黄酮含量的测定

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总黄酮含量测定

附录A（标准的附录）总黄酮含量的测定（分光光度比色法）1 试剂所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。

1.1无水乙醇；1.2硝酸铝溶液（100g/L)：称取AL(NO3)3•9H2O 17.6g，加水溶解，定容于100mL容量瓶中，摇匀备用。

1.3 醋酸钾溶液（9.8g/L)：称取KCOOH 9.814g，加水溶解，定容于100mL容量瓶中，摇匀备用。

1.4 芦丁标准溶液：1.4.1芦丁对照品储备液（1.0g/L)：精密称取芦丁标准物质50.000mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释定容至50mL。

1.4.2 芦丁对照品工作溶液（0.2g/L)：精密吸取芦丁对照品储备液（1.4.1）10mL,置于50mL容量瓶中，加无水乙醇（1.1）至刻度，摇匀备用。

2 仪器全波长光度计；分析天平（0.000g）；容量瓶等玻璃仪器。

3 分析步骤3.1 标准曲线3.1.1精密吸取芦丁对照品工作液（1.4.2）1mL，2 mL，3mL,4mL，5mL，6mL分别置于50mL容量瓶中。

3.1.2加无水乙醇（1.1）至15mL，然后依次加入硝酸铝溶液（1.2）1.0mL，醋酸钾溶液（1.3）1.0mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，静止1hr。

3.1.3 用1cm比色杯于415nm处，以30%乙醇（V/V）溶液为空白，测定吸光度。

3.1.4 以50mL溶液中芦丁质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，用线性回归法做标准曲线，（线性范围0.0mg ~1.2mg（以50mL计）。

3.2 空白对照精密吸取待测试样4.0mL，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇14mL,加水稀释至刻度，摇匀。

静止1hr，用ø=0.22μ的过滤膜过滤，滤液作为样品的空白对照。

3.3样品测定3.3.1精密吸取待测样液4.0mL，置于50mL容量瓶中，按3.1.2进行操作。

静止1hr，用ø=0.22μ的过滤膜过滤，滤液作为测定液。

总黄酮含量测定

1 总黄酮含量测定1．1 紫外可见分光光度法严赞开［1］综述了紫外分光光度法测定植物中黄酮含量的方法．重点介绍了单波长法、差示法、双波长法、三波长法、导数法等紫外分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理及分析特性。

1．1．1 紫外可见分光光度法: 是以分子吸收光谱为基础的紫外－可见分光光度法，利用某些物质的分子在峰带I( 300 ～400 nm) 和峰带Ⅱ( 220 ～280 nm) 光谱区的吸光度来进行分析测定的方法。

具有简便、适用性广、准确度、精密度和重现性较好等特点，在总黄酮含量分析中发挥着重要作用。

1．1．2 比色法: 是一些药典最常用的总黄酮含量检测方法，它主要以Al( NO3 ) 3 为显色剂，在碱性条件下，利用其与总黄酮形成红色螯合物为特征。

常用于总黄酮类化合物含量测定的金属盐试剂有Al( NO3 ) 3、AlCl3 等。

1．1．3 差示分光光度法简称ΔA 法: 使用稍高于样品或稍低于样品的标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度。

而此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成比例关系，借差示工作曲线而求出样品的含量。

1．1．4 双波长和导数分光光度法: 用于测定吸收光谱曲线重达的混合物的含量而不须用解联立方程，还可分析高浓度及混浊样品，其灵敏度和准确度比普通分光光度法好。

在选择波长时，原则上除了要干扰物有相等吸光度外，还要求两波长比较接近，被测组分在该两波长处的摩尔吸收系数相差大些，这样方法的灵敏度会更高。

如果将上述双波长分光光度计上两个波长尽可能指近，使只相差1 ～2 nm，并且同时进行扫瞄，能得到试样一阶导数吸收光谱-吸光度对波长的变化率曲线，即导数分光光度法。

2 药理作用2．1 镇痛作用赵铁华等［4］研究结果显示灌胃、腹腔注射、皮下注射适宜剂量的黄芩茎叶总黄酮，对实验动物经化学和热刺激导致的疼痛反应皆有一定的抑制作用，其镇痛作用机制与中枢作用相关。

