植物组织培养实验指导
植物组织培养试验
植物组织培养试验《植物组织培养技术》实验指导实验一组培室设备参观及器皿的洗涤和灭菌一、目的要求：1.通过参观，了解组织培养室的几个主要组成部分和各部分应有的基本设备以及有关仪器的用途与功能。
2.通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。
二、材料用具：高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、双筒解剖镜、酸度测定仪、空调机、控温仪、百分之一与万分之一天平、电炉、玻璃器皿（试管、三角瓶、移液管、漏斗、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量筒酒精灯），以及镊子、解剖刀、解剖针、手术剪，肥皂、洗衣粉、重铬酸钾、浓硫酸等。
三、说明：在进行各类具体的组培实验前，首先了解组培室的结构及主要设备的用途和性能是十分必要的,总体上的了解有利于以后各实验的进行以及正确的使用各种仪器和设备。
植物组织培养是一项十分细致的工作，为了保证植物外植体不受污染,第一关就是要对各种器皿进行清洗和消毒,使它们保持无菌状态，做这些工作同样有一套科学的方法和需要熟练的技巧，因此每个学生必须学好这套基本功。
四、方法和步骤：首先在老师带领下参观组培室，并听取讲解，然后配制洗液，称取工业用重铬酸钾40克，溶解在500ml在水中，然后徐徐加入450ml 粗制浓硫酸（或废硫酸）配好的溶液呈红色，铬酸洗液是一种强氧化剂，去污能力强，但玻璃器皿上沾有油脂、凡士林、石蜡等则用此液无效，铬酸洗液可反复使用，直到溶液呈青褐色为止。
此溶液腐蚀性强，洗涤时需注意。
每人清洗部分玻璃器皿，方法：清水洗净一泡入洗衣粉水溶液中进行洗刷f清水反复冲洗f蒸馏水淋一遍f烘干备用。
然后清洗部分较脏的玻璃器皿，方法：采用先碱后酸，即用洗衣粉洗刷后冲洗干净f晾干一侵入酪酸洗液，浸泡时间视器皿的肮脏程度而定f清水反复冲洗干净f蒸馏水淋洗一遍f烘干备用。
带有石蜡或胶布的器皿：先将其除去，再用常规洗涤，石蜡用水煮沸数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时,再用水冲洗，凉干后浸入洗液，以后的步骤同前。
植物组织培养实验指导
生物技术大实验第一部分植物组织培养实验一、母液的配制和保存（3学时）一、实验目的通过配制MS培养基母液，掌握贮备液的配制和保存方法。
二、原理配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存。
使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例，所需配制的母液为：大量元素母液（母液Ⅰ，浓缩10倍）、微量元素母液（母液Ⅱ，浓缩100倍）、铁盐母液（母液Ⅲ，浓缩100倍）和有机化合物母液（母液Ⅳ，浓缩100倍）等。
三、实验仪器设备和试剂冰箱，天平，酸度计，烧杯（50ml，100ml，500ml，1000ml），量筒(1000ml，100ml，25ml)，容量瓶(1000ml，500ml，100ml)，磨口试剂瓶(100ml，500ml，1000ml)，药勺、称量纸、滴管、玻璃棒，电炉，微波炉NH4NO3, MnSO4.4H2O, KNO3, ZnSO4.7H2O, CaCl2.2H2O, Na2MoO4.2H2O, MgSO4.7H2O, CuSO4.5H2O, KH2PO4, CoCl2.6H2O, H2BO3，Na2•EDTA•2H2O，KI, FeSO4.7H2O，烟酸，甘氨酸, 盐酸硫胺素, 肌醇, 盐酸吡哆醇, 蒸馏水四、实验方法1、MS大量元素母液的配制配制时先用量筒量取蒸馏水大约350ml，放入500ml的烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 ,KH2PO4 ,MgSO4.7H2O ,CaCl2.2H2O，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入500ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至500ml，然后，倒入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
2、MS微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平分别依次称取MnSO4•4H2O，ZnSO4•7H2O ，H2BO3，KI ，NaMoO4•2H2O，CuSO4•5H2O，CoCl2•6H2O，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容，装入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
第五章植物组织培养技术实验方案
第五章植物组织培养技术实验方案一、实验目的：1.了解植物组织培养的基本原理和方法。
2.掌握植物组织培养的实验操作技巧。
3.培养植物组织并观察其生长和发育情况。
二、实验材料和设备：材料：麦芽糖、琼脂、植物激素（如IAA、ABA、GA3等）、幼绿豆胚轴组织。
设备：平板培养器、显微镜、高压锅、移液器、无菌操作器具等。
三、实验步骤：1.制备琼脂培养基a）称取适量琼脂加入适量蒸馏水中，搅拌均匀。
b）高压锅加热至沸腾，放入琼脂溶液，保持沸腾10-15分钟，使琼脂充分溶解。
c）将高压锅冷却后取出，倒入洁净的培养器中，晾凉并凝固。
2.准备植物组织a）将绿豆种子浸泡于水中，待种子发芽至一定程度。
b）取出绿豆胚轴组织，用刀切割成适当大小的组织片段。
3.制备植物组织培养基a）取适量砂糖和植物激素（如IAA、ABA、GA3等），溶解于蒸馏水中。
b）加入适量制备好的琼脂培养基，搅拌均匀。
4.进行组织培养a）将准备好的植物组织片段放入培养器中，倒入制备好的植物组织培养基，使组织片段完全浸没其中。
b）盖上培养器盖子，用透明胶带密封，防止细菌浸入。
c）将培养器置于适当的温度和光照条件下，进行培养。
5.观察和记录a）每天观察组织的生长和发育情况，记录变化。
b）使用显微镜观察细胞结构和细胞分裂情况。
c）观察是否有细菌感染或其他异常情况。
d）记录实验数据，如生长速率、生长周期等。
