总黄酮、多酚含量的测定
菊花总黄酮_多酚及水浸出物含量分析
线计算出总黄酮含量。 1.2.3 菊花多酚含量检测方法
（1）供试液制备：精确称取菊花样品 2.50 g，移入 250 mL 三角锥瓶中，250 mL 沸水浸提 10 min，每隔 3 min 摇晃 1 次，中途搅拌 2 次，减压过滤，蒸馏水洗涤 滤渣数次，滤液定容至 250 mL 容量瓶中，即为供试液。
酮含量和怀菊总黄酮含量的 RSD 值都小于 5%，且前 者 比 后 者 高 ；二 者 占 水 浸 出 物 的 含 量 ，分 别 是 10.21% 、13.74% 。 段 崇 霞 报 道 的 杭 菊 总 黄 酮 含 量 为 30.17 mg/g，而笔者测得的杭菊含量为 51.76 mg/g，可 能由分析检测的原料不同所致。另外，与段崇霞 、 [7] 汪民海[8]、芦金清[9]、杨铭[10]等报道的贡菊、滁菊、亳菊、
有治疗心血管疾病、抗氧化以及抗肿瘤等多种药理功 效[1-3]。多酚类物质是总黄酮类化合物中的一类主要功 能活性物质，在自然界分布非常广泛，具有抗氧化、抗 衰老、抗肿瘤、防治心脑血管疾病等多种药理功能，但 菊花中多酚物质的含量测定未见报道。此文选取杭菊 和怀菊两类有代表性的菊花，对其总黄酮含量、多酚含 量及水浸出物总量进行测定与分析，可为菊花功能活
出物含量分别为(506.90±2.56) mg/g、(493.80±2.63) mg/g，RSD 分别为 0.51%、0.53%，该研究结论可为菊
花功能活性成分的提取及综合利用提供理论依据。
关键词：菊花；总黄酮；多酚；水浸出物；含量
中图分类号：S3
文献标志码：A
论文编号：2009-2483
Content Analysis of the Flavonoids, Polyphenols and Water-extracts in Chrysanthemum Zhang Jianyong1, Jiang Heyuan1, Yuan Xinyue2, Yao Yu2, Liu Hongyun1, Cui Hongchun2
保健食品 总黄酮测定方法
保健食品总黄酮测定方法
保健食品是指具有保健功能的食品，其中总黄酮是一种常见的保健成分。
总黄酮是指一类具有黄酮骨架结构的化合物，包括黄酮类、异黄酮类、花青素类等多种物质。
总黄酮具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种保健作用，因此被广泛应用于保健食品中。
为了保证保健食品中总黄酮的含量符合标准，需要进行总黄酮测定。
总黄酮测定方法主要有两种：分光光度法和高效液相色谱法。
其中，分光光度法是一种简单、快速、经济的测定方法，适用于大批量样品的测定。
该方法的原理是利用总黄酮与铝离子形成络合物，使样品溶液的吸光度增加，从而测定总黄酮的含量。
该方法的操作简单，但对样品的前处理要求较高，需要去除干扰物质，否则会影响测定结果的准确性。
高效液相色谱法是一种准确、灵敏、选择性好的测定方法，适用于复杂样品的测定。
该方法的原理是利用高效液相色谱仪对样品中的总黄酮进行分离和检测。
该方法的优点是测定结果准确可靠，但需要较长的分析时间和较高的仪器成本。
总黄酮测定方法的选择应根据实际情况进行，以保证测定结果的准确性和可靠性。
同时，保健食品生产企业应严格按照国家标准进行总黄酮含量的测定，确保产品质量符合标准，保障消费者的健康。
总黄酮含量检测
总黄酮含量检测试剂盒说明书(货号：NM-F-0120 分光法50T/24S)一、产品简介：总黄酮，即黄酮类化合物；是植物重要的一类次生代谢产物，具有较强的抗氧化活性，可捕捉活性氧自由基，降低氧化伤害，在果实中影响其色泽和风味；对植物的抗逆性和抗病虫害方面有重要作用。
在碱性亚硝酸盐溶液中，黄酮类化合物与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定反应产物在510nm处的吸光值，即可计算样品中总黄酮含量。
二、试剂盒组分与配制：三、需自备的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、30-50目筛、无水乙醇、蒸馏水。
四、操作步骤：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、预实验样本制备℃ 组织样本：称取约0.1g新鲜样本；或者称取约0.02g烘干样本（将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50目筛，得到烘干样本），加入1.5mL的提取液（若鲜样需研磨均质），60℃振荡提取2h，12000rpm，25℃离心10min，取上清待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。
℃ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、标准溶液的配制：把10mg/mL标准品母液用提取液稀释成0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.05 mg/mL3、预实验上机操作：℃ 可见分光光度计预热30min以上，调节波长至510nm，蒸馏水调零。
4、正式实验：℃ 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用提取液适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；℃ 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；℃ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。
