猪肉中瘦肉精的检测——GC-MS法PPT幻灯片
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
17
3.3 检测限及精密度
以信噪比的3倍和10倍分别计算检测限和定量限，方法检测限 为0.13 μg/kg, 定量限为0.43μg/kg。该方法有较好的日 内及日间精密度，在定量限附近，相对标准偏差小于20%（ 见表1），可满足分析要求。
表1. 克伦特罗的方法学数据
18
四、杜绝措施
• 相关部门要对瘦肉精的流通进行严加监管，实行购买登记 制度。
10
2.3 分析条件
• 色谱柱：Rtx-5MS (30 m×0.25 mm×0.25 μm) • 进样口温度：220℃ • 柱温程序：70℃(0.6 min)-25℃/min-220℃(6 min)-
25℃/min-280℃(5 min) • 恒线速度方式, 柱流量0.9 mL/min • 不分流进样 • 检测波长：244nm • 检测离子：
• 养牲畜者自律，监管人严格监督。 • 对责任人加大处罚力度，完善法律法规实。
19
五、参考文献
[1]气相色谱质谱联用仪(GC-MS)测定猪肉中的瘦肉精的含量.食品 与发酵工业．2011年03期．
[2]Deng Ruiguang，Zhang Haitang，Wang Ziliang， Zhong Hua ， Zhang Gaiping．Development of GC-MS Method for Detecting Clenbuterol Residues and Confirmation of Self-made Strip Performance ．CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN.2008,24(11)
C18小柱
上清液 离心5 min
超声10 min
0.8 mL 甲醇：20 mmol/L 磷酸 =1：1(v/v）解析，调ph=7， 定容2mL
毛细管 整体柱
涡旋30s 衍生5 min
100 μL 甲苯 100 μLBSTFA
0.2 mL 的甲醇解析+ 50 μL 的内标使用液
300μL 甲苯混匀
按操作规程使 GC-MS仪到工作状态，
猪肉中瘦肉精—克伦特罗的检测
制作人： 班级：食品1001班 学号：201035090114
1
目录
一、背景事件 二、概述
1、瘦肉精 2、克伦特罗 三、气相色谱-质谱联用法（GC-ＭＳ）检测克伦特罗 1、检测方法选择 2、实验具体方案 3、实验结果及分析 四、杜绝措施 五、参考文献
2
一、“双汇”瘦肉精事件
5
2.2 人在食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉后会出现心
率失常、酮症酸中毒或乳酸中毒、急性中毒症状如面色潮 红、头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢 麻木等。
国家标准规定，每克肉中瘦肉精含量不能超过1纳克 。
6
三、气相色谱-质谱联用法（GC-ＭＳ）检测克伦特罗
1、检测方法选择
GC-MS法优点：把色谱高效快速的分离效果和质谱高 灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在 的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且 具更高的检测极限。
基线平直时进样
质谱图
12
3、实验结果及分析 3.1 盐酸克伦特罗的GC-MS 测定
图1 为衍生化克伦特罗和内标的质谱图，以克伦特罗碎片离 子 (m/z 86) 与内标碎片离子 (m/z 95) 的浓度比值为横坐
标，峰面积比值为纵坐标进行定量。
13ห้องสมุดไป่ตู้
14
3.2 标准曲线
图2 为空白猪肉和添加2.5μg/kg 克伦特罗的猪肉样品 提取液的离子流图，内标 (Peak 1) 和克伦特罗 (Peak 2) 的保留时间分别为9.83 min 和9.92 min, 空白猪肉样 品在被测物及内标处均无干扰
肉质对比
4
2、克伦特罗
2.1 在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗。其学名是盐酸 克伦特罗，是一种平喘药。
• 结构简式：
• CAS号：37148-27-9 • 分子式：C12-H18-Cl2-N2-O • 理化特性：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，熔点
161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。
GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更 低，常用作筛选后阳性样品的确证。
7
2、实验具体方案
2.1 分析方法