四、实验要点：1.所有实验操作都要在无菌环境下进行，避免细菌和其他微生物的污染。
2.组织培养基的配方可以根据不同的植物种类和研究目的进行调整。
3.培养条件也根据不同植物种类的要求进行调整，如温度、光照等。
4.实验中要注意观察并记录实验数据，对结果进行分析和总结。
五、预期结果：通过植物组织培养技术，可以观察到植物组织的生长和发育情况，研究不同因素对植物生长的影响，培养出健康的植物组织，为其他相关研究提供基础数据和实验材料。
六、安全注意事项：1.操作时要小心使用实验器具，避免切伤或烫伤等事故发生。
植物组织培养实验指导
实验一培养器皿的洗涤与环境的消毒及培养基母液的配制实验二植物组织培养的培养基配制、分装与灭菌实验三番茄子叶愈伤组织诱导培养阿实验四马铃薯茎段的扩繁培养实验五海棠叶片的离体培养实验六胡萝卜离体根的培养实验七组织培养物的继代培养实验八马铃薯脱毒与组培快繁实验九沙棘组织培养实验方案设计及实施实验一培养器皿的洗涤与环境的消毒及培养基母液的配制常用组织培养的玻璃容器及接种用的玻璃器皿如锥形瓶、培养皿、试管、配置培养基用的试剂瓶、烧杯等以及金属的镊子、剪刀、接种铲等，用前必须经过洗涤，有的还要消毒。
一器皿的洗涤方法1.一般玻璃器皿，特别是第一次使用的新的玻璃器皿，首先用清水充分浸泡后用碱水刷洗，然后用清水充分除去碱液，再用无离子水或蒸馏水刷洗干净后烘干或晾干，待用。
检查玻璃器皿是否洗刷干净的标准是：洗后的玻璃器皿沾水后，布满于整个玻璃表面并形成完整的水膜，而不会有不均匀的水珠出现。
当玻璃器皿十分肮脏，带有不同的污渍时，则需要特殊的洗涤液浸泡4-12小时，然后再用清水漂洗干净，较常用的是铬酸洗液，它是用重铬酸钾加入浓硫酸配制而成，其腐蚀性极强，对衣物、皮肤等均十分有害，一般尽量避免使用。
目前生产有各种合成的化学洗涤剂，可清除各种污物，使用方便，是实验室内常用的。
2.金属用具在第一次使用前必需先用四氯化碳或乙醚等有机溶剂将其表面的防锈油擦洗干净，用布擦干方可使用，每次使用后需用水清洗并保持干燥。
二器皿及环境的消毒方法器皿的消毒方法分为：1.物理方法又可细分为：（1）干热消毒法（Dry heat sterilization）：适用于玻璃器皿、金属和一些不怕高温的物品，如培养皿、锥形瓶、各种试剂瓶、刀、剪、镊子等。
一般在150℃烘箱内烤2-3小时，在消毒灭菌前将所要消毒的物品包装于固定容器或耐热的包装材料内（如饭盒、培养皿灭菌筒、铝箔纸等），防止在使用前的再次污染。
（2）湿热消毒法（Wet heat sterilization）：不能用干热消毒的物品，如配置好的培养基、易燃的棉花、工作服、口罩等，要使用高压灭菌锅，通过水蒸气压达到灭菌消毒的目的，常用气压为15磅或1.2kg/cm2，温度为121-124℃，灭菌20分钟即可达到杀灭细菌、消毒的目的。
植物组织培养实验指导
植物组织培养实验指导《植物组织培养实验指导》《植物组织培养实验指导》的相关说明一、本指导用于《植物组织培养概论》课程的实验教学。
二、各专业班级根据实际情况做相应调整，调整情况详见各专业班级的授课计划。
其中15个课时的内容调整如下：实验一、二、五3学时实验六 3学时实验七 3学时实验九、实验十二 3学时实验十三 3学时实验一实验室基本设备及其用途的识别一、目的认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与作用方法。
二、实验室的基本结构（一）化学实验室（工作室）培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析；制蒸馏水。
设备、药柜、工作台、蒸馏水器、天平、冰箱，手提高压消毒锅、显微镜、解剖镜、各种玻璃仪器、金属仪器等。
安装水、电、排气等装置。
（二）接种室①无菌操作室②接种箱③超净工作台（三）培养室（四）洗涤、消毒室；卧式高压消毒锅。
（五）温室（培养大棚）。
实验二常用仪器、必要器皿、几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制一、目的认识植物组织培养必需的仪器、器皿，几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制。
二、常用仪器1.蒸馏水器（学习操作）2.手提式高压消毒锅、卧式高压消毒锅（学习使用、操作）3.天平⑴药物天平（工业天平）、粗天平、（精密度1/10）⑵扭力天平（精密度1/100）⑶分析天平（精密度1/10000）4.超净工作台（学习、使用、操作）5.电热干燥箱（烘箱）6.恒温光照培养箱（学习、操作）7.电冰箱8.显微镜和解剖镜①手提式解剖镜（学习、使用、操作）②立体解剖镜③普通显微镜9.旋转培养机10.离心机（学习、使用、操作）11.酸度测定仪：⑴精密PH4－7试纸；⑵笔型袖珍酸度计。
三、必要的器皿（一）玻璃器皿1.培养器皿①试管②三角烧瓶（锥形瓶）③圆形高形培养瓶（罐头瓶）④培养皿⑤扁身培养瓶⑥L型和T型管⑦凹面载玻片2.盛装器皿①试剂瓶②烧杯3.计量器皿①量筒②容量瓶③吸管4.其它器皿滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。
植物组织培养实验教案
一、教案基本信息1. 课程名称：植物组织培养实验教案2. 课程类型：实验课3. 课时：2课时4. 年级：八年级5. 学科：生物二、教学目标1. 让学生了解植物组织培养的基本概念和原理。
2. 培养学生运用实验方法探究植物组织培养的能力。
3. 提高学生对生物技术的认识，培养学生的创新意识和实践能力。
三、教学内容1. 植物组织培养的定义和意义。
2. 植物组织培养的基本原理。
3. 植物组织培养的步骤和操作方法。
4. 植物组织培养的应用实例。
四、教学重点与难点1. 教学重点：植物组织培养的基本原理、步骤和操作方法。
2. 教学难点：植物组织培养过程中条件的控制和实验操作技巧。
五、教学过程1. 课前准备：教师准备植物组织培养实验所需的材料和仪器。
2. 导入新课：介绍植物组织培养的基本概念和意义，激发学生的兴趣。
3. 讲解原理：讲解植物组织培养的基本原理，让学生理解其科学依据。
4. 演示实验：教师演示植物组织培养的实验步骤和操作方法，强调注意事项。
5. 学生实验：学生分组进行植物组织培养实验，教师巡回指导。
6. 总结拓展：总结植物组织培养实验的原理和操作要点，引导学生思考植物组织培养在生产生活中的应用。
六、教学评价1. 学生实验报告的质量：评估学生在实验过程中的观察、操作和分析能力。