总黄酮的含量测定方法
总黄酮的含量测定方法
总黄酮的含量测定方法主要包括以下几种：
1. 酸性条件下的比色法：将样品与酸反应生成有色化合物，测定其吸光度。
如盐酸或硫酸与总黄酮反应生成有色化合物，可通过紫外可见光谱测定吸光度，进而计算总黄酮的含量。
2. 高效液相色谱法(HPLC)：使用高效液相色谱仪进行分离和测定。
通过采用特定的色谱柱和流动相，分离出总黄酮，并通过检测器测定其峰面积或峰高值，并与已知标准品进行比较，计算样品中总黄酮的含量。
3. 薄层色谱法：将总黄酮的样品与色谱载体共同涂布在薄层板上，通过色谱柱法进行有效分离。
然后，利用染色剂，如硼酸或铝酸盐等，在紫外或可见光下观察或测定样品斑点的强度，从而计算总黄酮的含量。
4. 毛细管电泳法：通过毛细管电泳仪将总黄酮进行分离，并通过测定峰面积或峰高值，配合已知标准曲线，计算总黄酮的含量。
需要注意的是，不同样品中总黄酮的化学结构和含量可能存在差异，因此在选择测定方法时应根据具体的样品特性和仪器设备的可用性做出选择。
红河州13种食用花卉的总黄酮、总多酚含量测定
红河州13种食用花卉的总黄酮、总多酚含量测定严和平;洪亮;徐进诺;罗玉芹;陈雅顺;许春;欧朝凤;张举成【摘要】采用乙醇热提法对红河州13种食用花卉进行总黄酮和总多酚的提取.以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH为显色体系,利用双波长分光光度法,测定总黄酮含量;以Folin-phenol试剂为显色剂,测定总多酚含量.结果表明:13种食用花卉中均含有黄酮和多酚类化合物.总黄酮含量顺序是:桂花(23.93 %)>黄饭花(6.51 %)>棠梨花(3.93 %)>猫屎花(3.43 %)>玉荷花(2.08 %)>鸡屎臭药花(2.04 %)>帘子藤花(1.77 %)>芭蕉花(1.75 %)>石榴花(1.63 %)>马桑花(0.81 %)>菊花(0.64 %)>金雀花(0.52 %)>苦刺花(0.22 %).总多酚含量顺序是:石榴花(13.16 %)>桂花(10.83 %)>棠梨花(5.34 %)>猫屎花(4.94 %)>黄饭花(3.81 %)>鸡屎臭药花(3.23 %)>玉荷花(3.13 %)>帘子藤花(2.61 %)>芭蕉花(2.34 %)>菊花(1.31 %)>金雀花(1.11 %)>马桑花(1.08 %)>苦刺花(0.83 %).桂花的总黄酮含量最高,石榴花的总多酚含量最高,苦刺花的黄酮和多酚含量均最低.%13 types dietary flowers from Honghe Prefecture were extracted by hot extraction.The total flavones contents of the 13 types dietary flowers were detected by dual wavelength spectrophotometry, using the color system of NaNO2-Al(NO3)3-NaOH. The concentration of total polyphenols were detected by Folin-phenol reagent colorimetric method. The results indicated all of the flowers had polyphenols and flavones, the total flavonoids contents sequnce was Osmanthus fragrans(23.93 %)>Buddleja officinalis(6.51 %)>Pyrus pashia (3.93 %)>Gnaphalium affine(3.43 %)>Bauhinia purpurea(2.08 %)>Valeriana officinalis(2.04 %)>Clematis chinensis Osbeck(1.77 %)>Musasapientum(1.75 %)>Punica granatum(1.63 %)>Morus alba(0.81 %)>Chrysanthemum morifolium(0.64 %)>Caraganasinica(0.52 %)>Sophora davidii(0.22 %).The total polyphenols contents sequnce wasP.granatum(13.16 %)>O.fragrans(10.83 %)>P.pashia(5.34 %)>G.affine(4.94 %)>B.officinalis(3.81 %)>V.officinalis(3.23 %)>B.purpurea(3.13 %)>C.chinen sis Os-beck(2.61 %)>M.sapientum(2.34 %)>C.morifolium(1.31 %)>C.sinica(1.11 %) >M.alba(1.08 %)>S. davidii(0.83 %).The content of total flavones inO.fragrans was the highest and the total polyphenols in P. granatum was the highest,but the flavones and polyphenols in S.davidii were the lowest.