Western blot 转膜及膜的选择
20kd 转膜条件
20KD 转膜条件转膜（Western blotting）是一种用于检测特定蛋白质在凝胶电泳后是否存在于样品中的技术。
"20kD"指的是分子量约为20千道尔顿（kDa）的目标蛋白。
转膜条件需要根据实验的具体需求和所使用的膜材料来调整，以下是一些通用的转膜条件：1. 转膜时间：通常情况下，转膜时间取决于蛋白的大小和转移效率。
对于小分子量的蛋白（如20kD），转膜时间可能需要较短，比如1小时左右，以避免过度转膜导致大分子蛋白的丢失。
2. 转移电压：电压的选择通常基于实验的规模（如小规模或大型凝胶）和转膜系统。
对于小规模凝胶，常用的电压是80-100V；而对于大型凝胶，可能需要更高的电压，例如200-300V，以缩短转膜时间。
3. 转移缓冲液：最常用的转移缓冲液是含有甲醇的Tris-甘氨酸缓冲液（TGB），甲醇有助于紧密结合蛋白和膜，并提高转膜效率。
缓冲液的pH值通常为8.3。
4. 转膜膜材料：对于小分子量的蛋白质，通常推荐使用聚偏氟乙烯（PVDF）膜，因为它具有较高的亲蛋白性和较强的结合能力。
5. 转膜系统：根据实验室的设备和资源，可以使用湿式转膜系统或半干式转膜系统。
湿式转膜系统通常提供更均匀的转移效果，适合于对转膜质量要求较高的实验。
6. 转膜后处理：转膜完成后，需要使用封闭液（如5%脱脂牛奶或BSA）封闭膜上未被蛋白质占据的部位，以减少非特异性结合。
7. 检测方法：根据目标蛋白的性质选择合适的检测方法，如化学发光、荧光或酶标记等。
需要注意的是，上述条件仅供参考，实际操作中应根据实验目的和所用材料的具体特性进行优化。
例如，某些情况下可能需要在较低的电压下延长转膜时间，或者在转移缓冲液中加入SDS以提高小分子蛋白的转移效率。
此外，转膜效率也受到样品量、凝胶浓度、膜的孔径大小等因素的影响。
因此，建议进行预实验以确定最佳的转膜条件。
维真生物-WesternBlot实验方法及注意事项
WesternBlot实验方法及注意事项实验原理：WesternBlot印迹方法，又称为免疫印记，是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，对不同分子量的蛋白质进行分离，并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物（NC膜或PVDF膜）上，用抗靶蛋白的非标记抗体（一抗）与转印后膜上的靶蛋白进行特异性结合，再与经辣根过氧化物酶标记（偶联）的二抗结合，最后用ECL超敏发光液试剂检测。
如果转印膜上含有靶蛋白，经X光片曝光、显影后，则会在X-光片上出现特异性蛋白条带。
实验材料：分离胶及积层胶溶液、水饱和异丁醇、1×Tris・Cl/SDS,pH8.8 、蛋白质分子量标准混合物、1×SDS电泳缓冲液、电泳装置及夹子、玻璃板、灌胶支架、缓冲液槽等附件、0.75mm封边垫片、0.75mm样品梳子、50μl微量加样器、恒流电源常用试剂：1）30%丙烯酰胺/0.8% N,N’-亚甲丙烯酰胺将30克丙烯酰胺和0.8克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml 水中，加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。
0.45μm微孔滤膜过滤除菌，查证该溶液pH应不大于7.0，置棕色瓶中保存。
小心：丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。
称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。
可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。
2）4×Tris・Cl/SDS,pH8.8,在300mlH2O中溶解91g Tris碱(1.5mol/L)，用1mol/L调节pH 至8.8,补加H2O至体积500ml。
用0.45μm滤膜过滤溶液，再加入2g SDS[0.4%(w/v)]，于4℃可保存1月。
3）4×Tris・Cl/SDS,pH6.8,在40mlH2O中溶解6.05g Tris碱(0.5mol/L)，用1mol/L调节pH 至6.8,补加H2O至体积100ml。
western blot转膜
7.1.6 DNA 分子杂交中靶DNA 的转移转移又称吸印，是指杂交前将被测核酸吸印于膜上（见图7-1）。
DNA 吸印与Southern 杂交的研究早在70年代就已开始，当时使用的只是单一的硝酸纤维素膜，以后又陆续使用过各种经化学修饰的滤纸，发展至今已广泛使用尼龙膜、修饰尼龙膜与PVDF 膜等。
吸印的方法也从单一的毛细管转移发展到真空转移与电转移，下面介绍用于吸印的各种膜和转移方法。
7.1.6.1 杂交膜类型（1）硝酸纤维素膜（NC 膜）硝酸纤维素膜是最早用于杂交吸印的膜，即使在今天也是除尼龙膜外使用最多的一种，特别是在非放射性物质的标记杂交中，由于本底低、价格便宜而为人们选用。
这种膜能与dsDNA ，RNA 和蛋白质结合，结合容量为80 μg/cm 2～100 μg/cm 2。
可惜结合原理至今未明，只是肯定了属于非共价结合。
由于非共价结合力较弱，吸印不够牢固，经不起反复洗涤，所以这种膜不适于多探针杂交。
此膜的另一特点是吸印要在高盐条件（10×SSC ）下才能进行，且对于小于200bp 的DNA 吸附能力下降。
吸印后的膜可置于80℃下烘烤2小时，使DNA 固定于膜上。
NC 膜易碎，变性后未彻底中和的膜在烘烤后更易变黄、变脆，极易损坏，所以变性后要注意使膜得到充分的中和。
NC 膜操作时稍有不慎就会产生折痕，特别是用于非放射性标记显色时可能产生深色的背景，如折痕恰在电泳条带处就会影响杂交结果的分析。
（2）叠氮氧苄甲基纤维素纸（DBM 纸）、重氮苯硫醚纤维素纸（DPT 纸）和氨基苯硫醚纤维素纸（APT 纸）这三种膜是能与核酸、蛋白质产生共价作用的滤纸，能吸印NC 膜不适用的小片段DNA ，且能用于多个探针的杂交；但由于滤纸本身质地疏松，难于耐受反复洗涤，所以对于进行高特异性检测的多探针杂交仍有一定的困难。