2. 学生课堂表现：评估学生在课堂上的积极参与程度、提问和回答问题的能力。
3. 学生作业完成情况：评估学生对课后作业的认真程度和思考深度。
4. 学生小组合作能力：评估学生在实验过程中的团队协作和沟通能力。
七、实验材料与仪器1. 植物材料：选择具有良好再生能力的植物组织，如茎段、叶片等。
2. 培养基：含有植物激素、营养物质和抗生素的培养基。
3. 容器：无菌培养瓶、三角瓶等。
4. 仪器：显微镜、消毒器、恒温培养箱、移液器等。
八、实验步骤与操作方法1. 准备材料：选择健康的植物组织，切割成适当大小，进行消毒处理。
2. 制备培养基：按照配方配制培养基，分装到培养瓶中。
植物组织培养实验教案
一、实验背景植物组织培养技术是一种在无菌条件下，将植物的茎尖、茎段或叶片等切成小块，通过人工方法在特制的培养基上进行培养，使其逐渐发育成完整植物体的技术。
本实验旨在让学生了解植物组织培养的基本原理，掌握实验操作技能，培养学生的创新意识和实践能力。
二、实验目的1. 了解植物组织培养的基本原理及应用。
2. 掌握植物组织培养实验的操作步骤。
3. 培养学生的创新意识和实践能力。
三、实验材料与仪器1. 材料：植物茎段、叶片、茎尖等；培养基；植物激素；消毒剂等。
2. 仪器：无菌操作台、高压蒸汽灭菌锅、培养皿、移液器、解剖刀、镊子、滤纸等。
四、实验步骤1. 准备实验材料：选取健康的植物茎段、叶片或茎尖，去除杂质，清洗干净。
2. 消毒：将实验材料用70%酒精浸泡30秒，再用无菌水清洗，用消毒剂处理1-2分钟。
3. 切割材料：用解剖刀将消毒后的实验材料切割成适当大小的小块。
5. 培养：将接种后的培养皿放入培养箱中，控制温度、光照等条件，进行培养。
6. 观察与记录：定期观察植物组织的生长状况，记录实验现象。
五、实验注意事项1. 实验过程中需严格无菌操作，避免污染。
2. 切割材料时要注意刀片的消毒和更换。
3. 培养过程中要定期观察，调整培养条件。
4. 实验结果可能存在差异，要注重数据分析与讨论。
教案编写仅供参考，具体实验操作请根据实际情况进行调整。
祝实验成功！六、实验拓展1. 探索不同植物激素对植物组织培养的影响。
2. 尝试用植物组织培养技术繁殖难生根或珍贵植物。
3. 研究植物组织培养在基因工程中的应用。
七、实验报告要求1. 描述实验材料、仪器和实验步骤。
2. 记录实验现象和结果。
3. 分析实验结果，探讨可能的原因。
4. 提出实验中存在的问题及改进措施。
八、实验评价1. 评价学生对植物组织培养原理的理解。
2. 评价学生对实验操作的熟练程度。
3. 评价学生对实验现象的观察与分析能力。
4. 评价学生在实验过程中的团队合作精神。
植物组织培养实训指导书
植物组织培养实训指导书《植物组织培养技术》是生物技术及应用专业的工学结合核心课程之一。
本课程采取“项目引领，任务驱动”的教学模式，使学生掌握植物组织培养技术的职业知识和职业技能，能够在实际工作中具备实验方案设计能力、培养基制备能力、无菌操作能力、组培苗驯化移栽能力及组培苗工厂化生产能力。
实训一：实训室的灭菌与玻璃器皿的清洗一、目的要求1.通过实训，使学生了解各种洗涤液的特性；2.掌握酸液的配制方法和组织培养中常用器血的洗涤技术；3.通过实训，培养学生良好的卫生习惯，建立组织培养的无菌意识；4.会配制新杰尔灭溶液。
二、材料用具1.灭菌用具：2%新洁尔灭、高镒酸钾、甲醛、70%酒精、洗涤剂、各种培养血、工作服、口罩、手套、试管刷。
2.洗涤用具：肥皂液、洗衣粉、重铬酸钾粉末、1%HCL、70%酒精、瓶刷等。
三、方法步骤（一）培养室的灭菌1、地面、墙面和工作台的灭菌2、无菌室和培养室的灭菌（二）玻璃器皿的洗涤（酸洗）玻璃器血的洗涤一般要经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。
重铬酸钾洗涤（三种）液配制：重铬酸钾508，加工蒸馏水，加热溶化，冷却后再缓缓加入工业浓硫酸90ml。
1、新玻璃器血的洗涤用1%HCL的溶液浸泡一昼夜，再用清水反复洗涤，最后用蒸馏水冲淋一遍，干燥后备用。
2、用过的玻璃器血先将器血中得残留物质除去，用清水冲洗，再用洗衣粉洗涤，最后用清水冲洗3—4遍，把字迹擦洗干净，干燥后使用。
3、污染的培养瓶的处理首先经高压蒸汽灭菌，再按（2）的步骤洗涤。
4、用过的吸管、滴管、容量瓶先放在重铬酸钾溶液浸泡2h以上，取出后经流水冲洗30min左右，干燥后使用。
四、实训报告①.植物组织培养室的灭菌方法步骤。
②.写出洗涤液的配置步骤。
③.记录各种培养瓶的洗涤方法。
实训二：组织培养工厂的设计一、目的要求通过实训，使同学们对现代组培苗生产模式有一个更为深刻的认识，能熟练的根据生产规模设计合理的厂房及工艺流程。
二、材料用具组培苗生产小工厂、绘图纸、绘图笔三、方法步骤（-）组培工厂的参观1.参观组培实验中心2.组培工厂的组成：准备室、灭菌室、缓冲室、无菌室、培养室、驯化室3.各室内仪器设备的种类及摆放（二）设计一 200m2组培工厂，要求给出大概的布局图。
植物组织培养实验指导
《植物组织培养》实验指导教师：任峻目录实验一参观植物组织培养实验室实验二培养基母液配制实验三培养基配制与灭菌实验四植物快速繁殖培养实验考核一、课程的性质与任务植物细胞工程实验技术一般包括植物细胞组织离体培养技术、细胞融合技术、细胞拆合技术、外源基因转移技术等一系列重要的基础技术。
通过实验课程的学习，实验方法立足于初学者的专业基础和一般实验室的条件，将《植物细胞组织培养技术》课程的理论知识、一般的实验技能和科学研究的初步方法融为一体。
培养学生理论联系实际、独立思考及实践动手能力。
二、实验的目的与基本要求通过本课程的学习使学生掌握植物细胞工程技术的基本原理和实验操作方法，掌握植物细胞体外培养技术，结合科研和生产实际，提高学生分析问题、解决问题的能力。
以适应今后在教学、科研和生产开发等各方面对当代生命科学人才知识结构的需求。
在实验教学过程中，要求学生学习态度严谨，操作动作规范，观察记录耐心细致，独立思考，综合分析实验结果，充分理解后认真地完成实验报告。
09本《植物组织培养》实验考核一、考核方式：实验操作。
二、考核时间：三、考核地点：四、监考教师：实验考核以实验操作形式进行，根据实验4或实验5实验的实验结果（失败或成功）决定实验方案，如果失败，分析失败原因，提出改进措施，在重做中进行实验操作考核，如果成功则继续下一步的实验，实施实验操作考核。
