DNA的粗提取与鉴定
高中生物实验—DNA的粗提取和鉴定
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3、方法与过程
1).制鸡血细胞液
0.1g/mL柠檬酸钠100mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌， 离心或静置沉淀。 活鸡鲜血180mL
血浆
血细胞 离心或静置后去掉上清液
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关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验结果的比较， 最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题： （1）鸡血中红细胞 含有完整的、成形的细胞核，家鸡属于鸟类， 新陈代谢旺盛，因而血液中 红 细胞数目较多，可以提供丰富的 DNA量，所以一般采用鸡血 （2）实验前由老师制备鸡血细胞液供同学们做实验材料，而不用 鸡全血，主要原因是 鸡的全血包括血浆和血细胞，血浆中无DNA， 全血中除掉血浆后就是浓缩的血细胞液，DNA的相对含量提高了。
）
DNA在不同浓度的NaCl 溶液中的溶解度不同 溶于NaCl ，在0.14 mol/L的 溶液中并 NaCl溶液中的溶解度 稀释 最低
DNA不被蛋白酶所水解 加入嫩肉粉 嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质（酶的专一性
DNA耐高温
DNA不溶于酒精溶液
高温
DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA 热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60～ 80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。
2)实验方法步骤：
提取细胞核物质： 利用细胞吸水破裂，细胞核内物质释放出来，后用纱布过滤取其滤液。 血细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂，据此可得出含核DNA的溶液。
溶解核内DNA：在滤液中加2mol/L的NaCl溶液并搅拌，使染色质中DNA 与蛋白质分离，DNA充分溶解，过滤(除杂质)
8 用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。 洋葱的鳞片叶表皮细胞
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注
意
DNA的粗提取与鉴定
二、实验原理 2.DNA的分离和提纯
DNA溶于2mol /L的NaCl溶液,但 不溶于冷酒精，细胞中的其它杂 质溶于冷酒精。
二、实验原理 3.DNA的鉴定
DNA与二苯胺作用生成蓝色沉 淀用来鉴定 DNA（沸水浴）
实验步骤
一、取材：香蕉去皮、洗洁精、食盐溶液、95％酒精等
二、DNA的释放、溶解、获取
实验材料
研磨提取粗提取、提纯恒 温 水 浴 加 热实验现象一
实验现象二及比较
作业： 1.如果选用实验材料是鸡的血细 胞，请写出实验操作步骤； 2.你做的实验现象是怎样的？请 分析或推测原因，并拟定证明你 的推测的进一步实验方案。
1.往研钵香蕉加入10mlNaCl溶液和少量的洗洁进行研磨； 2.用漏斗一层纱布过滤，取滤液； 3.往滤液中加入等量的95%的酒精，静置2--3分钟； 4.用玻棒卷起白色絮状物，用吸水红吸去水分后放入试 管，加入4ml 2mol /L的NaCl溶液充分溶解。
三、DNA的鉴定：找实验老师加4ml二苯胺溶液，在 恒温水浴锅加热2--3分钟，观察现象并分析实验结果。
一、实验目标 1.用15分钟左右的时间尝试对
香蕉组织中的DNA进行粗提取； 2.学会用二苯胺对粗提取的DNA
进行鉴定； 3.能对实验结果进行分析评价。
二、实验原理 1.DNA的释放 洗涤剂等去污剂可以溶解香
蕉细胞的细胞壁，破坏细胞膜， 同时也能使蛋白质变性。 （教材P55)洗涤剂能够瓦解细胞 膜,但对DNA没有影响。
dna的粗提取与鉴定
dna的粗提取与鉴定DNA的粗提取与鉴定一、粗提取粗提取的方法是通过物理和化学方法从一个或多个生物样品中提取DNA样品，通常是为了进行DNA分子生物学分析、基因组学以及其他科学研究。
1. 用拆解液拆解细胞使用拆解液拆解细胞是最常用的粗提取DNA技术。
主要使用的拆解液有Tris-EDTA（TE buffer）、Cetyltrimethyl ammonium bromide （CTAB）、Sarkosyl（SDS）和NaOH溶液等。
各种拆解液的比例和温度可以根据每个实验的要求进行调整。
2. 用磁珠或磁性分选器抽提也可以使用磁珠或磁性分选器来抽提DNA样品。
这种方法可以从多种生物样品中提取DNA，如血清、血浆、细胞粗提物以及血液细胞等。
磁珠抽提的原理是利用磁性珠子来吸附DNA样品，而磁性分选器则是利用磁场将DNA分离出来。
磁珠抽提的优点是简单快捷，缺点是提取的DNA质量不够高。
3. 改良的拆解方式一些改良的拆解方式可以用来考察某一特定细胞类型。
这些方法包括冷冻破碎、湿热破裂、极限温度破裂和化学破裂等。
这些技术可以有效地提高蛋白质和DNA的提取效率，但缺点是需要较高的技术要求，而且操作步骤较多，比较耗时。
二、DNA的鉴定DNA的鉴定是指用特定的方法和技术，明确某个DNA样品的鉴定。
常见的DNA鉴定技术有定性分析、定量分析和活性检测等。
1. 定性分析定性分析是指对DNA样品进行定性鉴定，识别出它们是哪种DNA，以确定其基本性质。
常用的定性分析方法有紫外光检测和酶切检测等。
紫外光检测是将DNA浓度调整至1μg/ml，然后放置在紫外光228纳米的紫外灯管（UV lamp）下，通过分析紫外光吸收光谱来鉴定DNA 样品。
酶切检测是将DNA样品与特定的酶进行反应，用来分析DNA的特征。
常用的酶有限制性内切酶（restriction enzymes），例如EcoRI、BamHI、PstI和HindIII等。
2. 定量分析定量分析是指对某一DNA样品的浓度和数量进行测量，以了解其容量。
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定
方法步骤：
1.溶解鸡血细胞核内的DNA
取一个125mL烧杯，注入15mL蒸馏水，注入1mL制备好的鸡血细胞液，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向快速搅拌5min，血细胞吸入大量水分而被胀破（搅拌加速破开裂），释放出DNA。
向烧杯中注入20mL 2mol/L的NaCl溶液，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向搅拌1min，混合均匀，DNA溶解。
2.析出含DNA的粘稠物
取150mL蒸馏水，沿烧杯壁缓慢加入，同时，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向缓慢不停地搅拌，大量含DNA的粘稠物逐渐析出，并吸附在玻璃棒周围，此时，溶液中NaCl浓度为0.14mol/L.