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2018(039)009【总页数】6页(P142-147)【关键词】食用花卉;总黄酮;总多酚;含量测定;红河州【作者】严和平;洪亮;徐进诺;罗玉芹;陈雅顺;许春;欧朝凤;张举成【作者单位】红河学院理学院,云南蒙自661199;云南省天然药物与化学生物学重点实验室,云南蒙自661199;红河学院生命科学与技术学院,云南蒙自661199;红河学院理学院,云南蒙自661199;红河学院理学院,云南蒙自661199;红河学院理学院,云南蒙自661199;云南省天然药物与化学生物学重点实验室,云南蒙自661199;红河学院理学院,云南蒙自661199;云南省天然药物与化学生物学重点实验室,云南蒙自661199;浙江环茂自控科技有限公司,浙江杭州310051;红河学院理学院,云南蒙自661199;云南省天然药物与化学生物学重点实验室,云南蒙自661199【正文语种】中文云南拥有中国二分之一的植物资源，是植物资源极为丰富的“天然花园”。
总黄酮总酚含量测定方法
太行菊的抗氧化活性试验计划1. 实验内容对太行菊的甲醇提取物的乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、水共六种萃取物进行总酚、总黄酮含量的测定，分析实验结果，选择总分和总黄酮含量比较高的两个层分进行抗氧化能力测定，分析其抗氧化能力强弱，判断其有无研究价值。
用Folin-Denis法测定太行菊甲醇提取物各萃取层组分的总酚含量，以没食子酸作为标准品进行对照。
用三氯化铝法测定太行菊各萃取层组分的总黄酮含量，以槲皮素作为标准品进行对照。
根据实验结果，选择总酚和总黄酮含量较高的萃取层组分进行抗氧化能力测定，包括DPPH自由基清除能力测定，羟基自由基清除能力测定，还原能力测定。
2.实验步骤将太行菊用甲醇溶液回流提取其有效成分，旋转浓缩后用水溶解，然后分别用正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取、水层，得相应层的馏分。
2.1总酚含量测定：在试管中分别加入不同层样品（1mg/ml）0,25ml +Folin-Denis 试剂0.5ml ，5min后，再加入Na2CO3饱和溶液0.5ml,并做三组重复。
对照组中样品和Folin-Denis试剂用DW代替，其他不变。
空白组中Folin-Denis试剂用DW代替，其他不变。
在760nm紫外光下测定吸光度。
对实验结果处理后做标准曲线，以没食子酸为标准品。
以没食子酸的微克数表示总酚含量:吸光度=0.0069 μg没食子酸－0.042。
Folin-Denis试剂的配制：在2L烧瓶中加入750ml蒸馏水，再加入100g钨酸钠和20g磷钼酸，再加入50ml正磷酸回流2h, 冷却后装入1L容器内置于暗处实验组*3:体积Folin-Denis的体积Na2CO3MEOH层0.25ml 0.5ml 0.5mlH层0.25ml 0.5ml 0.5mlCH层0.25ml 0.5ml 0.5mlEA层0.25ml 0.5ml 0.5mlBUOH层0.25ml 0.5ml 0.5mlW层 1 2 2对照组*3：DW DW Na2CO3体积0.25ml 0.5ml 0.5ml空白组*3：体积DW的体积Na2CO3MEOH层0.25ml 0.5ml 0.5 mlH层0.25ml 0.5ml 0.5 mlCH层0.25ml 0.5ml 0.5mlEA层0.25ml 0.5ml 0.5mlBUOH层0.25ml 0.5ml 0.5 mlW层0.25ml 0.5ml 0.5ml2.2总黄酮含量测定：在试管中分别加入不同层样品(1mg/ml) 0.5ml + 1M CH3COOK溶液0.1ml + DW 2.8ml + 95%乙醇 1.5ml + 10% AlCl3·6H2O溶液0.1ml，并做三组重复。
紫外分光光度法测定市售檀香中总黄酮含量
紫外分光光度法测定市售檀香中总黄酮含量
紫外分光光度法是一种常用的分析化学方法，可以用于测定市售檀香中总黄酮的含量。
总黄酮是指植物中具有类黄酮结构的化合物，具有很强的抗氧化活性和生物活性。
测定总黄酮含量的步骤如下：
1. 仪器准备：准备紫外分光光度计和试剂，包括紫外可见光谱仪、量瓶、玻璃管、
比色皿、乙醇、二氧化硅溶胶、含有总黄酮的标准溶液。
2. 标准曲线的绘制：准备一系列浓度不同的总黄酮标准溶液，使用紫外可见光谱仪
在特定的波长下测定各个浓度标准溶液的吸光度，并将吸光度值作为纵坐标，浓度作为横
坐标，绘制标准曲线。
3. 样品制备：将市售檀香样品研磨成细粉，取约0.5克样品，用乙醇进行提取，使样品与溶剂充分接触，摇匀，并静置一段时间。
4. 执行测定：将提取液定容至100毫升，用比色皿进行测试。
对于提取液，使用紫外可见光谱仪在与标准曲线相同的特定波长下，测定样品的吸光度。
5. 计算样品中总黄酮的含量：根据标准曲线，计算样品中总黄酮的浓度，并以毫克/
克表示。
需要注意的是，在测定过程中，应注意避免阳光直射，以及其他光源对结果的影响。
还应注意操作的准确性和仪器的正确使用。
紫外分光光度法是一种简单、快速、准确的测试总黄酮含量的方法，被广泛应用于食品、药品和化妆品等行业的质量控制和研究中。
它可以为檀香的质量评价提供重要的参考
依据。
亚贡叶中总黄酮及总酚酸的含量测定
亚贡叶中总黄酮及总酚酸的含量测定背景作为食品和药品等领域的常用添加剂，总黄酮和总酚酸广受关注。
亚洲人民喜欢饮用茶水，茶叶中富含黄酮类和酚酸类物质。
亚贡叶是一种茶树的近亲，也含有丰富的总黄酮和总酚酸。
因此，对于亚贡叶中总黄酮及总酚酸的含量测定具有一定的研究意义。
实验方法实验器材•分析天平•恒温器•恒温槽•磨粉器•容量瓶•离心管•手动振荡器实验试剂•甲醇•乙酸乙酯•乙醇•硫酸实验步骤1.用磨粉器将亚贡叶制成细粉末，称取一定量置于离心管中。
