急性痛风性关节炎动物模型研究进展

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3.目前研究较少涉及本病中医证型的动物模型，导致中医药在本 病的动物研究方面尚缺乏准确证型的动物模型，使中医药对本病的 治疗方面的研究受到一定程度的限制，今后应努力研究完善本病各 种证型的动物模型。
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恳请老师各位同学批评指 正！
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目前，常用于 AGA的造模动物主要有啮齿类、禽类和灵长类 动物。啮齿类动物多选用大鼠与家兔；禽类动物常选择鸡作为 AGA 模型动物；灵长类动物主要选用猴，但由于来源较少及成 本昂贵等原因，近年来尚无文献报道。
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大鼠模型的构建 目前，构建 AGA 大鼠模型的主流方法仍沿用 20 世纪 80 年代的 Coderre 法，即通过大鼠踝关节腔注入 0.2 mL MSU 溶液以诱导 AGA。 但由于此方法所致 AGA 与人体AGA 的发病机制不相符，故 近年来许多学者致力于探索出更好的造模方法。
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2.家兔模型的构建 家兔一般采取 McCarty 造模方法构建 AGA 模型，即兔耳缘静脉 注射麻醉，然后注射 10 mg MSU 溶液至兔膝关节腔内，诱导致 AGA 模型。近几年对此造模方法进行改良的研究较为少见。有学者 按照 McCarty DJ 经典的造模方法，选取兔膝关节一侧为进针点， 关节腔注射 0.4 mL 50 mg/mL 的 MSU 溶液及 0.1 mL 多粘菌素， 并对膝关节做屈伸运动 5 min，结果证明此造模方法具有成功率较 高，创伤性较小的优势。
急性痛风性关节炎动物模型研究进展
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随着本病发病率逐年升高，其发病机制和防治途径日益成为 研究热点。而动物模型的成功构建是研究疾病发病机制和防治 途径的必要手段之一。
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由于大多数动物具有尿酸分解酶，其可将尿酸分解为尿囊素， MSU 晶体在形成之前便可以尿囊素的形式随尿液及时排出体 外。因此，一般情况下不会发生高尿酸血症和AGA。但禽类 与灵长类的动物体内缺乏尿酸分解酶，其尿酸的代谢过程与 人类较为接近，若加上长期高嘌呤饮食，即可引起高尿酸血 症及 AGA 的发生。
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大鼠模型的构建的改进方法 改进原理：由于 AGA 的发生与高尿酸血症密切相关，故有学者提 出，应同时建立高尿酸血症和 AGA 模型，才更接近人类 AGA 的发 病机制。
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改进方法 1.采用 Coderre 法结合次黄嘌呤，以及 Coderre 法结合氧嗪酸两 种方法造模，并对其进行比较。在检测血尿酸并对大鼠关节滑膜及 其步态进行观察后发现，通过次黄嘌呤结合 Coderre 法构建的AGA 大鼠模型更接近人体尿酸代谢紊乱诱发 AGA 的发病机制。
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
3.禽类动物模型的构建 1. 采用经典的 Mc Carty 方法造模，公鸡单侧膝关节局部注射 2%MSU 溶液0.5ml/kg，每 3d 注射 1 次，连续注射 4 次，并于 注射前，注射后 5、24、48 h 后观察其关节形态学改变，采用分 级评分标准对模型进行评分，并对进行组织学检测，结果证实造 模的公鸡膝关节的软骨及滑膜组织均有明显改变。
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改进方法的弊端 灌胃或饲喂造模剂结合冷水浴( 敷) 方法制备的伴高尿酸血症性 急性痛风性关节炎动物模型，尿酸变化大，与人类的痛风性关节炎 发生有一定的的相似之处，但动物在寒冷环境中出现明显身体不适 ，易冻伤死亡，影响了造模成功率，操作繁琐且不可长期持续，有 待进一步研究。
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改进方法 3.改良了大鼠造模的进针方法。将进针点定于大鼠右下肢后侧踝关 节与胫腓骨间的关节腔，并使踝关节屈曲90°，充分暴露踝关节与 胫腓骨的间隙后以 45°进针，注射 2 mL MSU 溶液。结果表明， 与常规进针方法（即进针点为右后肢足内踝后缘，针向胫跗关节腔） 相比，改良后的进针方法具有造模成功率高、稳定性强、创伤性小 的优点。