3.洗涤粘稠物——提取含杂质较少的DNA
取一个100mL的烧杯，注入25mL 95%酒精（常温），持玻璃棒连同吸附的粘稠物转移到注入酒精的烧杯中，沿顺（或逆）时针方向搅拌1—2min，血色及大部分杂质被洗去，缠绕在玻璃棒上的丝状物，其主要成分是DNA（含杂质较少）。
4.DNA的鉴定
取两只试管，分别加入2mL 0.015mol/L NaCl溶液，1号试管中加入丝状物，用玻璃棒搅拌，混合均匀，两只试管中分别加入2mL二苯胺试剂，振荡，水浴3min，1号试管变深蓝色（说明DNA 的量多），冷却后蓝色略深，2号试管无颜色变化。
注意：操作步骤2中搅拌不能快，以免析出的粘稠物被搅碎，搅拌后难以进行后面的操作。
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定（一）实验原理鸟类血液中红细胞有细胞核，细胞核内DNA与蛋白质结合成染色质。
利用DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，而蛋白质此时的溶解度高的特点，可以使DNA与蛋白质分离，形成沉淀析出，通过过滤，得到粗提取的滤出物DNA。
再利用DNA不溶于酒精，但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点，进一步提取出含杂质较少的DNA。
利用DNA遇二苯胺（沸水浴）成蓝色的特性，可以鉴定提取的DNA。
（二）实验材料（以鸡血为例）鸡血细胞液：先配备10%的柠檬酸钠溶液，按180mL新鲜鸡血混合100mL10%柠檬酸钠溶液的比例，立即将血液与柠檬酸钠充分混合，同时用玻璃棒搅拌以免凝血。
然后，用离心机以2000转/min的速度离心4min后，用吸管除去离心管上清液，就可获得所需的鸡血细胞悬液。
每组大约需要5—10mL鸡血细胞悬液。
如果无离心机，可将与柠檬酸钠充分混合的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀后，也可获得所需的鸡血细胞悬液。
（三）试剂与仪器1、2mol/L的NaCl溶液称取117g的NaCl，加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解，即可获得2mol/L 的NaCl，须按此配方配备大量的2mol/L 的NaCl。
2、二苯胺试剂A液——1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。
B液——体积分数为0.2%的乙醛溶液。
实验前，将0.1mL的B液加入到10mL的A液中，现配现用。
3、0.015mol/L的NaCl溶液称取0.88g氯化钠加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解。
4、塑料杯和试管DNA易吸附在玻璃器皿上，用塑料杯和试管可减少提取过程中DNA的损失。
（四）实验方法与步骤1、提取细胞核物质取5—10mL鸡血细胞悬液入烧杯中，加蒸馏水20mL，同时，用玻璃棒沿一个方向快速充分搅拌，使血细胞过度吸水破裂，细胞核内物质释放出来，然后用纱布过滤取其滤液。
2、溶解核内的DNA在滤液中加入2mol/L的NaCl40mL，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，核中DNA游离并充分溶解，染色质中的DNA和蛋白质分离。
dna粗提取与鉴定
dna粗提取与鉴定DNA粗提取与鉴定DNA是生命的基础，它携带了生物体的遗传信息。
在现代分子生物学中，DNA的提取和鉴定是非常重要的技术。
本文将介绍DNA粗提取和鉴定的方法。
一、DNA粗提取1.1 细胞破碎法细胞破碎法是一种常见的DNA粗提取方法。
它通过机械或化学手段破坏细胞膜和核膜，释放出细胞内的DNA。
机械方法包括高压均质和超声波破碎等，化学方法包括SDS、NaOH等。
这些方法都可以有效地破坏细胞结构，但同时也会对DNA造成一定程度的损伤。
1.2 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA粗提取方法，它利用酚对蛋白质和核酸有不同的溶解度来分离DNA。
首先用盐水或缓冲液洗涤样品，然后加入酚/氯仿混合液，在离心后上层为水相（含RNA）、中间为界面层（含蛋白质）和下层为有机相（含DNA）。
通过抽取下层的有机相，可以得到粗提的DNA。
1.3 硅胶柱法硅胶柱法是一种高效的DNA粗提取方法，它基于DNA和硅胶之间的亲和力。
首先将样品加入硅胶柱中，然后用盐水或缓冲液洗涤硅胶柱，最后用低盐缓冲液洗脱DNA。
这种方法可以得到较纯的DNA，并且适用于大量样品处理。
二、DNA鉴定2.1 凝胶电泳凝胶电泳是一种常见的DNA鉴定方法，它利用电场将带电的DNA分子移动到凝胶上。
根据不同长度的DNA片段在凝胶中行进速度不同来分离不同大小的DNA片段。
通过比较样品中不同长度的DNA条带，可以确定样品中是否存在目标序列。
2.2 PCR扩增PCR扩增是一种高效、敏感、特异性强的鉴定方法。
它通过引物特异性识别目标序列，在体外进行大量扩增。
PCR扩增可以检测极少量的目标序列，并且能够对复杂混合物进行分析。
2.3 DNA测序DNA测序是一种直接读取DNA序列的方法。
它通过将PCR扩增的目标片段或提取的DNA样品，进行测序仪读取，得到目标序列的具体信息。
这种方法可以检测出极少量的变异或突变，并且可以对整个基因组进行分析。
三、总结DNA粗提取和鉴定是现代分子生物学中非常重要的技术。
DNA的粗提取与鉴定
4.DNA的再溶解。 用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物。 5.DNA的沉淀和浓缩。 对于除去了蛋白质的DNA的氯化钠溶液，必须再进 一步沉淀和浓缩，常用酒精沉淀法。即往含有Na＋的 DNA溶液，加入体积分数为95%的冷却酒精，混匀后可 以使DNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNA丝状物， 悬浮于溶液中。若丝状物较少，可将混合液再放入冰 箱中冷却几分钟即可。浓缩后的DNA丝状物可以用玻棒 （玻棒有吸附DNA的作用）缓缓旋转的方法卷起。 6.DNA的鉴定。 100℃ DNA＋二苯胺 蓝色物 鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。
二、方法与过程
1.制鸡血细胞液
0.1g/mL柠檬酸钠100mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌， 离心、分离或静置沉淀。 活鸡鲜血180mL 2.提取DNA ⑴.提取细胞的核物质： ①取鸡血细胞液5-10mL＋20mL蒸馏水，用玻棒沿一个 方向快速搅拌。 ②纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。 ③原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速 搅拌，加速细胞破裂。 ⑵.溶解核内的DNA： 滤液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向 轻缓搅拌，使DNA充分溶解。
