第四章免疫学检测技术PPT课件

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2.比例性
➢ 结合价： 天然抗原分子表面一般含多种抗原决定基，可与 多个抗体分子结合，为多价。单体形式的抗体分 子有两个Fab段，能结合两个相同的抗原决定基， 为两价。
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➢ 比例合适：
若抗原、抗体的数量比例合适，抗体分子的两个Fab段分 别与两个抗原决定基结合，相互交叉连接成网格状复合体， 则反应体系中基本不存在游离的抗原或抗体，此时形成肉 眼可见的反应物（沉淀物或凝集物）。 因此，确定反应体系中抗原、抗体的最适比例十分重要。 前带现象（prozone）和后带现象(postzone)
用于沉淀反应中的抗原称沉淀原(precipitonogen)。 用于沉淀反应中的抗体称沉淀素（precipitin) 。
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❖ 大多沉淀反应多用半固体琼脂凝胶作为介质 进行琼脂扩散或免疫扩散，即可溶性抗原与 抗体在凝胶中扩散，在比例合适处相遇即形 成可见的白色沉淀。
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沉淀反应
1．单向免疫扩散(single immunodiffusion) 2．双向免疫扩散(double immunodiffusion)
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2.酸碱度 抗原抗体反应的最适pH是6-8。
3.温度 最适温度为37℃。有些例外，如冷凝集素在 4℃左右与红细胞结合最好，20℃以上反而 解离。
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4.抗原和抗体的性质
抗体的特异性和亲和力是决定抗原-抗体反 应的关键因素。
此外，抗原理化性质、抗原决定基多寡和种 类等均可影响抗原-抗体反应。
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亲和力(affinity)
抗体分子上一个抗 原结合点与对应的 抗原决定基之间的 结合能力
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（三）、免疫学检验方法
根据抗原的性质、结合反应的现象、参与反 应的成分等因素分类：
1.凝集反应 2.沉淀反应 3.补体参加的反应 4.免疫标记技术
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反应类型
实验技术
非 凝集反应 标 记 沉淀反应
❖ Ab过剩和Ag过剩
抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现象，
与两者的浓度和比例密切相关
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前带现象（prozone）和后带现象(postzone)
Ab过剩和Ag过剩
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抗体过剩
抗体Biblioteka Baidu体比例合适
抗原过剩
网格学说（lattice- theory）
抗原
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抗体
3.可逆性
抗原-抗体反应为分子表面的非共价结合，结合 虽稳定但可逆。在一定条件下（如低pH、高浓 度盐、冻融等），抗原-抗体复合物可被解离。解 离后的抗原和抗体仍保持原有理化特性和生物学 活性。
根据此特点，可借助亲和层析法纯化抗原或抗 体。
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4.阶段性
抗原抗体反应可分为两个阶段
特异性结合阶段：反应快，不可见。
可见的反应阶段：反应慢，出现凝集、沉淀和细
胞溶解等现象。
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（二）、抗原-抗体反应的影响因素
1.电解质 抗原和抗体有对应的极性基团，能相互吸附并
由亲水性变为疏水性。电解质的存在使抗原-抗 体复合物失去电荷而凝聚，出现可见反应，故 免疫学试验中多用生理盐水稀释抗原或抗体。
直接凝集试验、间接凝集试验、间接 抑制凝集试验、协同凝集试验
液相内凝集试验、凝胶内凝集试验
补体参与的反应 补体溶血试验、补体结合试验
中和反应
病毒中和试验、毒素中和试验
标 标记免疫反应 记
荧光免疫技术 放射免疫技术
酶免疫技术
发光免疫技术
金免疫技术
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凝集反应（Agglutination Tests）
颗粒性抗原（细菌或细胞等）与相应抗体结合，在 一定条件下，出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反 应(agglutination) 。
用于凝集反应中的抗原称凝集原(agglutinogen)。 用于凝集反应中的抗体称凝集素（agglutinin)。
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1．直接凝集（direct agglutination) ： 细菌或红细胞与相应抗体直接反应，可出现细菌或红 细胞凝集现象。
2．间接凝集（indirect or passive agglutination) ： 检测针 对可溶性Ag的Ab
3．间接凝集抑制试验 (direct agglutination inhibition test) 4. 协同凝集试验（co-agglutination test）
载体为金葡菌，其细胞壁蛋白A与IgG 的Fc结合，用 于细菌、病毒的快速检测。
沉淀环
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双向免疫扩散 （Double Immunodiffusion)
❖ 是将抗原与抗体分别加入 琼脂凝胶的小孔中，二者 自由向周围扩散并相遇， 在比例合适处形成沉淀线。 如果反应体系中含两种以 上的抗原抗体系统，则小 孔间可出现两条以上的沉 淀线。本法常用于抗原或 抗体的定性 、组成和两种 抗原相关性分析的检测。
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妊娠免疫诊断试验
HCG检测为间接凝集试验的应用 ❖ 孕妇尿中，绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增
高。（HCG是可溶性抗原 ） ❖ 反之，非孕妇尿中HCG含量甚微，不足以消耗掉抗
HCG抗体。
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沉淀反应（Precipitation Tests）
Definition:可溶性抗原（血清蛋白、外毒素、细 菌滤液等）与相应抗体结合，在一定条件下，形 成出现肉眼可见的沉淀物的现象称为沉淀反应。
免疫学检测技术
中卫市第一人民医院 魏玉红
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一、免疫学检验原理
➢ 抗原-抗体反应：指抗原与相应抗体在体内、外发生
高度特异性结合反应。由于实验所用的抗体存在于
血清中，故又称血清学反应（serological
reaction)
➢ 应用：
• 用已知抗原检测未知抗体；
• 用已知抗体检测未知抗原：
• 定性或定量检测体内各种分子；
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单向免疫扩散 (Single Immunodiffusion)
含抗体的凝胶
❖ 是将一定量已知抗体混于琼 脂凝胶中制琼脂板，在适当 位置打孔后将抗原加入孔中 扩散。抗原在扩散过程中与 凝胶中的抗体相遇，形成以 抗原孔为中心的沉淀环，环 的直径与抗原含量成正比相 关。本法常用于测定血清 IgG、IgM、IgA 和 C 3等 的含量。
• 用已知抗体检测半抗原物质- 。
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（一）抗原-抗体反应的特点
1.特异性和交叉反应
➢ 特异性：一种抗原通常仅能与 由它刺激所产生的抗体结合。
➢分子基础：抗原表位与抗体分 子高变区之间空间构型的互补性 。
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➢ 交叉反应（cross reaction）性：若两种抗原 分子有一个或数个相同（或相似）的决定基， 则针对一种抗原的抗血清可与另一种抗原发生 反应。