试验
+
方法评价: 定性试验 简便和快速 敏感度低
临床应用: 菌种鉴定 血清学分型 血型鉴定
（二）试管凝集试验
方法评价： 半定量试验 简便、快速 敏感度低 可有假阳性
临床应用： 肥达氏试验：伤寒副伤寒 外裴二氏试验：斑疹伤寒 Wright test:布鲁菌病 交叉配血试验
免疫血清学检验技 术(ppt)
优选免疫血清学检验技术
Biblioteka Baidu
第一节 凝集与沉淀反应
一、 凝集反应及其特点
凝集反应： 细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等
颗粒性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与 载体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应 抗体（或抗原）发生特异性反应，在适当 电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。
凝集反应过程： 抗原抗体的特异性结合 出现肉眼可见的凝集现象
常用标记核素