DNA的粗提取与鉴定
一、实验原理 1.血细胞在蒸馏水中因渗透吸水过度而导致细胞膜和细 胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。 2.DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度 的变化而改变的。DNA在物质的量浓度为0.14 mol／L 的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使 溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。 3.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶 于酒精。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少 的DNA。 4.DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，二苯胺 可以作为鉴定DNA的试剂。
dna的粗提取与鉴定流程
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DNA的粗提取和鉴定
1．原理、方法和目的
基本原理 方法 目的 ①NaCl溶液为2 mol/L时，DNA溶解，而部 分蛋白质发生盐析生成沉淀，通过过滤可 除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质 ②当NaCl溶液稀释至0.14 mol/L时，DNA析 出，过滤可除去溶于NaCl溶液的部分蛋白 质和其他杂质
能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；
3、将混合液用两层纱布过滤，向滤液中 加入预冷的10ml乙醇溶液，静置，可产生 絮状的DNA。 DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质 4、取两支试管，分别加入5ml生 理盐水，将DNA挑至其中一支试 管中，轻轻搅拌使其溶解。
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2007年高考生物试题: 在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因，该对提 高农作物的抗寒能力有较好的应用价值，该基 因可以从这些鱼的DNA中扩增得到。试述在提取 和纯化DNA时影响提纯效果的因素及其依据。 （列举两点）
2)实验方法步骤：
提取细胞核物质： 利用细胞吸水破裂，细胞核内物质释放出来，后用纱布过滤取其滤液。 血细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂，据此可得出含核DNA的溶液。
溶解核内DNA：在滤液中加2mol/L的NaCl溶液并搅拌，使染色质中DNA 与蛋白质分离，DNA充分溶解，过滤(除杂质)
原理方法和目的基本原理基本原理方法方法目的目的dnadna在不同浓度的在不同浓度的naclnacl溶液中的溶解度不同溶液中的溶解度不同在014moll014moll的的naclnacl溶液中的溶解度溶液中的溶解度最低最低溶于溶于naclnacl溶液中并溶液中并稀释稀释naclnacl溶液为溶液为2mollmoll时时dnadna溶解而部溶解而部分蛋白质发生盐析生成沉淀通过过滤可分蛋白质发生盐析生成沉淀通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于除去部分蛋白质及不溶于naclnacl溶液的杂质溶液的杂质当naclnacl溶液稀释至溶液稀释至014moll014moll时时dnadna析析出过滤可除去溶于出过滤可除去溶于naclnacl溶液的部分蛋白溶液的部分蛋白质和其他杂质质和其他杂质dnadna不被蛋白酶所水解不被蛋白酶所水解加入嫩肉粉加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶水解蛋白质嫩肉粉中含木瓜蛋白酶水解蛋白质酶的专一性dnadna不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液加入冷却酒加入冷却酒精精9595dnadna析出除去溶于酒精的蛋白质析出除去溶于酒精的蛋白质dnadna可被二苯胺染成蓝可被二苯胺染成蓝加入二苯胺加入二苯胺并沸水浴并沸水浴鉴定鉴定dnadna高温dna耐高温dna和蛋白质对高温耐受性不同
2023高中生物人教版DNA的粗提取与鉴定实验教案
2023高中生物人教版DNA的粗提取与鉴定实验教案一、实验目的通过本实验，学生将了解到DNA的结构和提取方法，并学会进行DNA的粗提取与鉴定实验。
二、实验原理DNA是一种复杂的分子，存在于细胞核中。
DNA的提取是将细胞溶解，分离出DNA分子的过程。
本实验采用CTAB法进行DNA的提取。
CTAB（正十六烷基三甲基溴化铵）可与DNA中的脂质结合，使其在酒精中沉淀出来，然后进行纯化。
三、实验材料1. 鸽子肌肉组织2. CTAB提取液（含CTAB、EDTA等）3. 去离子水4. 洗涤溶液（含乙醇、酒精等）5. 漂白粉溶液6. 碘酒溶液7. NB试剂液（含甲酚、硫酸等）8. DNA鉴定试剂盒9. 细胞破碎管10. 离心管11. 显微镜四、实验步骤1. 取适量鸽子肌肉组织，用漂白粉溶液清洗约5分钟，然后用去离子水洗净。
2. 将清洗后的组织切成小块，加入细胞破碎管中。
3. 加入适量的CTAB提取液，轻轻颠倒破碎管，使其均匀混合。
4. 将混合液放入水浴中加热，温度控制在60℃，保持30分钟。
5. 在水浴中加热过程中，制备NB试剂液。
取一定体积的NB试剂液加入离心管中。
6. 完成加热后，将破碎管置于冷水中快速降温。
7. 按顺序加入等体积的NB试剂液和酒精，轻轻摇晃离心管。
8. 静置一段时间后，观察管内是否有白色物质沉淀，即DNA。
9. 使用显微镜观察提取的DNA样品，并拍照记录。
五、实验结果与分析通过上述实验步骤，我们成功从鸽子肌肉组织中提取到了DNA。
观察显微镜下的DNA样品，可以观察到DNA的纤维状结构，证明DNA成功提取。
通过DNA鉴定试剂盒，可以进一步鉴定DNA的质量和纯度。
六、实验扩展1. 不同来源的细胞组织是否存在DNA含量差异？2. 不同提取方法对DNA的效果有何不同？3. 通过PCR技术对提取的DNA进行进一步分析。
七、实验注意事项1. 实验过程中需注意个人安全，避免接触有害物质。
2. 实验器材需干净无污染，避免杂质对实验结果的影响。
实验05DNA的粗提取与鉴定
专题05DNA 的粗提取与鉴定一、实验原理1．提取DNA的原理利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
如：(1)DNA在酒精溶液中的溶解性：DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。
