食品质量安检测技术W3302NY761与均质法提取农残比较-微教材

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《农产品/食品质量安全检测技术》课程-微教材

知识讲解

一、NY761提取农残的典型操作

试样中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类农药、氨基甲酸酯类农药用有机试剂乙腈提取，提取液再经过滤、浓缩、净化后，最后用GC进行检测。提取过程中，加入氯化钠形成饱和盐水，与乙腈的极性差距变大，使水相和乙腈相分离开来。典型的操作过程为：

1. 称取10.00±0.1克样品匀浆于50mL离心管中，准确移入20.0 mL乙腈，于旋涡振荡器上混匀2min后用滤纸过滤，滤液收集到装有2g~3g氯化钠的50mL具塞量筒中。

2. 收集滤液20mL左右，盖上塞子，剧烈震荡1min，在室温下静置30 min，使乙腈相和水相完全分层。

3. 用移液管从具塞量筒中移取

4.0mL乙腈相溶液（需举手示意裁判）于10mL 刻度试管中，准备进行浓缩。

二、均质法提取农残的典型操作

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均质法的提取原理与761一致，即试样中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类农药、氨基甲酸酯类农药用有机试剂乙腈提取，提取液再经过滤、浓缩、净化后，最后用GC进行检测。

典型的操作为：

1. 称取10g样品（精确到0.01g），置于50mL的离心管中，加入20mL乙腈均质。均质的目的是使样品破碎充分，以更加彻底的提取出农药。

2. 用20mL乙腈清洗均质器，在盛放均质好样品的离心管中加入5gNaCl涡旋，4000r/min离心3min，取上层乙腈相，置于100mL浓缩瓶中。

3. 将清洗均质器的20mL乙腈倒入盛放样品的离心管涡旋离心，再提取一遍，有机相合并到100mL浓缩瓶中。

三、两种方法的比较

761法是将乙腈加入到样品中，然后用旋涡振荡仪混匀，将提取液过滤至具塞量筒中，然后加入NaCl，再通过手动振荡混匀提取，再静置，使饱和食盐水与乙腈相分离，农残溶解到了乙腈相中，然后再吸取出乙腈相的一部分，进行浓缩。均质法将是将乙腈加入到样品中，然后用均质机使样品与乙腈充分混合。均质机比漩涡振荡仪混匀的效果好，而且能进一步使样品充分破碎，让农残更加彻底地溶解到乙腈中。然后再加入NaCl，用离心机使饱和食盐水与乙腈相分离，离心后，收集上层的乙腈相。为了提高回收率，用于洗涤均质机的乙腈还要加入样品中，再提取一次。最后合并两次的乙腈相，用于进一步的浓缩。

均质法相比于761法优点非常突出，主要有：

1. 操作简单。由于761法用手动振摇混匀，非常费力；而均质法用均质机进行混匀，仅需均质最多1min左右，操作很轻松。761法需要过滤操作，均质法由于使用了离心机，不要过滤，节省了步骤。

2. 节省时间。761法中，提取液再静置半个小时，时间非常长，不适用于快速检测或大批量检测。均质法中，用离心机使乙腈相与饱和水相分层，离心仅需3min，因此节省了大量时间，适合快速和大批量的检测样品。

鉴于以上优点，目前大部分检测机构为了加快速度，采用均质法提取农药。

但是均质法也有明显的缺点，即需要离心机和均质机，对实验设备提出了更高的要求，增加了检测成本，这也是目前761法虽然繁琐，仍然在国内应用得非常广的原因。

四、SOP文件在检测分析中的应用

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（一）非标方法的确认

在分析检测的实际工作中，如果需要对国标进行改动，那么就要制定非标方法。就如我们上述的例子，如果想要节省检测时间，使用均质机和离心机，就需要制定一个相关的非标方法。

具体来说，可根据《GBT 27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测》申请非标方法确认，总的来说可分为以下几个步骤：

1. 从理论到实践对方法的理解；

2. 使用参考标准或标准物质进行校准；

3. 与不同方法所得结果进行比较；

4. 实验室间比对；

5. 对影响结果的因素作系统性评审；

6. 进行结果不确定度评定。

（二）SOP文件的制定

如果通过了非标认证，那么就可以根据该非标方法在企业内部制定一个SOP文件，然后按照此SOP文件对样品进行检测。SOP即标准操作程序(Standard Operation Procedure)，是将某一事件的标准操作步骤和要求以统一的格式描述出来，用来指导和规范日常工作。一份SOP文件应该包括以下的内容：

