过氧化物酶标记链霉亲和素使用说明
Streptavidin-HRP说明书
产品简介
链霉亲和素（Streptavidin）是一种分子量 60kDa 左右的四聚体蛋白，一分子链霉亲和素 可以高度特异性地与四分子生物素结合，链霉亲和素可用于检测和分离生物素化蛋白。辣根 过氧化物酶（HRP）是一种含亚铁血红素的糖蛋白，与底物孵育，能产生一种着色、荧光或 发光标记的分子衍生物。Streptavidin-HRP 是由链霉亲和素和辣根过氧化酶交联所得，与 生物素化蛋白和特定化学发光底物结合产生光信号，因此可用于生物素化抗体、蛋白、组织、 细胞、核酸等样品的检测。
储存缓冲液
1XPBS, 50%甘油。
储存温度
2-8℃保存一个月，-20℃保存一年，避免反复冻融。
产品应用
具体工作浓度按实际实验样品调整。稀释倍数受多种因素影响，包括一抗和二抗浓度、孵育 时间等，我们推荐稀释比例如下：
Immunocytochemistry Western Blot ELISA
1:200-1：500 1:1000 - 1:10000 1:5000 - 1:20000
订购信息
产品名称
Streptavidin-HRP
货号 SLP001H SLP001HC
规格 100µl 1ml
1/1
常州天ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ人和生物科技有限公司
联科生物 Human MMP-2 ELISA Kit 说明书
Catalog Number EK1M02-48EK1M02-96定量检测血清、血浆和细胞培养上清中的人基质金属蛋白酶2(MMP-2)浓度。
本产品仅用于科学研究，非诊断试剂，不能用于临床诊断。
1.背景介绍基质金属蛋白酶2(MMP-2)，又名72kDa 的IV 型胶原酶和明胶酶A ，在人类中由MMP2基因编码。
激活MMP-2需要蛋白水解加工。
MMP-2在子宫内膜破裂、调节血管形成和炎症应答中起作用。
MMP-2参与许多事件，如癌症进程、癌细胞浸润、细胞信号转导、新血管形成和淋巴管生成。
MMP2基因突变与Torg-Winchester 综合征、多发性骨溶解、关节炎综合征有关，可能与瘢痕疙瘩有关。
非囊性纤维化支气管扩张中，相比于呼吸道感染铜绿假单胞菌的患者，感染流感嗜血杆菌患者的MMP-2浓度是升高的。
2.检测原理本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。
特异性抗人MMP-2抗体预包被在高亲和力的酶标板上。
酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体，经过孵育，样本中存在的MMP-2与固相抗体和检测抗体结合。
洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。
洗涤后，加入显色底物TMB ，避光显色。
颜色反应的深浅与样本中MMP-2的浓度成正比。
加入终止液终止反应，在450nm 波长(参考波长570-630nm)测定吸光度值。
3.试剂盒检测的局限1)请在本试剂盒标示的有效期内使用。
2)试剂盒的试剂不能与其他批号的试剂或其他来源的试剂混合使用。
3)任何标准品稀释、操作人员、移液技术、洗涤技术、孵育温度、试剂盒保存时间的改变，都将影响结合反应。
4)本试剂盒在设计上去除或降低了生物学样本中的一些内源性干扰因素，并非所有可能的影响因素都已经去除。
Human MMP-2ELISA Kit 检测试剂盒（酶联免疫吸附法）EK1M02-01二、基本信息1.2.未提供的材料设备1)能够检测450nm吸光度的酶标仪，参考波长570nm或630nm2)移液器及枪头、加样槽3)准备试剂用的试管、离心管、量筒等4)蒸馏水或去离子水5)涡旋振荡器、微孔板振荡器3.贮存试剂盒保存于2-8℃，有效期标注于标签上。
辣根过氧化物酶标记 Streptavidin
辣根过氧化物酶标记Streptavidin产品简介：本辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-labeled Streptavidin)也称HRP-Streptavidin、Streptavidin-HRP或辣根过氧化物酶标记链霉亲和素，为进口分装，可以用于生物素(Biotin)标记的抗体、核酸、蛋白或其它生物素标记分子的检测。
具体用途包括Western、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学、原位杂交、Southern、Northern、EMSA等。
本HRP-Streptavidin用高纯度的Streptavidin和超纯的辣根过氧化物酶交联而成，确保产生最低的本底和最高的灵敏度。
本产品的浓度为1mg/ml。
Streptavidin的分子量为66kD，可以高度特异性地和生物素(Biotin)结合。
