微生物操作培训大纲.doc

微生物检验技术培训大纲

一．玻璃器皿准备

（1）玻璃器皿的清洗

新购进玻璃器皿处理

新构进的玻璃器皿，均含有游离碱，故应先浸于洗液或20ml/L盐酸内数小时，再用自来水冲洗干净。待干燥后，灭菌备用。

日常清洗注意事项

a.一切使用过得玻璃器皿，用完后先用清水冲洗干净，然后用热的肥皂水

洗刷清洁，再用清水冲数次，蒸馏水冲洗两次，自然风干，备用。如果肥皂水洗刷仍未清洁，可用洗液浸泡，洗出后用清水冲洗5次以上，再用蒸馏水冲洗两次。

b.吸管用完后应立即用清水和蒸馏水冲洗干净即可，如附有污物可用洗液浸

泡。

c.附有油污的器皿，若用热的肥皂水不能洗净时，切不可用洗液浸泡，而应先

用热的酒精、汽油或丙醇洗涤;或用氢氧化钠热溶液2（％）浸泡10-15分钟，然后再用稀盐酸洗一次，用水冲洗数次。油污如仍未出去，再重复以上手续一次。

洗液的配制和使用：

a.在35ml重铬酸钾饱和液（重铬酸钾180g溶于100ml水中，或63g重铬酸钾

溶于35g水中），慢慢加入粗制浓硫酸1000ml玻璃器皿一般在这种洗液中浸泡2h以上即可除污。如将其加热至80-100℃（但不可加热至发烟或煮沸，此时温度达240-250℃），浸泡10-15分钟，效力更大。

b.溶解80g重铬酸钾于1000ml温水中，待凉后，徐徐加入粗制浓硫酸100ml于

水中即成含硫酸10％的清洗液，使用时，将玻璃器皿先浸于这种洗液中

24h，然后清水和蒸馏水冲洗。

c.溶60g重铬酸钾于300ml热水中，慢慢加入粗制浓硫酸460ml，边加边用玻璃

棒搅拌，因为此液产生大量热，在配制时应用耐热容器，并放在水槽中以便冷却。一般玻璃器皿在此溶液中浸泡6h以上即可。

如何判定清洗干净

既不聚成水滴，也不成股流下。

（2）微生物检测常用玻璃器皿及规格

所用玻璃仪器及规格：

吸管：1ml和10ml，标有0.1ml刻度

平皿：皿底直径为9cm

试管：15×150mm、18×180mm、20×200mm、

酒精灯

三角瓶：250ml、300ml

广口瓶：用于采样

大肠菌群：双料:、单料、复发酵

单料乳糖胆盐发酵管：20g蛋白胨、10g乳糖、5g胆盐、1.6％溴甲酚紫乙醇溶

液0.6ml（0.04％溴甲酚紫水溶液25ml）、蒸馏水100 制法：将各成分溶于1000ml水中，溶解后将PH值调至7.4分装于18×180mm试

管中，115C高压灭菌15分钟。

双料乳糖胆盐发酵管：单料除水外其他各成分加倍, 分装于18×180mm试管中. 乳糖发酵管：20g蛋白胨10g乳糖1.6％溴甲酚紫乙醇溶液0.6ml（0.04％溴甲酚紫水溶液25ml）蒸馏水1000ml PH值调至7.4取3ml分装于12×

120mm试管中，1150C高压灭菌15分钟。

（3）玻璃器皿的准备、包扎、高压灭菌条件

棉塞制备：用普通棉花纱布做成所需大小的棉塞，高压灭菌固定。

吸管：在吸管的上端塞上一小段棉花，防止吸管中的菌液、酸液、碱液等吸入口中。塞入的棉花应与吸管口保持5mm左右的距离棉花全长不短于10mm，赛好棉花后用截成条的旧报纸包装，先把吸管的尖端放在纸条的一端，45度角折叠纸条，包住尖端。以螺旋式包扎剩余的纸条折叠打结，也可把塞好棉花的吸管放入铁皮筒中，加盖密封1210C高压灭菌15分钟。

平皿：用过的培养皿中有废弃的培养基，为了防止杂菌传播污染环境，也应先经高压灭菌或沸水煮沸半小时后，倒掉污物洗涤。新的培养皿可直接洗刷，洗净后用蒸馏水冲洗三次，培养皿全部向下，一个接一个压着皿边，然后扣在桌子上空净水。用报纸包好或装在铁皮筒中，1210C15分钟。

三角瓶：洗刷干净的三角瓶塞上塞子用截成方块的旧报纸包好，用绳子捆住。二．培养基选用、配制、成分作用、高压灭菌条件（表格）

三．高压锅正确使用方法及注意事项

使用规则

1）松开紧固螺杆，将器盖翻开，放入消毒物后，为胆内注水，并观测水位至最高水位线即可，在顺时针方向拧紧螺杆后，消毒器就可以接通

电源。

2）加热时，应把放气阀推向垂直放气的位置，使冷空气加热由筒内逸出。

3）等较急的蒸汽冒出时，关闭蒸汽阀直至压力表指针上升至消毒物所需压力后开始记消毒灭菌时间。

4）消毒完毕，切断电源，开启上边放气阀，待汽排尽压力表指针回到0时才能打开器盖，开启下面放水阀，排放胆内热水。

5）对瓶装溶液消毒完毕压力表指针回到0后，必须在放汽水咀打开下，等冷却20分钟左右，方能打开器盖，否则溶液瓶回因突然遇冷而发生

爆炸事故。

6）每次使用完毕应擦干各部件，以防生锈。

注意事项

1）严禁使用不在有效期内的或其它型号的压力表和安全阀

2）该仪器使用一年时必须进行外部检查，使用三年时，必须进行内外部检查；使用六年时，必须进行全面检查。

3）严禁在消毒器内有压力时打开器盖。

4）盖上器盖时应轻旋，并在橡胶圈上涂上滑石粉，提高密封圈使用寿命。5）不用时消毒器应放在通风处。

四．灭菌后培养基的存放注意事项

最好及时用完，不宜保存过久，以免减低其营养价值或化学变化。培养基在储存期间，因能吸收空气中的二氧化碳而变为酸性。

五．无菌室注意事项（人员、环境、灭菌要求）

1.无菌室要保持清洁整齐，室内仅存放最必须的检验用品，如：酒精灯、酒精

棉、火柴、镊子、接种针、接种环、记号铅等。

2.室内检验用具及桌凳应保持固定位置，不随便移动。

3.每2—3周用2%石碳酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌凳及地面，然后用2%

石碳酸水溶液喷雾消毒空气，最后紫外灯杀菌半小时。

4.定期检查室内空气无菌状态，进行细菌和霉菌的检查。