2.加入甲醇，并振荡30分钟，放置15分钟静置。
3.经离心制成沉淀，加入乙酸乙酯，并振荡，再静置15分钟。
4.取上层液体移到新的烧杯中。
5.将离心管里的沉淀放到容量瓶内，加入乙酸乙酯，振荡10分钟，用乙酸乙酯补充至刻度线。
6.将乙酸乙酯提取液过滤，取一部分蒸干。
7.取一定量蒸干物质加入乙醇，振荡，放置15分钟。
8.将液体放到新的烧杯中。
9.取一部分乙醇液体移动到离心管中，加入硫酸，振荡2分钟，放置15分钟静置。
10.取上层液体移到新的离心管中，弃去底部混浊物质。
11.将液体移动到新的烧杯中并蒸干。
12.用甲醇溶解蒸干的物质。
13.用分析天平，分别对总黄酮和总酚酸量进行测定。
结论根据实验结果，亚贡叶中总黄酮的含量为 X 毫克/克，总酚酸的含量为 Y 毫克/克。
实验过程中，需要注意样品的制备和测量方法。
由于各种因素的干扰，需要重复多次实验，取平均值来得出较为准确的数据。
山西老陈醋中总多酚和总黄酮测定方法研究
山西老陈醋中总多酚和总黄酮测定方法研究翟淑红;雷霄宇;陈涛【摘要】分析了Folin-Ciocalteu法测定山西老陈醋中总多酚含量、Al(NO3)3-NaNO2-NaOH体系比色法测定山西老陈醋中总黄酮含量的条件。
通过单因素试验得到了总多酚和总黄酮的优化试验条件，并根据稳定性、重现性、精密度、加标回收率试验对方法进行评价。
结果表明2种测定方法简便、快速、准确、可靠，可用于山西老陈醋及其他食醋产品中多酚和黄酮的测定。
%The suitable conditions of determination of the content of total polyphenols in Shanxi aged vinegar using Folin-Ciocalteu method, the content of total flavonoids in the Shanxi aged vinegar using Al (NO3)3-NaNO2-NaOH colorimetric method were studied. The optimum experimental conditions were obtained by single factor experiment. The stability, repro-ducibility, precision, recovery rate test were employed to evaluate the experimental method. The results showed that two kinds of method were simple, rapid, accurate and reliable, which could be used for determination of polyphenols and flavonoids Shanxi aged vinegar and other vinegar products.【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2015(000)024【总页数】4页(P6372-6375)【关键词】山西老陈醋;总多酚;总黄酮;检测【作者】翟淑红;雷霄宇;陈涛【作者单位】华中农业大学楚天学院，武汉430205;华中农业大学食品科技学院，武汉 430070;华中农业大学食品科技学院，武汉 430070【正文语种】中文【中图分类】TS264.22食醋是人们生活中不可缺少的日常用品，也是一种国际性的重要调味品。
食品中总黄酮的测定
实验九食品中总黄酮的测定（－）目的意义黄酮类化合物（flavonoids）是广泛存在于植物界的一大类多酚化合物，多以苷类形式存在。
其分析方法有多种，对于黄酮类化合物的相互分离以及单一成分的定量分析，常采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）；而对于总黄酮含量的测定，则主要采用分光光度法。
通过本方法的学习，可以掌握食物中总黄酮的测定方法。
（二）高效液相色谱法1. 原理植物类样品用石油醚脱脂后，经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离，在紫外检测器360nm条件下，以保留时间定性、峰面积定量。
2．仪器和试剂（1）高效液相色谱仪（2）紫外检测器（3）层析柱（4）超声波清洗仪（5）索氏提取器（6）微孔过滤器（滤膜0.45um）（7）甲醇（色谱纯）（8）芦丁标准品（9）石油醚，盐酸，磷酸（分析纯）。
（10）去离子水（11）芦丁标准溶液：精确称取经105℃干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配成150ug／ml的芦丁标准溶液。
3. 操作步骤（1）样品处理1）固体样品：称取2.0g干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）提取脂肪等脂溶性成分，弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml和25％HC1 5ml，80℃水浴回流水解1h，取出后快速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，甲醇定容，经0.45um滤膜过滤，供分析用。
2）液体样品：准确吸取样品2.0ml，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后，以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜（0.45um）滤过后供测定用。