Streptavidin和生物素的亲和常数为K d=10-15M。
Streptavidin是一个4聚体蛋白，可以同时结合4个生物素分子。
Streptavidin的中文名为链霉亲和素，从Streptomyces adidinii 中纯化获得，和鸡蛋清来源的Avidin(亲和素)在空间结构以及与生物素的亲和力方面具有高度的相似性。
和Avidin不同的是，Streptavidin是一种非糖基化蛋白，并且基本不带电荷。
Avidin的pI= ~10.5，在中性pH条件下呈碱性。
由于Streptavidin 和Avidin相比在中性条件下不带电荷，因此Streptavidin的非特异性结合比Avidin低很多，这样检测时的非特异性背景就低很多。
因此目前在生物素检测时通常使用Streptavidin替代Avidin。
辣根过氧化物酶即horseradish peroxidase (HRP)，可以在Western、EMSA、Southern或Northern等检测时催化ECL类试剂(如ECL、BeyoECL等)产生化学发光，可以在ELISA时催化TMB产生蓝色，也可以在免疫组化、免疫细胞化学或Western blot 检测时催化DAB产生棕色沉淀。
链霉亲和素-R-藻红蛋白说明书
化学品安全技术说明书页 1/6根据 GB/T 16483-2008, GB/T 17519-2013发行日期 2019.12.20在 2019.11.08 审核(在 2 页继续)化学品中文(英文)名称, 化学品俗名或商品名：链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，0.25 mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，1 mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，10mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，50 mg(在 1 页继续)化学品中文(英文)名称, 化学品俗名或商品名：链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，0.25 mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，1 mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，10mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，50 mg(在 2 页继续)· 混合危险性等安全储存条件· 储存:· 储存库和容器须要达到的要求:没有特别的要求.· 有关使用一个普通的储存设施来储存的资料:不需要.· 有关储存条件的更多资料:没有.· 具体的最终用户无相关详细资料。
化学品中文(英文)名称, 化学品俗名或商品名：链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，0.25 mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，1 mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，10mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，50 mg(在 3 页继续)· 爆炸的危险性:该产品并没有爆炸的危险· 爆炸极限:较低:未决定.较高:未决定.· 蒸气压在 20 °C:23 hPa· 密度:未决定的· 相対密度未决定.· 蒸气密度未决定.· 蒸发速率未决定.· 溶解性水:不能拌和的或难以拌和· n-辛醇/水分配系数:未决定.· 黏性:动态在 20 °C:0.952 mPas运动学的:未决定.· 溶剂成份:水:98.8 %固体成份: 1.0 %· 其他信息无相关详细资料。
辣根过氧化物酶及其使用介绍
辣根过氧化物酶及其使用介绍酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。
酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。
酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。
酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。
目前，高质量的酶(如辣根过氧化物酶，简称HRP)国内已有商品供应。
高质量的抗体则可通过提取纯化而获得。
在制备方法上，宜选用产率高、不影响结合物的活性和不混杂干扰性物质且操作简便易行的方法。
(一) 酶制剂及其底物凡无毒性又能呈现有色化学反应的酶，原则上均可作为标记用。