这种纸的制备过程复杂，且对pH 、温度等的变化敏感，在尼龙膜出现后已很少有人问津了。
（3）二乙氨基乙基纤维素纸（DEAE 纸）这是一种利用静电引力非共价结合双链DNA 、RNA 的滤纸。
操作篇：westernblot之转膜
操作篇：westernblot之转膜转膜篇1. 转一张膜需准备 6 张 7.0～8.3 cm 的滤纸和 1 张 7.3～8.6 cm 的硝酸纤维素膜。
切滤纸和膜时一定要戴手套，因为手上的蛋白会污染膜。
将切好的硝酸纤维素膜置于水上浸 2 h 才可使用。
要领：（1）用镊子捏住膜的一边轻轻置于有超纯水的平皿里，要使膜浮于水上，只有下层才与水接触。
这样由于毛细管作用可使整个膜浸湿。
若膜沉入水里，膜与水之间形成一层空气膜，这样会阻止膜吸水；（2）个人感觉其实转膜之前浸湿一下就ok 了，没有多大问题，可能按照上述操作结果会更好。
2. 在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支玻棒、滤纸和浸过的膜。
3. 将夹子打开使黑的一面保持水平。
在上面垫一张海绵垫，用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡。
在垫子上垫三层滤纸，一手固定滤纸一手用玻棒擀去其中的气泡。
要领：（1）「用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡」，要领：一手擀另一手要压住垫子使其不能随便移动。
（2）「在上面垫一张海绵垫」要领：可三张纸先叠在一起在垫于垫子上。
个人感觉就垫 1 张滤纸也没问题。
4. 要先将玻璃板撬掉才可剥胶，撬的时候动作要轻，要在两个边上轻轻的反复撬。
撬一会儿玻璃板便开始松动，直到撬去玻板。
除去小玻璃板后，将浓缩胶轻轻刮去（浓缩胶影响操作），要避免把分离胶刮破。
小心剥下分离胶盖于滤纸上，用手调整使其与滤纸对齐，轻轻用玻棒擀去气泡。
将膜盖于胶上，要盖满整个胶（膜盖下后不可再移动）并除气泡。
在膜上盖3 张滤纸并除去气泡。
最后盖上另一个海绵垫，擀几下就可合起夹子。
整个操作在转移液中进行，要不断的擀去气泡。
膜两边的滤纸不能相互接触，接触后会发生短路。
要领：（1）「要在两个边上轻轻的反复撬」要领：应该边撬边用流水缓缓冲洗（2）「直到撬去玻板」要领：撬时一定要小心，胶很易裂，要用巧劲（3）转移液含甲醇，操作时要戴手套，实验室要开门以使空气流通。
（4）最后做成的「三明治」千万不能形成短路，不然有可能会短路烧坏转膜装置（价格不菲，尤其是进口的），第一次做的应请老手指教。
westernblot法
Western blot，也称为蛋白质印迹或免疫印迹，是一种常用的生物化学技术，用于分析样品中特定蛋白质的存在、细胞中特异蛋白质的半定量分析以及蛋白质分子的相互作用研究等。
下面是Western blot的基本步骤和注意事项：一、实验步骤蛋白样品制备：从细胞或组织中提取蛋白质样品，常用的方法有细胞裂解、组织匀浆等。
蛋白定量：使用BCA蛋白浓度测定法等对蛋白质样品进行定量，以便后续的Western blot分析。
凝胶电泳：将蛋白质样品在聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离，根据蛋白质的大小和电荷进行分离。
转膜：将电泳分离后的蛋白质样品转移到硝酸纤维素膜上，以便进行后续的免疫检测。
免疫检测：使用特异性抗体对转移后的蛋白质样品进行免疫检测，抗体与目标蛋白质结合后，通过显色反应呈现阳性结果。
数据分析：对免疫检测结果进行定量和定性分析，如条带大小、灰度值等。
二、注意事项实验前要充分了解实验原理和操作流程，确保实验的正确性和可行性。
蛋白样品制备过程中要保证细胞或组织充分裂解和匀浆，以获得更纯的蛋白质样品。
在进行Western blot分析前，要对蛋白质样品进行定量，以保证实验结果的准确性。
在转膜过程中，要选择合适的转移缓冲液和转移时间，以保证蛋白质样品的完整转移。
在免疫检测过程中，要选择合适的抗体和显色试剂，以保证免疫检测结果的特异性。
在数据分析过程中，要选择合适的分析方法和软件，以保证数据分析的准确性和可靠性。
总之，Western blot是一种常用的生物化学技术，在蛋白质分析领域具有广泛的应用价值。
在进行Western blot实验时，要严格遵守实验步骤和注意事项，以保证实验结果的准确性和可靠性。
Western blot中膜的选择及其特点
Western blot中膜的选择及其特点PVDF市场上出售的一般有俩种：0.45μm孔径和0.2μm孔径，作用原理是疏水作用导致其强的蛋白质吸附性，一般来说均一的0.45μm孔径特别适合于>20kD的蛋白质转印，0.2μm孔径适合<20kD 的蛋白质转印。
0.2μm孔径的PVDF膜吸附量会比较大，从而会导致背景很高！解决办法：用封闭液的时候加倍，时间加倍！不行就三倍！可以降低背景！解释：封闭:1、原先我们用脱脂奶粉封闭的浓度是0.5%,为了减低背景,需要把封闭液的浓度加倍到1%,如果效果还是不好可以加倍到1.5%.2、时间也要加倍，比如说，原先一小时，现在用两个小时。
为什么用0.2um的膜背景会很高,是因为蛋白的结合和膜的表面积有关,0.2um 的膜显然要比0.45 um的膜的内表面积大.所以我们在封闭的时候要加大封闭的量和时间,要尽量完全封闭.NC膜PVDF膜尼龙膜的特点解答：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型;硝酸纤维素膜(NC膜)是目前应用最广的一种固相支持物，价格最便宜;PVDF膜介于二者之间。
就结合能力而言：尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480-600μg/cm2，可结合短至10bp的核酸片段;硝酸纤维素膜(NC 膜)结合DNA和RNA能力可达80-100μg/cm2，对于200bp的核酸片段结合能力不强;PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125-300μg/cm2。