用C18小柱和聚（甲基丙烯 酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯） 整体柱进一步富集净化，经N ,O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺 (BSTFA) 衍生，选择离子监测 方式进行气相色谱质谱测定。 该方法以克伦特罗同位素 (Clenbuterol-D9) 为内标，内 标法定量。
15
16
相关性分析
分别添加不同体积的克伦特罗标准溶液(1 μg/mL) 和 50μL 内标溶液于2 g 猪肉样品中 (其中克伦特罗的质量 分别为1、5、10、20、40 和100 ng)，样品的处理方法如 上所述。
以克伦特罗与内标的峰面积的比值对浓度比值进行线性回 归，发现克伦特罗在0.5-50μg/kg 的浓度范围内，线性 关系良好，相关系数大于0.999。
C18小柱
8
2.2 仪器与试剂
仪器：岛津GCMS-QP2010 Plus 高速离心机（转速可达到12000r/min以上） 漩涡混合器 超声波清洗器 氮吹仪 固相萃取装置 C18固相萃取小柱（100 mg, 3 mL） 混合型阳离子交换固相萃取柱
9
试剂：
• 盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CLB）标准溶液1μg/mL • 内标溶液（Clenbuterol-D9， CLB-D9）1μg/mL • N , O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA） • 甲醇(分析纯） • 20 mmol/L 磷酸溶液 • 甲苯（分析纯）
2011年3•15特别行动中，央视曝光了双汇“瘦肉精”养猪 一事 。河南省孟州市等地养猪场采用违禁动物药品“瘦肉精 ”饲养生猪，有毒猪肉流入双汇食品中。
3
1、瘦肉精
二、概述
瘦肉精是一类动物用药，有数种药物被称为瘦肉精，例如 莱克多巴胺（Ractopamine）及克伦特罗（Clenbuterol）等。 将瘦肉精添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使 用、使肉品提早上市、降低成本。但因为考虑对人体会产生副 作用，各国开放使用的标准不一。
CLB：检测 m/z 86, 187, 243, 262， CLB-D9：检测 m/z 95, 187, 262 以克伦特罗 (m/z86) 与内标峰 (m/z 95) 的峰面积比校 准定量。
11
2.4 实验流程
称取(2 ± 0.01) g 己绞碎的猪肉 4 mL 0.1 mol/L 盐酸
旋涡振荡5 min
3.3 检测限及精密度
以信噪比的3倍和10倍分别计算检测限和定量限，方法检测限 为0.13 μg/kg, 定量限为0.43μg/kg。该方法有较好的日 内及日间精密度，在定量限附近，相对标准偏差小于20%（ 见表1），可满足分析要求。
表1. 克伦特罗的方法学数据
18
四、杜绝措施
• 相关部门要对瘦肉精的流通进行严加监管，实行购买登记 制度。
10
2.3 分析条件
• 色谱柱：Rtx-5MS (30 m×0.25 mm×0.25 μm) • 进样口温度：220℃ • 柱温程序：70℃(0.6 min)-25℃/min-220℃(6 min)-
25℃/min-280℃(5 min) • 恒线速度方式, 柱流量0.9 mL/min • 不分流进样 • 检测波长：244nm • 检测离子：
• 养牲畜者自律，监管人严格监督。 • 对责任人加大处罚力度，完善法律法规实。
19
五、参考文献
[1]气相色谱质谱联用仪(GC-MS)测定猪肉中的瘦肉精的含量.食品 与发酵工业．2011年03期．
[2]Deng Ruiguang，Zhang Haitang，Wang Ziliang， Zhong Hua ， Zhang Gaiping．Development of GC-MS Method for Detecting Clenbuterol Residues and Confirmation of Self-made Strip Performance ．CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN.2008,24(11)
C18小柱
上清液 离心5 min
超声10 min
0.8 mL 甲醇：20 mmol/L 磷酸 =1：1(v/v）解析，调ph=7， 定容2mL
毛细管 整体柱
涡旋30s 衍生5 min
100 μL 甲苯 100 μLBSTFA
0.2 mL 的甲醇解析+ 50 μL 的内标使用液
300μL 甲苯混匀
按操作规程使 GC-MS仪到工作状态，
猪肉中瘦肉精—克伦特罗的检测
制作人： 班级：食品1001班 学号：201035090114
1
目录
一、背景事件 二、概述
1、瘦肉精 2、克伦特罗 三、气相色谱-质谱联用法（GC-ＭＳ）检测克伦特罗 1、检测方法选择 2、实验具体方案 3、实验结果及分析 四、杜绝措施 五、参考文献
2
一、“双汇”瘦肉精事件