（2）色谱分离条件色谱柱：CLC－ODS，6mm×150mm，5um;流动相：0.3％磷酸水溶液：甲醇（V:V）＝40:80，临用前用超声波脱气；流速：lml／min；柱温：40℃；检测波长：360nm；灵敏度：0.02AUFS；进样量：20ul。
总黄酮、多酚含量的测定
总黄酮、多酚含量的测定燕麦总黄酮含量的测定一、仪器紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、超声波提取器、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、10mL容量瓶15个、10mL具塞试管、100mL烧瓶、10mL离心管10个、试管架2个二、药品芦丁标准品40mg、无水乙醇1000mL、亚硝酸钠500g、硝酸铝500g、NaOH 500g 三、实验步骤（一）、样品处理及总黄酮的提取1. 将样品籽粒分别称取2.5 g置于小信封里，80℃烘干24 h。
2. 研成粉末，称取500±2 mg样品于10 mL离心管中，使样品位于试管底部（重复3次）。
3. 每管加4 mL 60％乙醇，放水浴锅60℃浸提2 h。
6000 r/min 离心10 min，离心后取上清液于10 mL容量瓶中。
4. 再向离心管中加4 mL的60％乙醇，放水浴锅60℃浸提1 h。
6000 r/min离心10 min，离心后取上清液于相应的10 mL容量瓶中。
60％乙醇定容至10 mL，待测。
（二）、标准曲线绘制1. 精确量取浓度200 μg/mL芦丁标准溶液0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL 分别置于10 mL容量瓶中。
2. 向容量瓶中分别加60％乙醇5、4.8、4.6、4.2、3.8、3.4、3.0 mL。
3. 然后加5％亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，静置6 min。
4. 再加10％硝酸铝0.3 mL，摇匀，静置6 min。
5. 加4％氢氧化钠4.0 mL，用60%的乙醇定容至刻度，摇匀，静置12 min。
6. 于510 nm波长下测定吸光度，并以芦丁标准浓度值为纵坐标，以吸光度为横坐标，绘制标准曲线。
（三）、样品提取液总黄酮含量的测定准确吸取总黄酮提取液2.0 mL于10 mL容量瓶中，按二的方法测定吸光度，将吸光度代入标准曲线计算样液的总黄酮含量。
燕麦总酚含量的测定一、仪器紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、微波炉、回流装置、25mL容量瓶、25mL具塞试管、250mL烧瓶二、药品没食子酸标准品100mg、无水乙醇1000mL、无水碳酸钠500g、盐酸500mL、福林酚试剂100 mL三、实验步骤（一）、样品总酚的提取称取2.0g粉碎的燕麦粉于250 mL烧瓶中，加入40 mL体积分数60%的乙醇溶液，提取液中盐酸含量0.024%，搅拌均匀，在恒温水浴锅中安置好回流装置，水浴温度75℃，提取50 min。
黄酮含量测定
一、黄酮含量的测定方法1、样品的处理取材料地上部分洗净，晾晒至表面无水分，置于干燥箱中，80℃下干燥至恒重，磨成粉末，过筛待用。
2、标准曲线的绘制准确称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加体积分数70%乙醇溶解至刻度，摇匀得0.2mg/ml的对照品溶液。
然后，分别吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4ml，分别置于7支试管中，加水补齐至2.4ml，分别加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。
再加入10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。
加入4.3%氢氧化钠溶液4ml，然后分别加2.2ml水，摇匀，放置15min。
以空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长处测定吸光度。
3、黄酮的提取（微波提取法）准确称取干燥至横重的野生马齿苋粉末3份，每份1g，分别置于锥形瓶中，喷洒适量蒸馏水润湿，用中高火微波处理90s。
加入一定量体积分数为70%的乙醇溶液，于80℃恒温水浴加热提取1.5h，趁热过滤，洗涤残渣，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得黄酮提取液。
4、黄酮含量的计算吸取分别黄酮提取液1ml，加1.4ml蒸馏水，摇匀，加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。
再加10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。
加入4.3%氢氧化钠溶液4ml。
加入蒸馏水2.8ml，摇匀放置15min。
以蒸馏水代替黄酮提取液的空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长出测定吸光度。
带入标准曲线中，计算黄酮含量。
总黄酮含量（mg/g）= c*v/m式中：c为1ml样品中测得的黄酮含量（mg）；v为提取液总体积（ml）；m为叶片干重。
二、矿质元素的测定每份需0.2g。
总黄酮含量测定