银杏总黄酮( TFG) 腹腔内注射可显著抑制甲醛致小鼠疼痛反应，延长小鼠舔足潜伏期并减少小鼠扭体反应数。

总黄酮含量测定-比色法

总黄酮（Flavonoid）含量(铝盐显色法酶标仪96样)（一）检测原理：总黄酮，即黄酮类化合物，包括黄酮，黄酮醇，黄烷酮，橙酮，异黄酮，黄烷醇，花青素等，是植物重要的一类次生代谢产物，具有有较强的抗氧化活性，可捕捉活性氧自由基，降低氧化伤害，在果实中影响其色泽和风味；对植物的抗逆性（比如抗紫外）和抗病虫害方面有重要作用。

实验采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法测定黄酮总含量，即在碱性亚硝酸盐溶液中，黄酮类化合物与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定反应产物在510nm处的吸光值，即可计算样品中总黄酮含量。

（二）试剂组分与配制：试剂名称规格保存要求备注试剂一液体1.6m L×1支4℃保存试剂二液体3m L×1瓶4℃保存试剂三液体12m L×1瓶4℃保存标准品粉剂mg×1支4℃保存做标曲，则用到该试剂（三）所需的仪器和用品：酶标仪、96孔板、粉碎仪、筛子、60%乙醇、离心机、蒸馏水。

（四）总黄酮测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：①组织样本：称取约0.1g新鲜样本(若水分充足，可增加样本取样质量)；或者称取约0.03g烘干样本（将样本在105℃下杀青3min，然后60℃烘干至恒重，粉碎，过40-60目筛，得到烘干样本），加入1.5mL的60%乙醇（若鲜样需研磨均质），60℃振荡提取2h（若蒸发用60%乙醇定容至1.5mL），25℃×12000rpm，离心10min，取上清待测。

【注】：若样本量较少，可同比例缩减样本量，如取0.02g干样，加入1mL60%乙醇，60℃振荡提取2h。

25℃×12000rpm，离心10min，取上清，用60%乙醇定容至1mL待测。

②液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测：①酶标仪预热30min，调节波长至510nm。

黄酮含量测定实验报告

黄酮含量测定实验报告1. 实验目的本实验旨在探究不同食材中黄酮含量的差异，并利用比色法测定黄酮的含量。

2. 实验原理比色法是利用物质对可见光的吸收特性进行定量分析的方法。

黄酮是一类具有广泛生物活性的天然化合物，常常用作药物和食品添加剂。

黄酮的浓度可以通过其在特定波长下的吸光度来确定。

3. 实验步骤3.1 准备工作- 准备所需食材样品，如黄芩、枸杞、山楂等。

- 准备试剂：甲醇、石油醚、2N盐酸、硼酸溶液、盐酸。

3.2 提取黄酮1. 将所选食材样品粉碎，并称取3克样品。

2. 将样品加入25mL石油醚，室温条件下搅拌30分钟，以去除油脂。

3. 过滤样品，将滤液收集入锥形瓶中。

4. 再加入25mL甲醇，室温条件下搅拌30分钟，以提取黄酮。

5. 过滤后，用甲醇定容至100mL。

3.3 构建标准曲线1. 取黄酮标准品，分别称取0.1g、0.2g、0.3g、0.4g和0.5g，置于50mL锥形瓶中。

2. 分别加入25mL石油醚和25mL甲醇，按上述方法提取黄酮。

3. 过滤后，用甲醇定容至50mL，得到浓度分别为2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL、8mg/mL和10mg/mL的黄酮溶液。