就温度适应性而言：尼龙膜经烘烤或紫外线照射后，核酸中的部分嘧啶碱基可与膜上的正电荷结合;硝酸纤维素膜(NC膜)依靠疏水性相互作用结合DNA，结合不牢固;PVDF膜结合牢固，耐高温，特别适合于蛋白印迹。
就韧性而言：尼龙膜较强;硝酸纤维素膜较脆，易破碎;PVDF膜较强。
就重复性而言：尼龙膜可反复用于分子杂交，杂交后，探针分子可经碱变性被洗脱下来;硝酸纤维素膜(NC膜)不能重复使用;PVDF膜可以重复使用。
wb小分子蛋白半干转条件 -回复
wb小分子蛋白半干转条件-回复WB小分子蛋白半干转条件小分子蛋白半干转（Western Blot Semi-Dry Transfer）是一种常用的蛋白转印技术，用于将蛋白质从制备好的凝胶转移到膜上，以便进一步进行免疫印迹分析。
WB半干转法具有时间短、样品消耗少、结果可靠等优点，逐渐成为了实验室中最被推崇的蛋白转印方式之一。
本文将为您一步一步回答关于WB小分子蛋白半干转条件的问题。
第一步：准备工作在开始实验之前，您需要准备以下实验材料以及仪器设备：1. 蛋白凝胶：可以是SDS-PAGE凝胶、Native凝胶或者IEF凝胶等。
2. 转膜设备：一般使用膜构（membrane sandwich）装置。
3. 蛋白质转膜膜：可以选择PVDF膜或者NC膜等，根据需要选择合适的膜材。
4. 电源：选择合适电源以供电转印。
5. 混合溶液：制备半干转膜缓冲液。
第二步：制备半干转膜缓冲液半干转膜缓冲液一般由粗转膜缓冲液（Cathode Buffer）和精转膜缓冲液（Anode Buffer）混合而成。
其中，粗转膜缓冲液可视实验室条件选择具体配方，一般包括Tris-HCl缓冲液、甘油（glycerol）和SDS等成分；精转膜缓冲液包括甘油、Tris-HCl缓冲液以及SDS等。
具体的条件可以从文献中找到或者咨询相关实验室的技术人员。
第三步：装置装配1. 在半干转膜装置上安装内外层的导电网（wick）和滤纸等辅助物质。
内层wick（即离孔层）可以是滤纸或者海绵，而外层wick一般是滤纸。
2. 将内外层wick放置在半干转膜装置的相应位置上。
确保内外层wick与电极完全贴合，且相对平整。
3. 在内层wick上还可以放置一块滤纸，以增加液体的吸收能力。
第四步：蛋白转膜条件确定好实验条件后，即可进行蛋白转膜：1. 首先，在浸泡一段时间的转膜膜上进行标记，将蛋白凝胶与转膜膜定位对齐。
2. 将架于内阴极涂抹有粗转膜缓冲液的内层wick上，确保内外层wick贴合时形成一个平滑的表面。
western blot检测蛋白质的表达实验的结论和注意事项
western blot检测蛋白质的表达实验的结论和注意事项Western blot（免疫印迹）是一种常用的实验技术，用于检测蛋白质的表达水平和鉴定特定的蛋白质。
下面将分别介绍Western blot的实验结论和注意事项。
实验结论：通过Western blot实验可以得出以下结论：1. 确定蛋白质的表达水平：Western blot可以定量检测特定蛋白质在样本中的表达水平，比如癌细胞中的肿瘤抑制因子的表达水平是否下调，通过和对照组的比较可以得出结论。
2. 确定蛋白质的鉴定：Western blot可以用于鉴定特定蛋白质的存在与否，通过与已知目标蛋白的分子量进行比较，可以确定其身份。
3. 确定蛋白质的修饰状态：一些蛋白质在翻译后会发生修饰，如磷酸化、糖基化等，这些修饰状态可能会影响蛋白质的功能。
通过Western blot可以检测修饰状态，并进一步探究其功能。
注意事项：在进行Western blot实验时，有一些注意事项需要遵守，以保证实验的准确性和可靠性：1. 样品制备：样品的制备至关重要，要确保样品蛋白质的完整性和稳定性。
使用磷酸化酶抑制剂、蛋白酶抑制剂等，避免蛋白质在制备过程中被降解。
2. 蛋白质的分离：Western blot一般需要将蛋白质进行SDS-PAGE电泳，要注意合理选择电泳条件和胶液浓度，以达到最佳的蛋白质分离效果。
同时还需要确保样品装载均匀，可与内参蛋白进行标准化。
3. 转膜条件：Western blot的关键步骤是将分离的蛋白质迁移到聚丙烯酰胺薄膜。
转膜条件包括电流、时间和转膜缓冲液的配方，需要根据蛋白质的大小和性质进行优化，以确保迁移的效率和完整性。
4. 主抗体选择：选择适当的主抗体对目标蛋白进行检测，主抗体的产地、克隆型和浓度都会影响实验结果。
需要进行充分的文献调研和优化，以保证实验的准确性和特异性。
5. 二级抗体选择：Western blot实验中一般需要使用带有酶标记物（如HRP）的二级抗体来检测主抗体与蛋白质结合情况。
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式（原创实用版）目录1.WB 转膜的定义和目的2.WB 转膜的常用方法3.WB 转膜的条件公式4.WB 转膜的注意事项5.总结正文一、WB 转膜的定义和目的WB（Western Blot）转膜，又称为免疫印迹转膜，是一种将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）转移到固相支持物上的技术。
其主要目的是为了将电泳分离得到的蛋白质样品，转移到固相载体上，以便于进行后续的免疫学检测和分析。
二、WB 转膜的常用方法WB 转膜常用的方法有以下几种：1.湿式转膜：湿式转膜是最常用的 WB 转膜方法，其主要原理是利用电场和分子渗透作用，将蛋白质从凝胶中转移到固相载体上。
2.干式转膜：干式转膜则是通过暴露于干燥的气氛中，使得凝胶中的蛋白质与固相载体上的抗体结合，然后再进行洗涤和检测。
3.半干式转膜：半干式转膜则是湿式转膜和干式转膜的结合，一部分采用湿式转膜，一部分采用干式转膜。
三、WB 转膜的条件公式在进行 WB 转膜时，需要控制的条件包括：1.转膜缓冲液：转膜缓冲液的 pH 值、离子强度和蛋白酶抑制剂的浓度等，都会影响到蛋白质的转膜效果。
2.转膜时间：转膜时间过长或过短，都会影响到蛋白质的转膜效果。
3.转膜温度：转膜温度一般控制在 12-18℃，温度过高或过低都会影响到蛋白质的转膜效果。
4.固相载体：固相载体的选择和处理，也会影响到蛋白质的转膜效果。
