生物样品检测与质量控制

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选择具有特异性和很好剂量-效应关系的监测指 标的生物材料;
(一)血液
各种有害物质进入人体,不论经过哪个途径 进入,都进入血液,再输送到机体的各部分, 血液中有害物质和其代谢物的浓度通常反映了 接触的水平。 优点:反映接触水平。 缺点:血液的采集会造成一些损伤。
血液的采集和保存
血液按照采血渠道分为静脉血和末稍血; 静脉血是用注射器通过静脉血管取得的血液; 末梢血是指血或耳血。
用于检测微量元素的器皿,应用硝酸等溶液 浸泡。
用于检测微量有机物的器皿,应用重铬酸钾 洗液或萃取液、解吸液淋洗内壁。
尽量使用国家批准销售的标准物质和标准溶 液。
配制标准溶液时,要用基准物质或分析纯以 上级别的试剂,其分析性能应与待测物质具有 相同或相似。使用的溶剂应与样品溶液相同或 相似。配制后,要朔源到国家标准物质。
校正
采用肌酐校正法进行校正的尿样,需要返回 实验室后尽快进行肌酐检测,肌酐浓度大于 3g/L和小于0.5g/L的尿样应当舍弃。
注意事项:
采样时,采样对象应离开工作场所,更换工 作服,洗净手和脸,最好洗澡后,在清洁的 环境下,将尿液收集到清洁的容器内。
在采集班中尿或班后尿时,必须防止外来物 的污染。
析方法,且操作简单、快速和价廉。
生物样品的采集和保存
生物材料的选择 采样时间的选择 容器的选择和清洗 样品采集的要求
在职业卫生工作中,常用的生物材料有尿、 血、呼出气是较理想的生物监测的生物材料。
已经制订出生物限值的,应按其规定采集生 物样品。
参照国外相关材料进行
生物材料的选择
选择原则: 根据有害物质在体内的代谢动力学研究结果,
生物接触限值 职业病诊断参考值
生物监测,更多的是接触强度的评估,而不 是健康危险度的评估。
当内剂量和有害健康作用之间的定量关系已 确定,例如血铅、尿镉、碳氧血红蛋白,生 物接触指标可认为是健康危险度的指标。
当内剂量与有害作用和外接触都有定量关系 时,这个生物接触指标提供了接触和健康危 险度的信息 。
理想的生物接触指标:
应具有以下几个特点: 1、是接触有害物质的特异指标; 2、有监测接触低水平有害物质人群的足够灵
敏度; 3、接触剂量与有害作用及危险度有定量的关
系;
4、比空气监测获得更多的健康危险度的 信息;
5、有足够的样品稳定性; 6、没有明显的采样不适和任何健康危害; 7、有足够灵敏度、准确度和特异性的分
在运输过程中,血样应避免强烈振动和大的 温度改变。
血液冷冻后会溶血,为了防止溶血,可以将 血液的各部分(血浆和血细胞)分别冷冻贮 存。
如果血样临时存放过夜,可放在4℃保存, 否则必须冷冻保存。
用于测酶活性的血样,必须尽快分析,放置 时间过长会使酶活性降低。
(二)尿液
许多有害物质及其代谢物通过尿液排泄,其 浓度与接触剂量有一定的相关关系; 优点:采集简单方便
c - 校正前尿样中待测物的浓度,mg/L; cr - 尿样的肌酐浓度,g/L。
采样时间的选择
具有生物限值的化合物,其生物材料采集具有明确 规定,应严格执行。
没有限值的生物样品,采集时间应根据毒物代谢动 力学为依据:
半减期短的(几分钟~几小时)化合物,其在各种组 织中的水平变化很快,所以采样时间限制要严格;
注意事项:
当取血量在0.5m1以上时,当收集样品的环 境有外源性化学物质存在增加了污染可能性 时,以及测定血中易挥发性的化学物质时, 均不宜采集末稍血,应采集静脉血。
有些有害物质及代谢物在全血、血浆、血清 和血细胞中分布是不同的,因此,在采样时 必须根据检测的需要,采集不同的血液部分。
在进行金属分析时,必须考虑EDTA抗凝剂 对金属离子的络合作用,影响测定结果,最 好采用肝素抗凝。
在采样容器上必须贴上统一的标签,标签上 注明采样日期、样品编号(与采样记录用统 一的编号)、加入了什么防腐剂及加入量等 项目。
采样环境
检测对象应离开工作场所,脱去工作服,洗 净手、脸及取样部位,有条件的要在洗浴后进 行。 采样地点应清洁,没有污染;选择避风和上 风方向的场所进行,同时注意由于通风造成的 污染。 检测原形化合物时,对环境的污染要特别注 意。