3.4 测定样品黄酮含量1. 将提取得到的样品溶液取5mL，并用甲醇定容至25mL。

2. 取适量样品溶液置于比色皿中，以甲醇为对照组。

3. 在波长为380nm的紫外可见光谱仪中测定吸光度。

4. 实验结果与分析4.1 标准曲线根据所得的吸光度数据，绘制出黄酮浓度与吸光度之间的标准曲线。

4.2 样品含量计算根据所测得的样品吸光度值，利用标准曲线可得到样品中黄酮的浓度。

5. 实验讨论与结论本实验利用比色法测定了不同食材中黄酮的含量。

通过对标准曲线的测定和样品吸光度的测量，可以准确计算出样品中黄酮的含量。

本实验的结果对于食品科学和药物研发具有重要意义。

黄酮作为一种天然化合物，具有多种生物活性，可以抗氧化、抗炎和抗肿瘤等。

因此，了解黄酮含量对于评估食材的营养价值和药物疗效具有指导意义。

总黄酮含量测定方案

总黄酮含量测定一样品溶液的制备70%乙醇溶液，料液比1﹕8 ，80度下回流2h。

取10g样品放入圆底烧瓶中加入80ml 70%乙醇溶液回流2h,抽滤定容至100ml备用。

使用时先离心再用70%乙醇稀释10倍做样品溶液。

二芦丁标准品的配置精密称取芦丁2mg，加无水乙醇定容至10ml。

制得浓度为0.2mg/ml芦丁标准品溶液。

三显色方法的确定1 扫描原液分别取芦丁溶液和样品溶液各1ml，加无水乙醇定容至25ml，空白对照，全波扫描。

2硝酸铝显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加5%亚硝酸钠溶液（1.25g亚硝酸溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml, 摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液(4,4014g硝酸铝.九水溶于无水乙醇中定容到25ml 容量瓶中) 1ml，摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠试液(2g氢氧化钠溶于无水乙醇中定容到50ml容量瓶中）10ml, 再加无水乙醇定容至25ml，摇匀，放置15min，空白对照，全波扫描bb 。

3氯化铝显色法分别取芦丁对照溶液和样品溶液各5ml ,加1%的氯化铝溶液（1g氯化铝溶于无水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml，摇匀放置10min，空白对照，全波扫描。

4 氢氧化钾显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加3ml10%氢氧化钾溶液（2.5g氢氧化钾溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中），充分摇匀显色5min后，用无水乙醇定容至25ml, 摇匀，空白对照，全波扫描。

四显色条件的确定五标准曲线的绘制分别取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml芦丁对照品溶液，按所选的显色方法测定吸光度，绘制标准曲线。

六精密度实验按标准曲线绘制方法，分别准确量取1.0ml芦丁标准液5份，按所选显色剂和所确定的最优显色条件在所选波长下测定吸光度。

次数 1 2 3 4 5吸光度平均值相对标准偏差RSD（%）七重现性实验取火棘果样品5份各10g,按提取步骤制得样品液，按制备标准曲线方法显色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。

中药总黄酮的含量测定方法

中药总黄酮的含量测定方法
中药总黄酮的含量测定方法常用的有以下几种：
1. 酸碱比色法：先将中药样品提取，然后加入酸性试剂，使黄酮化合物转化为黄色络合物，再通过比色法测定黄色染色的强度，从而计算出黄酮的含量。

2. 高效液相色谱法（HPLC）：中药样品经过适当溶剂提取后，利用高效液相色谱仪对黄酮进行分离和检测，通过峰面积或峰高与标准品进行比较计算黄酮的含量。

3. 紫外分光光度法：根据黄酮化合物在紫外可见光区域的吸收特性，在一定波长范围内测定样品的吸光度，通过比较吸光度与标准曲线计算黄酮的含量。

4. 荧光法：将黄酮溶液与适当溶剂混合后，在特定波长下激发，并测定荧光强度，通过标准曲线计算黄酮的含量。

以上方法可根据实际研究需求和条件选择适合的方案进行测定。

值得注意的是，不同的中药样品可能有不同的成分和浓度，因此在具体测定过程中需根据样品特点进行方法优化和验证。

黄酮含量测定的方法

黄酮含量测定的方法
黄酮是一类天然的植物次生代谢产物，具有多种生物活性，包括抗氧化、抗炎、抗癌等作用。

因此，测定黄酮含量是对植物提取物、草药或食物中黄酮类化合物进行研究和评价的重要手段。

目前常用的黄酮含量测定方法包括色谱法、分光光度法和高效液相色谱法等。

1. 色谱法：色谱法常用的分离技术有薄层色谱法（TLC）和气相色谱法（GC）。

其中TLC常用于初步筛选和分离样品中的黄酮类化合物，GC常用于定量分析。

2. 分光光度法：分光光度法是通过黄酮类化合物吸收特定波长处的紫外光来间接测定其含量。

这种方法简单、快速，但对样品的成分和色素的影响较大。

3. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是目前最常用的分析方法。

通过选择合适的柱型、流动相和检测波长，可以实现对不同黄酮类化合物的分离和定量。

此外，还可以结合质谱（MS）等技术，用于黄酮类化合物的结构鉴定和定量分析。

需要注意的是，不同的黄酮类化合物在不同的测定方法中可能表现出不同的灵敏度和选择性，因此在选择测定方法时需要考虑到样品中的主要成分和相关性质。

同时，还应注意样品的前处理、提取和色谱条件等因素，以获得准确可靠的测定结果。

黄酮含量测定

一、黄酮含量的测定方法1、样品的处理取材料地上部分洗净，晾晒至表面无水分，置于干燥箱中，80℃下干燥至恒重，磨成粉末，过筛待用。

2、标准曲线的绘制准确称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加体积分数70%乙醇溶解至刻度，摇匀得0.2mg/ml的对照品溶液。

