弥散性血管内凝血(实验细节)

弥散性血管内凝血(DIC)

实验细节与步骤：

1.家兔的正确捉拿、称重(Kg)

2.麻醉与固定：20%乌拉坦5ml/kg，耳缘静脉缓慢注射

麻醉效果判定指标：四肢肌肉松弛；疼痛反射、角膜反射消失；呼吸平稳

3.颈静脉、动脉分离、插管

颈静脉插管，不描记血压，不用连接换能器：补液+造模

动脉插管，描记血压：取血（2ml EP），测检测相关指标。

4.观察并记录正常血压、呼吸

5.①取血(加0.2ml肝素抗凝) 2ml，测正常指标(Pt,fg,FDP)

动脉插管后，立刻用EP管取血2ml；其中20ul全血用于血小板计数，剩余血离心取上清用于检测3P试验和纤维蛋白原含量测定。

★插管前，先用小的EP管加入380ul血小板稀释液，试管提前加入2.7ml 饱和NaCl和生理盐水，标记为对照管和样品①。

★除了血小板计数外，其他检测都在第四实验室进行。

6.复制DIC模型：

•耳缘静脉或颈静脉缓慢注射4%兔脑粉（或粗制内毒素）溶液，1~3 ml/kg.bw。（加入至20ml NS中）速度一定要慢，速度快，动物容易

死亡。

•

7.15min后②取血测定指标变化（血压、呼吸，血小板、纤维蛋白原、FDP）

8.45min③后重复检测一次（时间不够则不做）。

9.处死，空气栓塞。

附检测方法：取血(加0.2ml肝素抗凝) 2ml

血小板计数方法

血小板稀释液0.38 ml

+ 全血20 l

•混匀，取一小滴，加入血球计数板内；

•静置15分钟；

•高倍镜下计数5个中方格内血小板数（= *109/L）

先看到方格再计数，（正常范围：100~300*109/L）

用20ul加样枪吹打入计数板中，注意不要有气泡，每次用完计数板后要清洗干净；380ul血小板稀释液用EP管装。

纤维蛋白原含量测定

•全血离心5000rpm,3min;

•样本管：取血浆0.3ml，

加入饱和氯化钠溶液2.7ml，

对照管：取血浆0.3ml，

加入生理盐水 2.7ml。

•混匀，37℃水浴3min

•再次混匀，以对照管调零，分光光度计检测OD520nm

•计算：样本管光密度值* 33.3 = g/L

第一实验室后面离心后，立刻到第四实验室进行检测，加入到提前装有2.7ml饱和氯化钠溶液和生理盐水的玻璃试管中。

分光光度计简易操作步骤

1．设定测定样品所需波长：（520nm）

2．透光度（T）凋零：以蒸馏水调零：开盖显示为0.00，如不为0.00，则调节“0”档；盖上显示为100，如不为100，则调节“100”档。

3．吸光度（A）调零：第2步完成后，调节T按钮为A档；显示为0.00，如不为0.00，则调节“ABS0”档；

4．依次外移拉杆测定待测样品吸光度（光密度OD），记录数值。测完后按T/A/C，调节回T，打开盖子，取出样品。（暂时不测定时，要开盖，光标指向T档）

对照管：（调零管）调零；

测定管：正常和造模15分钟各测一次，时间

允许再做45分钟的。

拉

杆

血浆鱼精蛋白副凝试验（3P试验）

•取血浆0.4 ml + 1%硫酸鱼精蛋白0.1ml

•混匀，静置30min。

•结果判定：

–阳性：摇动，出现白色纤维或凝块。

–阴性：均匀浑浊，无白色纤维或凝块。

先用玻璃试管加入0.4ml血浆，再加入0.1ml 1%硫酸鱼精蛋白。

针对今天的实验情况，写了以上实验的一些细节供同学们参考，祝同学们实验成功！

洪老师2014.10.13 21:00