总黄酮含量测定方案

总黄酮含量测定

一样品溶液的制备

70%乙醇溶液，料液比1﹕8 ，80度下回流2h。取10g样品放入圆底烧

瓶中加入80ml 70%乙醇溶液回流2h,抽滤定容至100ml备用。使用时先离心再用70%乙醇稀释10倍做样品溶液。

二芦丁标准品的配置

精密称取芦丁2mg，加无水乙醇定容至10ml。制得浓度为0.2mg/ml芦

丁标准品溶液。

三显色方法的确定

1 扫描原液分别取芦丁溶液和样品溶液各1ml，加无水乙醇定容至25ml，空白对照，全波扫描。

2硝酸铝显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加5%亚硝酸

钠溶液（1.25g亚硝酸溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml, 摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液(4,4014g硝酸铝.九水溶于无水乙醇中定容到25ml 容量瓶中) 1ml，摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠试液(2g氢氧化钠溶于无水乙醇中定容到50ml容量瓶中）10ml, 再加无水乙醇定容至25ml，摇匀，放置15min，空白对照，全波扫描bb 。

3氯化铝显色法分别取芦丁对照溶液和样品溶液各5ml ,加1%的氯化

铝溶液（1g氯化铝溶于无水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml，摇匀放置10min，空白对照，全波扫描。

4 氢氧化钾显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加3ml10%

氢氧化钾溶液（2.5g氢氧化钾溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中），

充分摇匀显色5min后，用无水乙醇定容至25ml, 摇匀，空白对照，全波

扫描。

四显色条件的确定

五标准曲线的绘制

分别取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml芦丁对照品溶液，按所选的显色方法测定吸光度，绘制标准曲线。

六精密度实验

按标准曲线绘制方法，分别准确量取1.0ml芦丁标准液5份，按所选显色剂和所确定的最优显色条件在所选波长下测定吸光度。

次数 1 2 3 4 5

吸光度

平均值

相对标准偏

差RSD（%）

七重现性实验

取火棘果样品5份各10g,按提取步骤制得样品液，按制备标准曲线方法显色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。

次数 1 2 3 4 5

总黄酮含量（%）

平均值（%）

相对标准偏

差RSD（%）

八稳定性试验

取制备好的同一样品溶液，将其显色后每10min测定一次，共测定7次，记录吸光度并计算总黄酮含量。

比色时间

(min)

0 10 20 30 40 50 60

总黄酮含量

（%）

平均值

相对标准偏

差RSD（%）

九回收率实验

分别准确量取已知总黄酮含量为mg/ml的1ml提取液5份，分别加入一定量芦丁标准品，按上述方法进，测定吸光度，计算黄酮含量，根据回收率公式计算出加样回收率。

回收率=（混合后测得量—样品中总黄酮含量）/芦丁标准品加入量*100

样品号样品中总

黄酮含量

（mg）

芦丁加

入量

（mg）

测定量

（mg）

回收率

（%）

平均回

收率

（%）

相对标准

偏差RSD

（%）

1 2 3

4

5

十样品含量测定

分别取3份样品溶液各1ml, 按制备标准曲线方法显色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。