四、WB 转膜的注意事项在进行 WB 转膜时，需要注意以下几点：1.保持实验操作的无菌性，以防止细菌污染。
2.选择合适的转膜时间和温度，避免过度转膜或转膜不足。
3.选择合适的固相载体，并正确处理和封闭。
4.使用高质量的转膜缓冲液，避免缓冲液中蛋白酶的干扰。
五、总结WB 转膜是蛋白质研究中常用的技术，其操作需要注意控制转膜缓冲液、转膜时间、转膜温度和固相载体等条件。
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式
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目录
1.WB 转膜的概述
2.WB 转膜的公式
3.WB 转膜的步骤
4.WB 转膜的注意事项
正文
一、WB 转膜的概述
WB（Western Blot）转膜是一种将电泳分离后的蛋白质转移至膜上的技术，以便进行进一步的检测和分析。
WB 转膜是蛋白质研究中常用的技术手段，可以帮助研究者了解蛋白质的表达情况、翻译后修饰等信息。
二、WB 转膜的公式
WB 转膜的公式通常表示为：
转膜效率 = (膜上蛋白质量 / 电泳分离蛋白质量) × 100%
三、WB 转膜的步骤
1.制备电泳分离样品：首先需要制备蛋白质样品，并通过电泳技术将蛋白质分离。
2.准备转膜膜：选择合适的转膜膜，并裁剪成适当大小。
3.转膜：将电泳分离后的蛋白质样品与转膜膜一起放入转膜液中，进行转膜处理。
4.固定：转膜完成后，将膜放入固定液中，进行固定处理。
5.检测：固定完成后，选择合适的检测方法进行检测，如酶联免疫吸
附试验（ELISA）等。
四、WB 转膜的注意事项
1.转膜过程中要保持恒温，避免温度对转膜效率产生影响。
2.选择合适的转膜液，根据实验目的和样品特点进行调整。
3.固定处理要充分，以保证后续检测的准确性。
4.检测方法要根据实验目的和样品特点进行选择，确保检测结果的准确性。
wb转膜原理
WB转膜原理一、什么是WB转膜在分子生物学研究中，Western blotting（WB）是一种常用的蛋白质检测方法。
它通过将蛋白质分离、转移到膜上并用特异性抗体进行检测，能够准确地检测目标蛋白质的存在和表达水平。
WB转膜是WB技术中的一个重要步骤，它将已经分离得到的蛋白质转移到固体支持物上，常用的支持物包括聚丙烯酰胺凝胶、聚乙烯二醇脲醛膜等。
WB转膜的目的是为了将蛋白质从凝胶中转移到膜上，以便后续的抗体检测。
二、WB转膜的原理WB转膜的原理是利用电场作用将蛋白质从凝胶中转移到膜上。
在转膜过程中，电场会使得蛋白质向阳极（阳极移动），因此要将膜放置在阳极一侧，凝胶放置在阴极一侧。
具体的WB转膜原理可以分为以下几个步骤：1. 准备工作首先，需要将蛋白质样品经过SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）进行分离，得到蛋白质的条带。
2. 选择合适的膜和缓冲液根据蛋白质的大小和特性，选择合适的膜和缓冲液。
常用的膜有聚乙烯二醇脲醛膜、聚偏氟乙烯膜等，常用的缓冲液有传输缓冲液（Tris-glycine buffer）等。
3. 建立电场将薄膜强制充湿于转印缓冲液中，然后将其与蛋白质凝胶层叠加在一起。
在薄膜上放置一个合适大小的吸水纸，再将层叠的凝胶和薄膜叠放在一个转印装置中，加上电源连接转印装置。
4. 转膜过程打开电源，通电进行转膜。
在转膜过程中，蛋白质会受到电场的作用，向阳极（薄膜）方向移动，逐渐从凝胶中转移到薄膜上。
5. 后续处理转膜完成后，将薄膜取出，可进行一些后续处理，如用Ponceau S染色检测转膜效果、去除Ponceau S染料、进行蛋白质的染色检测等。
三、注意事项和常见问题在进行WB转膜时，需要注意以下几点：1. 转膜条件的选择转膜条件包括转膜时间、电压和电流等。
不同的蛋白质样品可能需要不同的转膜条件，因此需要进行优化。
一般来说，转膜时间较长，电压较低，可以得到较好的转膜效果。
2. 防止蛋白质传输不完全蛋白质转移到薄膜上的效率可能受到多种因素的影响，如蛋白质的大小、电场的强度和转膜时间等。
【技术专题】WesternBlot实验操作及选购指南-3
【技术专题】WesternBlot实验操作及选购指南-3
“
转膜
”
转膜是将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶转移到膜上的过程。
转膜的方法可分为半干转和湿转，湿转法转膜效率较高，使用转膜液多，转膜时需要冷却，半干转转膜时间短，需要的转膜液少，不适合转移高分子量蛋白质。
印记膜可以选择PVDF膜和NC膜。
PVDF膜与目的蛋白结合能力较高，灵敏度高，不易破碎，可适用于再次标记（使用前需要浸泡在甲醇中激活）。
NC膜不需要甲醇激活但易破碎。
膜的规格有0.45 μm 和0.2 μm两个规格，大于20 kD的蛋白可用0.45 μm的膜，小于20 kD的蛋白要用0.2 μm的膜。
生工相关产品——印记膜
PVDF膜湿转步骤
1.准备好转膜液，将胶浸于转膜缓冲液10 min左右。
2.根据胶的大小剪PVDF膜（使用前需要用甲醇处理）和滤纸，放到转膜缓冲液中平衡10 min左右。
3.装配转膜，在海绵上放置3层已经用转膜液浸泡过的滤纸，放置胶，放置处理好的PVDF膜，放置3层已经用转膜液浸泡过的滤纸，放置海绵，注意每层之间都不能有气泡，用转膜仪中的支架夹住。
（胶位于负极）
4.将转膜“三明治”放置到转膜槽中，加转膜缓冲液，将转移槽置于冰浴中。
插上电极，根据蛋白分子量确认转膜的电压/电流，时间。
5.转膜结束后，切断电源，取出PVDF膜。
转膜后可能分不清膜的方向，可在膜上剪角，有利于判断膜的方向。
生工相关产品——转膜缓冲液。
小分子 蛋白wb注意事项
小分子蛋白wb注意事项以小分子蛋白WB注意事项为标题，我们来讨论一下在进行小分子蛋白Western Blot（简称WB）实验时需要注意的事项。
一、实验前的准备工作在进行小分子蛋白WB实验之前，我们需要做一些准备工作，以确保实验的顺利进行。
首先，我们需要准备好实验所需的试剂和仪器设备。
这包括蛋白提取液、蛋白浓度检测试剂盒、凝胶电泳设备、转移膜等。