但作为标记抗体用的酶应满足下列要求：(1)来源方便，易于纯化；(2)比活性高，性质稳定；(3)酶活性和量能用简单方法测定。
目前在免疫酶技术中常用的酶为辣根过氧化物酶(HRP)和硷性磷酸酶(AP)，其次还有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。
由于辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)比活性高，稳定，分子量小，纯酶容易制备，所以最常用。
HRP广泛分布于植物界，辣根中含量高，它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，糖含量18％。
HRP由多个同功酶组成，分子量为40,000,等电点为PH3～9,酶催化的最适PH因供氢体不同而稍有差异，但多在PH5左右。
酶溶于水和58％以下饱和度硫酸铵溶液。
HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和275nm，一般以OD403nm ／OD275nm 的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的纯度。
高纯度的酶RZ值应在3.0左右(最高可达3.4)。
RZ值越小，非酶蛋白就越多。
值得注意的是，纯度并不表示酶活性，如当酶变性后，RZ值仍可不变。
HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2)和供氢体(DH2)。
供氢体多为无色的还原型染料，通过反应可生成有色的氧化型染料(D)。
链霉亲和素系列及用途
链霉亲和素系列及用途------20130806一、链霉亲和素系列产品链霉亲和素 (Streptavidin，SA)是由一种链霉菌分泌的一种小分子非糖基化蛋白质，其天然形式为同源四聚体，分子量约60kD。
生物素（Biotin）分子量小，对蛋白质功能的干扰性低，可广泛应用于各种标记（如核酸、蛋白、基因芯片材料、纳米材料、分离填料等）。
SA及其衍生物与生物素有极高的亲和力和非凡的特异性，SA-Biotin复合物可以耐受变性剂（如盐酸胍）、去垢剂（如SDS）、蛋白水解酶、极端温度（4～90℃）和pH环境（pH2～8）。
使得SA-biotin系统在基础和临床影像学、蛋白质纯化、抗原抗体和酶等蛋白质材料的固定、免疫检测、临床诊断试剂、组织免疫化学、生物纳米材料组装、化疗药物靶向投放、肿瘤靶向放射治疗等领域得到广泛应用和尝试。
1.链霉亲和素产品2. 酶标记链霉亲和素辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，在Western、EMSA、Southern或Northern等检测时催化ECL类试剂（如ECL、BeyoECL等）产生化学发光，可以在ELISA时催化TMB产生蓝色，也可以在免疫组化、免疫细胞化学或Western blot检测时催化DAB产生棕色沉淀。
辣根过氧化物酶标记链霉亲和素（HRP-Streptavidin，HRP-SA）由高纯度的SA和超纯的HRP交联而成，确保产生最低的本底和最高的灵敏度，操作简便，可用于生物素化的蛋白、DNA、RNA等样品的检测，作为信号放大器，提高检测的灵敏度。
碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，AP）是一种水解酶，负责从核苷酸，蛋白质和生物碱等分子中去除磷酸基团。
AP在Western、EMSA、Southern或Northern等检测时催化BCIP/NBT等显色试剂显色或催化适当的化学发光试剂产生化学发光。
生物素-亲和素标记技术完整讲解
4 .4 在分离纯化中的应用（亲和层析）
1.平衡 2.上样 3.洗杂 4.洗脱
五 反应特点
1. BAS具有高灵敏度、高特异性、高稳定性和适用性等特点。
1包被抗原2洗涤3待测抗体4洗涤5生物素标二抗6洗涤7加亲和素8洗涤9加酶标生物素10洗涤11加底物12显色后加终止液直接法步骤2亲和素生物素过氧化物酶法abc法即亲和素生物素过氧化物酶法avidinbiotincomplextechnologyabc其原理是预先按一定比例将亲和素或链霉亲和素与酶标生物素结合形成可溶性的亲和素或链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物当其与检测反应体系中的生物素化一抗直接法或生物素化二抗间接法相遇时复合物中未饱和的亲和素或链霉亲和素结合部位即可与抗体上的生物素结合
磁微粒和氨基末端磁性微粒为载体分别通过物理吸附和共 价作用制备两种链亲和素-磁性微粒，其具有较高的游离 生物素结合容量以及较高的生物素标记寡核苷酸的结合能 力。
4.1.4 在免疫酶技术中的应用