(2)DNA在NaCl溶液中的溶解性：DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2 mol/L 的NaCl溶液。
2．鉴定DNA的原理在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
二、方法步骤1．称取约30 g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨。
2．去除滤液中的杂质方案一在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液方案二直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1 500 r/min的转速下离心5 min，再取上清液3．DNA方案一在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～3 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA；用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分方案二将溶液倒入塑料离心管中，在10 000 r/min的转速下离心5 min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干4.DNA取两支20 mL的试管，各加入2 mol/L的NaCl溶液5 mL。
将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中，再向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂。
混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
三、操作提示1．以血液为实验材料时，每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止血液凝固。
2．加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。
四、关键点拨1．利用动物细胞提取DNA时，破碎细胞的方法：动物细胞无细胞壁，可直接使其吸水涨破。
2．不能选用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料，原因是哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。
DNA粗提取和鉴定实验
DNA的粗提取与鉴定实验一、实验原理①DNA主要存在于细胞核②DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA 析出。
③DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
⑷DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
二、实验材料和用具鸡血细胞液（5~10ml）；体积分数为95%的冷酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却24h）；蒸馏水；质量浓度为0．１g/ml的柠檬酸纳溶液；质量的浓度分别为2mol/L和0．015mol/L的氯化纳溶液（新教材不要求0、015的浓度了，都是用的2mol/L）；二苯胺试剂；铁架台；镊子；水浴锅；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒（100ml，一个）；烧杯；（1000ml，一个，50ml、100 ml 、500ml各二个）；试管（20ml，二个）；漏斗；试管夹；纱布。
三、课前准备鸡血细胞液取质量浓度为0．1g/ml的柠檬酸纳溶液（抗凝剂）100ml，置于500ml烧杯中。
注入新鲜的鸡血（约180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳溶液充分混合，以免凝血。
将烧杯中的血液置于冰箱内，精置一天，使血细胞自行沉淀。
（也可以将血液倒入离心管内，用1000r/min（转每分）的离心机离心2min，血细胞沉淀于离心管底部。
实验时。
用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。
四、方法步骤①提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL，注入到50 mL烧杯中。
向烧杯中加入蒸馏水20 mL，同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。
然后，用放有1-2层纱布的漏斗将血细胞液过滤至1000mL。
取其滤液。
②溶解细胞核内的DNA将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L的溶液40mL加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。
DNA的粗提取与鉴定(优秀课件)
【实验总结】
此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤？ 几次析出？几次搅拌？分别在哪一步？ 两次蒸馏水： 三次过滤： 答：整个实验共 两次析出： 六次搅拌： 两次蒸馏水： 第1次： 步骤1.细胞吸水胀破 第2次： 步骤3.使 DNA黏稠物析出
三次过滤：
第1次：步骤1. DNA存在于滤液里 第2次：步骤4. DNA被留在纱布上 第3次：步骤6. DNA存在于滤液里
讨论： （1）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？ 答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是 原来颜色 （2）这一鉴定结果说明什么问题？
答：提取出的丝状物是DNA
（3） DNA的直径约为20×10-10 m，实验中出 现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的 大小？
答： DNA分子直径只有2 nm。丝状物是多 个DNA子聚在一起形成的
讨论：加入蒸馏水的目的？ 降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点，使 DNA从NaCl溶液中析出 注意事项： 将溶液中的DNA与其他杂质分离，这一步骤是 实验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸 馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌， 以利于DNA分子的附着和缠绕
④滤取含DNA的粘稠物