同时，我们还需要准备好实验所需的动物组织样本或细胞培养物。
二、蛋白提取与浓度检测在进行小分子蛋白WB实验之前，我们需要从组织样本或细胞中提取蛋白。
蛋白提取的方法有多种，如RIPA缓冲液法、细胞裂解液法等。
提取蛋白后，我们需要使用蛋白浓度检测试剂盒来确定蛋白的浓度，以便后续的凝胶电泳和转膜步骤。
三、凝胶电泳凝胶电泳是分离蛋白的常用方法，可以根据蛋白的大小和电荷来进行分离。
在进行凝胶电泳时，我们需要根据实验的需要选择合适的凝胶类型和浓度。
同时，我们还需要准备好电泳缓冲液，并根据实验的需求进行电泳条件的设置。
四、转膜转膜是将凝胶中分离的蛋白转移到转移膜上的过程。
在进行转膜之前，我们需要准备好转膜装置，并将其装配好。
在进行转膜时，我们需要注意转膜膜的选择，如聚丙烯酰胺膜（PVDF）或硝酸纤维素膜（NC）。
转膜的条件也需要根据实验的需求进行设置。
五、免疫检测在进行小分子蛋白WB实验时，我们通常会使用特异性抗体来检测目标蛋白。
在进行免疫检测之前，我们需要对抗体进行充分的验证，确保其具有良好的特异性和敏感性。
在进行免疫检测时，我们需要根据实验的需求进行合适的抗体稀释，并按照标准的免疫检测步骤进行操作。
六、结果分析在完成小分子蛋白WB实验后，我们需要对实验结果进行分析。
这包括对目标蛋白的表达水平进行定量分析，并与对照组进行比较。
同时，我们还可以进行进一步的数据统计和图像处理，以获得更准确的实验结果。
进行小分子蛋白WB实验时需要注意的事项包括实验前的准备工作、蛋白提取与浓度检测、凝胶电泳、转膜、免疫检测以及结果分析。
western转膜
western转膜western blot转移电泳一般操作流程总的来说，半干转、湿转的程序和基本原理是相同的。
胶和膜预稀释并用电转缓冲液平衡；滤纸/胶/膜/滤纸三明治放入电转设备中；正确的方向确保蛋白转移到膜上。
合适的电压/电流条件对于电转的成败是非常重要的。
电转缓冲液和电转条件的选择对于不同的电转设备，当选用不同的胶和缓冲液时，要求不同的电压/电流。
变性凝胶需要增加电转时间，而低分子量的蛋白需要相应的缩短电转时间。
现在实验室常用的Bio-rad 小型Mini Trans-Blot转印槽（湿转）和Trans-Blot半干转印系统转印槽（半干转）相应的电转参数如下表：槽式转印半干转印Mini Trans-Blot槽Trans-Blot半干转印系统转印槽印迹区域（宽x 长）10 x 7.5 厘米24 x 16 厘米转移参数凝胶夹数 2 -缓冲液要求450ml ≤200 ml电极距离4cm 按夹层结构厚度确定转移时间（高强度）60分钟15–60 分钟冷却蓝胶冷却装置/冷却旋管-凝胶容量18.3 x 19.3 厘米- 1 块凝胶（2 块凝胶堆叠）16 x 20 厘米- 1 块凝胶（2块凝胶堆叠）16 x 16 厘米-13.3 x 8.7 厘米- 3 个凝胶并列8.3 x 7.3 厘米每个凝胶夹1块凝胶共2个凝胶夹（两种尺寸）4个凝胶并列8.6 x 6.8 厘米通常我们在做湿转的时候，选择100V恒压（高强度，因为低强度时间较长，且效率较低），电流控制在120-350mA之间，分子量在60KD以下的60分钟即可，分子量在60KD 以上的需要延长转膜时间60-150分钟才能确保高效率的转膜。
所以如果你所需要转印的蛋白分子量差得比较多（如GAPDH 37KD，Ki67 358KD），你可以考虑将胶从中间分开，两部分分别采用不同时间转印，能达到你理想的效果。
电转液一般可以重复使用3次，之后电流会过大，不适合再使用。
Western Blot详解
3、当水和胶之间有一条折射线时（37℃30min），说明胶 已凝了。再等3min使胶充分凝固就可倒去胶上层水并用吸 水纸将水吸干。 4、按前面方法配的浓缩胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。 将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中。灌胶时 也要使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。插梳子时要 使梳子保持水平。由于胶凝固时体积会收缩减小，从而使 加样孔的上样体积减小，所以在浓缩胶凝固的过程中要经 常在两边补胶（不补胶问题也不大）。待到浓缩胶凝固后， 两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。
进一步了解
SDS2.1.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定法 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳， SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，也称为十二烷基 酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium 酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphatesulphate-polyacrylamide gelelectropho resis, SDS-PAGE)。主要用于蛋白质亚基分子 SDS-PAGE)。 量的测定。它具有操作简单，重复性好， 量的测定。它具有操作简单，重复性好，对样 品的纯度要求不高等特点， 品的纯度要求不高等特点，是目前使用较为广 泛的测定蛋白质亚基分子量的一种方法。 泛的测定蛋白质亚基分子量的一种方法。
随着技术的进步稍后的方法是使凝胶扩散 到经过处理的纸条上，通过共价结合将抗 原固定。使其在适当的纸面上呈现分离的 蛋白条带。后来将蛋白以非共价结合的方 式结合于硝酸纤维素滤膜，它不是通过简 单扩散而是以电洗脱方式转移至膜上，再 将化学发光技术应用于抗原检测，极大的 提高了免疫印迹的灵敏度，使其成为最为 广泛的免疫化学方法之一。
western blot 大蛋白转膜条件
Western blot是一种分析蛋白质的实验技术，它通过分析蛋白质在凝胶中的迁移和捕获来检测特定蛋白质的存在和浓度。