BAS应用于免疫酶技术，通过生物素-亲和素将免疫复 合物与辣根过氧化物酶连接起来，形成免疫酶-生物素-亲 和素法。赵金富等用合成的雌三醇-生物素复合物(E3Biotin)结合辣根过氧化物酶标记的亲合素(HRP-Avidin)作
BAS与免疫放射分析(immunoradiometric analysis，IRMA)方法偶联， 先将针对不同抗原决定簇的固相抗体和生物素化抗体与 抗原(标准抗原和待测抗体)同时反应，在固相载体表面形成双抗体夹心免疫复合物， 再用放射性同位素标记的亲和素(或链霉亲和素)与复合物中的生物素结合， 最终使反应信号放大。 李贵平等用153Sm标记BAS，再标记抗CEA 单抗， 最后在结肠癌裸鼠模型中进行γ显像和体内分布测定， 结果肿瘤显像时间大大缩短。郝君等采用生物素-磁珠富集微卫星， 与传统放射性同
过氧化物酶(Peroxidase,POD)试剂盒使用说明
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存；用时每瓶加入 3mL 试剂一，现配现用，可 4℃保存一周；
试剂三：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液， 超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min， 取上清，置冰上待测。
（2）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一
个酶活力单位。
POD（U/104 cell）＝245μL（反应体系）÷1000μL×提取酶液总体积（1000μL）÷样 本体积（5μL）÷0.005×ΔA÷细菌或细胞密度（104 cell /mL）=9800×ΔA÷细菌或细胞 密度（104 cell /mL）
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置
冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 470nm，分光光度计蒸馏水 调零。
2、 测定前将试剂一、二和三在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）放置 10min 以上。
注意事项：
1、如一次测定的样本数量较多，可将试剂一、二、三和蒸馏水按照比例混合，在 37℃ （哺乳动物）或 25℃（其它物种）放置 10min，测定时加入 240μL 即可。
2、样本测定值如果小于 0.005，可将反应时间延长到 3-5 分钟，计算时除以反应时间 即可；如果高于 0.5，可将样本用提取液进行稀释。计算时乘以相应的稀释倍数即可。
过氧化物酶标记生物素使用说明
过氧化物酶标记生物素使用说明
HRP-Biotin
货号：SE064
规格：0.1ml/0.5ml
保存：-20℃保存至少一年，避免反复冻融。
2-8℃可保存3-6个月。
产品说明：
HRP标记生物素是采用进口生物素和高活性过氧化物酶HRP，采用标记技术，制成HRP-Biotin复合物，可广泛用于免疫病理、酶联免疫测定、基因探针及其他学科的放大检测系统。
过氧化物酶标记生物素每毫升含有 4.5mg BNHS,0.05mg HRP和3mg BSA。
工作效价：
ELISA法：1：500～2000
组织化学：1：50～100
免疫印迹：1：200～400。
斑点免疫：1：200～400。
具体效价以产品标签为准，最佳使用条件需根据所检测样本的抗原及一抗效价优化而定。
相关试剂：
SP034兔IgG免疫球蛋白抗原
SPA131羊抗小鼠IgG(纯化)
SA134羊抗兔IgG(免疫血清)
SF134羊抗兔IgG-FITC
SE237兔抗猪IgG-HRP
A1800抗体稀释液。
过氧化物酶(Peroxidase,POD)试剂盒使用说明
3、细菌或细胞 POD 活性
（1）按样本蛋 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一个酶活 力单位。
POD（U/mg prot）＝245μL（反应体系）÷1000μL×提取酶液总体积（1000μL）÷样 本体积（5μL）÷0.01×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL）=4900×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL）
2、组织 POD 活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一个酶 活力单位。
POD（U/mg prot）＝245μL（反应体系）÷1000μL×提取酶液总体积（1000μL）÷样 本体积（5μL）÷0.005×ΔA 测定÷蛋白质浓度（mg/mL）=9800×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL）
