植物体内硝态氮含量的测定

二、植物体内硝态氮含量的测定

硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。

（一）原理

在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。

（二）仪器与用具

（1）722型分子光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20cm326支；（4）刻度吸管0.1cm3. 0.5cm3. 5cm3. 10cm3各1支；（5）容量瓶50cm38个；（6）容量瓶25cm33个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm。

试剂：

500ppmNO3-标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200cm3。

5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100cm3,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。置冰箱保存一周有效。

8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。

（三）实验步骤

1. 标准曲线的制作

（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1cm3. 2cm3. 3cm3. 4cm3. 6cm3. 8cm3. 10cm3. 12cm3分别放入501cm3容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列标准溶液。

（2）吸收上述系列标准溶液0.11cm3，分别放入刻度试管中，以0.11cm3无离子水代替标

准溶液作空白，再分别加入0.4cm

3水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51cm3摇匀冷却至室温，显色液总体积为101cm3。

（3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。以NO3-N浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品中硝酸盐的测定

（1）样品液的制备，取一定量的植物材料剪碎混匀后，精确称取2-3克分别放入三支刻度试管中，加入10cm3无离子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取30分钟，到时间后取出，用自来水冷却，将是取液过滤到25cm3容量瓶中，并反复冲洗残渣，最的定容至刻度。

（2）样口液的测定吸取样品0.1 cm3分别于三支刻度试管中，然后加入5%水杨酸一硫酸溶液0.4 cm3，混匀后置室温下20分钟，再慢慢加入9. 5 cm3 8%NaOH溶液，待冷却至室温后，以空白作参比，在410nm波长下测期吸光度。在标准曲线上查得或用回归方程计算出NO3--N浓度，再用下公式计算其含量。

旱作物组织中硝态氮的测定——硝酸试粉比色法

1. 目的

作物根系从土壤吸收的硝态氮，一部分很快参加蛋白质的合成但仍有相当数量的硝态氮是在向地上部分转运途中逐步转化的。特别是某些旱作物叶柄硝态氮的水平，在一定范围内反映了当时体内的氮素营养水平和土壤供氮状况。定期检测作物适当部位的硝态氮含量的水平，可以为作物的施肥和促控措施等提供一些依据。

本方法是基二锌在酸性条件下产生氢气，将硝酸根还原成亚硝酸根，亚硝酸根对氨基苯磺酸和a-萘胺作用，形成红色偶氮染料，在一定范围内可按颜色（玫瑰红）深浅估测NO3-N含量。

灵敏度范围为0.5-20ppm，其反应一定要在PH5左右条件下进行，在碱性条件下不显色或显色不明显。

2. 材料和试剂

（1）硝酸试粉称硫酸钡50g，分成数份，分别与硫酸锰（Mnso4?H2o）5g，锌粉1g，对氨基苯磺酸2g，a-萘1g，在研钵中研细混匀，最后与37. 5g柠檬酸一起研磨均匀，贮于暗色瓶中，防潮避光。此试粉灰白色，若变为粉红色，则不能使用。

（2）PH5柠檬酸缓冲液称取化学纯柠檬4. 31g，柠檬酸钠6. 86g，溶于500ml蒸馏水中（溶液必须新鲜酸置）。

（3）硝态氨标准溶液称取7. 22g分析纯硝酸钾加水定容到1000ml，即为1000ppmNo2-N。

3. 方法与步骤

（1）取样清晨在待测田块中，选取有代表性的植株10-20株的敏感部位，用湿布擦净，剪碎，榨汁备用。

（2）测定于15ml刻度试管中，加入5mlPH5. 0的柠檬酸缓冲液，滴入一滴组织汁液，摇匀加入0.2g硝酸试粉，塞紧，纵向摇动试管1分钟（200次/分），静置15分钟后，与硝态氮试管法比色卡或标准色阶溶液进行比较，目测硝态氮ppm数。

（3）结果计算

其中：V1-显色溶液的ml数；

V2-所取汁的ml数（按每毫升20滴计）

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