在进行Western blot分析时，大蛋白的转膜条件是非常重要的，它直接影响着实验结果的准确性和可重复性。
1. 背景介绍西方博Lot实验作为一种重要的蛋白质分析技术，在生物科学研究中得到了广泛的应用。
Western blot通过分析蛋白质在凝胶中的迁移和捕获来检测特定蛋白质的存在和浓度。
在Western blot实验中，样品首先需要通过SDS-PAGE凝胶电泳进行分离，然后转移到膜上，最后用抗体进行特定蛋白质的检测。
而大蛋白的转膜条件对Western blot 实验的结果起着关键的作用。
2. 大蛋白大蛋白通常指的是相对分子质量较大的蛋白质，其分子量一般在100kDa以上。
这类蛋白质在Western blot实验中转膜时往往会面临一些特殊的挑战，比如易于聚合、迁移速度较慢等问题，因此需要在转膜条件中予以特别考虑。
3. 转膜条件的重要性合适的转膜条件是确保大蛋白转膜效果的关键。
只有在适当的条件下，大蛋白才能迅速而均匀地从凝胶中转移到膜上，避免出现聚合和不均匀转膜等问题，从而保证Western blot结果的准确性。
4. 转膜条件的优化为了得到最佳的转膜效果，实验者需要在转膜条件上进行一系列的优化实验。
具体来说，可以对转膜膜的种类、孔隙大小、电泳缓冲液的成分和pH值、电场强度、转膜时间等因素进行系统的优化。
另外，选择合适的转膜设备和相关试剂也是提高转膜效率的关键。
5. 转膜膜的选择转膜膜是影响大蛋白转膜效果的重要因素之一。
常用的转膜膜有聚偏氟乙烯(PVDF)膜和硝化纤维素(NC)膜。
PVDF膜具有较好的耐性和机械规整性，适用于转膜大蛋白；而NC膜则对一些亲脂性较强的蛋白质有更好的结合效果。
实验者可以根据具体实验需要选择合适的转膜膜。
6. 电泳缓冲液的优化电泳缓冲液的成分和pH值对蛋白质的迁移速度和迁移效果有直接影响。
Westernblot转膜及膜的选择
Westernblot转膜及膜的选择Western blot 转膜及膜的选择转膜：经过PAGE电泳分离后的蛋白质样品需要经过“转膜”步骤——从PAGE 胶转移到膜上固定，才能用各种方法进行Western Blot的检测和显色，而且为了防止没有电场的情况下已经分离的蛋白条带扩散，转移要尽快进行转膜的首要是选膜。
在转移膜上显色其实就像是画家在画布上作画一样，不光要有好的画笔和颜料，适合的画布也是相当之重要。
Western Blotting亦是如此，没有选择好合适的转移膜是无法做出漂亮的结果的。
因此，选择适合的转移膜，要让转移“膜”高一尺，帮衬而不是阻碍到我们的实验。
Western Blot印迹常用的转移膜主要是硝酸纤维素膜（Nitrocellulose Blotting Membranes，NC）和PVDF膜（Polyvinylidene-Fluoride），此外也有用尼龙膜、DEAE纤维素膜做蛋白印迹。
具体哪种膜适合于哪些实验呢？选择的根据主要有：a.膜与目的蛋白分子的结合能力（也就是单位面积的膜能结合蛋白的载量），以及膜的孔径（也就是拦截蛋白的大小）；b.不影响后续的显色检测（也就是适和用于所选的显色方法，信噪比好）；c.如果后继实验有其他要求，比如要做蛋白测序或者质谱分析，还要根据不同目的来挑选不同的转移膜，就像国画要选择宣纸，油画要挑亚麻布或薄棉扣布一样。
转膜是对western blot最终结果影响最大的一步，转膜质量的好坏直接决定了实验结果的好坏。
转膜的影响因素不多，主要有膜的选择、转印方法和实验操作三个方面。
首先是膜的选择问题。
膜的选择主要从实验目的和实验要求来考虑。
例如，要做分子量小于20kDa的小蛋白，0.45um的NC膜是不可取的，因为这样可能会使得蛋白因透过膜孔而造成膜结合的目的蛋白量不确定，从而影响到最终结果的可靠性。
而如果所分离的蛋白需要进行测序，则非PVDF膜不可，因为只有PVDF 膜才能经受住严酷的清洗条件。
wb 70kd转湿转条件
wb 70kd转湿转条件
在蛋白质印迹（Western Blot，简称WB）中，70KD（千道尔顿）的蛋白
质转膜至湿转膜膜上通常需要以下条件：
1. 准备转膜液：根据所使用的转膜膜的规格，准备适量的转膜液。
常用的转膜液包括硝化纤维转膜液和尼龙膜转膜液。
2. 准备凝胶和膜：将凝胶放在玻璃板中，然后将湿转膜膜与凝胶紧密接触。
确保凝胶和膜之间没有气泡。
3. 转膜：将组装好的凝胶和膜放入转膜液中，确保转膜液完全覆盖凝胶和膜。
将转膜仪设置为恒流模式，设置适当的电流和时间进行转膜。
通常情况下，70KD的蛋白质转膜时间在1-2小时之间。
4. 洗膜：转膜结束后，将膜从凝胶上剥离下来，用洗膜液清洗，以去除未转印的蛋白质。
5. 封闭和抗体孵育：将清洗后的膜用适当的封闭液封闭，然后加入一抗进行孵育。
一抗的选择应根据实验目的而定。
6. 显色和检测：孵育结束后，清洗膜并加入二抗进行孵育。
最后加入显色剂进行显色反应，并使用成像系统检测蛋白质条带。
请注意，以上仅为一般性步骤和注意事项，具体操作应根据实验需求和所用试剂盒的说明书进行。
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式摘要：1.WB 转膜的概述2.WB 转膜的条件公式3.WB 转膜的实际应用正文：一、WB 转膜的概述WB（Western Blot）转膜是一种常用的生物技术实验方法，主要用于将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳转移到尼龙膜上。
这一过程是蛋白质研究、表达和检测的关键步骤，为后续的蛋白质鉴定和分析提供了重要的基础。
二、WB 转膜的条件公式WB 转膜的条件公式通常包括以下几个关键因素：1.转膜液：转膜液的成分和浓度对蛋白质的转移效率至关重要。
一般采用含有20% 甲醇、7% 醋酸和1%SDS 的缓冲液作为转膜液。
2.转膜时间：转膜时间与蛋白质的大小、电泳分辨率以及转膜液的浓度等因素有关。
通常情况下，转膜时间为60-90 分钟。
3.转膜温度：适宜的转膜温度有利于蛋白质的快速转移。
一般采用40-50℃的恒温箱进行转膜。
4.电压：适当的电压可以保证蛋白质在电场作用下快速转移。
