生产工艺和检验方法

质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂的检验方法

和相关情况说明

4.1 质量规格要求

4.2维生素K2（发酵法）生产工艺

4.3生产使用工艺

4.4食品中的检验方法和相关情况说明

质量规格要求

维生素K2（发酵法）质量规格要求，执行国家卫计委2016年第8号公告中附件3中规定。

1 范围

本质量规格要求适用于以大豆粉、白砂糖、葡萄糖经纳豆枯草芽孢杆菌发酵的发酵物，经提取精制而成的食品营养强化剂维生素K2（发酵法）。商品化的维生素K2（发酵法）包括：以食用油为辅料的维生素K2（发酵法）油剂和以变性淀粉或糊精、乳化剂、抗氧化剂等为辅料的维生素K2（发酵法）粉剂。

2分类

2.1 维生素K

（发酵法）油剂

2

维生素K2（发酵法）油剂产品其主要成分为维生素K2族的七烯甲萘醌，辅料包括大豆油。

2.2 维生素K

（发酵法）粉剂

2

维生素K2（发酵法）粉剂产品其主要成分为维生素K2族的七烯甲萘醌，辅料含变性淀粉、淀粉、糊精、微晶纤维素、乳化剂、抗氧化剂等。

3 分子式、结构式和相对分子质量

3.1分子式

C46H64O2

3.2 结构式

3.3 相对分子质量

649.00（按2007年国际相对原子质量）

4 技术要求

4.1 感官要求：应符合表1的规定。

表1 感官要求

4.2 理化指标：应符合表2的规定。

表2 理化指标

4.3 微生物指标：应符合表3的规定。

表3 微生物指标

5 其他要求

产品应装于适宜的避光容器中充氮或真空保存，产品的最佳保存温度为20℃以下。

附录A

检验方法

A.1 安全提示

本质量规格要求试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，操作时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用易燃品时，严禁使用明火加热。

A.2 一般规定

本质量规格要求所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的一级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。

A.3 鉴别试验

A.3.1方法提要

试样用正己烷提取，按含量测定项下色谱条件进行高效液相色谱分析，与七烯甲萘醌标准品保留时间进行对照。试样色谱图的主峰应与标准品主峰保留时间一致。

A.3.2试剂和材料

A.3.2.1维生素K2标准品（七烯甲萘醌，MK-7）。

A.3.2.2正己烷：分析纯。

A.3.3分析步骤

A.3.3.1试样溶液处理

精密称取试样适量（精确至0.001 g）于10 mL容量瓶中，加入正己烷超声提取30 min，定容至刻度，摇匀，过0.45 μm滤膜，得上样试样。

A.3.3.2试样检测

按照含量测定项下方法，配制标准溶液。按照含量测定色谱条件将标准溶液和样品溶液10 µL注入高效液相色谱仪中测定，以保留时间定性鉴别。

A.4 维生素K

含量的测定

2

A.4.1试剂和材料

A.4.1.1维生素K2标准品（七烯甲萘醌，MK-7）。

A.4.1.2异丙醇：分析纯。

A.4.1.3甲醇：色谱纯。

A.4.2仪器和设备

A.4.2.1高效液相色谱仪。

A.4.2.2紫外光检测器：可变波长。

A.4.2.3数据处理系统：色谱工作站或数据处理机。

A.4.3参考色谱条件

推荐的色谱柱及典型操作条件如下表A.1，其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。

A.1色谱柱和色谱操作条件

A.4.4分析步骤

A.4.4.1 试样溶液处理

精密称取试样适量（精确至0.001 g）于10 mL容量瓶中，加入异丙醇超声

30 min，用异丙醇定容至刻度，摇匀，过0.45 μm滤膜，得上样试样。

A.4.4.2 标准品溶液配制

精密称取七烯甲萘醌标准品适量，用异丙醇溶解并定容，配制成浓度为20 μg/mL的标准品溶液。

A.4.4.3 试样测定

用标准品和试样溶液10 µL注入高效液相色谱仪中测定，以保留时间定性，峰面积外标法定量。

A.4.5结果计算

维生素K 2的含量w ，单位为微克每克(μg /g)，按式（A.1）计算：

1

21

11m A V c A w ⨯⨯⨯=

…………………………………………………（A.1）

式中：

A 1——试样中维生素K 2（七烯甲萘醌）对应峰面积； A 2——标准品中维生素K 2（七烯甲萘醌）对应峰面积；

c 1——进样标准品中维生素K 2（七烯甲萘醌）的浓度，单位为微克每毫升（µg/mL ）；

V 1——供试试样定容体积，单位为毫升（mL ）； m 1——试样的质量，单位为克（g ）。

试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10 %。

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资料4.2 维生素K2（发酵法）生产工艺

维生素K2（发酵法）生产工艺Array

图1. 维生素K2（发酵法）生产工艺流程图