用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）POD 活性
单位的定义：每 mL 血清（浆）在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一个 酶活力单位。
POD（U/mL）＝245μL（反应体系）÷1000μL×血清（浆）总体积（1000μL）÷样本 体积（5μL）÷0.005×ΔA =9800×ΔA
（2）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一 个酶活力单位。
POD（U/104 cell）＝245μL（反应体系）÷1000μL×提取酶液总体积（1000μL）÷样 本体积（5μL）÷0.01×ΔA÷细菌或细胞密度（104 cell /mL）=4900×ΔA÷细菌或细胞密 度（104 cell /mL）
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一个酶活力单 位。
链霉亲和素标记的葡萄糖氧化酶
链霉亲和素标记的葡萄糖氧化酶一、概述蛋白质标记技术是生物化学研究中常用的一种手段，它可以用来检测、纯化和定位蛋白质，同时也可以用来研究蛋白质的功能和结构。
链霉亲和素标记技术是其中的一种重要技术，它可以通过链霉素和生物素之间的特异性结合，将链霉素标记的蛋白质与生物素标记的物质进行结合，从而实现对蛋白质的检测和纯化。
葡萄糖氧化酶作为一种重要的生物催化剂，在生物工程和医药领域有着广泛的应用，因此将链霉亲和素标记技术应用于葡萄糖氧化酶的标记和纯化，具有重要的研究和应用价值。
二、葡萄糖氧化酶的结构与功能葡萄糖氧化酶是一种催化葡萄糖氧化反应的酶类，它能够将葡萄糖转化为葡萄糖酸，并伴有产生氢过氧化物的副反应。
葡萄糖氧化酶具有较高的催化活性和稳定性，因此被广泛应用于生物制药、生物能源等领域。
葡萄糖氧化酶的二级结构主要由α-螺旋和β-折叠构成，而其活性部位则包括结合葡萄糖的部位和结合辅助因子的部位。
了解葡萄糖氧化酶的结构与功能，对于后续的标记和纯化工作具有重要的指导意义。
三、链霉亲和素标记技术原理链霉素和生物素是两种天然存在的生物小分子，它们之间通过特异性的结合作用形成稳定的链霉素-生物素复合物。
这种结合具有高亲和力和特异性，可以被广泛应用于生物学研究和生物工程领域。
链霉亲和素标记技术即利用链霉素-生物素的特异结合性质，将链霉素标记的蛋白质与生物素标记的物质进行结合，从而实现对蛋白质的检测、纯化和定位。
链霉素-生物素结合的原理是链霉素-生物素复合物的非共价相互作用，主要包括氢键、静电相互作用和范德华力等。
四、葡萄糖氧化酶的链霉亲和素标记方法为了实现葡萄糖氧化酶的链霉亲和素标记，首先需要选择合适的链霉素标记试剂和生物素标记试剂。
通常可以选择含有氨基、羧基或硫基等反应基团的链霉素衍生物，以及含有双亲杂环的生物素衍生物。
在一定的条件下，将链霉素标记试剂与葡萄糖氧化酶进行反应，使其特异性结合；接着将生物素标记试剂与链霉素标记的葡萄糖氧化酶进行反应，进而实现葡萄糖氧化酶的链霉亲和素标记。
实验二 链霉亲和素-过氧化物酶法(-精品医学课件)
各1 ′ 各1 ′ 各1 ′
《免疫组织化学相关技术》
实验二 链霉亲和素-过氧化物酶法
（SP法）
一、实验目的
1 掌握免疫组化染色的原理及步骤 2 了解免疫组化实验的设计及问题解决方法
免疫组织化学原理
利用抗原（antigen, Ag），抗体（antibody）特异 结合的原理，用已知抗体检测未知抗原的一种方法。
二、SP法基本原理
（streptavidin-perosidase）
即链霉亲和素-过氧化物酶连结法： （链霉抗生物素、链霉卵白素） 抗原
＋ 一抗 ＋ 生物素标记的二抗 ＋ HRP标记的链霉抗生物素蛋白（三抗）
＋ DAB底物反应，显色
棕色底物 HRP标记的 链霉亲和素
生物素偶联的 二抗
一抗
抗原
三、SP法优点
山
过 氧
羊 抗 血
勿洗
一 抗
PBS PBS
二 抗
三 抗
化
清
氢
3m*3 8′ 3m*3 12′
8′ 37℃ 50’ 3m*3 12′ 3m*3
DAB PBS
自
苏
显 色
来 水 冲 洗
木 精 复 染
返 蓝
脱透封 水明片
3m*3 1′
1’ 10‘
SP法具体实验步骤
苏木精复染后续
1. 苏木精复染1min,返蓝10min 2. 脱水，透明，封片
B、IP3R3——表达于胞浆
SP法结果: 可检测同一物质在不同组织中的表达情况。
A. p53在消化道腺癌中的表达
B. p53在正常癌旁组织中的表达
AEC显色方法
