黄酮含量的测定

黄酮含量的测定

1.提取（以麦苗粉为例）

根据仿生学原理，人体胃、小肠、大肠的体液酸度最佳pH分别为2.0,7.5,8.3。称取1g麦苗粉末，选用乙醇-水作为浸取剂，模拟胃肠道的pH，分别调pH值2.0,7.5,8.3,在60℃下超声50min，合并3次提取剂，，定容。

工艺流程：1g麦苗粉末→一次提取（加入10ml70﹪的乙醇，乙醇pH2.0）→抽滤→留渣继续二次提取，滤液保存→二次提取（加10ml70﹪的乙醇，提取剂pH7.5）→抽滤→留渣继续三次提取，滤液保存→三次提取（加入10ml70﹪的乙醇，乙醇pH8.3）→合并三次滤液→定容至30mL→黄酮类化合物含量的测定分光光度法测吸光值。

麦苗汁的提取

直接从榨汁后定容至100ml的麦苗汁中取36.5ml，加入85.2ml无水乙醇，60℃超声提取150min。

2.试剂配置

芦丁标准液：准确称取芦丁标准品7.5mg，用50%乙醇溶解并定容至25mL，得到浓度为300mg/mL的芦丁标准溶液。

10% Al(NO3)3溶液：称取5g Al(NO3)3，用蒸馏水溶解并定容至50mL。

5% NaOH 溶液：称取2.5g NaOH，用蒸馏水溶解并定容至50mL。

5% NaNO2 溶液：称取2.5g NaNO2，用蒸馏水溶解并定容至50mL。

0.05mol/L Tris-HCl缓冲液(pH=8.2)：0.1mol/L Tris 50mL，加入0.1mol/L HCl 22.9mL，混匀，稀释定容至100mL。

3 mmol/L 邻苯三酚-HCl溶液：准确称取0.0189g邻苯三酚，用10 mmol/L HCl溶解并定容至100mL。

9mmol/L水杨酸-乙醇：准确称取1.2430g水杨酸，用95%乙醇溶解并定容到1000mL 容量瓶中。

9mmol/L FeSO4：准确称取1.3680g FeSO4，定容到1000mL容量瓶中。

10mmol/L HCl：准确量取83.3mL分析纯HCl，定容到100mL容量瓶中。

8.8 mmol/L H2O2 溶液：吸取0.109mL 30% H2O2，用蒸馏水溶解并定容至500mL。

3.标准曲线的绘制

准确称取芦丁标准品15mg，用50%乙醇溶解并定容至50mL，得到浓度为0.3mg/mL的芦丁标准溶液。取7支试管编号，分别按表1中所给的量加入各种试剂，并测定其吸光值。

表6 芦丁标准曲线的绘制

试剂0(mL) 1(mL) 2(mL) 3(mL) 4(mL) 5(mL) 6(mL) 芦丁标准溶液0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 50%乙醇 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0 5% NaNO2 溶液0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 10% Al(NO3)3 溶液0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 5% NaOH 溶液 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 蒸馏水 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 加入5% NaNO2 溶液0.4 mL后，摇匀，放置6min ；加入10% Al(NO3)3 溶液0.4 mL

后，摇匀，放置6min ；加入5% NaOH 溶液4 mL ，再加入2.2 mL 蒸馏水，摇匀，放置15min 。以0号试管为空白，于510nm 处测吸光值。以芦丁的含量(mg/mL)为横坐标，OD 值为纵坐标绘制标准曲线。

芦丁标准曲线的绘制,以不同溶液中芦丁质量分数（mg/mL ）为横坐标，吸光度值

为纵坐标,建立线性关系。

1 2 3 4 5 6 芦丁溶液浓度（mg/mL ）

0.015 0.030 0.045 0.060 0.075 0.090 OD 值

0.182

0.369

0.561

0.757

0.936

1.086

0.2

0.40.60.8

1.0

1.2

A

Concentration(mg/mL)

图1 芦丁标准曲线

4.提取液中黄酮类化合物的测定

将按前述工艺流程得到的精确定容到30mL 的提取液吸取3mL ，按上表6号试管所示加入5% NaNO 2 溶液0.4 mL 后，摇匀，放置6min ；加入 10% Al(NO 3)3 溶液0.4 mL 后，摇匀，放置6min ；加入5% NaOH 溶液4 mL ，再加入2.2 mL 蒸馏水，摇匀，放置15min 。以0号试管为空白，于510nm 处测吸光值，根据回归曲线计算出麦苗粉中黄酮类化合物的含量。