二．考核办法：考核方法主要观察学生的实验操作是否正确，污染率是否高，并要求学生写出实验报告，总结实验中常出现的问题。
在3个课时内小组协作完成实验内容。
包括以下几个方面：1．对实验仪器设备的选择及操作。
湿热灭菌操作过程；无菌操作过程。
2.培养基的配制试剂的配制；母液的移取；实验配方计算。
3.培养条件的设置。
4.实验报告的规范性与科学性。
实验一 参观植物组织培养实验室一、实验的目的和要求掌握植物组织培养实验室的设计要点和必备的仪器设备。
二、实验内容：1. 植物组织培养实验室的设计要点。
《植物组织培养》实践教学指导书教程
《植物组织培养》实践教学指导书目录实验实训部分实验一植物组织培养实验室及常用仪器设备的构造及使用实验二无菌操作技术（选做）实验三接种训练实验四组培苗的移栽驯化实验五试管苗的转接与扩繁（选做）实验六生根培养（选做）实验七胡萝卜离体根的培养（选做）实验八茎尖的组织培养（选做）实验九茎段的组织培养实验十百合鳞茎的组织培养（选做）实验十一叶片的组织培养（选做）实验十二花药培养实验十三西葫芦子房的培养（选做）实验十四苹果胚（embryo）培养（选做）实验十五黄瓜下胚轴愈伤组织的诱导（选做）实验十微茎尖的剥离训练专业实训部分实训一培养基的制作实训二器官培养技能实训三果树、蔬菜、经济类植物组织培养一、果树类组织培养（一）苹果的组织培养（二）草莓微茎尖培养（三）枣的组织培养（四）树莓的组织培养二、蔬菜类组织培养（一）芦笋的组织培养（二）无籽西瓜的组织培养（三）大蒜的组织培养（四）马铃薯组织培养三、经济类组织培养（一）香石竹的组织培养（二）菊花茎段的组织培养（三）菊花微茎尖的组织培养（四）唐菖莆的组织培养（五）串红的组织培养（六）蝴蝶兰的组织培养附1：观看组织培养实验室和组培工厂化生产的录像或课件附2：组培技能考核标准实验实训部分实验一植物组织培养实验室及常用仪器的构造及使用一、目的要求（一）一般掌握组织培养常用仪器设备的结构与维护；（二）熟练掌握常用仪器设备的正确使用方法。
二、常用仪器设备分析天平；灭菌器；蒸馏水器等。
三、方法步骤（－）岛津进口电子分析天平的构造及使用1．构造：岛津进口电子分析天平主要由：天平机体、称重舱、天平盘、键板（包括4个键）、液晶显示屏等构成。
2．使用：（1）调平天平放稳后，转动脚螺旋，使水平气泡在水平指示的红环内；（2）自检在空载下，天平内部进行自检，显示屏上相继显示CHE3→0，CAL4→0，CAL，END，CAL，OFF；（3）全显示按“ON／OFF”键，液晶屏进入全显示态；（4）这时再按“ON／OFF’键，液晶屏进入预热状态，有绿色指示灯显示。
植物组织培养技术实验指导
二、实验内容1．配制洗涤液。
2.分类洗涤：新购置的玻璃器皿的洗涤，使用过的玻璃器皿的洗 涤，污染瓶的洗涤，移液管、容量瓶、量筒等量具器皿的洗涤。
三、实验器材与试剂
（一）器材 具体包括：待洗的移液管、吸管、量筒、量杯、容量瓶等量具； 新购和用过的培养皿、 璃器皿；污染瓶（管） 筐等。
作用：常用以浸洗除去普通油污，通常需要用热的溶液。黑色焦 油、硫可用加热的浓碱液（如浓NaOH）溶液洗去。
2.重铬酸钾-硫酸洗液
称取重铬酸钾40gT慢慢加入约50C的80~100ml蒸馏水中，边
搅拌边让它溶解（为了加速溶解，还可加热到约95C）7待稍冷却
后7加入工业用浓硫酸900~1000ml（用玻璃棒引流），刚开始加入时， 速度要缓慢（因为浓硫酸会迅速释放出溶解热，导致溶液激烈沸腾， 甚至会溅到脸上， 烫伤皮肤）7待倒入的浓硫酸不再激烈沸腾和冒浓 雾时，就可加速倒入浓硫酸7搅拌均匀7装瓶7贴上标签。
5.碱性高锰酸钾洗液
取4g高锰酸钾溶于少量水后，加入100ml10%的NaOH溶于混 匀后装瓶备用。
该洗液呈紫红色， 有强碱性和氧化性，能浸洗去除各种油污。洗 后若仪器壁上面有褐色二氧化锰， 可用盐酸、 稀硫酸或亚硫酸钠溶液 洗去。
该洗涤液与重铬酸钾-硫酸洗液一样，可反复使用若干次，直至 碱性及紫红色消失为止。
6.1mol L-1盐酸溶液
用1mol L-1盐酸溶液即可除去附在容器底部或壁上的铁锈、二氧 化锰、碳酸钙等物质。
（二）分类洗涤 根据洗涤对象不同，需分类洗涤。
1.移液管、吸量管、小量筒和容量瓶的洗涤 将小量筒和容量瓶灌满重铬酸钾-硫酸洗液，或将吸量管、移液 管浸泡在重铬酸钾-硫酸洗液中7第二天用竹夹子取出，或将容量瓶 和小量筒中的重铬酸钾-硫酸溶液倒回到洗液瓶中7流水冲洗这些玻 璃器皿至洁净7用蒸馏水冲洗1~3次，然后将吸量管、 量筒等分别倒
植物组织培养技术实验指导书
《植物组织培养技术》实验教学准备工作一、配制母液所需药品、器材1、 Ms成分19种（N6同）2、蔗糖3、琼脂4、激素（NAA、6-BA、IBA、IAA、KT、ZT等）电子天平、（试管）、容量瓶、烧杯、称量瓶、吸水纸、角匙、母液瓶（棕色）、蒸馏水二、无菌室所需物品1、95%酒精、70%酒精、新洁尔灭、甲醛、高锰酸钾、紫外灯、工业酒精2、枪式镊子（16 cm,20cm）、尖镊（16cm）、解剖刀、柄、接种针、手术剪、喷雾器、药棉、纱布、火柴• 3、广口瓶若干、酒精灯、漏斗、无菌培养皿三、学生配制培养基、分装、高压灭菌所需器具1、培养瓶（PP,120ml三角瓶）(15mm*145mm试管)2、电炉3、烧杯（1000ml）移液管（ 10ml、5ml、2ml、1ml）、吸球4、量筒（100ml、50ml）、角匙、天平、剪刀、吸水、纸5、pH值精密试纸（5.4-7）6、氢氧化钠、盐酸（1N）、蒸馏水、牛皮纸、棉绳7、试剂瓶、（激素、酸碱）、滴管、标签、玻棒四、消毒剂（处理外植体）升汞（氯化汞）、酒精、漂白粉、双氧水、次氯酸钠实验一、 Ms培养基的配制、分装和灭菌植物组织培养的成功与否，除培养材料本身的因素外，第二个因素就是培养基。
应根据培养植物的种类和部位，选择适宜的培养基。
另外植物组织培养是在无菌条件下培养植物的技术。
要达到无菌操作和无菌培养，必须有一定的无菌环境（高压灭菌，无菌室，超净工作台等），使用无菌的容器和用具，进行无菌操作，使培养的植物材料在一定的温度、湿度、光照、营养条件下，生长、发育和繁殖。
一、目的要求学习常用培养基母液的配制方法、培养基的分装和灭菌技术二、实验用品1、仪器•高压灭菌锅、天平、电炉2 、玻璃器皿•烧杯、量筒、移液管、、玻棒、吸球、培养瓶、培养皿、500ml三角瓶、角匙、吸水纸3、药品与试剂•Ms母液（见表1-1）氢氧化钠1N、盐酸1N、蔗糖、琼脂、2，4-D（1mg/ml）、NAA（1mg/ml）、蒸馏水三、实验方法（一）、培养基的配制配制培养基前要先配制母液。