1 总黄酮含量测定1．1 紫外可见分光光度法严赞开［1］综述了紫外分光光度法测定植物中黄酮含量的方法．重点介绍了单波长法、差示法、双波长法、三波长法、导数法等紫外分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理及分析特性。
1．1．1 紫外可见分光光度法: 是以分子吸收光谱为基础的紫外－可见分光光度法，利用某些物质的分子在峰带I( 300 ～400 nm) 和峰带Ⅱ( 220 ～280 nm) 光谱区的吸光度来进行分析测定的方法。
具有简便、适用性广、准确度、精密度和重现性较好等特点，在总黄酮含量分析中发挥着重要作用。
1．1．2 比色法: 是一些药典最常用的总黄酮含量检测方法，它主要以Al( NO3 ) 3 为显色剂，在碱性条件下，利用其与总黄酮形成红色螯合物为特征。
常用于总黄酮类化合物含量测定的金属盐试剂有Al( NO3 ) 3、AlCl3 等。
1．1．3 差示分光光度法简称ΔA 法: 使用稍高于样品或稍低于样品的标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度。
而此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成比例关系，借差示工作曲线而求出样品的含量。
1．1．4 双波长和导数分光光度法: 用于测定吸收光谱曲线重达的混合物的含量而不须用解联立方程，还可分析高浓度及混浊样品，其灵敏度和准确度比普通分光光度法好。
在选择波长时，原则上除了要干扰物有相等吸光度外，还要求两波长比较接近，被测组分在该两波长处的摩尔吸收系数相差大些，这样方法的灵敏度会更高。
如果将上述双波长分光光度计上两个波长尽可能指近，使只相差1 ～2 nm，并且同时进行扫瞄，能得到试样一阶导数吸收光谱-吸光度对波长的变化率曲线，即导数分光光度法。
2 药理作用2．1 镇痛作用赵铁华等［4］研究结果显示灌胃、腹腔注射、皮下注射适宜剂量的黄芩茎叶总黄酮，对实验动物经化学和热刺激导致的疼痛反应皆有一定的抑制作用，其镇痛作用机制与中枢作用相关。
银杏总黄酮( TFG) 腹腔内注射可显著抑制甲醛致小鼠疼痛反应，延长小鼠舔足潜伏期并减少小鼠扭体反应数。
黄酮、多酚和抗氧化
1、总黄酮含量(硝酸铝～亚硝酸钠比色法，以芦丁计)芦丁标准标准溶液的配制：准确称取经105 ℃干燥至恒重的芦丁标准品15.0 mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至100 mL，配成150 μg/mL 的芦丁标准溶液，制备标准曲线。
精密称取一定量的测定样品，用30 %的乙醇溶液溶解定容至100 mL，取1 mL的待测液，加入30 %乙醇溶液至5 mL，加入5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，混匀后放置5 min，加入10 %硝酸铝溶液0.3 mL，混匀后放置6 min，加入1.0 mol/L氢氧化钠溶液4 mL，用30 %乙醇定容至10 mL，静置10分钟，以零管为空白，摇匀后用1 cm的比色杯，在510 nm的波长处测定吸光度，并根据芦丁的标准曲线计算试样的总黄酮含量。
2、酚酸含量（福林试剂还原比色法，以没食子酸计）没食子酸标准溶液的配制：称取经真空干燥至恒重的没食子酸对照品25.0 mg，用30 %的乙醇溶液溶解并定容至100 mL，配成0.250 mg/mL的没食子酸标准溶液，制备标准曲线。
精密称取一定量的测定样品，用30 %的乙醇溶液溶解、定容，并稀释至适宜浓度，记录总体积。
取0.1 mL样品，并用水稀释至5.0 mL，各加入0.5 mL 未稀释的福林试剂，混匀后静置8 min，加入1.5mL 20%Na2CO3水溶液，室温暗处静置2 h，以零管为空白，用1cm的比色杯，在765 nm的波长处测定吸光度，并根据没食子酸的标准曲线计算试样的总酚含量。
抗氧化方法ABTS˙+法先配制140 mmol/L过硫酸钾（K2S2O8）溶液和7 mmol/L ABTS储备液，然后取176 µL 140 mmol/L过硫酸钾溶液和10 mL 7 mmol/L ABTS储备液混合，在室温条件下避光储备12-16 h。
测定之前加入乙醇将ABTS˙+溶液稀释至吸光值为0.700±0.02（734 nm）下将3.9 mL 的ABTS˙+溶液与0.1 mL待测样溶液（所用测试样品均溶解在50 %的甲醇中）混合摇匀，在室温下反应6 min，在734 nm 波长下测定吸光值，以50 %的甲醇为空白对照(Re, Pellegrini, Proteggente, et al, 1999)。
高效液相色谱测定总黄酮参数
高效液相色谱测定总黄酮参数高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种常用的分离、纯化和定量分析化合物的方法，具有高灵敏度、高分辨率、选择性好、可自动化等优点。
总黄酮是一类具有多种生物活性的化合物，广泛分布于维生素、植物、水果、药物等中，其测定在食品、药物、保健品领域有着极其重要的应用价值。
本文将探讨高效液相色谱测定总黄酮参数的方法及其应用。
一、HPLC测定总黄酮的基本原理与步骤基本原理：色谱柱中填充高度均一的吸附材料，样品、测定物质随着流动相通过色谱柱时，在各自的化学性质和分子量大小的差异作用下，逐步发生分离，最后通过检测器进行信号转换并输出结果。
步骤：样品制备→ HPLC系统设置→ 色谱柱条件设置→ 流动相制备→ 样品注射→ 定量测定二、HPLC测定总黄酮的试验方法及操作步骤需要的试剂和仪器设备：HPLC仪器，紫外检测器，色谱柱，采样器，长春新普实验室仪器优化试剂。
试验操作步骤：1、制备样品：将需要测定总黄酮的样品使用蒸馏水提取，过滤后可以得到无悬浮物、杂质的样品。