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弊端 此模型是模拟临床上常见的痛风性关节炎证候类型—湿热蕴结型 ，将痛风性关节炎“病”与中医湿热“证”病证复合的动物模型， 虽然同时表现出痛风性关节炎“病”与“湿热”的症状，但这有别 于中医湿热内蕴，瘀滞络道而致痛风性关节炎。
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小结
Coderre 等最初设计 MSU 局部关节注射诱导 AGA 大鼠模型的 方法，经过多次改良后己作为 AGA 的经典造模方法被广泛采 用。近年来对 AGA 经典造模方法的改良研究较多，无论从AGA 结合高尿酸血症进行造模，还是进针点及进针角度进行改良， 或是对 MSU 溶液制备方法进行改良，都丰富了本病的动物造 模方法，为构建更加稳定的AGA 模型提供新的思路。 但纵观 近几年的文献报道，本病的动物模型仍缺乏稳定性，造模用药 剂量和时间存在争议，且学术界对造模方法尚未达成共识。具 体存在以下不足之处：
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改进方法的弊端 腹腔注射高嘌呤成分、尿酸或尿酸酶抑制剂结合 Coderre 等方 法制备的伴高尿酸血症性急性痛风性关节炎动物模型，虽然易于操 作，但不能形成持久的模型，且此方法造模与人类痛风病形成的原 因相差较大。
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改进方法 2.将次黄嘌呤结合冰敷法构建大鼠 AGA 模型,通过比较正常组、冰 敷组、次黄嘌呤灌胃组和次黄嘌呤灌胃加冰敷组大鼠的关节肿胀程 度和步态对动物模型进行判断。在冰敷 3 d 后次黄嘌呤灌胃加冰 敷组大鼠膝关节发现大鼠膝关节明显肿胀，并出现轻度跛行，说明 该方法可模拟人体因低温条件及高嘌呤饮食结构所致AGA 的发病机 制。
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1.在造模动物的选择方面，AGA 的动物模型以啮齿类及禽类动物 为主。但尿酸的代谢过程与人类较为接近是禽类与灵长类，由于经 费及动物来源等原因，并没有文献报道关于灵长类 AGA 动物模型 。
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2.动物造模后的症状虽与 AGA 类似，但仍与人类 AGA的发病机制 存在区别，如血尿酸代谢途径不同等，其仅模拟了痛风关节症状， 只适用于局部症状的观察，因为此种外源性 MSU 所致的损伤与人 类内源性生成的 MSU 所致痛风仍存在差距，不能反映血尿酸水平 对痛风发病的影响。 故仍有待进一步寻找更好的造模方案，复制 与机体尿酸代谢更为接近的动物模型。
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改进方法 4.因大鼠品种的不同，其对 MSU 溶液的反应性也存在差异，故可 对造模的效果造成不同程度的影响。通过观察不同品系大鼠注射 MSU 溶液后的炎症反应程度，分别在 SD 大鼠与 Wistar 大鼠踝关 节外侧后方注入 20 mg/ mL 的 MSU 溶液造模，在造模后 9 h 和 12 h 后分别观察大鼠踝关节的周径及关节液中 IL-1β和 TNF-α 的表达水平。结果显示，与 Wistar 大鼠比较，SD 大鼠对 MSU 更 敏感，更适用于 MSU 诱导 AGA 模型的建立。
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湿热蕴结造模 以普通饲料喂养大鼠，200g /L 蜂蜜水自由饮用，并分别以油脂 ( 10 g /kg) 或52% 红星二锅头酒( 10 mL /kg) 灌胃，二者交替 进行，持续 10 d。自第 11 天开始，将大鼠置入湿热［相对湿度 为( 92 ± 3) % 、温度( 32 ± 2) ℃］的人工气候箱中喂养，在 第 13 天上午，于在大鼠右侧踝关节腔注射 50 μL( 20 mg /mL) 的 MSU 溶液，制备痛风性关节炎湿热证病证结合大鼠模型。
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2.高嘌呤饮食饲喂法也常用于禽类的痛风造模，其通过在产蛋日 龄前喂投喂高核蛋白及高钙饲料，同时控制摄水量，从而建立禽类 AGA 模型。
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中医证型的动物模型 原理：痛风属于中医“痹 症”的 范 畴，主要是由于痰热瘀滞 而致。《中医病证诊断疗效标准》将其分为湿热蕴结型、瘀 热阻滞型、痰浊阻滞型和肝肾阴虚型 4 型，以湿热蕴结型多见。