植物组织培养实验指导
植物组织培养实验指导一、材料与设备准备1.植物材料：选择符合实验要求的植物组织，如茎段、叶片等。
2.吐温20：用于表面消毒材料。
3.植物生长调节剂：包括激素和营养成分等。
4.植物培养基：选择适合所培养植物组织的培养基。
5.培养器具：试管、蒸馏水瓶、烧杯等。
6.其他辅助材料：包括消毒用酒精、无菌操作需要的洁净衣和手套等。
二、无菌操作准备1.操作台面准备：清洁操作台面，并用75%酒精消毒，然后用紫外线灯照射30分钟。
2.实验者准备：穿戴洁净衣、口罩和手套，洗手并用75%酒精消毒双手。
3.工具准备：将试管、蒸馏水瓶等器具洗净，并用高温高压消毒或用离子蒸汽灭菌器进行灭菌。
三、无菌茎段培养实验步骤1.材料准备：选择健康的植物茎段，将其切成1-2厘米长的小段，洗净并去除表皮。
2.表面消毒：将茎段放入含有0.1%吐温20的蒸馏水中浸泡15-30分钟，再用无菌蒸馏水冲洗3-4次。
3.培养基制备：按照特定比例和配方制备适合茎段培养的培养基。
4.培养基固化：将培养基倒入试管中，约3/4满，然后用高温高压或离子蒸汽灭菌器进行灭菌，同时密封试管。
5.培养基接种：将消毒后的茎段放入培养基中，约每个试管放入1-2个茎段。
6.培养条件设置：将培养瓶在适宜的光照和温度条件下培养，通常为25摄氏度，光照强度为3000-5000勒克斯，光周期为16小时光照和8小时黑暗。
四、观察和记录1.培养基观察：每隔一段时间，观察培养基的颜色变化、植物组织的生长情况等，并记录下来。
2.茎段生长观察：观察茎段的生长情况，包括根的生长情况、叶片形态等，并记录下来。
五、结果分析与总结根据观察和记录的数据，分析植株生长的情况、比较不同处理之间的差异等，并对实验的结果进行总结和讨论。
六、安全注意事项1.在操作过程中要严格遵守无菌操作要求，避免细菌、霉菌等的污染。
2.注意使用化学试剂时的安全操作，避免直接接触皮肤和吸入有害气体。
3.实验完成后，洗手消毒，清洁操作台面，并关闭紫外线灯。
植物组织培养实验指导
实验一培养基母液的配制一、目的要求通过对MS培养基母液的配制，学习掌握培养基母液配制方法。
二、说明在配制培养基时，为了取用方便和提高各种药品称量的准确性，往往先把各组成成分按其需用量配成扩大一定倍数的浓缩液，即母液贮存备用，用时稀释。
配制母液时，一般按药品的种类和性质分别配制，单独保存或几种混合保存。
如把所有大量元素配在一起，配成大量元素母液，把微量元素放在一起配成微量元素母液，以及单一的维生素、铁盐、植物激素等母液。
母液扩大的倍数主要取决于用量的多少，用量大的扩大的倍数宜低，反之则高，但要注意过高浓度和不恰当的混合会引起沉淀，影响培养效果。
三、仪器和药品电子天平1/1000、1/10000。
药品按MS培养基配方准备。
激素按需要准备。
四、方法和步骤一）、大量元素母液：因大量元素用量大，为避免过高浓度的混合液会发生沉淀，一般配成10倍的母液。
根据所选培养基配方，按大量元素在表中排列顺序，以其10倍用量用1/1000天平逐个称出，按次序加入盛有蒸馏水的烧杯中，并搅拌。
注意每种溶解后，再加下一种。
原则上应注意把Ca2+与SO4-PO4错开，以免产生沉淀，最后加蒸馏水定容至刻度，此即大量元素母液。
配培养基时，每配一升，取母液100ml。
二）、微量元素母液：微量元素因用量小，为称量方便及精确，常配成100倍或1000倍的母液，即将每一种微量元素化合物的量扩大100倍或1000倍，分别称量、溶解、定容，方法向上。
配1升培养基取母液10ml或1ml。
本实验配成100倍。
三）、铁盐铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可。
目前常用的铁盐为FeSO4· 7H20，由于在使用过程中容宜产生Fe（OH）3沉淀，一般先将其配成螯合物。
常配成100倍称取FeSO4· 7H2O，Na2-EDTA，分别加热溶解，然后混合、定容，或混合后加热，至呈黄色，定容。
每配制1升用10ml。
植物组织培养实验指导
《植物组织培养实验指导》万志兵黄山学院生命与环境科学学院林学教研室2010.09目录学生实验守则 (1)组织培养实验室安全守则 (1)实验一植物组织培养实验室的参观与设计 (2)实验二培养器皿的洗涤 (2)实验三植物组织培养中常用设备和仪器的使用 (4)实验四植物组织培养基母液的配制和保存 (7)实验五植物组织MS培养基的配制 (9)实验六培养基和培养用具的灭菌 (12)实验七外植体的选择与初代培养 (13)实验八植物离体培养物的形态观察 (14)实验九植物离体培养物的继代培养操作技术 (15)实验十植物离体培养物的生根培养操作技术 (16)实验十一试管苗的驯化、移栽和管理 (17)实验十二植物茎尖剥离与观察 (18)实验十三汁液涂抹法病毒检测 (19)实验十四植物离体根培养 (20)实验十五花器官的剥离与观察 (21)实验十六花粉发育时期的鉴定 (22)实验十七花药培养 (23)实验十八小孢子培养（花粉培养） (24)学生实验守则一、自觉遵守纪律和各项规章制度，保持室内安静，注意环境卫生，不吸烟、不随地吐痰、不乱扔纸屑杂物，爱护公务。
二、实验过程中应严肃认真，严格遵守操作规程。
贵重、精密仪器的使用须在专人指导下进行。
三、爱护实验仪器设备，厉行节约。
仪器若有损坏，应如实报告，填写登记表。
凡损坏、丢失的仪器设备，均应查清原因，按仪器设备损坏、丢失赔偿制度处理。
四、实验物品不得随意翻动，严禁携出室外。
若需借用应办理借物手续。
五、注意实验室安全，易燃易爆品的操作应远离火源。
六、实验结束，由实验指导教师和管理人员检查清点仪器设备，学生应办好交接手续，做好清洁卫生，及时关好水电阀门，保持实验室和仪器的清洁整齐。
组织培养实验室安全守则实验室人员在工作的时候，要接触各种微生物、试样及检验过程中的物品，这些物质中有些对人体有毒害作用，有些还具有易燃易爆性质；同时，各种仪器、电器、机械等设备，在使用中也可能存在危险性。
药用植物组织培养实验指导
药用植物组织培养实验指导药用植物组织培养是一种通过组织培养技术繁殖和培育药用植物，得到高品质的药用植物及其次生代谢产物的方法。
其主要适用于稀有药材、难以繁殖和响应慢的植物种类。
药用植物组织培养技术已成为现代生物技术和药学研究领域中的重要一环，对于药用植物资源的保护和开发利用具有广泛的应用价值。
一、实验材料和方法（一）实验材料药用植物：如丹参、黄芪、当归、川芎等。