5
2.2 人在食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉后会出现心
率失常、酮症酸中毒或乳酸中毒、急性中毒症状如面色潮 红、头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢 麻木等。
国家标准规定，每克肉中瘦肉精含量不能超过1纳克 。
6
三、气相色谱-质谱联用法（GC-ＭＳ）检测克伦特罗
1、检测方法选择
GC-MS法优点：把色谱高效快速的分离效果和质谱高 灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在 的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且 具更高的检测极限。
基线平直时进样
质谱图
12
3、实验结果及分析 3.1 盐酸克伦特罗的GC-MS 测定
图1 为衍生化克伦特罗和内标的质谱图，以克伦特罗碎片离 子 (m/z 86) 与内标碎片离子 (m/z 95) 的浓度比值为横坐
标，峰面积比值为纵坐标进行定量。
13ห้องสมุดไป่ตู้
14
3.2 标准曲线
图2 为空白猪肉和添加2.5μg/kg 克伦特罗的猪肉样品 提取液的离子流图，内标 (Peak 1) 和克伦特罗 (Peak 2) 的保留时间分别为9.83 min 和9.92 min, 空白猪肉样 品在被测物及内标处均无干扰
肉质对比
4
2、克伦特罗
2.1 在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗。其学名是盐酸 克伦特罗，是一种平喘药。
• 结构简式：
• CAS号：37148-27-9 • 分子式：C12-H18-Cl2-N2-O • 理化特性：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，熔点
161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。
GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更 低，常用作筛选后阳性样品的确证。
7
2、实验具体方案
2.1 分析方法
用C18小柱和聚（甲基丙烯 酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯） 整体柱进一步富集净化，经N ,O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺 (BSTFA) 衍生，选择离子监测 方式进行气相色谱质谱测定。 该方法以克伦特罗同位素 (Clenbuterol-D9) 为内标，内 标法定量。
15
16
相关性分析
分别添加不同体积的克伦特罗标准溶液(1 μg/mL) 和 50μL 内标溶液于2 g 猪肉样品中 (其中克伦特罗的质量 分别为1、5、10、20、40 和100 ng)，样品的处理方法如 上所述。
以克伦特罗与内标的峰面积的比值对浓度比值进行线性回 归，发现克伦特罗在0.5-50μg/kg 的浓度范围内，线性 关系良好，相关系数大于0.999。
C18小柱
8
2.2 仪器与试剂
仪器：岛津GCMS-QP2010 Plus 高速离心机（转速可达到12000r/min以上） 漩涡混合器 超声波清洗器 氮吹仪 固相萃取装置 C18固相萃取小柱（100 mg, 3 mL） 混合型阳离子交换固相萃取柱
9
试剂：
• 盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CLB）标准溶液1μg/mL • 内标溶液（Clenbuterol-D9， CLB-D9）1μg/mL • N , O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA） • 甲醇(分析纯） • 20 mmol/L 磷酸溶液 • 甲苯（分析纯）
2011年3•15特别行动中，央视曝光了双汇“瘦肉精”养猪 一事 。河南省孟州市等地养猪场采用违禁动物药品“瘦肉精 ”饲养生猪，有毒猪肉流入双汇食品中。
3
1、瘦肉精
二、概述
瘦肉精是一类动物用药，有数种药物被称为瘦肉精，例如 莱克多巴胺（Ractopamine）及克伦特罗（Clenbuterol）等。 将瘦肉精添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使 用、使肉品提早上市、降低成本。但因为考虑对人体会产生副 作用，各国开放使用的标准不一。
CLB：检测 m/z 86, 187, 243, 262， CLB-D9：检测 m/z 95, 187, 262 以克伦特罗 (m/z86) 与内标峰 (m/z 95) 的峰面积比校 准定量。
11
2.4 实验流程
称取(2 ± 0.01) g 己绞碎的猪肉 4 mL 0.1 mol/L 盐酸
旋涡振荡5 min