用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液 至 500mL的烧杯中，含 DNA的粘稠物被留在 纱布上 ⑤将DNA的粘稠物再溶解 取 1个 50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物 质的量浓度为 2 mol／L的溶液 20mL。用钝头 镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻 璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶 液中
A.随着NaCl溶液浓度的增大，DNA在NaCl溶液中的 溶解度也增大 B.随着NaCl溶液浓度的减小，DNA在NaCl溶液中的 溶解度也减小 C.DNA在NaCl溶液中的溶解度与NaCl溶液的浓度无 关 D.当NaCl溶液的浓度为0.14M时，DNA的溶解度最低
高中生物选修一--DNA的粗提取与鉴定
方法步骤
加入物质
1.制备鸡血细胞液
柠檬酸钠溶液
2.提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水
3.溶解细胞核内的DNA
2 m1／L 的 NaCI 溶液 40mL
4.析出含DNA 的黏稠物
蒸馏水
5.滤取含DNA 的黏稠物
6.将 DNA 的黏稠物再溶解 2 mol／L 的 NaCl 溶液 20 mL
7.过滤含DNA 的 NaCl 溶液
1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯 中加入蒸馏水的作用是( )。
A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA
答：B
2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 mol／L和 0.14 mol／L对DNA有何影响?
8.提取含有杂质较少的DNA 9.DNA 的鉴定
冷却的95％的酒精50 mL
A:(1)向试管中加入0.015 mol／L 的 NaCl 溶液 5mL (2)加入 DNA (3)4 mL二苯胺试剂
B:(1)向试管中加入0.015mol／L 的 NaCl 溶液 5mL (2)4 mL 二苯胺试剂
目的 ① ②幻灯 ③幻灯 ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧幻灯
答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出
3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ) A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色
答：D
4.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液 中的上清液?
液中的血浆部分，不含DNA，所以 要除去上清液(含有蛋白质)。
⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
① 蛋白酶——水解蛋白质， 对DNA没有影响
② 高 温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃ 而DNA在80℃以上才会变性
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8、DNA的鉴定 ① DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因 此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂
②紫外灯照射法 A、配制染色剂，用蒸馏水配制万分之五的溴 化已锭（EB） B、将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上， 再滴一滴EB溶液染色 C、将蜡纸放在紫外灯(260 nm)下照射（暗室 中），可见橙红色的荧光(DNA的紫外吸收高峰 在260 nm处)
讨论： （1）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？
答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是 原来颜色 （2）这一鉴定结果说明什么问题？
答：提取出的丝状物是DNA
（3） DNA的直径约为20×10-10 m，实验中 出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径 的大小？
答： DNA分子直径只有2 nm。丝状物是多 个DNA子聚在一起形成的
3、提取DNA的基本思路
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化 学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分
4、DNA的溶解性
DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶 液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的 盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀， 或者相反
5、讨论：
①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图， 思考在什么浓度下， DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？
第一步 第四步 第六步
过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有 关，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要 使用多层纱布，第一次和第三次均要用其滤液， 使用的纱布为1－2层
③两次析出
第一次：用0.14 mol／L 的NaCI 溶液含杂质多 第二次：用冷却的95％的酒精
第三步 第七步
④六次搅拌：第一、二、三、五、七步
6、讨论：
（1）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过 滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？
答：整个实验共“两次蒸馏水，三次过滤，两 次析出，六次搅拌”
①两次蒸馏水
第一次：细胞吸水胀破 第二次：使 DNA黏稠物析出
第一步 第三步
②三次过滤
第一次： DNA存在于滤液里 第二次： DNA被留在纱布上 第三次： DNA存在于滤液里
答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质； 得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA
②溶解细胞核内的DNA