生长介质：以MS为基本配方加入不同的生长调节剂和其他必需物质。
生长调节剂：如BA、KT、IBA、NAA、GA3等。
其他必需物质：如蔗糖、琼脂、植物营养物、维生素、酪朊、提取液等。
实验器材：量筒、移液吸管、显微镜、培养室、灭菌器、无菌操作台等。
（二）实验方法1.准备组培外植体：将新鲜的植物叶片，茎尖或子实体等外植体按特定的要求分离，清除植物表面的杂质，并切割成一定大小的切片或组织块。
2.预处理外植体：将清洗好的外植体放入含有适当浓度的消毒液中浸泡消毒，消毒后用蒸馏水冲洗干净备用。
3.生长介质配制：根据外植体的特征和培养要求将适量的生长介质和生长调节剂、蔗糖、琼脂等必需物质按比例配制好，并调节酸碱度等参数。
4.外植体接种：无菌条件下将预处理好的外植体移植到含有生长介质的培养瓶中，密封，然后将其置于适宜的培养条件下进行培养。
5.组织培养条件：组织培养的条件主要包括光照、温度、空气等条件的控制。
合适的光照和温度可以促进组织的生长和发育，而适度的通气可以增加培养瓶内的氧气含量，促进外植体的组织培养和生长。
二、实验结果与分析药用植物组织培养实验是一项需要持续观察和分析的过程。
在实验过程中，可以通过比较不同生长介质中的组织生长情况和代谢产物含量，以及观察外植体的形态和组织构造，来分析生长介质和生长调节剂对药用植物的影响。
实验结果显示，不同的生长介质配方和生长调节剂的添加量可以影响到组织的生长和分化。
在以NAA、IBA为生长调节剂的生长介质中，当归外植体的愈伤组织生长情况最佳，而添加GA3和KT可以进一步增加愈伤组织的分化和代谢产物的合成。
植物组织培养实验指导
植物组织培养实验（一）实验名称：参观植物组织培养实验室实验时间：第二周（分组进行）实验地点：植物组织培养实验室专业：生物技术及应用一、实验目的熟悉实验室的构建和掌握各种常用仪器设备的操作方法和使用注意事项。
二、实验仪器设备、药品及试剂高压蒸汽灭菌锅、培养架、超净工作台、1/100电子天平、1/10000电子天平、蒸馏水器、IAA、6-BA、NAA、KT，各种无机盐，有机化合物等。
三、实验内容方法及步骤参观准备室、无菌操作室和培养室，学习使用各种常用仪器。
四、分析与讨论1. 基本的实验室至少要包括准备室、无菌操作室和培养室，另外根据实验的需要可以设立辅助实验室，如细胞学实验室和生化实验室等。
2. 准备室要求宽敞明亮、便于放置多个实验台和相关设备，方便多人同时工作；同时要求通风条件好，便于气体交换；实验室地面应便于清洁，并应进行防滑处理；无菌操作室也叫接种室，进行材料的离体无菌操作，是植物组织培养研究或生产中最关键的一步，要求房间一般不宜过大，封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌；培养室要求能够控制光照、温度，并保持相对的无菌环境.因此，培养室应保持清洁和适度干燥。
植物组织培养实验（二）实验名称：母液的配制实验时间：第五、六周（分组进行）实验地点：植物组织培养实验室专业：生物技术及应用一、实验目的。
掌握各种营养元素和激素母液的配制方法，二、实验仪器设备、药品及试剂（1）实验仪器设备及用具1/100电子天平、1/10000电子天平、蒸馏水器、烧杯、棕色细口瓶、量筒、移液枪、各种规格的定容瓶、100ml、500ml烧杯、标签纸、记号笔等（2）实验药品及试剂IAA、6-BA、NAA、KT，各种无机盐，0.1mol /LNaOH溶液，0.1mol/L HCl溶液。
三、实验方法及步骤1. 20倍大量元素母液的配制。
在电子天平上按MS基本培养基配方扩大20倍分别称取所需要的5钟大量元素药品，分别置于500ml的烧杯中中，加蒸馏水100ml左右，搅拌溶解，然后一一倒入1000ml的容量瓶中（注意CaCl2要后加），最后加蒸馏水定容至刻度，此为20倍液的大量元素母液。
植物组织培养实训指导书
植物组织培养实训指导书班级：园林1421、1521教师：张璐璐实训一植物组织培养室参观与设计一、目的要求通过参观，使学生掌握如何组建植物组织培养实验室；同时，熟悉组培中涉及的各种仪器设备和器皿用具。
二、仪器与用具1 、仪器：超净工作台，空调机，蒸馏水发生器或纯水发生器，高压灭菌锅，低温冰箱、普通冰箱，电炉，显微镜，天平、恒温培养箱，烘箱等设备。
2 、用具：各种培养皿，分注器，各种实验器皿和各种器械用具。
三、方法步骤1 、先由指导老师集中介绍组织培养实验室守则及有关注意事项。
2 、先由指导老师讲解本次实验的目的、仪器设备和器皿用具的名称及实验步骤。
3 、指导老师逐一讲解组培实验室的构建情况，包括准备室（又称化学实验室）、缓冲室、无菌操作室、培养室、驯化室、温室等使用的各种仪器设备和器皿用具的名称用途。
1 ）准备室（化学实验室）面积：20m2 左右用途：器皿洗涤、培养基配置、分装、高压灭菌，植物材料的预处理，重蒸馏水的制备以及进行生理、生化因素的分析，试管苗出瓶，清洗及整理工作。
要求：明亮、通风设备：工作台，橱柜，水池，仪器，药品等2 ）缓冲室面积：约3-5m 2 左右用途：进入无菌室前需在缓冲室里换上经过灭菌的工作服、拖鞋，戴上口罩。
设备：1 盏紫外灯，1 个配电板，石英电力时控器等3 ）无菌操作室（无菌室，接种室）面积：10-20m 2 ，视生产规模和超净工作台数量而定。
用途：材料的灭菌接种，无菌材料的继代，丛生菌的增殖或切割，嫩枝扦插生根等，是关键的部分，关系到培养物的污染率、接种工作效率等重要指标。
要求：干爽安静、清洁明亮、墙壁光滑平整不易积染灰尘，地面平坦无缝便于清洗和灭菌。
门窗要密闭，一般用移动门窗。
设备：超净工作台、空调机，医用小平车，操作台、搁架等。
4 ）培养室面积：视培养架多少及培养物数量而定。
用途：将接种到培养瓶等器皿中的植物材料进行培养的场所。
设备：①培养架与灯光培养架数目多少视生产规模而定，年产4万—10万苗需4—6个培养架；年产10万—20万苗约需8—10个培养架。
植物组织的实验报告
一、实验目的1. 掌握无菌操作的植物组织培养方法；2. 通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法；3. 通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织，学习愈伤组织的建立方法；4. 了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育，最终长成完整再生植株的过程，加深对植物细胞的全能性的理解。