2、HPLC系统设置：开启HPLC仪器，打开数据处理软件，选择UV检测，波长350nm，设置流量为1.0ml/min。
3、色谱柱条件设置：选择常用的C18柱作为分离柱，大小一般选取250mm×4.6mm，孔径为5μm。
4、流动相制备：取甲醇、乙酸和蒸馏水，按照9：1：90的比例混合，用5μ去除脏物、气泡等杂质，调整pH值为4.0。
5、样品注射：使用采样器将上述制备好的样品注射入色谱柱中，并定量注射。
6、定量测定：通过检测器进行信号转换并输出分离结果。
三、HPLC测定总黄酮的优势与应用优势：1、高分辨率：可以分离并识别不同种类的黄酮化合物，得到更加准确的结果。
2、高灵敏度：灵敏度达到ppm等级，能够准确检测低浓度的总黄酮含量。
3、可自动化：可以通过计算机控制分离过程，并实时监测结果。
总黄酮的检测方法
【含量测定】总黄酮对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。
精密量取20ml，置50ml置瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0. 2mg)。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml．分别置25ml量瓶中，各加水至6ml．加5%亚硝酸钠溶液1ml．摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照紫外·可见分光光度法(附录V A)，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线．
测定法取本品细粉约1g．精密称定，加稀乙醇（甲醇）溶解，转移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度．摇匀，作为供试品贮备液．取供试品贮备液，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
精密量取2ml．置25ml置瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液巾芦丁的重量，计算，即得。
本品按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁( C27 H30 O16)计，不得少于7.0%。
食品中总黄酮的测定方法
食品中总黄酮的测定方法黄酮类化合物(flavonoids)是广泛存在于植物界的一大类多酚化合物，多以苷类形式存在。
其分析方法有多种，对于黄酮类化合物的相互分离以及单一成分的定量分析，常采用高效液相色谱法 (high performanee liquid chromatography, HPLC)；而对于总黄酮含量的测定，则主要采用分光光度法。
通过本方法的学习，可以掌握食物中总黄酮的测定方法。
(一)高效液相色谱法1.原理植物类样品用石油醚脱脂后，经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离，在紫外检测器360nm条件下，以保留时间定性、峰面积定量。
2 •仪器和试剂(1)高效液相色谱仪(2)紫外检测器(3)层析柱(4)超声波清洗仪(5)索氏提取器(6)微孔过滤器(滤膜0.45um)(7)甲醇(色谱纯)(8)芦丁标准品(9)石油醚，盐酸，磷酸(分析纯)。
(10)去离子水(11)芦丁标准溶液：精确称取经105C干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配成150ug/ml的芦丁标准溶液。
3. 操作步骤(1)样品处理1)固体样品：称取2.0g干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚(60〜90C)提取脂肪等脂溶性成分，弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml和25% HC1 5ml，80C水浴回流水解1h,取出后快速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，甲醇定容，经0.45um滤膜过滤，供分析用。
2)液体样品：准确吸取样品2.0ml，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后,以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜（0.45um ）滤过后供测定用（2）色谱分离条件 色谱柱： CLC — ODS ， 6mm x 150mm ，5um;流动相：0.3%磷酸水溶液：甲醇（V:V ）= 40:80，临用前用超声波脱气； 流速: lml / min ；柱温: 40C ；检测波长：360nm ；灵敏度：0.02AUFS ;进样量：20ul 。
总黄酮含量的测定
总黄酮含量的测定植物中总黄酮的提取与测定原理黄酮母核中含有碱性氧原子,一般又多带酚羟基，能和铝离子产生黄色络合物,又加入亚硝酸钠和氢氧化钠,使在碱性溶液中呈红色，溶液在510 nm 处有最大吸收，显色反应在60 min 内稳定。
用芦丁作为对照品，用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂，吸光度与芦丁的浓度呈线形关系，采用分光光度法对总黄酮进行了含量测定。
仪器与试剂新锐T6型紫外可见分光光度计；Explrer型电子天平（0.1mg）。
60%的乙醇溶液；5%亚硝酸钠溶液；10%硝酸铝溶液。
芦丁标准溶液的配制称量13.2mg芦丁，用60%乙醇定容到25ml容量瓶作为标准溶液。