生物监测与质量控制
中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所
闫慧芳
生物监测与检测标准方法 生物样品的采集和保存 检测过程质量控制
生物监测
生物监测可分为接触的生物监测、效应 的生物监测和敏感性的生物监测。
接触性标志物 效应性标志物 敏感性标志物
生物监测
暴露剂量评估 职业健康监护 职业病诊断
有的尿样如测定尿汞和挥发性有害物质的要 尽快分析,否则因容器壁的吸附或挥发使测 定结果偏低。
1.校正的方法有尿比重法和肌酐法
将尿样中待测物浓度校正到标准比重的方法。 (我国规定标准比重为1.020g/ml) 校正公式:
1.020 – 1.000 C=c×
D – 1.000 式中:C - 校正后尿样中待测物的浓度,mg/L或g/L;
技术培训
试验用品:
验收 合格供应商的评估 管理
标准物质的管理
实验室比对 能力验证 评审
生物样品检测的特点:
基质复杂
共存物质的影响
常用定量方法
工作曲线法 标准加入法 工作曲线法
检测过程质量控制:
采样用品
预处理、抽检
样品采集过程
环境、控制
标准溯源
一级标物
过程控制指标
最大容许相对偏差
(%)
1
2.5 5 10 20 30 50
(2)在测定样品前,必须检测1~2个质控样 或标准物质,测定结果满足质控要求后,才 可开始测定样品,测定结果才能有效。
没有伤害,容易接受。 缺点:受多种因素影响
必须进行校正
尿样的采集和保存
采样的时间很重要,一定要按照规定的时间 进行采样。
尿样的采集通常采集一次尿液,例如晨尿、 班前尿、班中尿或班后尿,每次采样最好收 集全部尿液,尿量应在50ml以上。
24小时尿样采集方法是在一个规定时间,先 将尿液排空弃掉,然后在24小时内,将所有 的尿液收集到容器中,直到开始规定的时间 再将尿液收集起来。
在收集的过程中,应尽量避免尿样被多次转 移。
为了防止尿样变质,通常需要加入防腐剂。 常用的防腐剂是盐酸或硝酸、氯仿等。
在测定金属化合物的尿样中加入酸,还起到 保护金属离子不被容器壁吸附的作用。通常 100ml尿样加1ml防腐剂,加后摇匀。
采集的尿样若不能及时测定,应放在冰箱中 保存;需要长期(5天以上)贮存的样品,最好 保持在冰冻状态。
样品的预处理
在测定过程中,应尽量避免或减少样品预处 理操作; 必须处理时,应尽量减少操作步骤和试剂用 量。
样品测定
(1)在每批样品测定的同时至少要带2个试剂 空白。
空白值应小于所用测定方法检出限的1/2, 其相对偏差应符合下表中的数值。
检测结果的浓度范围
(G/L,mg/g)
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7
半减期较长的毒物或代谢物,它们在各种组织中 的浓度反映了较长时间的接触程度,所以采样时间可 以不太严格。
生物样品的采集时间
半减期小于2h 的有害物质很难进行生物监测; 半减期为2~10h,最佳采样时间为班末或下一班前; 半减期为10~100h,可提供前一日吸收的物质总
量(在16h 后采样)或一周(周末采样)吸收的有 害物质总量的评价。 对于积蓄性有害物质如重金属,采样时间不重要。
c - 校正前尿样中待测物的浓度,mg/L或g/L; d - 尿样的实测比重,g/ml。
2.肌酐校正法
将尿样中的待测物浓度用尿中肌酐浓度进行校正的 方法。(机体每日肌酐的排泄量是比较稳定的,不受 饮食、出汗等因素影响) 校正公式:
c ( mg/L ) C = ――――――――
cr ( g/L ) 式中:C - 校正后尿样中待测物的浓度,mg/g;
测定方法的选择
要选用国家颁布的标准方法或统一的检测方 法。
无标准方法或统一方法时,可选用国内外公 认的检测方法,但应经过验证。要求此方法不 受样品中共存物的干扰,准确度、精密度和检 出限能满足检测的要求,并将操作规范化。
需要研制新方法时,必需按“研究规范”和 “采样规范”中规定的要求进行研究和验证, 并将操作规范比。
待测物是无机金属和类金属化合物,可用高 压聚乙烯塑料、聚丙烯塑料、石英、硬质玻 璃等容器。