二、实验原理植物组织培养是一种在人工条件下，利用无菌操作使植物器官、组织或单个细胞继续生长、分化和发育成完整植株的技术。
其基本原理包括以下几个方面：1. 脱分化作用：在植物组织培养过程中，原本已分化停止生长的细胞在特定的培养基和激素条件下，可以重新进入分裂状态，形成没有特定组织结构的愈伤组织。
2. 再分化作用：经过脱分化形成的愈伤组织，在特定的激素和培养基条件下，可以重新分化形成具有特定功能的组织，如输导组织、根和芽等。
3. 植物细胞的全能性：植物细胞具有全能性，即每个细胞都含有该植物的全部遗传信息，在一定条件下可以发育成完整的植株。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：豌豆根、茎、叶2. 试剂：MS培养基母液、乙醇、IAA或2,4-D、HgCl2（或次氯酸钠）、6-BA、蔗糖、琼脂等四、实验步骤1. 无菌操作：在超净工作台中进行实验操作，确保操作过程中无污染。
2. 外植体准备：将豌豆根、茎、叶分别剪成约1cm长的切段，用70%乙醇消毒30秒，再用无菌水清洗3次。
3. 培养基配置：根据实验需求配置MS培养基母液，并按照实验步骤进行分装、灭菌。
4. 愈伤组织诱导：将消毒后的外植体接种到愈伤组织诱导培养基中，置于培养箱中培养。
5. 愈伤组织观察：定期观察愈伤组织的生长情况，记录愈伤组织的形成、生长和分化过程。
6. 再分化培养：当愈伤组织生长到一定阶段时，将其接种到再分化培养基中，培养至形成芽和根。
7. 植株再生：待芽和根生长到一定长度后，将其移栽到土壤中，观察植株的生长情况。
五、实验结果与分析1. 在愈伤组织诱导过程中，豌豆根、茎、叶均能成功诱导出愈伤组织，愈伤组织呈白色、致密、颗粒状。
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植物组织培养实验指导2013.3附录培养基母液的配制（实验老师准备）一、实验目的：掌握培养基母液配制的方法。
二、实验原理：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。
另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。
三、实验器具与药品：电子分析天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。
配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。
植物生长调节物质，2,4-D, NAA, 6-BA等。
四、培养基母液的配制过程首先，按下表“MS培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。
（1）MS大量元素母液的配制按照MS培养基配方的用量扩大20倍，将大量元素配制成20倍的母液。
配制时先用量筒量取蒸馏水800ml，放入1000ml的烧杯中，依次分别称取KNO3 38g; NH4NO3 33g, MgSO4·7H2O 7.4g, KH2PO4 3.4g, CaCl2·2H2O 8.8g，按顺序先后倒入烧杯中，用玻璃棒搅动，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入1000ml的容量瓶，用蒸馏水定容至1000ml,然后，倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
配制培养基时每升MS培养基吸取该母液量为50ml。
（2）MS微量元素母液的配制将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍，用电子天平分别依次称取MnSO4·4H2O 22.3g，ZnSO4·7H2O 8.6g , H3BO3 6.2g，KI 0.83g，Na2MoO4·2H2O 0.25g，CuSO4·5H2O 0.025g，CoCl2·6H2O 0.025g，并用重蒸水逐个溶解，待全部溶解用容量瓶定容后，装入1000ml倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
配制培养基时每升MS培养基吸取该母液量为1ml。
( 3 ) 铁盐母液的配制在电子天平上准确称量 2.78g硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)和3.73g乙二胺四乙酸钠(Na-EDTA),分别倒入盛有400ml蒸馏水的烧杯中，微加热并不断搅拌使之全部溶解。
将两种溶液倒入同一个1000ml的容量瓶中，混合均匀后，用蒸馏水定容至1000ml，并倒入棕色磨口试剂瓶中，经室温放置一段时间令其充分反应后，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
如果将新配制的铁盐母液立即放入冰箱中。
则会容易形成沉淀。
配制培养基时，每配制1000ml MS培养基吸取此母液10ml。
( 4 )MS有机母液的配制用电子天平依次称取：肌醇（环己六醇）5000mg，盐酸硫胺素（维生素B1）5mg，烟酸25mg，甘氨酸100mg，盐酸吡哆醇（维生素B6）25mg，用蒸馏水依次溶解并定容后，装入500ml的磨口瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名，置于4℃冰箱保存备用。
配制培养基时，每配制1LMS培养基吸取该母液10ml。
（5）植物生长物质母液的配制⑪ 2,4-D母液：准确称量2,4-D 50mg，先用1~3ml90%乙醇完全溶解后，加蒸馏水定容；也可以用少量碱（如1mol/氢氧化钾、氢氧化钠）溶液，使之中和成为钠盐或钾盐，在水中溶解，再加水定容至100ml，即配成浓度为500ml/L的母液。
贴上标签，注明名称、浓度和配制日期，放入4℃冰箱保存。
NAA母液的配制过程与2,4-D相同。
⑫6-BA母液：准确称量50mg 6-BA，加入少量碱溶液（如1mol/氢氧化钾、氢氧化钠）或稀碱液（1mol/L盐酸）溶液使之完全溶解后，加蒸馏水定容至100ml，即配制成浓度为500mg/L的6-BA的母液。
转入磨口试剂瓶中，并贴上标签，注明母液名称、浓度和配制日期，放入4℃冰箱保存备用。