然后，分别吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4ml，分别置于7支试管中，加水补齐至2.4ml，分别加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。

再加入10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。

加入4.3%氢氧化钠溶液4ml，然后分别加2.2ml水，摇匀，放置15min。

以空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长处测定吸光度。

3、黄酮的提取（微波提取法）准确称取干燥至横重的野生马齿苋粉末3份，每份1g，分别置于锥形瓶中，喷洒适量蒸馏水润湿，用中高火微波处理90s。

加入一定量体积分数为70%的乙醇溶液，于80℃恒温水浴加热提取1.5h，趁热过滤，洗涤残渣，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得黄酮提取液。

4、黄酮含量的计算吸取分别黄酮提取液1ml，加1.4ml蒸馏水，摇匀，加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。

再加10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。

加入4.3%氢氧化钠溶液4ml。

加入蒸馏水2.8ml，摇匀放置15min。

以蒸馏水代替黄酮提取液的空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长出测定吸光度。

带入标准曲线中，计算黄酮含量。

总黄酮含量（mg/g）= c*v/m式中：c为1ml样品中测得的黄酮含量（mg）；v为提取液总体积（ml）；m为叶片干重。

二、矿质元素的测定每份需0.2g。

黄酮含量的测定方法

黄酮含量的测定方法1、对照法1）①对照品制备：精密称取芦丁对照品20.8mg，置于100ml容量瓶中，加70%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。

②样品溶液制备精密称取样品0.50g，精密加入70%乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，称定重量，用70%乙醇补足减失重量，即得。

③标准曲线的制备精密称取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于25ml比色管中，加70%乙醇10ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加1mol/L 氢氧化钠溶液10ml，加70%乙醇置刻度，摇匀，放置15分钟。

各取10ml 置于50ml容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度。

在510nm的波长下测定吸光度。

2）①样品溶液的制备：分别精确称取80℃恒温干燥的样品用50%甲醇回流提取，料液比1：15,提取两次，每次30min，将两次提取液合并浓缩至一定体积，用30%甲醇定容至50ml 容量瓶中。

从其中取出12ml溶液放入100ml容量瓶中，稀释至刻度，再从100ml 容量瓶中取出1.5ml溶液，放至10ml容量瓶中，定容，为待测样品液Ⅰa和Ⅱa。

②最大吸收波长的选择：分别作样品液Ⅰa、Ⅱa及芦丁标准品的吸收曲线，均在350 nm 处有一强吸收，因此选择350 nm为测定波长。

③标准曲线的制定：精密称取芦丁对照品10.3mg，用少量30%乙醇溶解后，转移至50ml容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。

分别精密量取2ml、3ml、4ml、5ml、6ml芦丁溶液置于100ml 容量瓶中，于350 nm 波长处测定吸光值，以芦丁空白为参比，以芦丁浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，提示在4.12～12.36mg／103ml浓度之间，吸光度值与浓度呈现良好的线性关系。

④含量测定结果：分别吸取2．2．1中Ⅰa和Ⅱa待测样品液各适量于石英比色池中，按标准芦丁一吸光度测定法，以样液空白参比，于350nm 波长下测定吸光值，计算各提取液中总黄酮含量。

黄酮类含量测定方法

黄酮类含量测定方法
黄酮类是一种常见的植物次生代谢产物，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。

因此，测定黄酮类的含量对于研究植物的生物活性和药用价值具有重要意义。

以下是测定植物中黄酮类含量的常用方法：
1. 酸水解法
通过酸水解将黄酮骨架中的糖部分裂解，然后用紫外光谱法（UV）或高效液相色谱法（HPLC）等方法测定莽草中黄酮类的总含量。