1． 本产品总量为 10 次（10 毫升/次）或 1000 次（100 微升/次）操作 2． 可用于 1000 cm2 免疫印迹膜片：建议 5 毫升用于 1 张 5 X 8 cm2 膜片 3． 可用于 1000 片 1 cm X 1 cm 大小的组织切片 4． 用户可以根据需求，调整试剂用量 5． 操作时，须戴手套 6． 染色时间根据情况调整，不能过长，以免造成过度显色 7． 如果封闭欠佳，易造成背景颜色过深 8． GENMED 染色液（Reagent A）避免在－20℃冰箱里保存 9． GENMED 染色工作液不宜超过 4 至 6 小时；如果发现沉淀，不宜使用 10．固相膜染色后数小时将会褪色，不能永久存在 11．本产品只能用于辣根过氧化酶（HRP）标记的杂交和沉淀反应 12．染色后可用苏木素复染，增强对照；建议使用 GENMED 苏木素复染试剂盒－GMS80050 13．染色后不能使用乙醇等有机溶剂清理 14．本公司提供系列组化染色试剂
实验步骤
一、 免疫印迹染色
实验开始前，分别移出
毫升 GENMED 染色液（Reagent A）和 GENMED 反应液（Reagent B）到
15 毫升锥形离心管，混匀后标记为 GENMED 染色工作液，避免光照。然后进行下列操作。
1
1． 准备好含有待测蛋白的固相膜（5 X 8 cm2）：包括电泳、转印、封阻、一抗（或生物素）处理、辣根
名称 蛋白质西方杂交免疫印迹 ECL 化学发光检测试剂盒
蛋白质西方杂交免疫印迹 DAB 显色检测试剂盒 蛋白质西方杂交免疫印迹消除试剂盒 化学发光免疫印迹消除试剂盒
琼脂糖凝胶法蛋白质西方杂交免疫印迹 ECL 化学发光检测试剂盒
琼脂糖凝胶法蛋白质西方杂交免疫印迹 DAB 显色检测试剂盒
临床免疫学：第十三章 生物素-链霉亲和素标记免疫技术
4
生物素标记蛋白质的特点
生物素需活化后才能通过侧链与蛋白质 分子连接；
多价性-一个蛋白质分子可以被多个生物 素标记(放大效应)；
抗原、抗体标记后需保持活性不变； 多用BNHS标记抗体和中性或偏碱性的蛋 白质，BHZ标记偏酸性蛋白（抗原）
2、与其他标记物（如酶、荧光素、胶体金）结合制成 新的标记物。
10
3、生物素标记抗体（IgG）的制备 基本原理 生物素N-羟基丁二酰亚胺酯（BNHS）分子酯键中的-
C=O基团可与蛋白质分子中的氨基在碱性条件下形成肽 键，从而使其标记上生物素。
11
4、实验流程
1、用二甲基甲酰胺（DMF）将BNHS配成1mg/ml溶 液；
但与聚苯乙烯的非特异性吸附较高。
6
亲和素活性单位 以亲和素结合生物素的
量来表示； 结合1μg生物素所需要
的亲合素量为1个亲合素 活性单位。一般1mg亲合 素约含13～15个活性单 位。
7
链霉亲合素（streptavidin,SA） 与亲合素(A)有类似生物学特性的一种蛋白质。
由Streptomyces avidinii菌分泌的一种蛋白 质，SA分子量为65000，由4条序列相同的肽链 构成，每条SA肽链可以结合1个生物素分子。 SA与A的ka虽然相同，但在实际应用中其检测 灵敏度明显优于A。
12
二、亲和素标记物的制备 1、几乎所有用于标记的物质均可与亲
和素结合，小分子如I125、胶体金、荧 光素；大分子如蛋白酶、抗原/体、荧 光蛋白等 直接标记法：A+E 改良过碘酸钠法、戊二醛法
间接标记法：A+B+E
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过氧化物酶标记链霉亲和素使用说明
HRP-Streptavidin
货号：SE068
规格：0.1ml/1ml
保存：-20℃保存至少一年，避免反复冻融。
2-8℃可保存1个月。
产品说明：
链霉亲和素(streptavidin)是与亲和素(avidin)有相似生物学特性的一种蛋白质，是streptomycesavidinii菌的分泌物，其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似，等电点 6.0，非特异性结合远比亲和素低。
链霉亲和素是四聚体蛋白，大小为66KDa。
一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合，两者之间的亲和力极为强烈，链霉亲和素-生物素复合物的解离常数处于10mol/L数量级，这一性质常用于分子生物学用途。
其中一条完整的SA肽链中有159个氨基酸残基，分子量为16450。
HRP标记链霉亲和素是采用进口链霉亲和素和高活性过氧化物酶HRP制成复合物，可以用于生物素(Biotin)标记的抗体、蛋白或其它生物素标记分子的检测。
具体用途包括Western、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学等。
保存体系：0.01M PBS(pH7.4)﹑1%BSA﹑0.03%Proclin300﹑50%甘油。
浓度：链霉亲和素浓度为1mg/ml。
工作效价：
ELISA法：1：500～5000
组织化学：1：50～500
免疫印迹：1：500～5000。
具体效价以产品标签为准，最佳使用条件需根据实际情况而定。
相关试剂：
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SE237兔抗猪IgG-HRP
A1800抗体稀释液。