1. 明确职责：包括负责者、制定者、审定者、批准者。

2. 格式：

（1）每页SOP页眉处注明“标准操作规程”字样；

（2）制定SOP单位全称；

（3）反映该份SOP属性的编码、总页数、所在页码；

（4）准确反映该项目SOP业务的具体题目；

（5）反映该项SOP主题的关键词，以利计算机检索；

（6）简述该份SOP的目的、背景知识和原理等；

（7）主体内容：具体内容简单明确，可操作性强，以能使具备专业知识和受过培训的工作人员理解和掌握为原则；

（8）列出制定该份SOP的主要参考文献；

（9）每份SOP的脚注处有负责者、制定者、审定者、批准者的签名和签署日期；

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（10）标明该份SOP的生效日期。

图1例举了一份SOP文件的封面，每个正规的检测机构都有自己的SOP文件格式，主要包含了以上的因素。

文件封面的样例1 SOP图

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边学边练

一、任务1：NY761提取小青菜中的拟除虫菊酯农残

操作要点：

（1）称量。天平应该放在防震垫上，以保证称量结果准确。称量前，先将天平调至水平。准确称取3份青菜匀浆10.00正负0.1克于50 ml具塞离心管中。称量过程中应保持天平洁净。要及时记录数据，并作好标记。

（2）移入乙腈。移液前须对烧杯、移液管进行润洗，一般为2-3次。准确移取20.00mL乙腈液至每份小青菜样品中。

（3）旋涡提取。将离心管置于漩涡振荡器上，高速旋涡混匀2分钟。注意，将离心管压在漩涡振荡器上力度应合适，样液应形成明显的涡旋，漩涡过程中可以把离心管拿出上下振荡一下，以保证样品充分混匀。

（4）过滤。

1）准备收集器。称量2.5—3g氯化钠，分别置于25mL具塞量筒中。

2）过滤，滤纸根据漏斗大小，适当调整，并用少量匀浆液润湿。

3）收集。滤液收集到装有氯化钠的具塞量筒中，大约为20mL左右。

4）震荡。盖上塞子，剧烈震荡1min。在盖上塞子时，注意要旋转180度，以防在震荡过程中有样液漏出。振荡过程中，停下打开塞子1-2次，放出振荡产生的气体。

5）静置分层。打开具塞量筒的塞子，在室温下静置30分钟，使乙腈相和水相完全分层。

二、任务2：均质法提取小青菜中的拟除虫菊酯农残

操作要点：

（1）称量。称量前，先将天平调至水平。准确称取3份青菜匀浆10.00正负0.1克于50 mL具塞离心管中。

（2）移入乙腈。向三只装有青菜匀浆的离心管中分别移入20 mL乙腈。然后去三只空离心管，分别移入20 mL乙腈，并与三只装有青菜的离心管一一对应，用以清洗均质器，清洗后的乙腈将用来对样品进行二次提取。

（3）匀浆提取。将一只装有青菜匀浆的离心管置于均质机中均质，以10000r/min 转速均质15秒，均质时应上下小幅度移动离心管，以使均质效果更好；均质的目的是使苹果破碎充分，以更加彻底的提取出农药。然后将其对应的装有20 mL 清洗用乙腈的离心管置于均质器上，提取15秒。接着对离心机用纯净水进行清洗，务必清洗干净，以免影响其他样品的检测结果。另外两只同样操作。

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（4）离心分层。在盛放均质好样品的离心管中加入大约5g NaCl，然后高速涡旋1min以混匀，再将其放入离心机中，以4000r/min离心3min。

注意，将样品放入离心机的时候要注意平衡。本次试验共三个样品，因此需要一个水样来平衡才能进行离心。应该等到离心机的速度将为0，才能开盖把样品拿出来。

（5）再次提取。用巴氏管小心取出一只离心管中的上层乙腈相，置于100mL浓缩瓶中。然后将相对应清洗均质器的20mL乙腈倒入提取过一次的样品的离心管