但是，该方法会破坏一部分黄酮类化合物的结构、消耗大量的试剂和时间。

2. 高效液相色谱法（HPLC）法
由于黄酮类化合物的分子结构复杂，所以HPLC法是测定黄酮类含量的有效方法之一。

通过将样品在特定条件下分离、纯化，利用紫外或荧光探测器分析检测出样品中的黄酮类含量并计算。

该法具有分离效率高、检测灵敏度、可靠度高等优点。

3. 毛细管电泳法（CE）法
毛细管电泳法是利用毛细管对混合物进行分离，将混合物分离为单独的组分的方法，实现其含量分析。

该方法抗干扰性强、检测速度快，适用于对样品含量分析较低且复杂的情况。

综上所述，不同的样品或应用领域需要不同的黄酮类含量测定方法，研究者可以
根据自己的需要选用不同的方法进行研究。

药典中总黄酮测定方法

药典中总黄酮测定方法
总黄酮是一类具有类黄酮结构和作用的化合物，广泛存在于植物中。

药典中常用的总黄酮测定方法包括以下几种：
1. 显色法：将含总黄酮样品与乙醇-水混合溶液及磷酸钠溶液混合后，加入硼酸试液，产生紫色或蓝色显色反应，通过比色法测定总黄酮含量。

2. 二苯基丙烯酸法：将含总黄酮样品与二苯基丙烯酸溶液混合后，利用紫外可见光谱法测定吸光度，通过标准曲线计算总黄酮含量。

3. 铝试剂法：将含总黄酮样品与铝试剂溶液混合后，加入氢氧化钠溶液，经酸化处理后用紫外可见光谱法测定吸光度，计算总黄酮含量。

4. 比色法：将含总黄酮样品与乙醇-氢氧化钾溶液混合后加入稀硫酸溶液，以黄烷酮为对照品，经比色法测定吸光度，计算总黄酮含量。

以上是比较常用的药典中总黄酮测定方法，选择不同的方法需考虑到样品类型、检测精度等实际问题。

总黄酮含量测定方法

总黄酮含量测定方法
总黄酮含量测定呀，有几种常见方法呢。

紫外- 可见分光光度法。

先得把样品处理好，就像给食材做前期准备一样。

把含有总黄酮的样品进行提取，提取液要纯净呀，不能有太多杂质干扰，杂质多了就像炒菜的时候锅没洗干净，那肯定做不出好菜。

然后在特定波长下测定吸光度，这个波长就像一把专门开总黄酮这把锁的钥匙，得找对喽。

这方法安全性挺高的，只要按照正常操作流程，不会有啥危险情况，稳定性也不错呢，只要仪器正常工作，数据偏差不会太大。

在食品、药品检测领域应用可广泛了，能快速知道产品里总黄酮的大概含量。

我知道一家小型制药厂，想检测新研发的药品里总黄酮含量，就用这个方法，快速得到结果，他们高兴得不得了，就像挖到宝藏一样。

还有高效液相色谱法。

这得把样品制成合适的溶液，溶液就像一支整齐有序的队伍，不能乱哄哄的。

然后注入色谱仪，色谱仪就像一个超级严格的裁判，把不同成分分得清清楚楚。

测定过程中要保证仪器的清洁和稳定，这可不能马虎呀，不然数据就乱套了。

这个方法安全性也还好，就是操作要细心些。

在科研中用得很多，能精确测定总黄酮含量，优势就是精准度高呀。

有个科研团队研究植物中的总黄酮含量，用这个方法得到准确数据，他们兴奋地说这简直是找到了解开谜团的密码。

我觉得这些总黄酮含量测定方法各有各的好，在合适的场景下都能发挥大作用，就像不同的工具在不同的工作里都能大显身手。

黄酮含量的测定方法

黄酮含量的测定方法黄酮是一类天然产物，常见于植物中，具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种生物活性。