将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol的溶40mL 加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌 1min，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈 溶解状态
③析出含DNA的粘稠物
沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停 地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观 察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中 出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时 停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量 浓度相当于0.14 mol／L）
在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶 解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在 0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液 浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。
②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液 中溶解或析出？
当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA 的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA 的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐 溶液中溶解或析出
2、植物细胞
①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解 细胞膜 讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？
答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜， 有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl， 有利于DNA的溶解
②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加 入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研 磨，过滤后收集研磨液
其中除第八步外，其余均要朝一个方向搅拌， 在第三、五步搅动还要轻缓，玻璃棒不要直 插烧杯底部，这样才能保证得到完整的DNA
（2）为什么反复地溶解与析出DNA，能够去 除杂质？
答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高 盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出， 能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过 反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解 度不同的多种杂质
答：因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以 溶解在酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可 以析出,悬浮于溶液中 （2）观察丝状物呈什么颜色？
答：白色
⑧ DNA的鉴定
取两支20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量 浓度为0．015 mol／L的溶液5 mL，将丝状物 放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物 溶解。然后，向两支试管中各加入4mlL的二苯 胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中 溶液颜色的变化
讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样 的影响？ 答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全， 提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到 丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等
（三）去除滤液中的杂质
为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理
讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞 成分？
答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质
答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分 是血细胞，离心后除去的上清液是血浆
5、方法步骤
①提取鸡血细胞的细胞核物质
将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL，注入到 50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 mL， 同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速 破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过 滤至500mL。取其滤液。
讨论1：构成生物体的遗传物质是什么？ 讨论2：如何证明他们是遗传物质？ 讨论3：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？
DNA的粗提取与鉴定
一、基础知识 （一）提取DNA的方法
1、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理 或化学性质的生物大分子 2、生物大分子
主要指蛋白质、酶和核酸
（四） DNA的析出与鉴定
1、DNA的析出
DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒 精溶液（体积分数为95 ％） ，静置2－3min， 溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。 用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用 滤纸吸取上面的水
