芽孢总数测定的标准操作规程

1．8．2芽孢总数测定的标准操作规程

1．8．2．1检验目的和范围

对无菌操作条件下获得的样品原液，配制的样品稀释液进行芽孢总数的测定。

1．8．2．2操作程序

一、样品准备

1、在无菌操作条件，将10ML室温状态下的待测样品加入一个灭菌试管中，盖好棉塞。

2、在同直径的试管中加入10ML同样室温状态下的水，并插入温度计。

3、将两支试管同时放入80℃水浴中保温，当水中的温度计达到80℃时开始计时。

计时达10分钟后迅速将样品管取出，编号后记录，置于4-10℃冷水中迅速降温到室温。

无菌操作条件对降温后样品进行稀释，编号后记录于“微生物操作表”中。

原料选择10-2-10-4三个稀释度的样品稀释。

中间产品选择10-1至10-2两个稀释度的样品稀释液。

问题产品检验选取10-1至10-2两个稀释度的样品稀释液。

二、培养基准备

1、检查预先经过灭菌处理的营养琼脂培养基是否处于正常。

2、将灭菌培养基用微波炉加热2分钟，或用水浴融化后，在40-45℃水浴中保温待用。

三、接种培养

在无菌操作条件下，在一个灭菌平皿内倾入15ML营养琼脂培养基，并暴露至接种过程结束，标记后以做为环境对照品。

2、按照样品编号在灭菌平皿底部作相应标记，并记录在“微生物检验操作表”中。

3、在无菌操作条件下，用1ML的灭菌吸管移取1ML选定的样品稀释液或样品原样至灭菌平皿中。

4、同上对同一样品重复操作，即每个选定的样品稀释度做两个平皿。

5、按以上步骤，以1ML无菌生理盐水作为空白操作对照。

6、在无菌操作条件下，将约15ML的营养琼脂培养基倾入样品平皿中，将平皿置于操作台面上轻轻转动。使样品和培养基混合均匀。

7、待琼脂凝固后，将平皿翻转，即保持有标记和培养基的一面朝上。

8、将所有平皿（包括空白和环境对照）置于32±1℃的恒温培养箱内，保持培养72小时。

9、在“微生物检验操作表”中记录保温时间。

四、菌落计数

1、选择菌落数在30至300之间的平皿为标准，在菌落计数器上计数每个平皿上的菌落总数，记录在“微生物检验操作表中”。

2、检验结果：平行样品菌落数和/2×稀释倍数，记录在“微生物操作表”中。

3、计数结果在100以内，按实际计数报告，100以上按两位有效数字报告。