在药学和食品工业中，测定黄酮含量的方法非常重要，因为它可以评估原料的质量和产品的纯度。

目前常用的测定方法包括光谱法、色谱法和化学法等。

光谱法是测定黄酮含量最常用的方法之一。

常见的光谱法包括紫外-可见吸收光谱法（UV-Vis）和高效液相色谱-紫外检测器（HPLC-UV）。

紫外-可见吸收光谱法通过测定黄酮在特定波长下的吸光度，从而反应其含量。

这种方法操作简单，快速，但需要参考品的标准曲线进行定量分析。

相比之下，HPLC-UV法需要使用高效液相色谱仪，可以通过分离样品中的黄酮类化合物，再通过紫外检测器进行定量分析。

这种方法准确性高，分离效果好，但需要耗费较多的时间和资源。

除了光谱法，色谱法也是测定黄酮含量的常用方法之一。

目前常用的色谱法包括气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）。

气相色谱法通过将黄酮类化合物转化为易挥发的衍生化合物，再通过气相色谱仪进行分离和定量。

这种方法对于易挥发的黄酮类化合物特别有效，但对于不易挥发的化合物则不适用。

液相色谱法分为高效液相色谱法（HPLC）和超高效液相色谱法（UHPLC），通过使用不同的色谱柱和移动相来实现黄酮类化合物的分离和定量。

这种方法具有分离效果好，灵敏度高，且适用范围广的优点。

化学法是一种相对简单的测定黄酮含量的方法。

常见的化学法包括显色反应法、比色反应法和化学滴定法等。

显色反应法通过将黄酮化合物与特定试剂反应产生有色产物，再通过测定产物的吸光度进行定量分析。

这种方法快速简便，但对于不同的黄酮类化合物，可能需要不同的试剂进行定量。

比色反应法通过与金属离子或有机碱反应，产生有色络合物，从而测定黄酮含量。

相比之下，化学滴定法需要使用标准溶液进行滴定，通过滴定的体积或浓度差计算黄酮含量。

这种方法操作简单，但限制较大，只适用于某些特定化合物的测定。

总结起来，测定黄酮含量的方法有光谱法、色谱法和化学法等。

黄酮含量的测定

黄酮含量的测定黄酮含量的测定1.提取（以麦苗粉为例）根据仿⽣学原理，⼈体胃、⼩肠、⼤肠的体液酸度最佳pH分别为2.0,7.5,8.3。

称取1g麦苗粉末，选⽤⼄醇-⽔作为浸取剂，模拟胃肠道的pH，分别调pH值2.0,7.5,8.3,在60℃下超声50min，合并3次提取剂，，定容。

⼯艺流程：1g麦苗粉末→⼀次提取（加⼊10ml70﹪的⼄醇，⼄醇pH2.0）→抽滤→留渣继续⼆次提取，滤液保存→⼆次提取（加10ml70﹪的⼄醇，提取剂pH7.5）→抽滤→留渣继续三次提取，滤液保存→三次提取（加⼊10ml70﹪的⼄醇，⼄醇pH8.3）→合并三次滤液→定容⾄30mL→黄酮类化合物含量的测定分光光度法测吸光值。

麦苗汁的提取直接从榨汁后定容⾄100ml的麦苗汁中取36.5ml，加⼊85.2ml⽆⽔⼄醇，60℃超声提取150min。

2.试剂配置芦丁标准液：准确称取芦丁标准品7.5mg，⽤50%⼄醇溶解并定容⾄25mL，得到浓度为300mg/mL的芦丁标准溶液。

10% Al(NO3)3溶液：称取5g Al(NO3)3，⽤蒸馏⽔溶解并定容⾄50mL。

5% NaOH 溶液：称取2.5g NaOH，⽤蒸馏⽔溶解并定容⾄50mL。

5% NaNO2 溶液：称取2.5g NaNO2，⽤蒸馏⽔溶解并定容⾄50mL。

0.05mol/L Tris-HCl缓冲液(pH=8.2)：0.1mol/L Tris 50mL，加⼊0.1mol/L HCl 22.9mL，混匀，稀释定容⾄100mL。

3 mmol/L 邻苯三酚-HCl溶液：准确称取0.0189g邻苯三酚，⽤10 mmol/L HCl溶解并定容⾄100mL。

9mmol/L⽔杨酸-⼄醇：准确称取1.2430g⽔杨酸，⽤95%⼄醇溶解并定容到1000mL 容量瓶中。

9mmol/L FeSO4：准确称取1.3680g FeSO4，定容到1000mL容量瓶中。

10mmol/L HCl：准确量取83.3mL分析纯HCl，定容到100mL容量瓶中。

实验——总黄酮含量的测定

《有机分析实验讲义》植物中总黄酮的提取与测定黄酮类化合物主要指以2—苯基色原酮为基核的化合物，主要有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、花色素、查尔酮等以及它们的衍生物。