通常电压设置为100-200V。
5.尼龙膜：尼龙膜的选择对蛋白质的转移效果和检测灵敏度有很大影响。
常用的尼龙膜有PVDF、硝化纤维素等。
三、WB 转膜的实际应用WB 转膜在生物科学研究中具有广泛的应用，主要包括：1.蛋白质表达水平分析：通过比较不同实验组和对照组的蛋白质转膜结果，可以评估蛋白质表达水平的差异。
2.蛋白质亚基分析：通过转膜实验可以检测蛋白质亚基的存在和相对比例。
3.蛋白质修饰分析：WB 转膜可以用于检测蛋白质的翻译后修饰，如磷酸化、糖基化等。
4.蛋白质互作研究：通过转膜实验可以筛选与目标蛋白质相互作用的蛋白质。
总之，WB 转膜作为蛋白质研究中的关键技术手段，其条件公式的掌握对于实验的成功与否至关重要。
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Western blot 转膜及膜的选择转膜： 经过PAGE电泳分离后的蛋白质样品需要经过“转膜”步骤——从PAGE 胶转移到膜上固定，才能用各种方法进行Western Blot的检测和显色，而且为了防止没有电场的情况下已经分离的蛋白条带扩散，转移要尽快进行转膜的首要是选膜。
在转移膜上显色其实就像是画家在画布上作 画一样，不光要有好的画笔和颜料，适合的画布也是相当之重要。
Western Blotting亦是如此，没有选择好合适的转移膜是无法做出漂亮的结果的。
因此，选择适合的转移膜，要让转移“膜”高一尺，帮衬而不是阻碍到我们的实 验。
Western Blot印迹常用的转移膜主要是硝酸纤维素膜（Nitrocellulose Blotting Membranes，NC）和PVDF膜（Polyvinylidene-Fluoride） ，此外也有用尼龙膜、DEAE纤维素膜做蛋白印迹。
具体哪种膜适合于哪些实验呢？选择的根据主要有：a.膜与目的蛋白分子的结合能力（也就是单位面积的膜 能结合蛋白的载量），以及膜的孔径（也就是拦截蛋白的大小）；b.不影响后续的显色检测（也就是适和用于所选的显色方法，信噪比好）；c.如果后继实验有 其他要求，比如要做蛋白测序或者质谱分析，还要根据不同目的来挑选不同的转移膜，就像国画要选择宣纸，油画要挑亚麻布或薄棉扣布一样。
转膜 是对western blot最终结果影响最大的一步，转膜质量的好坏直接决定了实验结果的好坏。
转膜的影响因素不多，主要有膜的选择、转印方法和实验操作三个方面。
首先是膜的选择问题。
膜的选择主要从实验目的和实验要求来考虑。
例如，要做分子量小于20kDa的小蛋白，0.45um的NC膜是不可取的，因为这样可能会使得蛋白因透过膜孔而造成膜结合的目的蛋白量不确定，从而影响到最终结果的可靠性。
而如果所分离的蛋白需要进行测序，则非PVDF膜不可，因为只有PVDF 膜才能经受住严酷的清洗条件。
常用的western blot用膜有NC膜、PVDF膜和尼龙膜，它们的一些主要的特点总结如下表：NC膜 尼龙膜 PVDF膜灵敏度和分辨高 高 高率背景 低 较高 低结合能力 80－110 ug/cm2 >400 ug/cm2 125－200 ug/cm2（适合于SDS 存在下与蛋白质的结合）材料质地 干的NC膜易脆 软而结实 机械强度高溶剂耐受性 无 无 有操作程序 缓冲液润湿,避免气泡 缓冲液润湿 使用前100%甲醇润湿检测方式 常规染色，可用放射性和非放射性检测不能用阴离子染料常规染色， 比较于NC膜，可用考马斯亮蓝染色，可用于ECL检测，快速免疫检测。
适用范围 0.45um 一般蛋白0.2um一分子量小于20kD蛋白0.1um一分子量小于7kD蛋白低浓度小分子蛋白、酸性蛋白、糖蛋白和蛋白多糖(主要用在核酸检测中)糖蛋白检测和蛋白质测序价格 价格较便宜 便宜 较贵其次是转膜方法的选择。
主要有半干法转膜和湿法转膜。
半干法操作要求高，但效率也高。
湿法操作要求相对低，花时间多一些。
最后是实验操作方面的问题。
使用PVDF膜的时候需要进行预处理，这里面会带来一些问题，如甲醇润湿不够，膜的有些区域不能很好的结合蛋白就会引入误差。
膜上面一定不要有油脂类的东西，否则也会影响蛋白结合和抗体的杂交。
1. 硝酸纤维素膜硝酸纤维素膜是蛋白印迹最广泛使用的转移介质，对蛋白有很强的结合能力，而且适用于各种显色方法，包括同位素，化学发光（Luminol类）、常规显色、 染色和荧光显色；背景低，信噪比高。
NC膜的使用也很简便，比如不需要甲醛预处理，只要在无离子水面浸润排出膜内气泡，再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以 了；比如NC膜很容易封闭，也不需要特别严谨的清洗条件。
转移到NC膜上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间， Schleicher & Schull公司的一个实验表明，转移到NC膜上的几种蛋白4度条件下保存5年依然保持免疫识别特性，依然可以得到清晰可信的Western Blot结果。
不过要注意的是纯的硝纤膜在比较脆，又容易卷，操作要小心，不适合用于需要多次重复清洗的用途——因为经不起多次“折磨”。
选择硝纤膜时要 注意的是选择合适的孔径，通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜，小于20KD的话建议选择0.2um的，如果小于7KD的话最好选择 0.1um的膜。
另外还要注意选择纯的NC膜——混有含醋酸纤维（CM）的NC膜结合力会有所降低。
另外提醒一句：由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污 剂而被代替，因此在封闭时最好使用较温和的Tween20，而且浓度不要超过0.3%（据说0.05%效果最好）。
硝纤膜最为大家熟悉和认可的品牌就是 Schleicher & Schull；Millipore；PALL，另外罗氏、Invitrogen、GE（Amersham）、Santa Cruz等公司都有提供各式的硝纤膜（估计OEM的可能性比较大，不过有时挺奇怪的，OEM的有时比生产厂家卖的还便宜）。
