黄酮含量的测定

称，一般都具有4位羰基，且呈现黄色。黄酮类化合物的3—羟基、 4—羟基或5—羟基、4－羰基或邻二位酚羟基，与铝盐进行络合 反应，在碱性条件下生成红色的络合物。 本方法对样品中黄酮类化合物进行提取纯化后，用分光光度 法于510nm波长下测定其吸光度，与芦丁标准品比较，进行待测 物中总黄酮的定量测定。
三、器材与试剂
六、黄酮含量的测定流程图
取3支10ml具塞试管（2支测定管，一支空白管）
3支测定管加入粗提液 5ml， 1支空白管加同量30％乙醇 各管加0.5ml 5% NaNO2， 摇匀，静置5min
黄酮铝络合物易 受CO2作用使颜 色有所变化，要 求短时间完成操 作，中间盖塞
加0.5ml 10% Al(NO3)3，摇匀，静置6 min
一 黄酮的功效
1、它是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，如花 青素、花色素可以抑制油脂性过氧化物的溢出
2、黄酮可以改善血液循环，可以降低胆固醇，这些作用大大降 低了心脑血管疾病的发病率，也可改善心脑血管疾病的症状。 3、黄酮可以增进伤口愈合和止痛，
二 原理提要
黄酮类化合物是具有苯并吡喃环结构的一类天然化合物的总
（2）标准曲线的绘制： 准确吸取（ 0.1mg/ml ）芦丁标准溶液 0 、 0.50 、 1.00、2.00、3.00、⒋00ml（相当于芦丁0、50、 100 、 200 、 300 、 400ug ），移入 10ml 刻度比色管 中，加入30 ％乙醇溶液至 5ml ，各加 5 ％亚硝酸钠 溶液0.5ml，振摇后放置5min，加入10％硝酸铝溶 液 0.5ml 摇匀后放置 6min ，加 1.0mol ／ L 氢氧化钠 溶液 2ml ，用 30 ％乙醇定容至刻度。摇匀，放置 15min ，于 510nm 波长处测定吸光度，以零管为空 白，以芦丁含量（ ug ）为横坐标，以吸光度为纵 坐标绘制标准曲线。
A C
增 大
二、溶液的吸光定律
透光率 （透射比） 透光率定义： 入射光 I0 透射光 It
It T I0
T 取值为0.0 % ~ 100.0 % 全部吸收 全部透射 T = 0.0 % T = 100.0 %
Lambert – Beer Law:
A Kcb
物质的性质
lg T Kcb A
加2ml 4％ NaOH 用30%乙醇定容，混匀，放置15min 510nm下测定吸光度
（以芦丁为标样制作标准曲线）
结果记录：记载表老师检查
用品洗刷干净，检查摆放整齐、齐全 报告老师，经检查同意可离去
值日生负责注意: 清理分光光度计、比色皿、台面。
下一个实验：油脂中黄曲霉的测定
入射光波长 温度
K：吸光系数
吸收定律与吸收光谱的关系
吸 光 定 律 A 吸 收 光 谱 C
A或

A

max C
吸光度的加合性
多组分体系中，如果各组分之间无相互作用，其吸光 度具有加合性，即
A
Ai ibci b i ci
i i i
对吸收定律偏离
A
主要原因
非单色光 吸光质点的相互作用 C
仪器： 分光光度计，恒温水浴，50ml具塞试管，10ml试管，移液器， 漏斗，滤纸、125ml分液漏斗等。 试剂： 氯仿， 20% Na2CO3， 5%亚硝酸钠， 10% 硝酸铝，4％氢氧化钠，
30%乙醇等。
四．操作步骤
（1）样品处理 1）固体样品： 称取1～2g干燥的固体样品，用滤纸包紧，置于索氏提取器 中，加入50～100ml70％乙醇溶液浸润后，在80℃水浴下回流 3h，至提取液无色为止。粗提液冷却后，减压抽滤，并用少量 25％乙醇溶液洗涤滤渣，合并滤液。在50℃下减压蒸馏，除去 其中的乙醇，直至索氏提取器内溶液呈无醇味。倒出容器内溶 液，用30ml热水分3次洗涤，抽滤后，将滤液倒入分液漏斗 中，以75ml 氯仿分3次萃取脱脂，待完全分层后，收集各次下 层水溶液并定容至50ml。 2）液体样品： 准确吸取1.0ml样品，定容至50ml后，直接以75ml 氯仿分3 次萃取脱脂，其余步骤同上。
光
一、物质对光的吸收与吸收光谱
物质对光 的吸收
h 光作用于物质时，物质吸收了可见光， 而显示出特征的颜色，这一过程与物质的 性质及光的性质有关。
S3 S2
S1 S0
E3 E2 E1 E0
h E2 E0
物质对光的吸收满足Plank 条件
hc E E2 E0 h

吸收光谱 Absorption Spectrum
（3）样品测定： 根据样品中总黄酮含量高低，取适宜体积 待测液，按标准曲线制备操作步骤于510nm 处进行吸光度的测定（样液如有沉淀，应 过滤后测定）。
五.结果计算
根据标准工作曲线，求出相当于样品吸光度的芦丁含 量。 黄酮含量（μg/g）= X×V /m X为由吸光度按标准曲线查的结果； V为粗提液总体积(ml)； m为称样质量(g) 黄酮的标准曲线：y=0.8965x – 0.0014 R2 =0.9997
三、吸光分析仪的基本构造
Biblioteka Baidu
0.575
光源
参比 I0
单色器
吸收池
检测器
显示
A Kcb
请注意与定义比较 未考虑吸收池和溶剂对光子的作用
样品
It 入射光 I0
透射光 It
单波长单光束分光光度计
0.575
光源
单色器
吸收池
检测器
显示
单波长双光束分光光度计
光束分裂器
光源 单色器
比值
吸收池
检测器
显示
实验七 黄酮类物质含量的测定
h S3 S2 S1 S0 E3 E2 E1 E0
A
纯电子能态间跃迁 S2
h S1 S0 分子内电子跃迁 A
锐线光谱
带状光谱

定性分析与定量分析的基础
A B A
定性分析基础
物质对光 的选择吸收
max ( A) max ( B)
定量分析基础 在一定的实验 条件下，物质对 光的吸收与物质 的浓度成正比。
《油脂检测实验》
油脂中黄酮含量的测定
吸光光度法 是基于被测物质的分子 对光 具
有选择吸收 的特性而建立的分析方法。
光的电磁波性质
10-2 nm 10 nm
射 线 x 射 线
102 nm 104 nm
紫 外 光 红 外 光
0.1 cm 10cm
微 波
103 cm
105 cm
无 线 电 波
可
见