其主要结构式如图。

图黄酮类化合物分子结构式黄酮类化合物主要结构类型见表。

表黄酮类化合物主要结构类型原理黄酮母核中含有碱性氧原子,一般又多带酚羟基，能和铝离子产生黄色络合物,又加入亚硝酸钠和氢氧化钠,使在碱性溶液中呈红色，溶液在510 nm 处有最大吸收，显色反应在60 min 内稳定。

用芦丁作为对照品，用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂，吸光度与芦丁的浓度呈线形关系，采用分光光度法对总黄酮进行了含量测定。

仪器与试剂新锐T6型紫外可见分光光度计；Explrer型电子天平（0.1mg）。

60%的乙醇溶液；5%亚硝酸钠溶液；10%硝酸铝溶液。

芦丁标准溶液的配制称量13.2mg 芦丁，用60%乙醇定容到25ml 容量瓶作为标准溶液。

标准曲线的制作准确吸取0， 0.4， 0.8， 1.2， 1.6，2.0 ml 芦丁标准溶液，放入10毫升容量瓶内（写明标记），分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0 ml 的60%乙醇溶液；再加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml 摇匀，放置6min ；加入10%硝酸铝溶液0.5ml ，放置6min 后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml ，加60%乙醇定容，摇匀后，放置15min ；（扫描找到最大吸收）在510nm 处测定吸光度。

用0.0ml 作为空白，用芦丁含量的浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。

3.6.4 总黄酮提取与测定和计算称取0.6—0.8g 样品粉末，加入60ml60%乙醇放于100ml 圆底烧瓶内，置于水浴锅上，70℃条件下回流提取60min 。

过滤、定容于100ml.吸取样品量（根据样品的吸光度调整）1.0ml ，放入10毫升容量瓶内（写明标记），用60%乙醇加到2.0ml ；加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml 摇匀，放置6min ；加入10%硝酸铝，溶液0.5ml ，放置6min 后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml ，摇匀后，加60%乙醇定容，放置15min ；在510nm 处测定吸光度。

总黄酮含量测定方法

总黄酮含量测定方法总黄酮是指一类在植物中广泛存在的天然化合物，具有多种生物活性，包括抗氧化、抗菌、抗炎等作用。

因此，总黄酮含量的测定方法对于评估植物中潜在的药用价值具有重要意义。

以下是一种常用的总黄酮含量测定方法。

一、试剂与设备准备：1. 酸性乙醇溶液：加入浓盐酸（HCl）和乙醇（C2H5OH）（体积比为1:95）。

2. 铝试管。

3. DNA分光光度计或分光光度计。

4. 普鲁士蓝试液。

二、样品处理：1. 将待测样品（如草药材）洗净并晾干。

2. 将样品研磨成细粉末，通过筛网过筛以去除杂质。

3. 取一定质量的样品，加入酸性乙醇溶液中，浸泡4-6小时，以增加黄酮化合物的浸提效果。

4. 使用离心机离心加速提取，收取上清液并保存备用。

三、测定操作：1. 取适量的上清液，放入铝试管中。

2. 加入1 mL的酸性乙醇溶液，并摇匀，待样品溶解。

3. 将铝试管放入水浴中加热，加热温度为80C，保持10分钟。

4. 待样品冷却后，加入3 mL的普鲁士蓝试液，摇匀。

5. 使用DNA分光光度计或普通分光光度计，设置波长为595 nm，测定吸光度值。

四、数据处理与计算：1. 使用酸性乙醇溶液作为空白试剂进行校正。

2. 通过空白试剂的吸光度值，减去样品吸光度值，获得净吸光度值。

3. 根据普鲁士蓝的吸光度与黄酮的浓度之间的线性关系，计算样品中黄酮的含量。

以上就是一种常用的总黄酮含量测定方法，通过酸性乙醇提取样品中的黄酮化合物，并使用普鲁士蓝试液测定吸光度值，可以获得样品中总黄酮的含量。

为了提高测定结果的准确性，可以多次重复实验，并计算平均值。

此外，还可以使用其他方法进行总黄酮的测定，如高效液相色谱（HPLC）法和分光光度法等，根据实际需求选择合适的方法进行测定。

黄酮含量测定

荞麦黄酮含量测定
准备：把样品用无菌水洗干净，在室温下晾干后，放入烘箱中105℃杀青，杀青后样品放到60℃恒温干燥箱至恒重。

将处理好的样品研磨成粉末，放入干燥器中保存备用。

黄酮的测定参考(刘娜，2006)紫外分光光度法。

1.标准曲线的绘制
①芦丁标准品56㎎于50ml容量瓶中；
②用70%甲醇溶液溶解，并定容至刻度线（标准溶液）；
③用移液枪分别吸取芦丁标准溶液0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml、3ml置于25ml容量瓶中；
④加入三氯化铝2ml，乙酸甲溶液3ml，用70%的甲醇溶液定容至刻度，摇匀，得到芦丁对照品浓度梯度溶液；
⑤静置30min后用试剂空白作背景；
⑥分别对上述芦丁对照品浓度梯度进行测定，用吸光度(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线。