标准曲线的制作准确吸取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 ml芦丁标准溶液，放入10毫升容量瓶内（写明标记），分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0 ml的60%乙醇溶液；再加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，加60%乙醇定容，摇匀后，放置15min；（扫描找到最大吸收）在510nm处测定吸光度。
用0.0ml作为空白，用芦丁含量的浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。
总黄酮提取与测定和计算称取0.6—0.8g样品粉末，加入60ml60%乙醇放于100ml圆底烧瓶内，置于水浴锅上，70℃条件下回流提取60min。
过滤、定容于100ml.吸取样品量（根据样品的吸光度调整）1.0ml，放入10毫升容量瓶内（写明标记），用60%乙醇加到2.0ml；加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝，溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，摇匀后，加60%乙醇定容，放置15min；在510nm处测定吸光度。
根据标准曲线计算总黄酮的含量。
总黄酮含量=A/M·100×稀释倍数A为标准曲线中的含量。
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燕麦总黄酮含量的测定
一、仪器
紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、超声波提取器、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、10mL容量瓶15个、10mL具塞试管、100mL烧瓶、10mL离心管10个、试管架2个
二、药品
芦丁标准品40mg、无水乙醇1000mL、亚硝酸钠500g、硝酸铝500g、NaOH 500g 三、实验步骤
（一）、样品处理及总黄酮的提取
1. 将样品籽粒分别称取
2.5 g置于小信封里，80℃烘干24 h。
2. 研成粉末，称取500±2 mg样品于10 mL离心管中，使样品位于试管底部（重复3次）。
3. 每管加4 mL 60％乙醇，放水浴锅60℃浸提2 h。
6000 r/min离心10 min，离心后取上清液于10 mL容量瓶中。
4. 再向离心管中加4 mL的60％乙醇，放水浴锅60℃浸提1 h。
6000 r/min离心10 min，离心后取上清液于相应的10 mL容量瓶中。
60％乙醇定容至10 mL，待测。
（二）、标准曲线绘制
1. 精确量取浓度200 µg/mL芦丁标准溶液0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、
2.0 mL 分别置于10 mL容量瓶中。
2. 向容量瓶中分别加60％乙醇5、4.8、4.6、4.2、
3.8、3.4、3.0 mL。
3. 然后加5％亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，静置6 min。
4. 再加10％硝酸铝0.3 mL，摇匀，静置6 min。
5. 加4％氢氧化钠4.0 mL，用60%的乙醇定容至刻度，摇匀，静置12 min。
6. 于510 nm波长下测定吸光度，并以芦丁标准浓度值为纵坐标，以吸光度为横坐标，绘制标准曲线。
（三）、样品提取液总黄酮含量的测定
准确吸取总黄酮提取液2.0 mL于10 mL容量瓶中，按二的方法测定吸光度，
将吸光度代入标准曲线计算样液的总黄酮含量。
燕麦总酚含量的测定
一、仪器
紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、微波炉、回流装置、25mL容量瓶、25mL具塞试管、250mL烧瓶
二、药品
没食子酸标准品100mg、无水乙醇1000mL、无水碳酸钠500g、盐酸500mL、福林酚试剂100 mL
三、实验步骤
（一）、样品总酚的提取
称取2.0g粉碎的燕麦粉于250 mL烧瓶中，加入40 mL体积分数60%的乙醇溶液，提取液中盐酸含量0.024%，搅拌均匀，在恒温水浴锅中安置好回流装置，水浴温度75℃，提取50 min。
提取液以3000 r/min离心20 min，取上清液，量取提取液体积，采用福林酚法测定燕麦提取液的总多酚浓度。
（二）、标准曲线绘制和样品总酚含量的测定
精确称量没食子酸标准品25 mg，用水溶解后定容于250 mL容量瓶中，得到0.1 mg/mL的标准贮备溶液。
分别移取没食子酸标准储备溶液0.00、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 mL置于25 mL具塞试管中，分别加入福林酚试剂1 mL，摇匀后再分别加入质量分数12% Na2CO3溶液2 mL，用水定容至25 mL，摇匀。
平行三组。
室温下避光反应2 h后，在765 nm波长下测定吸光度。
以没食子酸标准溶液的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，制作标准曲线。
吸取1.00 mL燕麦总多酚提取液于25 mL具塞试管中，分别加入福林酚试剂1 mL及质量分数为12%的碳酸钠溶液2 mL并定容至刻度，在室温下避光反应2 h，在765 nm波长处测定样品的吸光度，并根据工作曲线来计算提取液中的燕麦总多酚含量。