食用菌组织分离制母种

再 见 !

分组辅导

注意同学们的操作； 及时纠正不规范动作。

接种操作完毕，收集试管进行培养。
数显式恒温培养箱的使用

注意事项（提问同学）
实训第三大部分
结果观察
母种培养生长状态观察

母种培养生长状态可分4种情况. 1.菌丝已萌发，生长旺，无污染 (如图所示)；


2.菌丝已萌发，但有杂菌污染； 3.菌丝未萌发，无污染； 4.菌丝未萌发，且杂菌污染严重；
原因分析


1.菌丝未萌发：①组织块太小②烫伤严 重③培养条件如温度不适宜。 2.有杂菌污染： ①培养基灭菌不彻底； ②培养基成分适宜杂菌生长； ③环境、用具消毒不严格； ④菇体耳体消毒不严格； ⑤接种操作控制不当，要无菌操作。
常见的杂菌观察

常见的杂菌主要有细菌、放线菌；
常见的杂菌观察

细菌、霉菌等。
组织分离部位的选择

菌肉组织如图

菌核组织如图
示 范操 作


④ 组织分离：解剖刀经火焰灭菌，在菇 柄中部纵切一刀，用手掰开菌再用刀片 在菇盖与菇柄交界处切取黄豆大小的小 方块。 ⑤ 接种：在无菌条件下，随后挑取一组 织小块，迅速移接到PDA斜面培养基上， 并塞好棉塞。
示范操作

⑥ 贴标签培养：试管从接种箱取出之前， 应逐支试管正面的上方贴上标签，写明 菌种编号、接种日期，随后把试管放入 培养箱（室）中，置适宜温度（平菇 22℃，香菇25℃）下培养，待组织块长 出菌丝无污染即为纯种。
超净工作台


⑴ 使用注意事项（提问同学） ① 提前接通电源，开启紫外线杀菌灯，30 分钟后关闭杀菌灯； ②然后开启日光灯、风机，20分钟后方可 进行操作。
组织分离操作

③菇体消毒：将子实体菌柄基部切 除，置接种箱内，在无菌箱内以0.1 ％的升汞水浸几分钟，再用无菌水 冲洗并揩干，或用75％酒精棉球擦 拭菌盖与菌柄2次，进行表面消毒。
实训设计思路
1. 母种培养基的成分不同对 菌丝生长有什么影响； 2. 组织分离选用的材料及分 离的部位不同有什么影响； 3.培养温度不同有什么影响； 4.杂菌污染的原因
ห้องสมุดไป่ตู้
（三）实训器材


新鲜菇(耳)体、刀片、镊子或接种针 试管斜面培养基 接种箱或超净工作台、无菌室、酒精灯、 75%酒精及酒精棉球等 培养箱等。
实训三 组织分离制母种
实训第一大部分
讲解及演示 指导老师

王德芝
食用菌味道鲜美 风味独特
下面请同学们欣赏几道
美味的菜肴
菇香美味迎客来
花好月圆蘑菇香
香菇招来蝶恋花
金针系珠相思豆
团团圆圆蘑菇圈
龙凤呈祥猴头宴
银耳黑耳齐争艳
蘑菇全席大师宴
味道鲜美君品尝
食用菌保健酒及饮料系列
食用及药用菌的药用提取物
（四）组织分离操作的主要步骤：


①挑选种菇：挑选生长健壮，菌龄适中， 无病虫害，具有本品种优良性状的菇体 或组织作为种菇。 ②环境、用具严格消毒：即超净工作台 或无菌室的使用，形成无菌的环境。
超净工作台的使用


超净台可将空气通过由特制的微孔的 “超级滤清器”后吹送出来，形成连续 不断的无尘无菌的超净空气层流，即所 谓“高效的特殊空气”，它除去了大于 0.3μm的尘埃、真菌和细菌孢子等等。 工作人员就在这样的无菌条件下操作， 保持无菌材料在转移接种过程中不受污 染。
培

养
置于适宜温度下培养3-5天，就可以看到 组织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大 即得到菌种。如香菇、平菇、双孢菇、 草菇、猴头菌等多采用此方法。
附：数显式恒温 培养箱的使用

数显式恒温培养箱的使用



培养箱是通过对周围环境条件的控制制 造出一个能使细胞、组织更好地生长的 环境，条件控制的结果就会形成一个稳 定的条件 ①调节适宜温度，并使温度稳定，再放 培养物; ②培养过程中要观察温度稳定性和生长 状态，并注意培养时间；
培养基的高压灭菌


使用高压蒸汽灭菌锅应注意的事项？ （提问同学） (1)锅内装物品不应过紧； (2)注意排出冷气，否则不能保证灭菌效果； (3)加热排冷气后，使温度达到121.3℃，压 力在0.1－0.15 MPa之间维持30 min； (4)不耐高热高压之物品，不能用此法灭菌。
复习上一节 母种培养基的配制步骤
• • • • • 1.按配方称量：见下面的配方 2.煮制 3.分装 4.灭菌 5.排斜面
母种培养基配方： 1.土豆200g、糖20g、琼脂20g、水1000ml
2.去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、 水1000ml、PH值自然，另外添加：麸皮20g、 玉米面5g或黄豆粉5g、磷酸二氢钾2g，硫酸 镁2g，VB11片（10mg）。 此配方适用于大多数菌种，金针菇、黑木耳、 灵芝生长尤其茁壮。 可作黑木耳、香菇的复壮培养基，效果显著。
常见的杂菌观察

青霉、黑曲霉
（五）组织分离制母种应注意的事项 （提问同学）

环境用具严格消毒； 组织小块大小要适宜(黄豆粒大小)； 接种时要严格无菌操作； 培养时调节到该菌的适宜温度。
（六）实训作业


1.组织分离法制母种过程中的注意事项 有哪些？ 2.记录你制作的母种的生长状态; 3.是否有杂菌污染,如有分析其原因.
注意

③培养终止，关掉电源，取出培养物；
④培养箱的环境应清洁整齐，干燥通风； 保持培养箱内空气干净，并定期消毒；

实训第二大部分

学生分组操作
分组操作


每班同学可分为二大组6小组； 第一大组3台双人超净工作台，每次可6 人操作； 第二大组可在无菌室内操作；
第一大组采用菌盖与菌柄交界处组织进 行分离，第二大组采用菌盖带菌褶部分 进行组织分离，作对比观察。
（一）实训目的 1.掌握母种培养基的配制操作及 高压灭菌方法; 2.理解组织分离法制母种的原理; 3.掌握组织分离接种技术; 4.会使用超净工作台和培养箱.

（二）实训原理



组织分离法是利用子实体组织来分离获得纯 菌丝的方法。 组织分离系一种无性繁殖法，双亲的染色体 没有经过重组，因此组织分离基本上可保持 亲本的生物学特性，优良菌株用组织分离法 能使遗传特性稳定下来。 该法操作简便，取材广泛，菌丝生长发育快， 比较常用。
组织分离制母种

好树结好果, 好种出好菇! 美味的食用菌及珍贵的药用菌需要好菌种!
你了解吗?
噢 菌种很重要！
食用菌的栽培
母种
原种
栽培种
子实体(菇体)
实训内容 母种培养基的配制 及组织分离接种

（一）实训目的 （二）实训原理
（三）实训设计思路
（四）实训器材 （五）实训步骤 （六）注意事项 （七）实验作业