2.样品的测定
①准确称取研磨后的样品粉末1g，加入30ml75%的甲醇，置于60℃恒温水浴锅中水浴4h；
②趁热过滤于50ml的容量瓶中，用75%的甲醇溶液清洗滤纸和残渣，合并滤液，冷却至室温，加甲醇溶液定容至刻度，摇匀，为待测液。

③准确吸取1.0ml待测液置于25ml容量瓶中，分别后加入三氯化铝2ml，乙酸甲3ml，用75%的甲醇定容至刻度，摇匀，室温下放置30min，于波长420nm处测定吸光值。

黄酮含量测定

一、黄酮含量的测定方法
1、样品的处理
取材料地上部分洗净，晾晒至表面无水分，置于干燥箱中，80℃下干燥至恒重，磨成粉末，过筛待用。

2、标准曲线的绘制
准确称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加体积分数70%乙醇溶解至刻度，摇匀得ml的对照品溶液。

然后，分别吸取0、、、、、、，分别置于7支试管中，加水补齐至，分别加入5%亚硝酸钠，摇匀，放置6min。

再加入10%硝酸铝溶液，摇匀，放置6min。

加入%氢氧化钠溶液4ml，然后分别加水，摇匀，放置15min。

以空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长处测定吸光度。

3、黄酮的提取（微波提取法）
准确称取干燥至横重的野生马齿苋粉末3份，每份1g，分别置于锥形瓶中，喷洒适量蒸馏水润湿，用中高火微波处理90s。

加入一定量体积分数为70%的乙醇溶液，于80℃恒温水浴加热提取，趁热过滤，洗涤残渣，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得黄酮提取液。

4、黄酮含量的计算
吸取分别黄酮提取液1ml，加蒸馏水，摇匀，加入5%亚硝酸钠，摇匀，放置6min。

再加10%硝酸铝溶液，摇匀，放置6min。

加入%氢氧化钠溶液4ml。

加入蒸馏水，摇匀放置15min。

以蒸馏水代替黄酮提取液的空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长出测定吸光度。

带入标准曲线中，计算黄酮含量。

总黄酮含量（mg/g）= c*v/m
式中：c为1ml样品中测得的黄酮含量（mg）；v为提取液总体积（ml）；
m为叶片干重。

二、矿质元素的测定
每份需。

总黄酮含量的测定原理

总黄酮含量的测定原理
总黄酮含量的测定原理是通过化学分析方法，利用黄酮类物质与特定试剂发生化学反应产生显色或荧光物质，并据此测定总黄酮含量的多少。

常用的测定方法包括铝盐显色法、氧化还原法和高效液相色谱法。

其中，铝盐显色法是最常用的一种方法。

铝盐显色法基于黄酮类物质与铝离子（如铝酸盐）形成的稳定络合物可以表现出明显的颜色。

具体操作时，首先将样品提取物与铝试剂混合，在适当的条件下（如合适的温度、酸碱度等），黄酮类物质与铝离子发生络合反应，生成显色物质。

然后，使用分光光度计等仪器测定样品的吸光度或荧光强度，通过与标准曲线比对，计算出样品中总黄酮含量的浓度。

铝盐显色法测定总黄酮含量的原理基于黄酮类物质的结构特点，常规黄酮类物质中含有酚羟基（-OH）和芳香环。

铝离子与酚
羟基结合形成络合物，可以通过吸收特定波长的光线而显色。

反应的稳定性取决于黄酮对铝离子的亲合性，不同黄酮类物质的亲合性不同，因此测定不同种类黄酮的总含量时，可能需要根据不同物质的特性进行修正。

总之，总黄酮含量的测定原理是基于黄酮类物质与铝离子的化学反应，并据此测定样品中总黄酮含量的浓度。

不同的测定方法略有差异，但原理基本相同。