生物制品化学规定规程

生物制品化学规定规程

本规程载人的化学检定项目，如采用其他方法测定，其结果与本规程所列应无显着差异。如遇制品质量存在疑问时，其最后判定应以本规程所列方法测定结果为准。

标准液的配制与标定方法参看最新版《中国药典》。

PH值测定（电位法）

1 仪器校准（定位）用标准缓冲溶液

应使用分析纯标准缓冲物质配制。

1.1 0.05mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液

称取于115±5℃干燥2～3小时的邻苯二甲酸氢钾

（KHC8H4O4）10.12±0.01g，溶于蒸馏水，并稀释至1000ml。

1.20.025mol/L磷酸氢二钠和0.025mol/L磷酸二氢钾混合溶液

分别称取在115±5℃干燥2～3小时的磷酸氢二钠

（Na2HPO4）3.53±0.01g和磷酸二氢钾（KH2PO4）3.39±0.01g，溶于预先煮沸过15～30分钟并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。

1.30.01mol/L硼砂溶液

称取硼砂（Na2B4O7·10H2O）3.80±0.01g（注意：不能烘！），溶于预先煮沸过15～30分钟并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。置聚乙烯塑料瓶中密闭保存。

标准缓冲溶液于0～50℃的标准pH值

温度(℃)

0.05mol/L邻苯

二甲酸氢钾

0.025mol/L混

合磷酸盐

0.01mo

l/L硼砂

0 4.01 6.98 9.46 5 4.00 6.95 9.39 10 4.00 6.92 9.33 15 4.00 6.90 9.28 20 4.00 6.88 9.23 25 4.00 6.86 9.18 30 4.01 6.85 9.14 35 4.02 6.84 9.10 40 4.03 6.84 9.07 45 4.04 6.83 9.04 50 4.06 6.83 9.02 2 操作

使用玻璃电极酸度计测定，操作方法按仪器说明书进行。用两种标准缓冲溶液校正或核对，相差不得超过0.05。

固体总量测定

甲、105℃干烤法

1 操作

精确量取一定体积样品于干燥至恒重的扁称量瓶中，置105℃烤箱中烘至恒重。

2 计算

烘干后样品重量

样品固体总量%（g/ml）= ──────────×100

样品ml数

乙、50℃干烤法

1 操作

精确量取1mlA群脑膜炎球菌多糖菌苗半成品原液于已干燥至恒重的称量瓶（2×2.5cm）中，置50℃干燥箱中，干燥至恒重。

2 计算

同105℃干烤法。

半微量定氮法

1 试剂

1.1 硫酸

化学纯，比重1.84。

1.2 消化剂

硫酸铜（CuSO4·5H2O）1份与硫酸钾（K2SO4）10份共同研细混匀即成。

1.3 1

2.5mol/L氢氧化钠液

取氢氧化钠500g，加蒸馏水至1000ml，摇匀。

1.4 2%硼酸吸收液

硼酸20g加蒸馏水使溶解成1000ml，加混合指标剂10ml，摇匀。

1.5 混合指示剂

0.2%（g/ml）溴甲酚绿酒精溶液5份与0.1%（g/ml）甲基红酒精溶液2份混合配成。

1.6 标准0.01mol/L盐酸或0.005mol/L硫酸溶液。

2 操作

2.1 消化

准确量取一定体积样品（含氮量在1～2mg左右）于凯氏定氮瓶中，加消化剂约0.3g，浓硫酸1.0ml进行消化，至澄明蓝绿色，继续消化约60分钟，同时做空白。

2.2 蒸馏与滴定

取10ml硼酸吸收液于100ml三角瓶内，将凯氏蒸馏器冷凝管末端浸入硼酸吸收液内，将消化好的样品移入凯氏蒸馏器内，用蒸馏水洗定氮瓶3～4次，洗液亦移入蒸馏器内，再加5ml 12.5mol/L氢氧化钠溶液，然后进行蒸馏，待接收液总体积约35～50ml,将冷凝管末端取出液面，让蒸汽冲洗约1分钟，再用少量蒸馏水冲洗冷凝管末端，接收液用标准0.01mol/L盐酸或0.005mol/L硫酸进行滴定，至溶液显著变色。

3 计算

（样品滴定数–空白滴定数）×标准盐酸mol/L×14

样品总氮含量

(mg/ml)────────────────────────

样品ml数

附注

1.蒸馏前应蒸洗蒸馏器15分钟。

2.蒸汽发生瓶内应加数滴硫酸及甲基红指示剂至呈明显红色。

蛋白质含量测定

甲、钨酸沉淀法

1 试剂

1.110%钨酸钠溶液

取钨酸钠10g，加蒸馏水使溶解成100ml。

1.2 0.33mol/L硫酸溶液

量取化学纯硫酸1.86ml，缓缓注入适量的蒸馏水中，待冷加水稀释至100ml。

1.30.145mol/L氯化钠溶液

取氯化钠9g，加蒸馏水使溶解成1000ml。

2 操作

2.1 钨酸除蛋白质

精确量取样品2ml加蒸馏水14ml，加10%钨酸钠2ml，

0.33mol/L硫酸2ml，摇匀，静置30分钟过滤。

2.2 精确量取样品1ml，用0.145mol/L氯化钠溶液准确稀释至每ml含氮量1mg左右。

2.3 精确量取稀释液1ml及除蛋白质滤液5ml，分别移入凯氏定氮瓶中，用半微量定氮法测定样品的总氮及非蛋白氮含量。

3 计算

样品总氮含量(mg/ml)=（样品滴定数-空白滴定数）×标准盐酸mol/L×14×稀释倍数

样品非蛋白氮含量(mg/ml)=（样品滴定数-空白滴定数）×标准盐酸mol/L×14×12

样品蛋白质含量(g/ml)=（总氮-非蛋白氮）×6.25×1/10附注

1.样品蛋白质含量如超过10%(g/ml)，除蛋白质时应适当加大样品稀释倍数，10%钨酸钠及0.33mol/L硫酸用量相应地按比例增加，使溶液钨酸浓度仍保持1%。