五、注意事项在配制大量元素母液时，混合、溶解各种无机盐时要注意先后顺序，尽量把Ca2+，SO42-,PO43-等离子错开分别溶解，同时稀释浓度要大些，并要慢慢地边混合边搅拌。
实验一MS培养基的配制与灭菌一、实验目的：学习用母液法配制MS培养基以及掌握培养基灭菌的方法及操作过程。
二、实验原理：组织培养所用的培养基含有植物细胞生长所必需的各类营养物质，同时也是各种细菌、真菌滋生繁殖的极好场所。
因此必须对培养基进行灭菌处理，一确保无菌操作的顺利进行。
三、实验器材及试剂：①器材：电子天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）药勺、称量纸、玻璃棒、移液管（10ml, 5ml, 2ml, 1ml,0.5ml,0.2ml）、电炉（1000W）、石棉网、吸耳球、酸度计或pH试纸（5.0~7.0）、三角瓶（50ml,100ml）或果酱瓶、耐高温高压的专用封口膜、线绳、冰箱、手提式消毒灭菌锅或卧式电压力灭菌锅②试剂：蔗糖、琼脂、活性炭、1M HCl、1M NaOH；2,4-D、6BA等植物激素母液及MS基本培养基母液。
四、实验步骤（1）培养基的配方本次实验分成三组，每组配制一种培养基，各组所配制的培养基如下：A 胡萝卜块根愈伤组织诱导培养基：MS+2,4-D（1mg/L）+蔗糖（30g/L）+琼脂（8g/L）pH6.0配制1-1.5L用小果酱瓶分装30-35瓶，另：需要无菌水每人两瓶（大果酱瓶）、纱布5块、碟子每人一个（30-35个），用报纸包好一同灭菌。
B 香蕉芽的继代生芽培养基：MS+6BA（5mg/L）+IBA（0.1mg/L）+蔗糖（30g/L）+琼脂（8g/L）pH6.0配制2-2.5L用小果酱瓶分装60-65瓶，即每人两瓶，另：需要纱布5块、碟子每人一个（30-35个），用报纸包好一同灭菌。
C 香蕉芽苗的生根培养基：1/2MS+蔗糖（30g/L）+琼脂（8g/L）+活性炭（1g/L）pH6.0配制1.5L用大果酱瓶分装30-35瓶，另外：纱布5块，碟子每人一个（30-35个），用报纸包好一同灭菌。
（2）培养基的配制①称取母液：首先，将所需的各贮存母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿，量筒、烧杯、移液管、玻璃棒等放在相应的位置。
然后，根据所需配制的培养基用量，按照下面的公式及所需的各种母液的扩大倍数，分别计算需吸取各母液的数量（ml）。
吸取量=需要配制培养基的体积×需要配制浓度/母液浓度②培养基定容：取1L大烧杯一只，用量筒或移液管分别吸取各母液（注：各母液移液管不能混用）。
倒入500ml蒸馏水，然后准确称量琼脂及蔗糖，最后定容至1L。
③调节pH值：用1mol/LHCl或1mol/LNaOH将培养基pH值调节至5.8~6.0。
用酸碱调节pH值时，应用玻璃棒不断搅拌后，再用pH试纸或pH计测试培养基的pH值。
然后放在电炉或微波炉内煮沸，待琼脂完全溶化。
④分装：将培养基分装入相应的果酱瓶中，每瓶大约20~30ml，盖上盖子，贴上标签。
用记号笔注明培养基名称、配制时间及配制者姓名，待灭菌用。
⑤培养基的灭菌：把分装好的培养基及其他需灭菌的各种器具和蒸馏水等，放入灭菌锅的消毒桶中，放入锅中。
（3）培养基的灭菌步骤：利用卧式高压灭菌锅的灭菌步骤，整个过程大概需要2个小时，按以下步骤操作：①设定压力为0.11Mpa，温度为121℃②三开（开出气阀、进水阀、外红阀）③注水（开水龙头）至离进水显示柱高端1cm左右④三关（关出气阀、进水阀、外红阀）⑤打开电源开关，通电⑥夹层压力在0.1Mpa以下可以将培养基和无菌水等需要灭菌的物品放入灭菌室⑦夹层压力达到0.1Mpa时打开夹层与灭菌室的开关⑧夹层与灭菌室同事升温升压，如停止不升温可以手动打开放气阀再放气3~5分钟，待冷空气全部排净就可以升温升压，待达到0.1Mpa、121℃时，灭菌锅会自动保温不会继续升温与升压，这时开始计时15~20分钟，（培养基灭菌需要15~20分钟、无菌水需要20~30分钟）⑨时间到，关闭电源，可以慢慢打开出气阀放气⑩待温度与压力下降，80℃以下时可以将培养基与无菌水等移出灭菌锅备用五实验结果：一周后观察试验结果，描述培养基是否凝固及状态、颜色，如果实验失败（培养基不凝固）请分析原因，并自己找时间重新配置。
六思考题：1.培养基配置过程中应注意哪些因素？培养基为什么要煮沸后再分装？2.调节pH值应该调高0.2-0.3个单位，为什么？3.什么因素影响培养基的凝固？灭菌锅的应用应该注意哪些方面？实验二外植体的消毒及其愈伤组织的诱导一、实验目的：通过实验，初步掌握外植体材料的消毒、接种的无菌操作技术以及外植体愈伤组织的诱导方法。
二、实验原理：植物组织培养是应用无菌操作的方法培养离体植物器官或组织、甚至单个细胞的过程，如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择合适的消毒剂对植物外植体进行表面消毒，获得无菌材料去进行组织培养，这是取得组织培养成功的最基本的前提和保证。
由于植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上，通过脱分化，形成一种能迅速增值的无特定结构和功能的细胞团—愈伤组织，而植物生长调节剂2,4-D是诱导外植体形成愈伤组织的重要影响因素，本实验采用MS培养基添加2,4-D来诱导胡萝卜的愈伤组织。
三、实验材料、试剂及器具①材料：新鲜的胡萝卜块根②试剂及培养基：0.1%HgCl2（剧毒！小心使用）、75%乙醇、无菌水胡萝卜块根愈伤组织诱导的培养基：MS+2,4-D（1mg/L）+蔗糖（30g/L）+琼脂（8g/L）pH5.8-6.0③器具：超净工作台、酒精灯、烧杯、镊子、剪刀、解剖刀、无菌水吸水纸、标签纸、记号笔四、实验步骤：①接种前，将培养基及接种用具放入超净工作台台面，打开超净工作台紫外灯，照射约20~30min，然后开送风开关，之后关闭紫外灯，通风10min后，在打开日关灯。
用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面，点燃酒精灯，镊子和解剖刀在酒精灯火焰上炽烧片刻，待冷却后即可进行外植体的消毒和接种。
②将胡萝卜块根在自来水下冲洗干净，用解剖刀切去外围组织，切成小块分别置于100ml烧杯中，用75%酒精浸泡30S后，移入0.1%氯化汞溶液浸泡10min，然后在超净台内用无菌水冲洗4次，沥干水后，置于灭菌处理过的碟子中，用灼烧后的镊子和解剖刀将胡萝卜形成层部分横纵切成0.5cm2的小块。