Schleicher & Schull的名字拗口——那大概需要舌头在口腔里经过若干次不同弧度和不同速度的上下往返精确运动再配合适当的吐气才能读得准确优雅，不过作为第一个提 供硝纤膜的厂家依然广为人知，其NC 膜分为纯NC膜和强化NC膜两种：Protran nitrocellulose membrane和Optitran nitrocellulose membrane。
前者Protran一直是 Schleicher & Schull自豪的产品，这种“100% Pure Nitrocellulose Membranes”。
一般而言，NC膜越纯，其蛋白结合能力就越高，所以要增加WB的灵敏度和分辨率，提高所使用膜的纯度是个可以考虑的选择。
如果NC 膜搀杂一些醋化纤维素——这在前面已经提到，会影响蛋白质结合。
而Protran在制作过程中去除了各种杂质，保证了其纯度，从而增加了蛋白结合能力。
除 了这一点以外，Protran还有低背景、多孔径选择（0.45, 0.2, 0.1um）和保存时间长（实验证明膜上蛋白辨认时间可长达5年！真是“路遥知马力”的典范）等优点。
但是Protran由于是纯NC膜，比较脆，机械耐 受力欠佳，需要小心操作，如果担心自己“粗手粗脚”，那么就可以考虑一下Optitran或者Pall公司的以耐受力著称的BioTrace NT Nitrocellulose Transfer Membrane。
Optitran是在一层超薄聚酯支撑膜的两面均匀铺上100%纯的硝酸纤维素，结果表面看起来和纯硝纤膜完全一样，保持了NC膜各种优点，只是内部多了 一层中性支持物，大大增强这种强化NC膜的柔韧度和机械耐受力，不容易卷曲，方便操作，特别是重复标记和洗脱的实验。
不过有的使用过的人反应不如纯NC膜 结合能力强。
NC膜除了一般的Discs、Rolls和Sheets以外，像Invitrogen、Bio-Rad公司还有一种方便顾客使用的“sandwich”三 明治形，十分有趣。
说它有趣是因为考虑周到，利于高通量操作，但其实也就是将滤纸和NC膜纸套成滤纸—NC膜—滤纸的层迭形式，预先切割装订好，方便使 用。
不过，卷膜肯定是最实惠的选择，只不过要自己动手裁剪——切记，必须带手套操作。
不知道为什么在国外硝纤膜会被当作危险品来运输还要加收运费，所以货 期蛮长的，所以还是卷膜好，一卷用n年——如果非要给这个n加个期限，那就是......至少可以用到等我毕业之后。
2. PVDF膜刚开始做WB的人也许会有这种疑问：为什么实验室的老师（或者师兄师姐们）在教我们做WB的时候，如果是用PVDF膜做，总是小心翼翼的剪，节省着用，甚至一些边边角角也舍不得丢掉呢？其实，这不仅是因为PVDF膜比较贵，还由于PVDF膜是做WB的“杀手锏”。
聚偏二氟乙烯（PVDF）膜作为基质的转印膜由Millipore公司在1985年首先推出。
与硝酸纤维素膜相比，PVDF膜在蛋白质截留能力，机械强度 和化学相容性上都更优越的性能（Pluskal,et al.,1986)。
市售硝酸纤维素膜的典型结合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜结合量是100-200μg/cm2（而结合强度PVDF比硝纤膜强6倍！）。
在艾滋病毒（HIV）血清学检验中直接比较PVDF和硝酸纤维素膜，PVDF膜具有更好的截留总HIV抗原能力并提高抗体检测糖基化被 膜抗原的性能。
但是PVDF膜最大的优点不仅于此：更好的机械强度和化学耐受性使PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中成为理想选择；而且单个凝胶的 泳道复本可用于多种目的，如考马斯亮蓝染色后切出条带并进行N-末端测序、蛋白消化/肽分离/内部测序和免疫检测（Kurien,et al.,2003)。
特别是需要做N端蛋白测序，在相当“严酷”的清洗条件下，当尼龙或者硝纤膜已经降解的情况下PVDF膜依然保持本色，笑傲江湖。
所以 PVDF也是要做蛋白测序的唯一选择。
此外，个人经验，一些强疏水蛋白用PVDF膜效果会更好一些。
PVDF膜适用的检测方法也不少，化学发光、常规显 色、同位素和标准染色都一样OK，但不适合荧光。
PVDF膜特别注意的是需要100%甲醇预处理（不超过15秒）再用缓冲液平衡，才能用，而且适用过程中 万一干了也要同样程序再处理（不过要真出现这种问题也是自己欠扁，谁要你不小心呢，转膜前处理也就罢了，转膜后再这样处理可能会影响后继的抗体识别呢）。
PVDF膜同样分0.45um和0.2um的，后者孔径小，对小分子蛋白有较好的拦截吸附，背景可能会比前者稍高。
PVDF膜常见的有以下几个品牌公司 产品名 孔径 适用范围 参考价格Millipore Immobilon TransferMembranes 0.45um0.2um$212Bio-Rad Immun-Blot PVDFMembrane Chemiluminescent, colorimetric western blots, amino-terminal sequence and total amino acid compositionPierce PVDF Membrane 0.45um0.2um Western, Southern, Northern, and dot blotsPall Life Science BioTrace PVDF TransferMembrane0.45um Nucleic acid andprotein transfers.Protein sequencing$149Invitrogen PVDF Membrane 0.45um0.2um Protein sequencing, immunoblotting￥1625.8Whatman Westran Clear SignalPVDF Membrane0.45um Western blots作为PVDF膜的鼻祖，Millipore公司的PVDF膜Immobilon系列分为Immobilon-P（0.45um）, -PSQ(0.2um), -FL(用于荧光显色)和Blotting Sandwiches for High Troughput四种。