待测物为有机化合物,采样用的容器应选用 玻璃或聚乙烯等塑料制品。
注意事项:
要避免使用橡胶和添加染料的制品。
如果样品需要冷冻保存,则不宜用玻璃容器, 以防冻裂。
采样用的容器应进行本底值抽检,空白值要 低于方法的检出限。
校正
采用尿比重校正法进行校正时,应在采样后 未加防腐剂或保护剂以前尽快测量尿比重。 如果条件允许,应在采集样品现场进行。
测量时,将收集的尿样移入25ml量筒中, 放入尿比重计,进行尿比重测定。对于比重 低于1.010g/ml和大于1.030g/ml的样品应 当舍弃,应重新进行采样。
测量比重后的尿液,最好弃去不用。
实验室外部质量控制
实验室外部质量控制是在实验室内部质量控 制的基础上进行的,是由上一级实验室对下级 实验室提供质控样品或盲样,检测结果由分发 质控样品或盲样的实验室进行统计评价,以考 核实验室的检测质量。
可以发现实验室是否有效地进行了实验室内 部质量控制;
也可以发现配制标准溶液时产生的误差;
应用低质量蒸馏水、其他溶剂、试剂等产生 的误差。
采样记录
采样时应在专用记录ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ上填写采样记录 记录样品编号 检测对象姓名 性别 年龄 工种 职业史
应检项目 采样时间 采样地点 采样环境(简单描述) 采样过程(简述)、 个人生活习惯(饮食、饮酒、吸烟等) 采 样人及记录填写者等
样品的贮存
在样品贮存及运输时,应防止被测物变质和 不引进干扰物质,避免样品中待测物的挥发和 在容器上滞留,样品的保存方法要与分析方法 相配合。 由于所用的生物材料和被测物不同,其贮存 (包括运输期间)要求也不一样。 标准检测方法对于样品的储存和运输都有明 确的说明,在实际操作中要严格执行。
仪器设备:
性能满足方法要求 定期检定 期间核查 标示管理 档案管理 使用记录
实验室环境:
环境条件满足设备需求
温度、湿度、防酸、尘等
环境条件满足方法要求
方法的关键技术指标
排毒设施
送风、排风
技术方法:
方法的选择
国标、国际标准、文献、研制
方法的验证
依据程序文件、方法验证的技术资料、审核 批准、作业指导书的制定、颁布
当测定血样中挥发性有害物质或代谢物时, 为了避免因挥发而造成损失,使测定结果偏 低,必须采集静脉血,而不能用末稍血。而 且应迅速密闭容器,在低温下保存。
采血过程中要避免污染,采样要在清洁无污染的场 所进行,对采血部位的皮肤除常规消毒外,必要时 还必须先清洗干净。
在需要采集血清或血浆或血细胞时,采血过程中要 防止溶血。用注射器采静脉血时,在转移血液时应 先把注射器针头取下,再将血样慢慢注入容器内, 可避免发生溶血。取未梢血时,不得用力挤压采血 部位,要尽量让其自然流出,避免因渗出组织液使 血液稀释,并弃去第一滴血。
在生物限值或检测方法中规定的采样时间:
班前是指工作班前1小时。 班中是指开始正常工作后2小时到下班前1小 时。 班末是指下班前1小时。 班后是下班后1小时。 下一班班前是指第二个工作班前1小时。 工作周末的班末是指一个工作周(通常为5个
工作班)的最后一个工作班下班前1小时。
容器的选择和清洗
一般根据待测物的化学性质、样品的性状和 样品需要保存的条件来选择容器。
质量控制分为:
职业卫生生物监测质量保证规范
➢ GBZ/T 173-2006
实验室内质量控制
实验室外质量控制
质量体系文件
质量管理体系 程序性文件 作业指导书 记录表格
质量控制的方面
人员 仪器设备 实验室环境 技术方法 试验用品
人员要求:
技术培训 相关专业背景 持证上岗 监督检查
实验室实际工作应用:
1.仪器设备: 量程、灵敏度和准确度等性能应满足检测的
要求; 计量仪器要依法进行定期检定,标有“准用”
标志; 仪器设备必须处于正常的工作状态。
玻璃容量器皿如容量瓶、吸量管、移液管等 和微量注射器、移液器等,必需使用一级产品, 其量值须经过检查和校正;
玻璃和塑料器皿的内壁应洗涤至无固体沉积 物和不挂水珠。
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