2、 DNA的鉴定
鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为 2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一 只加入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml 试剂。 混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试 管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看 看溶解有DNA的溶液是否有蓝色
讨论： （1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞 会有什么变化？
答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞 会吸水以至胀破 （2）用玻璃棒搅拌有什么意义？
答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的 破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能 太快太猛，防止打碎DNA （3）滤去的是什么物质？得到的是什么？
三、实验案例 （一）案例一：以鸡血为实验材料进行DNA的 粗提取 1、鸡血细胞做实验材料的原因
①鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得
②鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞 作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求 较高，操作繁琐，历时较长
2、实验原理
① DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的 浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为 0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原 理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液
1、动物细胞
动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中 加入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过 滤后收集滤液即可
讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体， 水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂， 再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的 破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA
③甲基绿 （绿色）
二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计
（一）实验材料的选取
1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、 哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、 在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取 2～3种实验材料）
2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考 虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功 的可能性更大
⑦提取含杂质较少的DNA
在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积 分数为 95％的溶液 50mL（使用冷却的酒精， 对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌， 溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将 丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝 状物的主要成分就是DNA
讨论：
（1）为什么要加50mL的冷酒精？
讨论：加入蒸馏水的目的？
降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点，使 DNA从NaCl溶液中析出
注意事项：
将溶液中的DNA与其他杂质分离，这一步骤是 实验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸 馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌， 以利于DNA分子的附着和缠绕
④滤取含DNA的粘稠物
用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液 至 500mL的烧杯中，含 DNA的粘稠物被留在 纱布上
讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去 除杂质
答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高 盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出， 能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反 复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度 不同的多种杂质
讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？
答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而 使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是 DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋 白质变性，与DNA分离
②柠檬酸钠作用
防止血液凝固
③作用机理
柠檬酸钠能与血浆中的Ca2+发生反应，生成柠 檬酸钙络合物，血浆中游离的Ca2+大大减少， 血液就不会凝固